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前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第4期37卷 437-443页

作者：杨瑞熊乙丁郭珊珊廖业夏嫱郭锦锦杜联峰遵义医学院珠海校区免疫学教研室

目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(TgPRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增TgPRF基因,并构建pET-30a(+)-TgPRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞... 详细信息

目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(TgPRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增TgPRF基因,并构建pET-30a(+)-TgPRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖昔(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白表达情况。目的蛋白经AKTA系统进行亲和层析纯化和超滤浓缩后进行蛋白质印迹分析(Western blotting).将2mg纯化的重组蛋白TgPRF与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,背部皮下多点注射免疫新西兰兔2只,首次免疫后每隔2周,用1mg纯化的重组蛋白空PRF与等体积弗氏不完全佐剂加强免疫3次,末次免疫后10d心脏采血。免疫后血清进行Western blotting鉴定及ELISA抗体效价检测。将胚胎成纤维细胞接种于96孔板中(4×10^3,个细胞/孔),并加入10^4个刚地弓形虫速殖子(RH-GFP)。设空白对照组(A组),抗体干预组(Bl、B2和B3组),阴性血清组(C组)。B1、B2和B3组分别加入1:20、1:80、1:200稀释的抗TgPRF兔血清100μl;C组加入1:20稀释的免疫前兔血清100μl,每组均设3个复孔。培养72h后荧光显微镜观察,通过Imagepro6.0软件分析虫体增殖情况。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果PCR扩增TgPRF基因片段为510bp,pET-30a(+)-TgPRF经测序与目的序列完全一致。经IPTG诱导表达,TgPRF蛋白相对分子质量(M1)约为25000,且高表达条带主要存在于上清中。TgPRF蛋白经纯化浓缩后浓度为4mg/ml,Western blotting分析显示,在M1 25000处出现特异性条带。经细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测,抗TgPRF血清对胚胎成纤维细胞未见毒性损伤。ELISA检测抗ZgPRF血清抗体效价>1:10^5;各实验组细胞于感染24h时,A组(0.62±0.23)及C组(0.74±0.25)相对虫体数量高于B1组(0.35±0.16)(P0.05),B1-B3组虫体增殖抑制率分别为43.5%、11.4%、3.6%。感染48h时,A组(3.61±0.66)与C组(3.38±0.78)相对虫体数量明显高于B1-B3组(P<0.01),而B1组(1.09±0.58)与B2组(1.92±0.73)低于B3组(2.47±0.84)(P<0.05),B1-B3组虫体增殖抑制率分别增高至69.9%、46.9%、31.7%;感染72h时,A组(19.90±3.92)与C组(20.61±4.07)相对虫体数量高于B1组(5.58±2.43)与B2组(8.06±2.66)(P<0.01),B3组(16.02±6.46)明显升高。B1-B3组抑制率分别为72.0%、59.5%、19.5%。结论弓形虫TgPRF蛋白能有效刺激新西兰兔产生抗体,且TgPRF兔血清抗体在体外能有效抑制弓形虫速殖子在小鼠胚胎成纤维细胞中的增殖并呈现明显的量效关系,但并不能完全消除虫体。

关键词：刚地弓形虫前纤维蛋白多克隆抗体原核表达

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霍奇金淋巴瘤HRS细胞来源研究进展

中华肿瘤防治杂志 2014年第4期21卷 312-315页

作者：纪星涉邓飞遵义医学院珠海校区病理教研室广东珠海519041

目的:总结霍奇金淋巴瘤中HRS细胞来源问题的研究进展,提出可能的解决途径。方法:应用PubMed和CBM全文数据库检索系统,以"霍奇金淋巴瘤、HRS细胞、细胞起源、B细胞、T细胞和组织细胞"为关键词,检索2000-01-2013-10的相关文献共211条。纳... 详细信息

