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过表达整合素链接激酶通过NF-kB通路促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化

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中山大学学报（医学科学版） 2016年第2期37卷 210-216页

作者：梁峰王冰鲍龙赵印生张淑芹辽宁医学院附属第一医院神经外科辽宁锦州121000 辽宁医学院附属第一医院儿科辽宁锦州121000

【目的】研究过表达整合素链接激酶(ILK)对胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)的调控作用及初步机制。【方法】项目组前期实验已经成功构建了重组质粒p EGFP-C1-ILK,并将其转染给SHG-44胶质瘤细胞,通过G418筛选出了稳定转染的细胞株。实验分... 详细信息

【目的】研究过表达整合素链接激酶(ILK)对胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)的调控作用及初步机制。【方法】项目组前期实验已经成功构建了重组质粒p EGFP-C1-ILK,并将其转染给SHG-44胶质瘤细胞,通过G418筛选出了稳定转染的细胞株。实验分组如下:SHG-44(空白对照组)、p EGFP-C1(空载组),及p EGFP-C1-ILK(稳转组),先检测各组中ILK的表达情况(RNA及蛋白质水平)及侵袭能力,再检测过表达ILK后对EMT标记物的影响,最后再分别应用NF-κB通路的特异性阻断剂BAY11-7028和RNA沉默的方法阻断核因子NF-κB通路,Western blot方法检测上皮间质转化标记物Ecadherin在阻断前及阻断后的表达情况,初步探讨NF-k B通路在过表达ILK的胶质瘤细胞中对EMT的调控作用。【结果】稳转组中ILK明显过表达,同时侵袭能力增强(Transwell小室透膜细胞数在对照组、空载组和稳转组分别为:92,87,229)。Western blot检测EMT标记物蛋白的表达:稳定转染组中snail,slug,twist,vimentin的表达较对照组及空载组的表达明显增高,而E-cadherin的表达则在稳定转染组中明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。当分别用NF-k B特异性阻断剂BAY11-7028及p65 si RNA的方法阻断该通路后,稳定转染组中E-cadherin蛋白表达明显升高。【结论】胶质瘤中过表达ILK可使侵袭能力增强,同时可下调E-cadherin,上调vimentin及Snail,Slug,Twist的表达,可能通过此机制促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化,NF-k B通路可能参与、调控该进程。

关键词：稳定过表达 NF-kB EMT

CXCR7-shRNA靶向抑制结肠癌SW620细胞的体外实验研究

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西安交通大学学报（医学版） 2014年第4期35卷 460-464,480页

作者：王鑫陈玲孙飞陆航辽宁医学院附属第一医院急诊科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院胃肠外科辽宁锦州121001

目的探讨慢病毒介导的CXCR7-shRNA转染人结肠癌细胞株SW620后对CXCR7蛋白表达的影响。方法①设计并合成CXCR7的3对shRNA序列及1对阴性对照序列,与pSilencerTM4.1系统合成构建重组慢病毒载体,转染HEK293T细胞包装病毒并检测滴度;②将3种... 详细信息

目的探讨慢病毒介导的CXCR7-shRNA转染人结肠癌细胞株SW620后对CXCR7蛋白表达的影响。方法①设计并合成CXCR7的3对shRNA序列及1对阴性对照序列,与pSilencerTM4.1系统合成构建重组慢病毒载体,转染HEK293T细胞包装病毒并检测滴度;②将3种重组慢病毒载体及阴性对照分别感染人结肠癌细胞SW620,RT-PCR检测CXCR7mRNA的表达情况,测定沉默效率,筛选沉默效率最高的一组CXCR7-shRNA作为后续实验的表达载体;③MTT法检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞生长增殖的影响;④细胞划痕实验检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞侵袭迁移能力的影响;⑤Western blot检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞蛋白表达情况。结果①测序证实3对慢病毒载体及1对阴性对照载体均包装成功,滴度分别3.16×108pfu/mL、4.27×108 pfu/mL、3.93×108pfu/mL和2.95×108pfu/mL;②3组慢病毒载体转染SW620细胞后,CXCR7mRNA的表达量均较阴性对照组明显降低(P<0.05),其中CXCR7-shRNA-1对CXCR7的抑制率明显高于其他两组(P<0.05);③CXCR7-shRNA-1转染SW620后,肿瘤细胞的增殖程度显著减少,与空白组相比有统计学差异(P<0.05);④SW620细胞在划痕24h后,空白对照组和实验组的细胞迁移指数(MI)分别为(49.92±6.41)%和(29.13±5.38)%,差异有统计学意义(P<0.05),划痕48h后,对照组与实验组的MI分别为(96.52±7.44)%和(72.03±8.29)%,差异有统计学意义(P<0.05);⑤CXCR7-shRNA-1转染SW620细胞后,与空病毒载体组、空白组相比,CXCR7蛋白表达量明显降低,具有统计学意义(P<0.05)。结论 CXCR7被沉默后可有效抑制SW620肿瘤细胞的增殖与迁移,这为后续研究以CXCR7/CXCL12生物学轴为靶点的肿瘤基因治疗打下良好基础。

