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太平洋鳕抗冻基因AFP4的原核表达及多克隆抗体的制备

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大连海洋大学学报 2017年第2期32卷 127-133页

作者：吕绘倩蒋洁兰姜志强毛明光大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实室辽宁大连116023

为进一步研究太平洋鳕Gadus macrocephalus抗冻蛋白AFP4的功能,通过RT-PCR方法克隆得到太平洋鳕4型抗冻蛋白基因(AFP4)的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建原核表达载体并优化表达条件,利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体,采用间... 详细信息

为进一步研究太平洋鳕Gadus macrocephalus抗冻蛋白AFP4的功能,通过RT-PCR方法克隆得到太平洋鳕4型抗冻蛋白基因(AFP4)的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建原核表达载体并优化表达条件,利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测抗体的效价,用Western-blot法分析重组蛋白的免疫原性。结果表明:AFP4基因编码区长度为375 bp,编码125个氨基酸;将AFP4基因的ORF与载体p ET-32a连接,构建重组体p ET-32a-AFP4,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中;经诱导、表达和条件优化,发现该重组体在37℃、0.01 mmol/L IPTG条件下诱导3 h获得最大的表达量;对该重组蛋白进行纯化,利用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测该抗体效价为1∶1 600 000;Western blot分析显示,重组蛋白可以与兔抗AFP4多克隆抗体发生特异性结合,表明该重组蛋白具有免疫原性。本研究结果可为深入研究太平洋鳕AFP4蛋白功能提供理论依据。

关键词：太平洋鳕抗冻基因原核表达抗体

四溴联苯醚慢性胁迫对黄盖鲽幼鱼鳃的毒性效应

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大连海洋大学学报 2024年第5期39卷 746-753页

作者：崔丹丹孙鹏飞郭亚枫曹胜男韩建顾知之王伟大连海洋大学辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室辽宁大连116023

为研究四溴联苯醚(BDE-47)对黄盖鲽(Pseudopleuronectes yokohamae)幼鱼(体质量为1.31 g±0.03 g)鳃组织的毒性效应,采用半静态水质接触染毒法,通过组织切片观察了BDE-47胁迫下(0.25、0.5、2 mg/L)黄盖鲽鳃组织的形态学变化,并利用mRNA... 详细信息

为研究四溴联苯醚(BDE-47)对黄盖鲽(Pseudopleuronectes yokohamae)幼鱼(体质量为1.31 g±0.03 g)鳃组织的毒性效应,采用半静态水质接触染毒法,通过组织切片观察了BDE-47胁迫下(0.25、0.5、2 mg/L)黄盖鲽鳃组织的形态学变化,并利用mRNA测序和miRNA测序联合分析黄盖鲽幼鱼鳃组织对BDE-47胁迫的分子机制。结果表明,在BDE-47胁迫下,黄盖鲽鳃小片上皮细胞出现肿胀、脱落及增生修复现象,黏液细胞明显增多,且随着BDE-47浓度升高呈递增趋势;转录组数据显示,ErbB信号通路基因表达量变化可能引起鳃小片上皮细胞的增生和修复;miRNA测序分析显示,BDE-47暴露导致的鳃小片上皮细胞脱落可能与MAPK及Ras信号通路有关;在mRNA和miRNA联合分析中,主要关注了硫辛酸代谢通路和Toll样受体信号通路,推测鳃组织miRNAs通过调节硫辛酸代谢和Toll样受体信号通路基因mRNA的稳定性和翻译,影响水体中BDE-47对黄盖鲽幼鱼鳃的毒性效应。研究表明,不同浓度BDE-47慢性胁迫会对黄盖鲽鳃组织结构造成不同程度的损伤,通过转录组联合分析发现,差异基因主要富集在炎症、凋亡和免疫调节等相关信号通路中。

关键词：黄盖鲽四溴联苯醚转录组组织病理鳃

不同形态饲料中添加壳寡糖对刺参生长和免疫的影响

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饲料工业 2017年第14期38卷 25-28页

作者：司滨暴宁崔前进孙梦蕾陈飞王丽苹姜志强大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室辽宁大连116023