目的:总结霍奇金淋巴瘤中HRS细胞来源问题的研究进展,提出可能的解决途径。方法:应用PubMed和CBM全文数据库检索系统,以"霍奇金淋巴瘤、HRS细胞、细胞起源、B细胞、T细胞和组织细胞"为关键词,检索2000-01-2013-10的相关文献共211条。纳入标准:1)HRS细胞的生物学特点;2)HRS细胞分子基因水平检测;3)HRS细胞起源。根据纳入标准最终纳入31篇,进行重点梳理和归纳。结果:目前公认的是HRS细胞起源于B细胞。HRS细胞在肿瘤组织中非常罕见。虽然HRS细胞来源于成熟的B细胞,但失去了B细胞表型,同时出现不寻常的与各种造血细胞标志的共同表达。HRS细胞出现多种细胞信号通路的激活,这些通路的激活是由HRS细胞以及微环境中的多种细胞共同作用的结果。结论:HL的发病机制目前还只是了解了其中的一部分,HRS细胞的基因突变的通路在逐步认识。HRS细胞信号通路与微环境的深入研究可能会给未来靶向治疗提供新的策略。

关键词：霍奇金病 HRS细胞细胞来源 B淋巴细胞信号通路微环境

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非霍奇金淋巴瘤组织坏死相关因素的探讨

肿瘤防治研究 2009年第7期36卷 589-592页

作者：郭瑞珍唐文台遵义医学院珠海校区病理教研室广东珠海519041 遵义医学院病理教研室

目的探讨非霍奇金淋巴瘤组织坏死相关因素。方法将124例NHL分成有坏死组和无坏死组两组;分成NK/T、TCL、BCL三种类型,用I HC(SP法)标记CD95(Fas)、CD95L(FasL)、bcl-2、TNF-α;ISH技术检测EB病毒编码的小核苷酸RNA(EBER1/2);病例随访。... 详细信息

目的探讨非霍奇金淋巴瘤组织坏死相关因素。方法将124例NHL分成有坏死组和无坏死组两组;分成NK/T、TCL、BCL三种类型,用I HC(SP法)标记CD95(Fas)、CD95L(FasL)、bcl-2、TNF-α;ISH技术检测EB病毒编码的小核苷酸RNA(EBER1/2);病例随访。结果坏死组Fas、FasL、EBER1/2的表达率依次为81.5%(22/27)、74.1%(20/27)、82.5%(23/27),无坏死组依次为68.1%(66/97)、59.8%(58/97)、12.4%(12/97),与无坏死组比较P<0.005,bcl-2表达正好相反,与坏死组比较P<0.005。Fas、FasL、EBER1/2表达主要集中在NK/T和TCL,与BCL比较差异有统计学意义;而bcl-2表达主要集中在BCL,与TCL及NK/T比较差异有统计学意义。坏死组、无坏死组平均生存时间分别为7.4月、24.2月,两组比较P<0.005。结论Fas、FasL、bcl-2的异常表达和EBV感染,在NHL的坏死中可能发挥了一定的作用,NHL中组织坏死是多因素共同作用的结果,组织坏死与预后有关。

关键词：非霍奇金淋巴瘤组织坏死预后 Fas/FasL EBER1/2

大鼠单根近端肾小管Na^+-K^+-ATPase活性测定方法的改进(英文)

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生理学报 2007年第3期59卷 382-386页

作者：高原罗蕾刘红遵义医学院珠海校区生理学教研室珠海519041

本研究旨在对Doucet 等报道的定量检测大鼠单根近端肾小管Na+-K+-ATPase 活性方法进行改进。取经过Ⅱ型胶原酶消化的大鼠肾脏皮质组织,在体视显微镜下手工分离单根近端肾小管,并测量其长度,经低渗和冻融处理后与[γ-32P]ATP 共同孵育,... 详细信息

本研究旨在对Doucet 等报道的定量检测大鼠单根近端肾小管Na+-K+-ATPase 活性方法进行改进。取经过Ⅱ型胶原酶消化的大鼠肾脏皮质组织,在体视显微镜下手工分离单根近端肾小管,并测量其长度,经低渗和冻融处理后与[γ-32P]ATP 共同孵育,液闪法检测从[γ-32P]ATP 解离出的32Pi,采用修正后的公式计算Na+-K+-ATPase 活性。改良法与 Doucet 等的方法比较,测定单根近端肾小管 Na+-K+-ATPase 活性无显著性差异(P>0.05)。改进后的方法节省试剂,操作简便、省时。