关键词：结直肠癌 CXCR7 CXCL12 重组慢病毒载体 RNAi

BMP-14转染脂肪来源干细胞后与软骨细胞共培养的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2013年第3期27卷 353-357页

作者：袁虹张解元张荣明辽宁医学院附属第一医院整形烧伤科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院骨关节外科辽宁锦州121001

目的研究BMP-14与软骨细胞共同诱导脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向软骨细胞分化是否具有协同作用,优化软骨组织工程种子细胞来源。方法取2只雄性新西兰大白兔(体重1.5、2.0 kg)关节软骨和皮下脂肪组织,分离、培养... 详细信息

目的研究BMP-14与软骨细胞共同诱导脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向软骨细胞分化是否具有协同作用,优化软骨组织工程种子细胞来源。方法取2只雄性新西兰大白兔(体重1.5、2.0 kg)关节软骨和皮下脂肪组织,分离、培养软骨细胞和ADSCs,取第3代细胞进行实验。对ADSCs行成骨(茜素红染色)、成软骨(阿利新蓝染色)和成脂(油红O染色)诱导鉴定。测定Ad-巨细胞病毒-BMP-14-内部核糖体进入位点-人源化海肾绿色荧光蛋白1转染的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)并以其转染ADSCs。实验分为5组:A组,采用Transwell小室将BMP-14转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1);B组,采用Transwell小室将未转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1);C组,单纯BMP-14转染的ADSCs培养;D组,单纯软骨细胞培养;E组,单纯ADSCs培养。培养3周后,取细胞采用阿利新蓝法检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,Western blot检测BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达,RT-PCR检测Sox-9基因表达。结果培养细胞经鉴定提示为ADSCs。倒置荧光显微镜观察示,MOI值为150时转染效果最好。A、C组GAG含量、BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达以及Sox-9基因表达均明显高于其余3组,A组高于C组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 BMP-14与软骨细胞能共同诱导并促进兔ADSCs向软骨细胞分化,两者之间具有协同作用。

关键词：软骨组织工程脂肪来源干细胞 BMP-14 软骨细胞共培养兔

PIK3CD表达上调与胃癌临床病理特征及患者预后的相关性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2015年第1期22卷 62-66页

作者：乔世峰李世正佟鑫辽宁医学院附属第一医院胃肠外科辽宁锦州121001

目的:分析磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit delta,PIK3CD)表达与胃癌临床病理特征和患者预后的相关性。方法:收集2004年5月至2007年12月在辽宁医学院附属第一医院胃肠外科行肿瘤切除并经病理... 详细信息

