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锦鲤疱疹病毒RAA-LFD检测方法的建立

中国预防兽医学报 2024年第4期46卷 374-378,425页

作者：吕晓楠徐立蒲张文王小亮王静波王姝曹欢北京市水产技术推广站北京100176

为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'... 详细信息

为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'端分别标记Biotin、FAM荧光基因。采用方阵法对RAA反应时间和温度等条件优化,结果显示,该检测方法在34℃~40℃恒温反应10 min即可实现对KHV目的基因片段的有效扩增,并且扩增产物结果可直接观察,由此初步建立了KHV的RAA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,建立的RAA-LFD检测方法与鲤浮肿病毒(CEV)、鲫造血器官坏死病毒(CHNV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、蛙虹彩病毒(BIV)等常见水生动物病原核酸均无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品p EASY-KHV的检测限为50拷贝/μL,与行业标准常规PCR的敏感性相当。重复性试验结果显示,该方法对5份p EASY-KHV的检测结果均一致;对室温放置7 d的p EASY-KHV检测结果也均一致。采用该方法和常规PCR对60份临床样品检测,结果显示二者的阴性、阳性符合率以及总符合率均为100%。本研究首次建立了用于检测KHV的RAA-LFD方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作方便,可用于KHV的临床样品检测,为KHV现地检测提供了一种简便、快捷的技术手段。

关键词：锦鲤疱疹病毒重组酶介导扩增侧向流试纸条快速检测

一株磺胺喹噁啉降解菌株Aspergillus sp. S-3的分离、鉴定及其降解代谢途径

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应用与环境生物学报 2024年

作者：陈雪婷张玉平刘菁华上海市水产研究所(上海市水产技术推广站)

磺胺喹噁啉(SQX)在集约化的养殖业中应用广泛，其残留威胁生态系统和人体健康，目前关于微生物纯培养物降解SQX的研究较少。本研究从养殖池塘底泥样品中分离到一株SQX降解菌株S-3，通过形态学特征和ITS序列系统发育分析将其鉴定为曲霉属... 详细信息

磺胺喹噁啉(SQX)在集约化的养殖业中应用广泛，其残留威胁生态系统和人体健康，目前关于微生物纯培养物降解SQX的研究较少。本研究从养殖池塘底泥样品中分离到一株SQX降解菌株S-3，通过形态学特征和ITS序列系统发育分析将其鉴定为曲霉属(Aspergillus sp.)。单因素实验表明，菌株S-3的最佳生长和降解温度及pH分别为30 ℃和7.0，降解最佳接种量为1%-5%。在此条件下，菌株S-3对初始浓度为0.8-24 mg/L的SQX具有较高的降解率(72 h降解率均在83.0%以上)。菌株S-3还可以降解磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺异恶唑，降解率分别为和78.5%和65.5%。通过超高效液相色谱串联高分辨率电喷雾电离质谱仪鉴定了菌株S-3降解SQX生成的6种代谢产物，并据此推测菌株S-3分别采用分子内SO2的脱除、脱氨羟基化以及喹噁啉基的羟基化策略开启SQX的降解。采用Toxicity Estimation Software Tool (T.E.S.T.)软件评估了降解产物的毒性，结果表明其急性毒性、发育毒性和致突变性的毒性分级区间整体上呈现减毒趋势。斑马鱼攻毒试验初步表明菌株S-3对水生生物的安全性较高。综上所述，本研究获得一株高效安全的SQX降解菌株Aspergillus sp. S-3，为环境污染的微生物修复提供菌株资源和理论依据。(图8 表4 参34)

关键词：磺胺喹噁啉微生物降解曲霉菌属降解特性代谢产物

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扁圆吻鲴人工繁殖技术

农业工程技术 2024年第13期44卷 125-126页

作者：黄远南福建省连城县水产技术推广站福建连城366200

扁圆吻鲴是福建连城县水产养殖中的传统鱼种之一,该文结合笔者多年在连城县吉明鱼苗养殖有限公司的实践经验,总结了扁圆吻鲴的人工繁殖环境需求,阐述了亲鱼培育、人工繁殖、鱼苗培育等各阶段的技术要点,给养殖者提供参考。