试验以基础配方相同的粉状饲料和颗粒饲料饲喂初始体重为(2.41±0.01)g的刺参50 d。在基础饲料中添加0.50%的壳寡糖(chitosan-oligosaccharides,COS),配制3种试验饲料,分别为粉状料对照组、COS粉状料组和COS颗粒料组,研究壳寡糖对刺参... 详细信息

试验以基础配方相同的粉状饲料和颗粒饲料饲喂初始体重为(2.41±0.01)g的刺参50 d。在基础饲料中添加0.50%的壳寡糖(chitosan-oligosaccharides,COS),配制3种试验饲料,分别为粉状料对照组、COS粉状料组和COS颗粒料组,研究壳寡糖对刺参生长性能和免疫的影响。结果显示:与对照组相比,处理组在生长性能上没有显著差异(P>0.05),其中,刺参末重由高到低的次序依次是:COS粉状料组>对照粉状料组>COS颗粒料组;COS颗粒料组的各项免疫指标均显著高于其他组别(P养殖中推广,或者将壳寡糖颗粒饲料作为辅助补充应用于养殖中。

关键词：刺参壳寡糖饲料形态生长免疫酶指标

牙鲆饲料中异亮氨酸与缬氨酸的交互作用对消化酶和部分免疫酶的影响

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饲料工业 2018年第20期39卷 23-28页

作者：王旭周婧薛晓强刘霞陈明康于海霞姜志强韩雨哲大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室辽宁大连116023

试验研究饲料中异亮氨酸(Isoleucine,Ile)和缬氨酸(Valine,Val)的交互作用对牙鲆(Paralichthys olivaceus)肠道消化酶及肝脏免疫相关酶活力的影响。设2个异亮氨酸(Ile)水平(分别占饲料干物质的0%和2%),并将其分别与3个缬氨酸(Val)水平(... 详细信息

试验研究饲料中异亮氨酸(Isoleucine,Ile)和缬氨酸(Valine,Val)的交互作用对牙鲆(Paralichthys olivaceus)肠道消化酶及肝脏免疫相关酶活力的影响。设2个异亮氨酸(Ile)水平(分别占饲料干物质的0%和2%),并将其分别与3个缬氨酸(Val)水平(分别占饲料干物质的0%、0.83%和2.27%)制成6组试验饲料(LI-LV、LI-MV、LI-HV、HI-LV、HI-MV、HI-HV)。以初始体重为(3.57±0.05)g的牙鲆为研究对象,随机分为6个处理组,每个处理组设3个平行,每个平行放20尾鱼,分别投喂上述6种试验饲料,试验期为60 d。结果表明,低Ile水平时,蛋白酶和淀粉酶活性随Val水平的增加先升高后下降,脂肪酶活性随之显著降低(P增加而显著下降(P增加而显著升高(P<0.05)。双因素方差分析结果表明,Ile和Val之间存在交互作用,且在Ile 2%与Val 2.27%水平下,牙鲆幼鱼脂肪酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶活力均达到最高值。故Ile与Val对牙鲆体组织消化酶和免疫酶有显著交互作用,并且Ile 2%与Val 2.27%交互作用时显著提高牙鲆脂肪酶、超氧化物歧化酶活性。

关键词：异亮氨酸缬氨酸交互作用牙鲆消化酶免疫酶

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繸鳚繁殖生物学特性

水产科学 2018年第4期37卷 539-543页

作者：陈冰付旭崔前进陈明康陈飞姜志强大连海洋大学辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁大连116023

2015年4月至2016年4月在黄海海域的大连市旅顺口区盐场地区逐月采集繸鳚样本350尾,采用常规生物学测定等手段,研究了繸鳚的繁殖生物学。试验结果表明,繸鳚为一次性产卵鱼类,成熟个体具有第二性征;雌雄最小性成熟年龄为2龄,雌性性腺指数... 详细信息

