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鼠伤寒沙门菌诱导巨噬细胞RAW264.7铜死亡机制研究

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中国病原生物学杂志 2025年第1期 14-18+24页

作者：李丽袁西露程龙云谢荣现祝姚姚李冰清宋楠楠山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)病原生物学系

目的讨论病原菌感染后诱导巨噬细胞发生铜死亡的现象并分析该细胞反应对细菌胞内生存影响，探索细胞铜死亡的机制及其对鼠伤寒沙门菌胞内生存和致病性的影响。方法鼠伤寒沙门菌入侵、加铜离子载体伊利司莫（Elesclomol, ES）和氯化铜2... 详细信息

目的讨论病原菌感染后诱导巨噬细胞发生铜死亡的现象并分析该细胞反应对细菌胞内生存影响，探索细胞铜死亡的机制及其对鼠伤寒沙门菌胞内生存和致病性的影响。方法鼠伤寒沙门菌入侵、加铜离子载体伊利司莫（Elesclomol, ES）和氯化铜24 h后，收集细胞并设置未处理细胞对照组、ES对照组、WT感染组，用电感耦合等离子质谱检测细胞内铜离子浓度变化；细胞内铜染色后，使用共聚焦显微镜观察铜离子的分布情况；细胞入侵48 h后，设置未处理细胞对照组、细胞中和感染的细胞中加入不同浓度铜离子（1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L）,采用乳酸脱氢酶法检测了添加铜离子前后感染细胞死亡率的差异；细胞入侵24 h后，免疫荧光和Western blot方法检测铜死亡关键指标硫辛酰化修饰的DLAT蛋白寡聚体产生及分布情况。结果感染和加入药物干预的RAW264.7细胞内的铜元素的含量无差异，细胞内铜元素含量分别为NC组0.06533±0.008327,ES组0.1580±0.002646,WT组为0.07367±0.007572;共聚焦显微镜显示感染后细胞内铜离子分布形态发生变化，铜离子聚集成点状；细胞感染48 h后，Cell组细胞死亡率为19.60±9.758,Cell+1μmol/L CuCl2组细胞死亡率为17.27±7.130,Cell+2.5μmol/L CuCl2组细胞死亡率为40.13±5.650,Cell+5μmol/L CuCl2组细胞死亡率为65.50±1.241,WT+1μmol/L CuCl2组细胞死亡率为65.44±1.329,WT+2.5μmol/L CuCl2组细胞死亡率为80.56±4.543,WT+5μmol/L CuCl2组细胞死亡率为76.42±1.316,鼠伤寒沙门菌入侵后细胞死亡率随培养基添加铜离子浓度增加而增高；共聚焦显微镜和Western blot显示鼠伤寒沙门菌入侵后铜死亡关键蛋白丙酮酸脱氢酶DLAT亚基发生寡聚化形成多聚体。结论感染后RAW264.7细胞启动铜死亡，抑制鼠伤寒沙门菌胞内生存，为铜死亡的机制研究提供了理论研究基础。