关键词：扁圆吻鲴人工繁殖繁育环境亲鱼鱼苗

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中国南方地区稻鱼共生系统的研究进展与思考

华南农业大学学报 2024年

作者：陈欣胡中元赵璐峰郝向举李坚明何金钊胡亮亮唐建军浙江大学生命科学学院全国水产技术推广总站广西壮族自治区水产技术推广站

稻田的水热环境是鲤科Cyprinidae鱼类天然生境，为此演育出稻鱼共生系统。我国南方山丘区的稻鱼共生系统具有悠久的历史，是利用当地水热和梯田条件而发展起来的独特稻作系统，对增加稻田产出、稳定农民收入、保护当地生物资源起着重要... 详细信息

稻田的水热环境是鲤科Cyprinidae鱼类天然生境，为此演育出稻鱼共生系统。我国南方山丘区的稻鱼共生系统具有悠久的历史，是利用当地水热和梯田条件而发展起来的独特稻作系统，对增加稻田产出、稳定农民收入、保护当地生物资源起着重要作用。本文概述了我国南方山丘区稻鱼共生系统的发展历程；从稻鱼共生系统的生产力、有害生物的控制和农药减量、土壤碳氮保持和肥料减量、甲烷排放和氧化、水资源利用与保护以及遗传多样性保育等方面综述了稻鱼共生系统的研究进展；分析了我国南方山丘区的稻鱼共生产业发展的潜力和可持续发展的可能路径，并对稻鱼共生系统今后的研究方向进行了展望。

关键词：稻鱼共生系统生态过程遗产多样性保育发展潜力可持续发展南方山丘区

长江刀鲚GHRH基因遗传多态性及其与生长性状的关联分析

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西北农业学报 2024年第6期33卷 997-1007页

作者：于爱清施永海徐嘉波刘永士邓平平上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

生长激素释放激素(GHRH)是鱼类生长激素合成和分泌的重要调控因子,对细胞的生长、增殖和分化极为重要。基于长江刀鲚转录组测序数据,利用基因克隆和PCR扩增技术,获得其GHRH基因的cDNA全长和基因组DNA序列,并开展基因遗传多态性与生长性... 详细信息

生长激素释放激素(GHRH)是鱼类生长激素合成和分泌的重要调控因子,对细胞的生长、增殖和分化极为重要。基于长江刀鲚转录组测序数据,利用基因克隆和PCR扩增技术,获得其GHRH基因的cDNA全长和基因组DNA序列,并开展基因遗传多态性与生长性状的关联性研究,为其分子标记辅助育种提供技术支持。结果显示:长江刀鲚GHRH基因cDNA全长1329 bp,由5′-UTR(300 bp)、ORF(465 bp)和3′-UTR(564 bp)组成,推导的蛋白序列由154个氨基酸组成,具有一个信号肽和GLUCA结构域;该基因的DNA序列长2983 bp,由4个内含子和5个外显子组成,经筛选,在第1、2内含子和第3外显子上分别筛选到9、2和1个SNP位点;12个突变位点共36种基因型,分别与100尾长江刀鲚的体质量、体长和体高性状进行关联分析,获得2个与其生长性状显著相关的位点(g.1636C>T和g.1882A>C)(PT和g.1882A>C可以作为优选长江刀鲚繁育亲本的重要候选分子标记。

关键词：长江刀鲚 GHRH 单核苷酸多态性生长性状关联分析

鲤Rhbdd3重组乳酸菌微生物制剂的开发及效果评价

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海洋与湖沼 2024年第4期55卷 1019-1026页