2015年4月至2016年4月在黄海海域的大连市旅顺口区盐场地区逐月采集繸鳚样本350尾,采用常规生物学测定等手段,研究了繸鳚的繁殖生物学。试验结果表明,繸鳚为一次性产卵鱼类,成熟个体具有第二性征;雌雄最小性成熟年龄为2龄,雌性性腺指数在10月达到最高值;雄性在9月达到最高值;其个体绝对繁殖力为4009~11 075粒,个体体长相对繁殖力为21.87~39.96粒/cm,个体体质量相对繁殖力为20.31~64.27粒/g。相关分析显示,个体绝对繁殖力与体长、体质量、空壳质量及卵巢质量之间均达到了极显著的相关水平,个体体长相对繁殖力与卵巢质量和肥满度之间为显著性相关,个体体质量相对繁殖力与体长、体质量、空壳质量之间呈显著性负相关,但与性腺指数和年龄呈正相关。

关键词：繸鳚雌雄区别个体繁殖力

饲料中亮氨酸和异亮氨酸交互作用对牙鲆消化酶及免疫相关酶活力的影响

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大连海洋大学学报 2017年第3期32卷 287-293页

作者：王莉苹姜志强孙梦蕾司滨韩雨哲陈飞暴宁大连海洋大学水产与生命学院农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室辽宁大连116023

为研究饲料中亮氨酸(Leucine,Leu)和异亮氨酸(Isoleucine,Ile)的交互作用对牙鲆Paralichthys olivaceus肠道消化酶及肝脏免疫相关酶活力的影响,以含50%全鱼蛋白牙鲆幼鱼饲料中氨基酸组成为参考,设2个Leu水平(分别占饲料干物质的2.58%和5... 详细信息

为研究饲料中亮氨酸(Leucine,Leu)和异亮氨酸(Isoleucine,Ile)的交互作用对牙鲆Paralichthys olivaceus肠道消化酶及肝脏免疫相关酶活力的影响,以含50%全鱼蛋白牙鲆幼鱼饲料中氨基酸组成为参考,设2个Leu水平(分别占饲料干物质的2.58%和5.08%),并将其分别与3个Ile水平(分别占饲料干物质的1.44%、2.21%和4.44%)交互制成6种试验饲料(LL-LI、LL-MI、LL-HI、HL-LI、HL-MI、HLHI);以初始体质量为(2.69±0.04)g的牙鲆为研究对象,将其随机分为6个组,每个处理组设3个重复,分别投喂含不同Leu和Ile水平的上述6种试验饲料;60 d的流水养殖试验结束后,测定牙鲆肠道消化酶(蛋白酶和脂肪酶)及肝脏免疫相关酶(总抗氧化能力T-AOC、过氧化氢酶CAT、超氧化物歧化酶SOD、酸性磷酸酶ACP、碱性磷酸酶AKP)活力。结果表明:高Ile饲料组肠道消化酶活力显著高于中间水平Ile饲料组(P增加,肝脏中CAT、SOD、ACP和AKP活力显著提高(P部分肝脏免疫相关酶活力,且在低Leu(2.58%)水平与高Ile(4.44%)水平(LL-HI饲料组)交互作用下,牙鲆肠道消化酶及肝脏免疫相关酶活力均为最高。

关键词：亮氨酸异亮氨酸交互作用牙鲆消化酶

刺参养殖池塘患病区域沉积物菌群结构与功能特征

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生态学杂志 2023年第8期42卷 1936-1943页

作者：林志萍周叶青张靖婧王荦刘艳霞丁君常亚青大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室辽宁大连116023

为探究刺参养殖池塘患病区域沉积物菌群结构与功能特征,本文采用高通量测序技术开展同一刺参养殖池塘患病区域与正常区域沉积物菌群结构与功能共性及特异性研究。结果表明:与正常区域相比,患病区域刺参养殖池塘沉积物菌群多样性无显著差... 详细信息

为探究刺参养殖池塘患病区域沉积物菌群结构与功能特征,本文采用高通量测序技术开展同一刺参养殖池塘患病区域与正常区域沉积物菌群结构与功能共性及特异性研究。结果表明:与正常区域相比,患病区域刺参养殖池塘沉积物菌群多样性无显著差异,但丰富度显著下降(P养殖池塘沉积物优势菌门均为变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes);患病区域沉积物特异性菌群则主要隶属于放线菌门(Actinobacteria)和蓝细菌门(Cyanobacteria),以假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)、弧菌属(Vibrio)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、Aliivibrio为代表;基于KEGG代谢通路注释,患病区域与正常区域刺参养殖池塘沉积物菌群代谢通路存在差异,其中有36条三级代谢通路呈现出显著性差异(P生物合成等通路显著性上调;正常与患病刺参养殖池塘沉积物菌群结构与功能存在显著性差异,其中弧菌、假交替单胞菌和葡萄球菌等条件致病菌的增殖加大了刺参患病的风险。