关键词：近端肾小管 Na^+-K^+-ATPase 大鼠

大鼠穹隆下器官注射肾上腺髓质素抑制近端肾小管Na^+,K^+-ATPase活性(英文)

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生理学报 2009年第1期61卷 94-98页

作者：高原李兴起遵义医学院珠海校区生理学教研室珠海519041

本文旨在观察大鼠穹隆下器(subfornical organ,SFO)注射肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对肾小管Na+,K+-ATPase活性的影响。经埋植的导管将ADM0.1μL(20ng/μL)注射到麻醉大鼠SFO。采集血样,以放射免疫法检测血浆ADM和血清内源性地高... 详细信息

本文旨在观察大鼠穹隆下器(subfornical organ,SFO)注射肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对肾小管Na+,K+-ATPase活性的影响。经埋植的导管将ADM0.1μL(20ng/μL)注射到麻醉大鼠SFO。采集血样,以放射免疫法检测血浆ADM和血清内源性地高辛样因子(endogenous digoxin-like factor,EDLF)水平;通过膀胱插管收集动物尿液,采用火焰分光光度法测定尿钠浓度;摘取肾脏,体视显微镜下手工分离单根近端肾小管,用液闪法测定其Na+,K+-ATPase活性。此外,将正常大鼠的近端小管与接受过SFO注射ADM的大鼠血清共同孵育后,检测其Na+,K+-ATPase活性。结果显示,大鼠的尿量和尿钠排出量均在SFO注射ADM后30min达到高峰,在注射后60min仍然保持较高水平(P<0.01)。在SFO注射ADM后30min,近端小管Na+,K+-ATPase活性显著降低(P<0.01),血清EDLF水平显著升高(P<0.01),而血浆ADM水平无显著变化。正常大鼠的近端小管与接受过SFO注射ADM的大鼠血清共同孵育后,其Na+,K+-ATPase活性也显著降低(P<0.01)。以上结果提示,继发于SFO注射ADM的利尿和尿钠排泄反应可能与肾小管Na+,K+-ATPase活性抑制有关;而肾小管Na+,K+-ATPase活性抑制则与SFO注射ADM后血清EDLF水平的升高有关。

关键词：肾上腺髓质素穹隆下器 Na^+ K^+ -ATPase 近端肾小管大鼠

刚地弓形虫在我国男性人群的流行及其与男性生殖障碍关系的Meta分析

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中国人兽共患病学报 2016年第9期32卷 810-818页

作者：杨瑞李佩珍岳续朋夏嫱杜联峰卢彦欣廖业郭锦锦遵义医学院珠海校区免疫与病原生物学教研室珠海519000 遵义医学院珠海校区预防医学教研室珠海519000 遵义医学院珠海校区生物工程教研室珠海519000

目的评价弓形虫在我国男性人群的流行及其对男性生殖的影响,为研究弓形虫致男性生殖损伤提供重要依据及参考数据。方法计算机检索PubMed、Science Direct、Google Scholar、Ovid、CNKI、维普、万方、CMB数据库,并辅以参考文献追溯和... 详细信息

目的评价弓形虫在我国男性人群的流行及其对男性生殖的影响,为研究弓形虫致男性生殖损伤提供重要依据及参考数据。方法计算机检索PubMed、Science Direct、Google Scholar、Ovid、CNKI、维普、万方、CMB数据库,并辅以参考文献追溯和手工检索方法,检索1990年1月至2015年12月发表的有关国内男性弓形虫流行及弓形虫致男性不育的文献及学位论文。按照纳入、剔除标准与质量评价筛选文献、提取资料后,采用Stata13.0软件进行Meta分析。结果获得关于弓形虫在男性流行的文献33篇,共调查36 442人。Meta分析结果显示男性弓形虫总感染率为6.96%[95%CI（5.81~8.18）],亚组分析显示地区间总体差异有统计学意义（Qint=62.19,P=0.002）,其中东北（5.00%）、华北（5.35%）感染率最低（P〈0.05）,西南地区最高（11.18%,P〈0.05）,华南（7.77%）、华东（7.09%）、华中（6.12%）、西北（6.94%）差异无统计学意义（P=0.713）。获得弓形虫与男生不育关系文献16篇,首先对正常及不育男性人群弓形虫感染情况的对照研究数据进行meta分析,OR为2.9[95%CI（2.25,3.75）];其次对其中涉及AsAb对照研究数据的7篇文献进行meta分析,OR为5.62[95%CI（3.49,9.04）];最后,将以上7项研究的AsAb数据及其弓形虫感染数据合并为两个亚组进行分析,两组的OR（95%CI）差异并无统计学意义（Qint=3.37,P=0.066）。结论我国男性弓形虫感染率在各地区差异较大,弓形虫感染及其诱生的AsAb与男性不育关系密切,需引起社会重视和进一步防治措施的研究。