关键词：鼠伤寒沙门菌巨噬细胞RAW264.7 铜死亡铜离子 DLAT蛋白

人参皂苷Rg1基于Notch1通路调控线粒体融合减轻HL-1细胞缺氧/复氧损伤的研究

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中国中药杂志 2025年

作者：张会雨崔晓珊陈原原辛高杰曹策刘子馨胥淑娟高佳明郭浩付建华中国中医科学院西苑医院基础医学研究所滨州医学院中医学院

基于神经源性基因Notch同源蛋白1（neurogenic gene Notch homologous protein 1，Notch1）通路探讨人参皂苷Rg1调控线粒体融合减轻HL-1细胞缺氧复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）损伤的具体机制。cell counting kit-8（CCK-8）检测缺氧6 h、复氧2 h后HL-1细胞的相对活力；乳酸底物法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）活力；荧光素法检测三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）含量；荧光探针检测细胞内活性氧（intracellular ROS，Cyto-ROS）水平以及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential，ΔΨm)；mito-Tracker和Actin共成像检测细胞内线粒体数量；荧光定量聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹法检测Notch1、线粒体融合蛋白2（mitochondrial fusion protein 2，Mfn2）、线粒体融合蛋白1（mitochondrial fusion protein 1，Mfn1）的mRNA和蛋白表达水平。结果显示，与对照组相比，模型组细胞活力降低，释放到细胞培养上清液中的LDH增加，Cyto-ROS增加，ATP含量降低。与模型组相比，人参皂苷Rg1组细胞活力升高，释放到细胞培养上清液中的LDH减少，Cyto-ROS降低，ATP含量升高。人参皂苷Rg1可升高H/R损伤HL-1细胞ΔΨm，增加线粒体数量，对线粒体具有较好的保护作用。H/R损伤后，Notch1、Mfn1 mRNA和蛋白表达降低，Mfn2 mRNA和蛋白表达升高；人参皂苷Rg1可显著升高Notch1、Mfn1 mRNA和蛋白表达，降低Mfn2 mRNA和蛋白表达；Notch1沉默则抑制人参皂苷Rg1的作用，降低Notch1、Mfn1 mRNA和蛋白表达，升高Mfn2 mRNA和蛋白表达。综上所述，人参皂苷Rg1可通过Notch1通路调控线粒体融合减轻HL-1细胞H/R损伤。

关键词：人参皂苷Rg 心肌缺血再灌注损伤(MIRI) 线粒体融合 Notch1 Mfn1 Mfn2

水稻粒型调控基因GW5的PARMS标记开发与应用

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分子植物育种 2025年

作者：陈宏伟张雪田书军高虹庞秀李小婉李全英解文孝王丽丽隋国民郑文静马作斌辽宁省水稻研究所

水稻粒型基因GW5能够通过参与油菜素内酯信号通路，调节水稻粒宽和粒重。粒型优异等位基因的应用，能够通过有针对性的改良使品种选育更具目的性。本研究根据GW5不同等位基因的特异序列，基于五引物扩增受阻突变体系(Penta-primer ampli... 详细信息

水稻粒型基因GW5能够通过参与油菜素内酯信号通路，调节水稻粒宽和粒重。粒型优异等位基因的应用，能够通过有针对性的改良使品种选育更具目的性。本研究根据GW5不同等位基因的特异序列，基于五引物扩增受阻突变体系(Penta-primer amplification refractory mutation system， PARMS)技术，开发了GW5基因的功能性分子标记。利用GW5标记在60份水稻品种检测出窄粒型GW5材料27份、宽粒型GW5材料33份，琼脂糖凝胶电泳试验进一步验证了标记的准确性。粒型相关性状结果显示，窄粒型GW5材料的粒宽极显著低于宽粒型GW5材料，粒长和长宽比则极显著高于宽粒型GW5材料，因此通过应用GW5不同等位基因能够有针对性的改良粒型。本研究设计了可快速高通量检测GW5基因型的PARMS分子标记，对于GW5优异等位基因的应用和高产优质新品种的选育，提供了重要的工具。

关键词：水稻粒型基因GW5 PARMS标记分子标记辅助选择

中医药随机对照试验对照组患者入组困难的解决思路

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中国中药杂志 2025年

作者：周甜甜左佳鑫王宏廖星胡晶首都医科大学附属北京中医医院/北京市中医药研究所/北京中医药循证医学中心中国中医科学院中医临床基础医学研究所循证医学基础研究室

随机对照试验（randomized controlled trial，RCT）目前仍是评价干预措施疗效的金标准，并广泛运用于中医药临床疗效的评价。然而，中医药RCT的实施过程面临独有的实质性挑战。寻求中医药治疗的患者多因西医治疗效果不理想或自身不耐... 详细信息

随机对照试验（randomized controlled trial，RCT）目前仍是评价干预措施疗效的金标准，并广泛运用于中医药临床疗效的评价。然而，中医药RCT的实施过程面临独有的实质性挑战。寻求中医药治疗的患者多因西医治疗效果不理想或自身不耐受，不愿接受某些药物、医疗器械或手术治疗，对中医药疗法存在选择性偏好，抵触随机分组，由此造成中医药RCT在实施时常会遇到西医对照组患者入组困难，这已成为制约中医药RCT实施的突出问题，亟待解决。基于此，该文介绍了当前在中医药领域解决RCT对照组患者入组困难的常用研究设计，包括Zelen设计、考虑患者偏好的部分随机临床试验（partially randomized patient preference trial，PRPP）、单组临床试验目标值法（single-arm objective performance criteria，OPC）、队列研究、单纯采用真实世界数据（real world data，RWD）作为外部对照组的单臂临床试验，以及基于RWD增补RCT对照组样本的设计方法，介绍其定义、方法学原理、优缺点及适用场景，并探讨了各设计方法在中医药领域的应用，以期为解决中医药RCT对照组患者入组困难提供思路。