关键词：刺参养殖池塘沉积物菌群高通量测序

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重铬酸钾对不同倍性泥鳅鳍细胞系的毒性效应

中国水产科学 2017年第1期24卷 173-179页

作者：吴迪李霞秦艳杰白丽雯周诗珈大连海洋大学辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室辽宁大连116023 大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室辽宁大连116023

以二倍体和三倍体泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)鳍细胞系(DIMF和TRMF)为实验材料,研究了重铬酸钾对细胞的氧化损伤、微核形成以及金属硫蛋白表达情况的影响,旨在多角度探讨重铬酸钾对细胞系的毒性效应,建立适合监测其污染情况的指... 详细信息

以二倍体和三倍体泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)鳍细胞系(DIMF和TRMF)为实验材料,研究了重铬酸钾对细胞的氧化损伤、微核形成以及金属硫蛋白表达情况的影响,旨在多角度探讨重铬酸钾对细胞系的毒性效应,建立适合监测其污染情况的指标。采用MTT法测定了细胞的半数抑制浓度;使用试剂盒测定了3种主要抗氧化酶活性;吉姆萨染色后观察了细胞微核的变化,并通过实时定量PCR方法测定了金属硫蛋白的表达情况。结果表明,24 h急性毒性实验两种细胞系的半抑制浓度分别为(25.3±1.2)μmol/L、(27.9±0.6)μmol/L,DIMF对重铬酸钾的敏感性要高于TRMF。当重铬酸钾浓度为0~30μmol/L时,二个细胞系的超氧化物歧化酶(SOD)活性随染毒浓度升高而升高。当重铬酸钾浓度为0~20μmol/L时,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性逐渐升高,浓度为30~40μmol/L时,其活力开始下降。两种细胞系的谷胱甘肽S转移酶(GST)活性随重铬酸钾浓度增大逐渐降低。二倍体细胞系氧化酶活性均低于三倍体。微核试验显示,重铬酸钾可引起细胞核损伤,形成微核。当重铬酸钾浓度为40μmol/L时,DIMF、TRMF微核率达到最大,分别为7.33‰和8.00‰,DIMF微核率要低于TRMF。实时定量PCR结果显示,对照组金属硫蛋白(MT)基因表达量很低,但经重铬酸钾胁迫后,MT基因表达量显著升高(P<0.01)。

关键词：重铬酸钾泥鳅细胞系酶活力微核率金属硫蛋白

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流速对光棘球海胆行为和生长的影响

生态学报 2022年第10期42卷 4160-4168页

作者：施栋涛赵冲尹东红陈阳常亚青农业农村部北方海水增养殖重点实验室大连海洋大学大连116023

海胆在海藻床生态系统结构和功能调控中发挥重要作用。深入理解流速对海胆摄食和生长的影响具有重要的生态学研究价值。研究了长时间(49 d)不同流速(2 cm/s, 10 cm/s和20 cm/s)对光棘球海胆幼胆(Mesocentrotus nudus,壳径:约20 mm)摄食... 详细信息

海胆在海藻床生态系统结构和功能调控中发挥重要作用。深入理解流速对海胆摄食和生长的影响具有重要的生态学研究价值。研究了长时间(49 d)不同流速(2 cm/s, 10 cm/s和20 cm/s)对光棘球海胆幼胆(Mesocentrotus nudus,壳径:约20 mm)摄食行为、摄食量和生长的影响,以评估不同流速下,海胆摄食行为和生长的差异。实验结果表明,流速对光棘球海胆的存活无显著影响,但显著影响其生长。2 cm/s下海胆的壳径和体重显著大于10和20 cm/s。在实验开始后的第2周和第3周,2 cm/s下海胆的体重和壳径已显著高于20 cm/s。流速显著影响光棘球海胆的摄食量(P增殖。对了解光棘球海胆的生态习性和优化其底播增殖技术提供了可参考的流速信息。

关键词：光棘球海胆流速行为生长

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