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疾病动物模型建模过程中伦理和福利审查

医用生物力学 2024年第1期39卷 1-8页

作者：邢凤英赵勇上海交通大学医学院附属第九人民医院实验动物中心上海200011 上海实验动物研究中心上海201203

建立动物模型是研究各种相应疾病发病机制和治疗手段不可或缺的工具,其伦理和福利的审查是保证科研质量以及促进实验动物科学、合理使用的必要措施。在审查实践中发现,大部分申请者都无法准确理解伦理申请表中的各项内容及其对应的伦理... 详细信息

建立动物模型是研究各种相应疾病发病机制和治疗手段不可或缺的工具,其伦理和福利的审查是保证科研质量以及促进实验动物科学、合理使用的必要措施。在审查实践中发现,大部分申请者都无法准确理解伦理申请表中的各项内容及其对应的伦理原则。因此,一套切实可行的动物实验伦理操作指南十分必要。本文以口腔疾病动物模型为例,从其开展的法律、伦理基础为切入点,将建立口腔疾病动物模型的方法分为物理法、化学法、生物法、联合法,并详述不同建模方法的伦理和福利审查要点和模型评价方法。希望能帮助审查者和项目申请者更好理解并执行伦理审查的要点,最终提高动物模型标准化程度和适用性。

关键词：疾病动物模型伦理审查动物福利模型评价

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胰腺癌类器官模型的构建与应用

中国比较医学杂志 2024年第6期34卷 40-46页

作者：李鹏黄敏丽谭邓旭张彩勤张永斌师长宏广州中医药大学动物实验中心广州510405 第四军医大学实验动物中心西安710032

目的构建胰腺癌类器官(patient-derived tumor organoid, PDO)并进行药物治疗评价,评估PDO模型的有效性。方法收集胰腺癌患者新鲜手术标本,用于PDO培养;分析PDO模型与原发瘤的病理学和遗传学特征;利用PDO模型开展临床化疗药物的疗效评... 详细信息

目的构建胰腺癌类器官(patient-derived tumor organoid, PDO)并进行药物治疗评价,评估PDO模型的有效性。方法收集胰腺癌患者新鲜手术标本,用于PDO培养;分析PDO模型与原发瘤的病理学和遗传学特征;利用PDO模型开展临床化疗药物的疗效评价,测试模型的有效性。结果成功建立一例胰腺癌PDO模型,组织形态学分析显示PDO模型基本保持了原发肿瘤病理学特征。全外显子测序结果显示,PDO在基因突变类型和特征方面与原始肿瘤保持一致。药物筛选试验显示,PDO模型对临床常用的化疗药物吉西他滨、伊立替康具有较好的敏感性。结论成功构建了一例胰腺癌PDO模型,该模型能够反应原始肿瘤的组织学和遗传学特征,并可以进行体外药物敏感性实验,证明了PDO模型的有效性,有望应用于胰腺癌的个体化治疗。

关键词：胰腺癌类器官药物筛选个体化治疗

猪附红细胞体eno基因重组腺病毒疫苗对仔猪免疫效果的研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第10期 89-93页

作者：杜宏鑫韩金成闫思雨姜湛恒张波王金琦薛书江崔起超延边大学农学院吉林延吉133002 延边大学实验动物中心吉林延吉133002

为了评价猪附红细胞体eno基因重组腺病毒疫苗(Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗)对仔猪的免疫效果,试验将12头仔猪随机分为3组,分别为Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组、重组空载体腺病毒组和PBS对照组,分别于3组仔猪的颈部肌肉注射Ad5-M/eno重组腺病... 详细信息

为了评价猪附红细胞体eno基因重组腺病毒疫苗(Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗)对仔猪的免疫效果,试验将12头仔猪随机分为3组,分别为Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组、重组空载体腺病毒组和PBS对照组,分别于3组仔猪的颈部肌肉注射Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗(浓度为1×10^(10)pfu/mL)、空载体重组腺病毒(浓度为1×10^(10)pfu/mL)和PBS各2.5 mL,于试验第0,21天分两次免疫。第2次免疫后第14天,麻醉后手术切除仔猪脾脏,采用密度梯度离心法提取猪脾脏淋巴细胞,利用流式细胞仪检测仔猪CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞含量。于第1次免疫前(第0天)及免疫后第7,14,21,28,35,42,49天无菌采集各组试验猪的颈静脉血,分离血清,检测每组仔猪抗猪附红细胞体特异性抗体IgG效价及IgG_(1)、IgG_(2a)和细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平,评价Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗对仔猪的细胞与体液免疫应答效果。结果表明:Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组的CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞含量极显著高于重组空载体腺病毒组和PBS对照组(P0.05)。免疫后第28,35,42,49天,Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组的抗猪附红细胞体特异性IgG抗体效价及IgG_(1)、IgG_(2a)和细胞因子IL-4和IFN-γ水平极显著高于重组空载体腺病毒组与PBS对照组(P0.05)。说明猪附红细胞体eno基因重组腺病毒疫苗可以诱导仔猪产生强烈的细胞免疫和体液免疫应答。

