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睾丸支持细胞免疫豁免研究进展及其应用

现代免疫学 2019年第3期39卷 231-236页

作者：闵明张继东遵义医学院免疫学教研室

由于独特的免疫豁免能力和有效的固有免疫调控作用,哺乳动物的睾丸拥有特殊的免疫环境。睾丸免疫豁免功能使具有免疫原性的生殖细胞免受免疫系统攻击,而局部固有免疫则在抵御病原微生物感染中发挥作用。睾丸免疫稳态遭到破坏可引起睾丸... 详细信息

由于独特的免疫豁免能力和有效的固有免疫调控作用,哺乳动物的睾丸拥有特殊的免疫环境。睾丸免疫豁免功能使具有免疫原性的生殖细胞免受免疫系统攻击,而局部固有免疫则在抵御病原微生物感染中发挥作用。睾丸免疫稳态遭到破坏可引起睾丸炎症,甚至男性不育。拥有复杂三维结构的睾丸支持(Sertoli)细胞是睾丸的重要组成细胞,除参与组建精原细胞生长微环境,还通过分泌多种细胞因子和免疫抑制因子调节免疫反应以维持免疫稳态。Sertoli细胞的免疫豁免特性为细胞、组织和器官的替代治疗提供了新思路。文章综述了Sertoli细胞免疫豁免机制的研究进展及其应用。

关键词：睾丸 Sertoli细胞免疫豁免固有免疫

前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第4期37卷 437-443页

作者：杨瑞熊乙丁郭珊珊廖业夏嫱郭锦锦杜联峰遵义医学院珠海校区免疫学教研室

目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(TgPRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增TgPRF基因,并构建pET-30a(+)-TgPRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞... 详细信息

目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(TgPRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增TgPRF基因,并构建pET-30a(+)-TgPRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖昔(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白表达情况。目的蛋白经AKTA系统进行亲和层析纯化和超滤浓缩后进行蛋白质印迹分析(Western blotting).将2mg纯化的重组蛋白TgPRF与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,背部皮下多点注射免疫新西兰兔2只,首次免疫后每隔2周,用1mg纯化的重组蛋白空PRF与等体积弗氏不完全佐剂加强免疫3次,末次免疫后10d心脏采血。免疫后血清进行Western blotting鉴定及ELISA抗体效价检测。将胚胎成纤维细胞接种于96孔板中(4×10^3,个细胞/孔),并加入10^4个刚地弓形虫速殖子(RH-GFP)。设空白对照组(A组),抗体干预组(Bl、B2和B3组),阴性血清组(C组)。B1、B2和B3组分别加入1:20、1:80、1:200稀释的抗TgPRF兔血清100μl;C组加入1:20稀释的免疫前兔血清100μl,每组均设3个复孔。培养72h后荧光显微镜观察,通过Imagepro6.0软件分析虫体增殖情况。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果PCR扩增TgPRF基因片段为510bp,pET-30a(+)-TgPRF经测序与目的序列完全一致。经IPTG诱导表达,TgPRF蛋白相对分子质量(M1)约为25000,且高表达条带主要存在于上清中。TgPRF蛋白经纯化浓缩后浓度为4mg/ml,Western blotting分析显示,在M1 25000处出现特异性条带。经细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测,抗TgPRF血清对胚胎成纤维细胞未见毒性损伤。ELISA检测抗ZgPRF血清抗体效价>1:10^5;各实验组细胞于感染24h时,A组(0.62±0.23)及C组(0.74±0.25)相对虫体数量高于B1组(0.35±0.16)(P0.05),B1-B3组虫体增殖抑制率分别为43.5%、11.4%、3.6%。感染48h时,A组(3.61±0.66)与C组(3.38±0.78)相对虫体数量明显高于B1-B3组(P<0.01),而B1组(1.09±0.58)与B2组(1.92±0.73)低于B3组(2.47±0.84)(P<0.05),B1-B3组虫体增殖抑制率分别增高至69.9%、46.9%、31.7%;感染72h时,A组(19.90±3.92)与C组(20.61±4.07)相对虫体数量高于B1组(5.58±2.43)与B2组(8.06±2.66)(P<0.01),B3组(16.02±6.46)明显升高。B1-B3组抑制率分别为72.0%、59.5%、19.5%。结论弓形虫TgPRF蛋白能有效刺激新西兰兔产生抗体,且TgPRF兔血清抗体在体外能有效抑制弓形虫速殖子在小鼠胚胎成纤维细胞中的增殖并呈现明显的量效关系,但并不能完全消除虫体。