作者：刘亚楠张小明邵玲上海市水产研究所、上海市水产技术推广站上海200433

鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并... 详细信息

鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并转化获得了重组乳酸乳球菌pNZ8148-rhbdd3 NZ9000。利用乳酸链球菌素nisin进行Rhbdd3蛋白的诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blotting进行验证。进一步,将重组乳酸乳球菌进行饲料拌喂并开展鲤春病毒血症病毒(SVCV)人工感染实验,检测鱼体免疫因子表达水平及攻毒后鱼体组织病毒载量。结果显示:经nisin诱导后,pNZ8148-rhbdd3 NZ9000能够表达约为39 kDa的特异性蛋白,与Rhbdd3蛋白大小一致。重组乳酸乳球菌的最佳nisin诱导浓度为100 ng/mL,最佳诱导时间为5 h。重组乳酸乳球菌饲喂后14 d,与对照组相比,实验组鲤鱼组织中免疫相关基因IFN1、IRF7、Viperin、Mx1和ISG15的表达水平均显著上调。此外,SVCV攻毒后,重组乳酸乳球菌饲喂组鱼体组织中病毒滴度较对照组显著降低,表明其可以抑制病毒的增殖。研究结果为Rhbdd3蛋白的大量制备和应用提供了一种可行方案,并为鱼类病毒性疾病的防控提供了一种有效措施。

关键词： Rhbdd3蛋白乳酸菌鲤鱼鲤春病毒血症病毒微生物制剂

一株红霉素降解菌Penicillium ***-1的筛选、降解特性及其应用研究

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生态环境学报 2024年第4期33卷 607-616页

作者：刘菁华张玉平陈雪婷上海市水产研究所(上海市水产技术推广站) 上海200433

在渔业养殖过程中,使用绿色环保、高效低廉的微生物菌剂解决渔业废水中的抗生素残留,对保障水产品质量安全和生态环境有重要意义。为获得可应用于渔业养殖废水的红霉素降解菌剂,采用梯度富集驯化的方法从养殖污染底泥样品中分离筛选红... 详细信息

在渔业养殖过程中,使用绿色环保、高效低廉的微生物菌剂解决渔业废水中的抗生素残留,对保障水产品质量安全和生态环境有重要意义。为获得可应用于渔业养殖废水的红霉素降解菌剂,采用梯度富集驯化的方法从养殖污染底泥样品中分离筛选红霉素降解菌株,通过形态学特征和ITS(InternalTranscribedSpaces)序列分析进行微生物分类鉴定;采用单因素试验确定最适降解温度和pH;利用超高效液相色谱串联高分辨率电喷雾电离质谱仪鉴定降解产物,并据此推测降解途径,通过斑马鱼攻毒试验初步评估菌株的生物安全性;优化菌株固态发酵参数,制备红霉素降解菌剂,并初探降解菌剂对红霉素污染的养殖废水的修复效果。结果显示,获得一株红霉素降解菌株ERY-1并鉴定其为青霉菌属(Penicilliumsp.);菌株ERY-1在温度20-35℃、pH 5-7的环境中具有较好的降解率,在该条件下,菌株对质量浓度为1.0 mg·L^(-1)的红霉素的降解率在97%以上;鉴定了5种降解中间产物,并据此推测菌株ERY-1通过脱水、脱红霉支糖和开环逐渐使红霉素失去抗菌活性;斑马鱼攻毒试验初步表明菌株ERY-1对水生生物具有较高的安全性;以稻壳:麦麸:玉米粉质量比(m꞉m꞉m)为1꞉1꞉1作为固态培养基配方,初始料水比为1g:1L,接种量为0.75%,在温度为25℃,发酵13d后获得产孢量约9.14×10^(9)cfu·g^(-1)的降解菌剂。将制备的降解菌剂投撒到有红霉素残留的养殖废水中,3d后水中的红霉素未达到方法的检出质量浓度(0.2ng·L^(-1))。结果表明,菌株ERY-1可有效的解决渔业养殖废水中的红霉素残留,由其制备的降解菌剂具有良好的应用和推广价值。