关键词：弓形虫男性不育 AsAb 感染率 Meta分析

大黄酸对高糖和血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞肥大的影响

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中药材 2010年第4期33卷 570-574页

作者：余德芊高原刘晓红遵义医学院生理学教研室贵州遵义563003 遵义医学院珠海校区生理学教研室广东珠海519041

目的:探讨大黄酸(Rhein)对高糖和血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞肥大的影响。方法:麻醉下,无菌分离大鼠单根近球小管并培养,以免疫细胞化学方法鉴定体外培养的肾小管上皮细胞。在高糖(30 mmol/L)环境下用... 详细信息

目的:探讨大黄酸(Rhein)对高糖和血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞肥大的影响。方法:麻醉下,无菌分离大鼠单根近球小管并培养,以免疫细胞化学方法鉴定体外培养的肾小管上皮细胞。在高糖(30 mmol/L)环境下用AngⅡ(10-7mol/L)刺激肾小管上皮细胞肥大。与此同时,加入不同浓度的大黄酸(30、15、5 mg/L),作用72 h后检测细胞体积、3H-亮氨酸掺入量以及蛋白质含量以观察细胞肥大的变化。结果:高糖(30 mmol/L)+AngⅡ(10-7mol/L)培养72 h导致细胞体积显著增大,3H-亮氨酸掺入量及细胞内蛋白质含量显著增加。加入大黄酸处理72 h后,大黄酸30 mg/L可显著降低高糖和AngⅡ所致的细胞体积增大、3H-亮氨酸掺入量及细胞内蛋白质含量的升高。大黄酸15 mg/L降低了3H-亮氨酸掺入量及细胞内蛋白质含量,而对细胞体积无显著抑制作用。大黄酸5 mg/L可降低细胞内蛋白质含量,而对细胞体积及3H-亮氨酸掺入量无显著抑制作用。结论:大黄酸能抑制高糖和AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞肥大。

关键词：大黄酸高糖血管紧张素Ⅱ 近端肾小管上皮细胞细胞肥大

人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析

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中国生物工程杂志 2008年第3期28卷 20-24页

作者：周鹤峰邵敏孙伟刘银花李官成葛正龙遵义医学院珠海校区生物工程教研室珠海519041 遵义医学院珠海校区生物化学教研室珠海519041 遵义医学院生物化学教研室遵义563003

利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导... 详细信息

利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。

关键词：人白细胞介素12 毕赤酵母分泌表达活性分析

氯通道阻断剂对NO诱导离体大鼠海马神经元凋亡的保护作用

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中国药理学通报 2009年第9期25卷 1197-1200页

作者：常全忠张淑玲尹金宝蔡仕宁遵义医学院珠海校区生理学教研室广东珠海519041

目的观察氯通道阻断剂SITS和DIDS对NO诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的保护作用。方法离体培养12d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、NO处理组、NO处理后使用氯通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观... 详细信息

目的观察氯通道阻断剂SITS和DIDS对NO诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的保护作用。方法离体培养12d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、NO处理组、NO处理后使用氯通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观察凋亡细胞数和MTT实验定量检测神经元的存活率,Western blot分析凋亡信号分子Caspase-3的变化。结果SITS和DIDS呈剂量依赖性地抑制NO诱导的神经元损伤,并能抑制损伤所引起的Caspase-3的激活,提高神经元的存活率。结论氯通道阻断剂对NO诱导的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用。

关键词：氯通道阻断剂 NO 海马神经元大鼠凋亡 Caspase-3