关键词：刚地弓形虫前纤维蛋白多克隆抗体原核表达

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同种异体肿瘤全细胞疫苗研究现状

现代免疫学 2019年第3期39卷 249-252,256页

作者：鄢玲利刘白南遵义医学院免疫学教研室

肿瘤全细胞疫苗(whole tumor cell vaccine, WTCV)是一种靶向肿瘤抗原的免疫疗法,目前,WTCV已成为肿瘤免疫治疗研究热点之一。该疫苗将完整的肿瘤细胞作为肿瘤抗原来源,不受抗原限制,能诱导机体靶向该肿瘤细胞所表达的大部分抗原、甚至... 详细信息

肿瘤全细胞疫苗(whole tumor cell vaccine, WTCV)是一种靶向肿瘤抗原的免疫疗法,目前,WTCV已成为肿瘤免疫治疗研究热点之一。该疫苗将完整的肿瘤细胞作为肿瘤抗原来源,不受抗原限制,能诱导机体靶向该肿瘤细胞所表达的大部分抗原、甚至未知抗原的免疫应答,从而在一定程度上避免了肿瘤发展过程中由于某些抗原丢失而造成的肿瘤细胞免疫逃逸。同种异体WTCV(allogeneic WTCV,Allo-WTCV)取材于同种族不同个体已建立的肿瘤细胞系,具有可大量制作和储存、便于标准化质量控制等优势。一些临床前研究以及临床试验结果都展现了该疫苗的研究价值。但是,基于Allo-WTCV的肿瘤免疫疗法目前还存在一些缺陷。为了得到更好的免疫效果,可以选择对疫苗进行适当修饰,或者与免疫佐剂联用、与特定单克隆抗体联合使用。文章就如何提升Allo-WTCV抗肿瘤效应及其在肿瘤免疫治疗中的应用作一综述。

关键词：肿瘤全细胞疫苗同种异体肿瘤细胞疫苗修饰肿瘤免疫治疗

人胎盘源间充质干细胞通过CD73/Nrf2途径抑制Th1细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病小鼠肝损伤机制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第9期43卷 663-670页

作者：吴沄桦张恒超韩凯悦赵雅萱栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的:探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)通过CD73/核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)途径抑制CD4^(+)IFN-γ+T(Th1)细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病(graft versus-host disease,GVHD)小鼠肝损伤的作用机制。方法:流式细胞术分析GVHD小鼠外周血和肝组织中Th1细胞对TNF-α的表达以及CD4^(+)IFN-γ+TNF-α+T(TNF-α+Th1)细胞上PD-1的表达水平。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)染色和免疫荧光染色观察各组GVHD小鼠肝组织病理变化,并进一步用HE染色观察各组GVHD小鼠皮肤和肺组织病理变化。体外建立非条件性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)向Th1细胞诱导方案,检测TNF-α+Th1细胞比例以及其Nrf2和磷酸化细胞核内核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-kappa B,p-NF-κB)的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)。结果:与正常对照组相比,GVHD发病高峰组小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例和TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达明显升高(P<0.01);hPMSCs干预可降低小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例(P<0.001),促进小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.01,P<0.001),然而shCD73对小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞的干预效果明显减弱(P<0.05,P<0.01)。肝组织病理学分析结果显示,肝脏中TNF-α+Th1细胞比例分别与Suzuki′s评分、胶原面积和α-SMA的MFI呈正相关(P<0.001)。同样,皮肤和肺组织病理学分析结果也显示,外周血中TNF-α+Th1细胞比例分别与皮肤的Cetkovic-Cvrlje评分和肺的Qiao Shukai评分呈正相关(P<0.001)。PBMCs活化实验也显示hPMSCs能下调TNF-α+Th1细胞比例(P<0.01),上调TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.05);进一步分析发现hPMSCs可增强TNF-α+Th1细胞中Nrf2的MFI(P<0.05),减弱p-NF-κB的MFI(P<0.01)。结论:hPMSCs可能通过CD73/Nrf2途径上调PD1的表达,抑制TNF-α+Th1细胞形成,进而减轻GVHD小鼠肝损伤。