关键词：随机对照试验对照组入组困难中医药

冠心静胶囊治疗气虚血瘀型冠心病心绞痛的“6+1”维度临床综合评价

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中国实验方剂学杂志 2025年第2期 120-128页

作者：王萌萌崔鑫吕健谢雁鸣王连心中国中医科学院中医临床基础医学研究所中国中医科学院西苑医院

目的：系统梳理冠心静胶囊治疗冠心病心绞痛（气虚血瘀证）现有研究，进行涵盖6+1维度及9个方面的临床证据和综合价值评估，明确冠心静胶囊临床定位及优势特点。方法：采用定性与定量相结合的评价方式，应用临床医学、流行病学、循证医... 详细信息

目的：系统梳理冠心静胶囊治疗冠心病心绞痛（气虚血瘀证）现有研究，进行涵盖6+1维度及9个方面的临床证据和综合价值评估，明确冠心静胶囊临床定位及优势特点。方法：采用定性与定量相结合的评价方式，应用临床医学、流行病学、循证医学、药物经济学等方法学，通过公开资料、问卷调查、真实世界数据和文献综合评价，构建了对冠心静胶囊的6+1维度等9个方面的评价体系。通过专家为准则层和指标层赋予权重，并利用多准则层决策分析模型（MCDA）和CSC(V2.0)软件对各维度进行了度量，揭示了冠心静胶囊的临床价值。结果：(1)评估结果显示冠心静胶囊的安全性较高，根据说明书不良反应、临床安全性系统评价和Meta分析、国家药品不良反应监测中心收集等数据显示冠心静胶囊不良反应主要包括胸闷、呼吸困难、头晕和消化系统相关症状，标准化分数为0.75分，安全性良好。(2)从Meta分析结果中可以看出，在疗效标准一致的情况下，单用冠心静胶囊和冠心静胶囊联合西医常规或中成药来治疗冠心病时的有效性高于单纯西医常规或中成药参芍胶囊治疗，有效性标准化分数为0.57分，仍需一定的证据支持。(3)以2020年的个人可支配收入作为患者的预期付款假设阈值，与单用常规治疗相比，在一定条件转化下（高于106.91元），冠心病心绞痛患者通过联合冠心静胶囊与常规治疗会有成本效益，经济性较好。(4)目前已有3个关于冠心静胶囊的发明的专利获得批准，涵盖了临床创新、服务系统革新及产业发展等多个领域，创新性较好。(5)此外，针对医护人员所做的调查问卷涉及5个不同的维度，其统计分数和评价均表现出良好的适应性，适宜性良好。(6)居民报销比例较高，抽样调查发现冠心静胶囊在全国医院内配比较全，可及性良好。(7)源自清朝著名医学家王清任的活血化瘀理论，冠心静胶囊融合了和益气养阴、芳香温通等多种疗法。根据“6+1”维度的分析数据，最终得出冠心静胶囊对冠心病心绞痛（气虚血瘀型）的临床综合评价为0.73分。结论：基于各维度及临床价值综合评价的结果，冠心静胶囊对于冠心病心绞痛（气虚血瘀型）临床证据充足，具备良好的安全性、适宜性和可及性，建议推荐冠心静胶囊按照既定程序纳入基本临床用药管理的相关政策范畴。

关键词：冠心静胶囊冠心病心绞痛气虚血瘀临床综合评价多准则决策分析

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富血小板血浆来源的血小板细胞外囊泡分离技术与应用

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 156-163页

作者：李娇李晓丰李剑平辽宁省血液中心辽宁省输血医学研究所辽宁省沈阳市110044 中国医科大学药学院辽宁省沈阳市110122 哈尔滨市血液中心黑龙江省哈尔滨市150056 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所江苏省苏州市215000