关键词：红霉素微生物降解降解特性代谢产物固态发酵菌剂应用

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香鱼“浙闽1号”养殖新技术

科学养鱼 2024年第1期 49-50页

作者：罗培强黄远南连城县揭乐乡畜牧兽医水产站福建龙岩366200 连城县水产技术推广站福建龙岩366299

香鱼“浙闽1号”是由宁波大学海洋学院李明云教授带领的团队,与福建宁德众合农业发展有限公司合作,以采捕自浙江宁海凫溪的野生香鱼为基础群体,应用群体选育技术,经十余年连续7代选育而获得的香鱼新品种。该品种具有生长速度快、雌性占... 详细信息

香鱼“浙闽1号”是由宁波大学海洋学院李明云教授带领的团队,与福建宁德众合农业发展有限公司合作,以采捕自浙江宁海凫溪的野生香鱼为基础群体,应用群体选育技术,经十余年连续7代选育而获得的香鱼新品种。该品种具有生长速度快、雌性占比高、外观好、抗病力强等优点。

关键词：养殖新技术基础群体香鱼采捕海洋学院群体选育浙江宁海生长速度

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2种饲料投喂下美洲鲥幼鱼肌肉营养成分分析及评价

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中国农业科技导报 2024年第5期26卷 223-233页

作者：蒋飞施永海徐嘉波严银龙刘永士袁新程上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

为科学评价常规饲料和绿色饲料养殖美洲鲥幼鱼肌肉的营养品质,采用生化分析方法对2种饲料投喂下美洲鲥幼鱼肌肉营养成分进行测定和比较分析。结果显示,常规饲料组肌肉中的粗脂肪含量(7.84%)极显著高于绿色饲料组(5.05%),水分含量(68.87%... 详细信息

为科学评价常规饲料和绿色饲料养殖美洲鲥幼鱼肌肉的营养品质,采用生化分析方法对2种饲料投喂下美洲鲥幼鱼肌肉营养成分进行测定和比较分析。结果显示,常规饲料组肌肉中的粗脂肪含量(7.84%)极显著高于绿色饲料组(5.05%),水分含量(68.87%)极显著低于绿色饲料组(71.98%),粗蛋白含量(16.93%)显著低于绿色饲料组(17.54%)。常规饲料组和绿色饲料组肌肉中必需氨基酸总量/氨基酸总量和必需氨基酸总量/非必需氨基酸总量无显著差异,均属于优质蛋白;绿色饲料组肌肉中鲜味氨基酸、苦味氨基酸和酸味氨基酸含量均显著高于常规饲料组,且甜味氨基酸含量极显著高于常规饲料组;绿色饲料组肌肉中支链氨基酸含量和支/芳值均显著高于常规饲料组;根据氨基酸评分和化学评分,常规饲料组和绿色饲料组的第一限制性氨基酸均为色氨酸,常规饲料组必需氨基酸指数(73.58)高于绿色饲料组(71.00)。常规饲料组肌肉中二十碳五烯酸(eicosa pentenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docose hexaenoie acid,DHA)含量均极显著高于绿色饲料组,常规饲料组肌肉中不饱和脂肪酸、n-3多不饱和脂肪酸(Σn-3)、n-6多不饱和脂肪酸(Σn-6)、多不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸和Σn-3/Σn-6多不饱和脂肪酸均极显著高于绿色饲料组,而绿色饲料组肌肉中饱和脂肪酸/不饱和脂肪酸极显著高于常规饲料组。以上结果表明,2种饲料组均属于优质蛋白,在绿色饲料中提高色氨酸、EPA和DHA含量有助于改善美洲鲥肌肉的营养品质。

关键词：美洲鲥饲料肌肉营养成分氨基酸脂肪酸

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