目的:分析磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit delta,PIK3CD)表达与胃癌临床病理特征和患者预后的相关性。方法:收集2004年5月至2007年12月在辽宁医学院附属第一医院胃肠外科行肿瘤切除并经病理证实的胃癌患者癌组织标本及相应癌旁组织标本各86例,采用免疫组织化学法检测PIK3CD蛋白在86例胃癌及癌旁组织中的表达;利用χ2检验及Spearman相关性检验探讨PIK3CD表达与胃癌临床病理特征的关系;应用Kaplan-Meier方法分析PIK3CD表达与胃癌患者术后5年生存率及生存时间。结果:相对于癌旁组织,PIK3CD在胃癌组织中的表达明显上调(P=0.006);PIK3CD表达与胃癌浸润深度呈显著相关性(P=0.005),与淋巴结阳性率(P=0.089)和临床分期(P=0.060)有相关趋势但无统计学意义,而与肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结和远处转移等无相关性。高表达和低表达PIK3CD的患者术后5年累积生存率分别为18.9%和60.6%,中位生存时间为31.0(95%CI:23.9~38.1)个月和60.6(95%CI:53.8~67.4)个月,Kaplan-Meier分析显示其差异有显著统计学意义(χ2=19.791,P=0.000)。多因素分析显示,PIK3CD可作为一个独立的预后评估因素(P=0.000)。结论:(1)胃癌组织中PIK3CD表达的显著上调提示其具有潜在的促癌作用;(2)PIK3CD表达上调与胃癌的浸润程度和患者生存时间相关,可作为胃癌预后不良评估的一个独立影响因素。

关键词：胃癌磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ 浸润预后

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

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中国医学科学院学报 2011年第1期33卷 71-75页

作者：张银旭刘晓梅左腾刘宇张俊华辽宁医学院附属第一医院普通外科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院肿瘤内科辽宁锦州121001

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW 620细胞生物学功能的影响。方法采用白细胞介素(IL)-4体外诱导人M2型巨噬细胞,W estern blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况。Transwel... 详细信息

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW 620细胞生物学功能的影响。方法采用白细胞介素(IL)-4体外诱导人M2型巨噬细胞,W estern blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况。Transwell非接触式共培养TAM和SW 620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW 620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW 620细胞的增殖和凋亡情况。结果 IL-4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS。SW 620与M2型巨噬细胞共培养24、48 h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均0.05)。与M2型巨噬细胞共培养24、48 h后,SW 620的NF-κBDNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均<0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均<0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均<0.01)。结论 TAM可能通过抑制SW 620细胞的NF-κB活性,抑制SW 620细胞增殖,促进SW 620细胞凋亡。

关键词：肿瘤相关巨噬细胞 SW620细胞共培养增殖凋亡

腺病毒介导BMP-2联合低氧诱导因子1α突变型与单基因BMP-2分别转染BMSCs后成骨效应的比较研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第9期26卷 1102-1106页

作者：张解元袁虹李谌李全营郭威刘丹平辽宁医学院附属第一医院骨关节外科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院整形烧伤科辽宁锦州121001

目的比较腺病毒载体Ad-BMP-2-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-低氧诱导因子1α突变型(hypoxia inducible factor 1αmu,HIF-1αmu)与Ad-巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)-BMP-2-IRES-人源化海肾绿色荧光蛋白1(human renilla reniformis green fluorescent protein 1,hrGFP-1)分别转染BMSCs后的成骨效应,优化成骨细胞种子来源。方法取1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs。取第3代BMSCs进行病毒液转染,根据转染病毒液不同将实验分为4组,A、B、C组分别采用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50、100、150和200的Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu、Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1、Ad-CMV-IRES-hrGFP-1(空腺病毒载体)转染细胞,D组为未被转染的BMSCs。选择最佳MOI值进行观察。转染后采用免疫组织化学染色检测BMP-2表达,Western blot检测BMP-2和HIF-1α蛋白表达,ALP活性测定和钙结节茜素红染色检测细胞成骨分化能力。结果 A、B、C组最佳MOI值分别为200、150和100。免疫组织化学染色示,A、B组BMP-2染色呈阳性,C、D组呈阴性;A组阳性细胞数明显多于B组(P0.05)。A、B组ALP活性明显高于C、D组(P<0.05),A组高于B组(P<0.05)。茜素红染色示,A、B组可见明显钙结节,C、D组未见钙结节形成;且A组钙结节数量多于B组(P<0.05)。结论单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu与单载体单基因Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1分别转染兔BMSCs后,前者BMP-2和成骨效应表达均高于后者。