背景:血小板细胞外囊泡是循环中最丰富的囊泡,富含丰富的生物活性分子、遗传物质及蛋白质等信息分子,参与细胞通讯和物质交换,不仅具有良好的促凝活性,还具有促进组织修复和再生的巨大潜力,在再生医学具有广泛的应用前景。目的:从血小... 详细信息

背景:血小板细胞外囊泡是循环中最丰富的囊泡,富含丰富的生物活性分子、遗传物质及蛋白质等信息分子,参与细胞通讯和物质交换,不仅具有良好的促凝活性,还具有促进组织修复和再生的巨大潜力,在再生医学具有广泛的应用前景。目的:从血小板细胞外囊泡的分泌机制、在再生医学领域的应用及临床转化的限制因素进行阐述,为血小板细胞外囊泡的临床转化提供一些理论支撑。方法:应用计算机检索2005年1月至2023年8月PubMed数据库与血小板细胞外囊泡有关的文章,英文检索词为“platelet-derived,plateletrich plasma,extracellular vesicles,isolated,microvesicles exosomes,applications”,最后纳入符合主题标准的文献62篇进行综述分析。结果与结论:(1)活化的血小板细胞外囊泡可产生血小板微囊泡和血小板外泌体两种类型的囊泡,前者的分泌可能与肌动蛋白细胞骨架的不对称性相关,后者的分泌可能与H^(+)-ATP酶的调节相关。(2)血小板细胞外囊泡是血小板浓缩物和血小板本身的潜在效应物,可能通过促进血管生成、影响细胞行为、促凝与止血以及发挥炎症作用等几方面影响组织再生。(3)血小板细胞外囊泡在组织损伤、肌肉再生、软骨再生、骨关节炎等再生医学领域已有临床前报道,作为伤口愈合的潜在治疗方法已有临床试验数据,但血小板细胞外囊泡的分离方法、样本来源以及激活剂的种类等因素限制了血小板细胞外囊泡在再生医学领域的临床转化。(4)未来血小板细胞外囊泡可能成为再生医学中替代富血小板血浆的无细胞疗法,其临床转化还需要积极寻找鉴别血小板细胞外囊泡和血小板外泌体的特异性标志物,在激活剂刺激血小板细胞外囊泡产生的机制以及血小板细胞外囊泡的最佳收集方式、最佳储存方法、保质期限、临床应用的推荐剂量和最佳临床适应证还需要继续深入研究。

关键词：血小板来源富血小板血浆血小板裂解液细胞外囊泡微泡外泌体分离治疗组织损伤应用

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松萝酸抗肿瘤作用研究进展

医药导报 2025年

作者：胡珊珊刘亚云盛德乔杨轶肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室三峡大学基础医学院

松萝酸是一种地衣的次生代谢产物，因其具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒及抗炎等多种药理作用而被广泛应用于医药、膳食补充剂和日化产品（饲料、染料、食品、香水和化妆品）等领域。近年来研究发现，松萝酸可以通过诱导肿瘤细胞的凋亡和自噬... 详细信息

松萝酸是一种地衣的次生代谢产物，因其具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒及抗炎等多种药理作用而被广泛应用于医药、膳食补充剂和日化产品（饲料、染料、食品、香水和化妆品）等领域。近年来研究发现，松萝酸可以通过诱导肿瘤细胞的凋亡和自噬、阻滞肿瘤细胞周期进程、抑制细胞的迁移与侵袭、调控miRNA的表达等方面抑制多种肿瘤的发生与发展。此外，松萝酸能够与临床抗癌药物联用产生协同抗癌效应，经改造后得到的松萝酸类似物也表现出较好的抗肿瘤活性。本文将围绕松萝酸的研究现状，从松萝酸的理化性质、抗肿瘤作用机制及其类似物的抗肿瘤作用等方面进行综述与展望。