关键词：人胎盘源间充质干细胞 Th1细胞 PD-1 CD73 Nrf2 NF-κB

褪黑素调控下丘脑PI3K/Akt/mTOR信号延缓雌性小鼠青春期启动的机制

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解剖学报 2023年第6期54卷 644-651页

作者：陈子璇司丽娜舒薇菡张欣魏晨阳程露阳杨松鹤乔跃兵承德医学院人体解剖学教研室承德医学院免疫学教研室河北承德067000

目的探讨褪黑素(MLT)对雌性小鼠青春期启动的影响以及对下丘脑磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路表达水平的影响。方法78只20日龄雌性KM小鼠,随机分为褪黑素(MLT)组和生理盐水(NS)组,每组39只... 详细信息

目的探讨褪黑素(MLT)对雌性小鼠青春期启动的影响以及对下丘脑磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路表达水平的影响。方法78只20日龄雌性KM小鼠,随机分为褪黑素(MLT)组和生理盐水(NS)组,每组39只。22日龄开始,给予MLT组皮下注射1 mg/kg褪黑素,给予NS组注射等体积的生理盐水。青春期启动前选取32日龄为取材点,两组分别处死13只小鼠,青春期启动后选取37、42日龄为取材点,两组分别处死13只小鼠。观察小鼠阴门开启时间;取卵巢、子宫称重计算器官指数;HE染色观察卵巢黄体数量;ELISA法检测血清黄体生成素(LH)水平;Real-time PCR和Western blotting检测下丘脑PI3K/Akt/mTOR通路mRNA和蛋白表达水平。结果与生理盐水组相比,褪黑素组小鼠阴门开启时间显著推迟(P<0.05);卵巢、子宫的大小和指数明显下降(P<0.05);血清LH水平明显下降(P<0.05);下丘脑PI3K/Akt/mTOR通路mRNA和蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。结论褪黑素可以延缓小鼠青春期启动,机制可能与抑制下丘脑PI3K/Akt/mTOR信号通路相关。

关键词：褪黑素青春期启动下丘脑-垂体-性腺轴磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路酶联免疫吸附测定小鼠

IL-6通过促进人胎盘间充质干细胞上CD73的表达调节其迁移、黏附和增殖能力

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第12期42卷 940-948页

作者：张恒超赵楠楠张加深韩凯悦赵雅萱戚荣栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的探讨IL-6影响人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)表面CD73的表达,以及调节其迁移、黏附和增殖的作用机制。方法流式细胞术(flow cytometry,FCM)和Western blot分析外源性IL-6和hPMSCs分泌的IL-6对hPMSCs上CD73表达的影响。单克隆抗体阻断和Western blot方法检测IL-6对hPMSCs中信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。实时无标记动态细胞分析技术(real-time cellular analysis,RTCA)分析慢病毒转染后低表达CD73的hPMSCs和APCP(5′-α,β亚甲基-二磷酸腺苷)预处理后hPMSCs的迁移、黏附和增殖变化。结果FCM与Western blot检测结果显示,外源性和hPMSCs分泌的IL-6均能促进CD73在hPMSCs上的表达(P<0.001,P<0.01)。IL-6R抑制剂处理后,hPMSCs上CD73表达明显下降(P<0.01);IL-6可上调hPMSCs内STAT3磷酸化和CD73水平(P<0.05,P<0.01),而加入STAT3抑制剂后,CD73表达下降(P<0.01)。RTCA分析结果显示,敲低hPMSCs上CD73的表达后,hPMSCs的黏附和增殖能力均明显降低(P<0.01,P<0.05),迁移能力明显上升(P<0.05)。使用APCP抑制hPMSCs上CD73水解酶活性后,hPMSCs同样表现出黏附和增殖能力明显降低,而迁移能力增强(P<0.05)。结论IL-6能够通过JAK/STAT3通路增强hPMSCs上CD73的表达,进而影响其迁移、黏附和增殖能力。

