检索结果-南通市图书馆

中国三株牛结节性皮肤病病毒的分离鉴定及其GPCR基因分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：周祉玉杜吉革莘若兰张嘉雯潘晨帆印春生陈小云朱真中国兽医药品监察所

为了解我国牛结节性皮肤病（lumpy skin disease， LSD）田间毒株流行情况及遗传进化情况并观察其生物学特征，本研究对临床疑似发生牛结节性皮肤病的牛皮肤结节样本进行PCR检测、病毒分离、免疫荧光鉴定、电镜观察、GPCR基因测序和遗... 详细信息

为了解我国牛结节性皮肤病（lumpy skin disease， LSD）田间毒株流行情况及遗传进化情况并观察其生物学特征，本研究对临床疑似发生牛结节性皮肤病的牛皮肤结节样本进行PCR检测、病毒分离、免疫荧光鉴定、电镜观察、GPCR基因测序和遗传进化分析。结果表明：利用原代羊睾丸细胞（PLT）分离得到3株牛结节性皮肤病病毒（LSDV），分别命名为LSDV/Heilongjiang/2022株、LSDV/Jiling/2022株和LSDV/Jiangxi/2022株，对三株病毒进行一步生长曲线测定，前96 h病毒增长速度最快，96～120 h时滴度最高，之后病毒生长速度开始减缓，接种96 h后滴度最高，三株病毒分别可达到106.0TCID50·mL-1、105.3TCID50·mL-1和105.1TCID50·mL-1。透射电镜下病毒粒子呈椭圆形，病毒直径为200～300 nm之间。将三株病毒GPCR基因序列与中国各地区以及近年其他国家流行毒株进行遗传进化分析，三株分离株与中国各地区毒株均处于同一分支上，说明中国各地区牛结节性皮肤病的流行有很强的相关性。（结论）本研究成功从黑龙江、吉林及江西三省牛皮肤结节病料中分离出三株LSDV，丰富了我国LSDV的流行病学及病原学数据，并对LSDV的持续监测与新型疫苗研发工作有参考意义。

关键词：牛结节性皮肤病病毒分离鉴定生物学特征遗传进化分析

我国畜禽细菌类主要兽医病原微生物及其疫苗研制与应用概况

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微生物学通报 2024年

作者：胡云皓刘燕朱良全中国兽医药品监察所

我国畜禽养殖体系庞大，细菌类病原微生物在畜禽间流行传播引发的畜禽疫病频发不仅会造成严重的经济损失，部分病原菌还会引发人兽共患病，威胁公共卫生安全。本文对我国近年来流行的家畜和家禽细菌类兽医病原微生物进行了概述，并梳理... 详细信息

我国畜禽养殖体系庞大，细菌类病原微生物在畜禽间流行传播引发的畜禽疫病频发不仅会造成严重的经济损失，部分病原菌还会引发人兽共患病，威胁公共卫生安全。本文对我国近年来流行的家畜和家禽细菌类兽医病原微生物进行了概述，并梳理了目前我国家畜和家禽疫苗研制和应用情况，以期为我国动物细菌类畜禽疫病的防控提供理论基础。

关键词：细菌病原微生物兽医疫苗

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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动物医学进展 2024年第4期45卷 51-56页

作者：刘丹黄小洁吴华伟孙淼陈延飞秦义娴侯力丹薛麒中国兽医药品监察所北京100081

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重... 详细信息

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白间接ELISA 抗体检测

鸡产蛋下降综合征病毒间接免疫荧光检测方法的建立及应用

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动物医学进展 2024年第1期45卷 44-51页

作者：孔冬妮王嘉邓永翟天舒刘丹黄小洁薛琪候力丹吴华伟薛青红李俊平毛娅卿中国兽医药品监察所北京100081

为建立检测鸡产蛋下降综合征病毒(EDSV)的间接免疫荧光方法,并对该检测方法的各个步骤进行优化,以鸡产蛋下降综合征病毒多抗血清和FITC标记的兔抗鸡IgG为组合,对一抗和二抗的最适工作浓度和孵育时间进行了优化,对IFA方法进行了敏感性、... 详细信息