关键词：松萝酸松萝酸类似物抗肿瘤

MICA基因中6个连锁单核苷酸多态性位点与玫瑰痤疮易感性相关

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中南大学学报(医学版) 2025年

作者：尹湘丽朱权李吉邹义洲罗奇志中南大学基础医学院免疫系中南大学湘雅医院皮肤科

目的：主要组织相容性复合体I类链相关基因A(major histocompatibility complex class I chain-related gene A,MICA)属于人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因的一部分，其多态性与自身免疫病等多种疾病的发生发展密切相... 详细信息

目的：主要组织相容性复合体I类链相关基因A(major histocompatibility complex class I chain-related gene A,MICA)属于人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因的一部分，其多态性与自身免疫病等多种疾病的发生发展密切相关。玫瑰痤疮是一种慢性炎症性皮肤病，其发病机制复杂，涉及遗传和免疫因素。通过分析MICA基因的多态性及其单核苷酸多态性位点与玫瑰痤疮易感性之间的关系，为玫瑰痤疮的发病机制提供新的见解。方法：收集2017年11月至2019年11月期间在中南大学湘雅医院皮肤科门诊就诊的84例玫瑰痤疮患者的外周血DNA样本，并收集233例健康志愿者外周血DNA样本作为对照组。利用聚合酶链反应-直接测序法(polymerase chain reactionsequencing based typing,PCR-SBT)及高通量测序(the next-generation sequencing,NGS)技术同时对MICA基因多态性进行分型分析并比较。通过统计学方法比较患者与对照组间MICA等位基因频率的差异。进一步对所有MICA多态性分子进行氨基酸聚类分析和单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点分析确定相关连锁SNP位点，将MICA多态性分子进行分类，并使用统计学方法比较分析患者组与对照组间两大类MICA多态性分子的频率差异。结果：玫瑰痤疮患者的血生化结果主要以中性粒细胞轻度升高为特征，淋巴细胞无显著改变。PCR-SBT及NGS均能有效准确地对MICA等位基因进行基因型鉴定。研究发现，玫瑰痤疮患者中MICA*008:04、MICA*010:01和MICA*019:01等位基因分布频率最高。玫瑰痤疮患者中MICA*002:01和MICA*027的频率显著低于对照组，而MICA*009:01和MICA*010:01的频率显著高于对照组。玫瑰痤疮患者MICA-A4和MICA-A9的频率显著低于对照组，而MICA-A6在玫瑰痤疮患者中的频率显著高于对照组。通过氨基酸序列聚类分析和SNP位点分析发现MICA基因中存在6个连锁单核苷酸多态性位点，据此将MICA多态性分子分为Type I型和Type II型。玫瑰痤疮患者中Type I型MICA多态性分子与玫瑰痤疮的易感性密切相关。结论：MICA基因多态性与玫瑰痤疮易感性相关，并且MICA基因中存在6个连锁SNP位点，据此将MICA多态性分子分为两型，Type I型与玫瑰痤疮发病密切相关。

关键词： MICA基因多态性玫瑰痤疮单核苷酸多态性

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促黄体激素释放激素类似物的制备

化学与生物工程 2025年第01期 49-52页

作者：李松涛杨雪郝婷范彦芳王燕承德医学院中药研究所河北省中药研究与开发重点实验室承德医学院基础医学院

以Rink Amide树脂为固相载体、N-芴甲氧羰基（Fmoc）保护氨基酸为原料，采用固相多肽合成法制备了一种促黄体激素释放激素（luteinizing hormone-releasing hormone, LHRH）6位经D-构型半胱氨酸（D-Cys）取代的类似物[D-Cys6]-LHRH。优... 详细信息

以Rink Amide树脂为固相载体、N-芴甲氧羰基（Fmoc）保护氨基酸为原料，采用固相多肽合成法制备了一种促黄体激素释放激素（luteinizing hormone-releasing hormone, LHRH）6位经D-构型半胱氨酸（D-Cys）取代的类似物[D-Cys6]-LHRH。优化的裂解试剂为三氟乙酸-水-三异丙基硅烷（95.0∶2.5∶2.5,体积比）,纯品的HPLC纯度为97.8%,总收率为47.5%。该方法简便高效、总收率高，为LHRH类似物的制备提供了参考，也为进一步构建LHRH受体靶向的多肽-药物偶联物奠定了基础。

关键词：促黄体激素释放激素类似物多肽固相合成 D-构型半胱氨酸