关键词：低氧诱导因子1α突变型 BMP-2 BMSCs 腺病毒基因转染兔

枸杞多糖对人脐静脉血管内皮细胞的增殖、迁移及血管形成的影响

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中国老年学杂志 2016年第8期36卷 1819-1822页

作者：尹逊天王巍朱玉峰白光辽宁医学院附属第一医院普外科辽宁锦州121000

目的观察枸杞多糖(LBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移能力及血管形成的影响。方法在HUVECs分别加入不同浓度的LBP后,应用噻唑蓝(MTT)和划痕实验方法检测对HUVECS增殖与迁移的影响。利用基质胶实验检测实验浓度LBP对血管形... 详细信息

目的观察枸杞多糖(LBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移能力及血管形成的影响。方法在HUVECs分别加入不同浓度的LBP后,应用噻唑蓝(MTT)和划痕实验方法检测对HUVECS增殖与迁移的影响。利用基质胶实验检测实验浓度LBP对血管形成作用的影响。结果 1MTT实验结果表明:随LBP浓度增加,抑制HUVECs增殖能力增强,同时应用甩片实验可推断LBP通过促进HUVECs凋亡而达到抑制细胞增长的作用;2划痕实验显示实验浓度LBP作用下HUVECs迁移距离较空白对照组具有统计学差异;3实验浓度LBP可明显抑制血管形成。结论 LBP对HUVECs增殖迁移及血管生成能力具有明显抑制作用。

关键词：枸杞多糖人脐静脉血管内皮细胞增殖迁移血管形成

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辽宁省农村留守老人生活质量和心理健康

中国老年学杂志 2016年第7期36卷 1741-1743页

作者：杨夙高秀梅辽宁医学院附属第一医院心外科辽宁锦州121000

目的了解辽宁省农村留守老人生活质量和心理健康现状。方法采用中文版简明健康状况调查问卷量表对辽宁省1348名农村留守老人进行目的性抽样调查。结果性别、年龄、文化程度、婚姻状况、患病情况在留守老人生活质量和心理状况得分方面差... 详细信息

目的了解辽宁省农村留守老人生活质量和心理健康现状。方法采用中文版简明健康状况调查问卷量表对辽宁省1348名农村留守老人进行目的性抽样调查。结果性别、年龄、文化程度、婚姻状况、患病情况在留守老人生活质量和心理状况得分方面差异显著(P<0.05)。结论农村留守老人生活质量与心理健康程度有待提高,制定改善措施要有针对性,需要考虑农村留守老人的特征。

关键词：农村留守老人生活质量

胃腺癌中原癌基因C-jun、C-fos和磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的表达及意义

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中国老年学杂志 2016年第13期36卷 3208-3210页

作者：胡乃军辽宁医学院附属第一医院普外科辽宁锦州121001

目的检测胃腺癌中原癌基因C-jun、C-fos和磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)的表达,关注其在不同临床病理特征中的意义。方法 72例胃腺癌根治术患者的临床资料及术后蜡块组织作为观察组,胃黏膜高级别上皮内瘤变组织32例作为对照组1,胃黏... 详细信息

目的检测胃腺癌中原癌基因C-jun、C-fos和磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)的表达,关注其在不同临床病理特征中的意义。方法 72例胃腺癌根治术患者的临床资料及术后蜡块组织作为观察组,胃黏膜高级别上皮内瘤变组织32例作为对照组1,胃黏膜低级别上皮内瘤变组织32例作为对照组2,观察组中距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织32例作为对照组3。应用免疫组织化学SP法检测四组中C-jun、C-fos和PTEN的表达。结果四组中C-jun、C-fos和PTEN表达的阳性率差异显著。观察组中C-jun、C-fos和PTEN的阳性率均与肿瘤最大径、浸润深度和Ki67指数密切相关,PTEN的表达与脉管内瘤栓密切相关。相关分析显示观察组中C-jun和PTEN、C-fos和PTEN的表达呈负相关。结论胃腺癌术后组织中C-jun、C-fos高表达、PTEN低表达,三者异常表达均可以促进肿瘤的进展,C-jun与C-fos均与PTEN有相关性。

关键词：胃腺癌 C-jun C-fos 磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN) 免疫组织化学