为建立检测鸡产蛋下降综合征病毒(EDSV)的间接免疫荧光方法,并对该检测方法的各个步骤进行优化,以鸡产蛋下降综合征病毒多抗血清和FITC标记的兔抗鸡IgG为组合,对一抗和二抗的最适工作浓度和孵育时间进行了优化,对IFA方法进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果表明,检测接种EDSV的96孔细胞培养板时,多抗血清的最适工作浓度为1∶320,孵育时间为45 min;FITC标记的兔抗鸡IgG的最适工作浓度为1∶200,孵育时间为30 min;病毒敏感性试验表明,该方法可以检测到10-2 TCID 50/mL的病毒;多抗血清敏感度试验表明,当多抗血清稀释到1∶1280时仍可见较明显的特异性荧光;特异性试验表明,该方法只针对EDSV,而不与禽副流感病毒4型、鸡新城疫病毒等其他病原反应;批内重复性试验和批间重复性试验结果表明,该方法具有较好的重复性和可靠性。结果表明,建立的间接免疫荧光方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性,可为我国禽源性生物材料EDSV的检测提供技术支持,有巨大的市场需求。

关键词：鸡产蛋下降综合征病毒多抗血清间接免疫荧光优化

非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质的研制

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 308-315页

作者：苏佳张敏白洪旭张兵赵炜薛青红杨承槐陈晓春中国兽医药品监察所北京100081

标准物质是分子生物学诊断技术的金标准。针对国内无非洲马瘟病毒标准物质的现状,以其AV1311株为原料,通过病毒培养、灭活、分装、特性检验等,成功制备非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质。同时,建立数字PCR方法,对标准物质进行均... 详细信息

标准物质是分子生物学诊断技术的金标准。针对国内无非洲马瘟病毒标准物质的现状,以其AV1311株为原料,通过病毒培养、灭活、分装、特性检验等,成功制备非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质。同时,建立数字PCR方法,对标准物质进行均匀性评估、稳定性考察及9家实验室联合定值,并进行临床试用。结果显示,组内和组间无统计学差异,样品均匀;-20℃保存可稳定6个月,4℃保存可稳定7 d,25℃保存可稳定24 h,可冻融5次,需干冰运输;标准物质认定值为(6.9±1.1)×10^(3)copis/μL;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样品互通性良好;最终通过全国标准物质管理委员会评审,获得国家二级标准物质证书[GBW(E)091272]。综上,本标准物质定值准确,均匀性好,量值稳定,为做好国内非洲马瘟防范工作提供了物质基础。

关键词：非洲马瘟病毒核糖核酸标准物质检测定值数字PCR

牛结节性皮肤病病毒(NMG株)基因组DNA标准物质的研制

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中国预防兽医学报 2024年第3期46卷 320-325页

作者：苏佳白洪旭赵炜王德丽刘伟洁王芳薛青红陈晓春中国兽医药品监察所北京100081

为提高牛结节性皮肤病病毒(LSDV)核酸检测结果的准确性,本研究通过病毒核酸提取及质量检测、分装,制备LSDV NMG株基因组DNA标准物质。通过荧光定量PCR(qPCR)检测外源病毒评价其纯净性;采用液滴式数字PCR(ddPCR)方法检测LSDV ORF101基因... 详细信息

为提高牛结节性皮肤病病毒(LSDV)核酸检测结果的准确性,本研究通过病毒核酸提取及质量检测、分装,制备LSDV NMG株基因组DNA标准物质。通过荧光定量PCR(qPCR)检测外源病毒评价其纯净性;采用液滴式数字PCR(ddPCR)方法检测LSDV ORF101基因的拷贝数以评估该标准物质的均匀性、稳定性并与9家实验室协作标定;进一步采用qPCR方法对该标准物质试用。结果显示,本研究制备的标准物质不存在外源病毒污染;组内和组间无显著性差异,均匀性好;标准物质于-20℃稳定保存6个月,4℃稳定保存7d,25℃稳定保存24 h;标准物质ORF101基因最终定值为(8.6±1.3)×10~3拷贝/μL;可以用于qPCR检测。综上,该标准物质定值准确,均匀性好,不仅可以用于LSDV核酸检测相关实验的质量控制、仪器校准、检测方法评价,还可为研制体外诊断试剂提供物质基础。

关键词：牛结节性皮肤病病毒液滴式数字PCR 标准物质定值