关键词：间充质干细胞胎盘 IL-6 CD73 迁移黏附增殖

慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞受体CDR3谱系的特征分析

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中华肝脏病杂志 2015年第8期23卷 628-630页

作者：庄勤建吕红潘宗琴陈宇马龙姚新生邱隆敏遵义医学院附属医院感染科 563003 遵义医学院免疫学教研室

本研究采用T淋巴细胞受体β链V区基因各家族（BV）互补决定区3（complementarity determiningregion3，CDR3）长度分析的方法（免疫谱系分析技术）监测慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（Tregs）TCRp链CDR3... 详细信息

本研究采用T淋巴细胞受体β链V区基因各家族（BV）互补决定区3（complementarity determiningregion3，CDR3）长度分析的方法（免疫谱系分析技术）监测慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（Tregs）TCRp链CDR3谱系漂移情况，并对特征性的谱系漂移家族进行基因测序鉴定其分子特征，探讨T细胞免疫在抗病毒应答中发挥的作用，以期为HBV感染后特异性T细胞免疫应答变化提供新的研究方法。

关键词：肝炎,乙型,慢性受体,T淋巴细胞 T淋巴细胞,调节性互补决定区3

柴胡皂苷D通过Akt/mTOR通路调控胰腺癌Panc-1细胞凋亡及自噬

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中国中药杂志 2023年第19期48卷 5278-5284页

作者：关月宏刘桂梅刘雨思兰琳博郑蕊刘晓斌延安大学医学院免疫学教研室陕西延安716000

该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^(-1)柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响;分... 详细信息

该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^(-1)柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响;分别设置对照组(0μmol·L^(-1))、柴胡皂苷D低浓度组(10μmol·L^(-1))和柴胡皂苷D高浓度组(16μmol·L^(-1)),采用平板克隆形成实验检测柴胡皂苷D对Panc-1细胞克隆形成率的影响;采用苏木素-伊红(HE)染色观察柴胡皂苷D作用后细胞形态的变化;采用Hoechst 33258荧光染色检测柴胡皂苷D对细胞凋亡的影响;采用细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)检测柴胡皂苷D对细胞自噬的影响;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和免疫细胞化学法检测柴胡皂苷D对B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、剪切的caspase-3(cleaved caspase-3)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平及分布的影响。结果显示,与对照组相比,柴胡皂苷D显著抑制Panc-1细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性;柴胡皂苷D作用后细胞克隆形成率显著降低。与对照组相比,柴胡皂苷D处理组细胞萎缩变小,并伴有凋亡小体形成;细胞凋亡率显著升高,自噬小泡堆积显著增多;Bax、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著升高,Bcl-2、caspase-3、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR的表达显著降低,均主要分布在细胞质中。因此,柴胡皂苷D可通过抑制Akt/mTOR通路抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖并诱导其凋亡及自噬。

关键词：柴胡皂苷D 胰腺癌凋亡自噬 Akt/mTOR

微小RNAs在阿尔茨海默病Aβ沉积和Tau磷酸化中的作用

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生命科学 2017年第5期29卷 507-513页

作者：赵娟娟岳东旭褚风云郭萌萌徐林遵义医学院免疫学教研室遵义563000

阿尔茨海默病(AD)是最常见的中枢神经系统退行性疾病,主要临床表现为进行性认知功能障碍和行为损伤。近年研究显示,微小RNAs(miRNAs)在以AD为代表的中枢神经系统疾病病变过程中发挥了重要调控作用。现综述miRNAs在AD发病的关键病理特征... 详细信息

阿尔茨海默病(AD)是最常见的中枢神经系统退行性疾病,主要临床表现为进行性认知功能障碍和行为损伤。近年研究显示,微小RNAs(miRNAs)在以AD为代表的中枢神经系统疾病病变过程中发挥了重要调控作用。现综述miRNAs在AD发病的关键病理特征——Aβ的沉积和Tau磷酸化中的调节作用,以期对AD发病机制的认识和诊治新策略的开发提供帮助。

关键词：阿尔茨海默病 miRNAs 淀粉样蛋白淀粉样前体蛋白 Tau蛋白