关键词：猪附红细胞体 eno基因重组腺病毒疫苗仔猪免疫保护

H3亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1137-1146页

作者：毛秋艳周淑宁刘朔彭程尹馨张雅馨周婉婷李金平侯广宇蒋文明宋厚辉刘华雷浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 青岛农业大学动物医学院青岛266109 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018

H3亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染宿主广泛,具备跨物种传播的能力,不但造成了家禽的发病,还导致了多起人感染病例,具有重要的公共卫生意义。因此,有必要建立一种快速灵敏的H3亚型AIV的检测方法。本研究参考了GenBank近... 详细信息

H3亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染宿主广泛,具备跨物种传播的能力,不但造成了家禽的发病,还导致了多起人感染病例,具有重要的公共卫生意义。因此,有必要建立一种快速灵敏的H3亚型AIV的检测方法。本研究参考了GenBank近年来公开的H3亚型AIV HA基因序列,在保守区域设计一对特异性引物和Taq Man探针。通过对反应条件的优化,分别以cRNA阳性标准品和病毒核酸标准品为模板绘制标准曲线,建立了针对H3亚型AIV的荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、重复性进行评估。进一步使用实验室攻毒鸡组织样品和临床拭子样品对该方法进行了验证。结果表明,该方法特异性强,与其他亚型AIV和常见禽类病原体均无交叉反应;检测下限分别为1.0×10^(2) copies·μL^(-1)和10^(2) EID 50·0.1 mL^(-1),灵敏度与常规RT-PCR相比提高了10倍;组内和组间变异系数均小于1.5%,重复性较好。动物攻毒临床试验样品和临床拭子样品检测结果显示,该检测方法敏感性高于普通RT-PCR方法,与病毒分离鉴定结果一致,符合率为100%,可用于临床检测。综上,本研究建立的H3亚型AIV荧光定量RT-PCR检测方法具备特异、快速、灵敏等特点,为H3亚型AIV的快速诊断和监测及防控提供一定的技术支持。

关键词：禽流感病毒 H3亚型荧光定量监测

内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况及分子鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 36-41页

作者：李娜藏达热乌日力格阿拉腾布日古德海鹰哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室国家级动物医学实验教学中心呼和浩特010018 乌审旗动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017300

目的了解内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况。方法2022年8月至2023年3月在乌审旗嘎鲁图、苏力德苏木、乌兰陶勒盖、乌审召和图克镇采集牛、羊血样和粪样,间接ELISA检测血清抗肝片形吸虫抗体,随机抽取部分血清抗体检测样品对应的... 详细信息

目的了解内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况。方法2022年8月至2023年3月在乌审旗嘎鲁图、苏力德苏木、乌兰陶勒盖、乌审召和图克镇采集牛、羊血样和粪样,间接ELISA检测血清抗肝片形吸虫抗体,随机抽取部分血清抗体检测样品对应的牛、羊粪样,采用虫卵沉淀法定性检查虫卵,对血清抗体检测和粪样虫卵检查结果进行一致性检验。2023年4月,在嘎鲁图、苏力德苏木和图克镇因感染片形吸虫死亡牛、羊尸首的肝脏和胆汁中采集片形吸虫成虫和虫卵,提取虫体和虫卵DNA,PCR扩增片形吸虫核糖体内转录间隔区2(ITS2)并测序,在NCBI数据库中进行BLAST比对分析,采用邻接法构建系统进化树。采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,不同地区的阳性率的比较采用χ^(2)检验。结果共采集825份牛、羊血样,其中295份血清肝片形吸虫抗体阳性,总阳性率为35.8%(295/825),羊、牛阳性率分别为34.7%(227/655)、40.0%(68/170)。羊血清阳性率以苏力德苏木最高[81.8%(45/55)],乌审召镇最低[22.0%(27/123)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=73.93,P<0.05)。牛血清抗体阳性率以嘎鲁图镇最高[65.1%(28/43)],图克镇最低[19.2%(5/26)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=21.50,P<0.05)。共抽取88份牛、羊粪样(羊粪样59份,牛粪样29份)检查,其中1份羊粪样、5份牛粪样检出肝片形吸虫虫卵,4份牛粪样检出同盘吸虫虫卵。88份牛、羊血样、粪样样品中,血清肝片形吸虫抗体的阳性率为29.5%(26/88),粪样肝片形吸虫卵的阳性率为6.8%(6/88),kappa值为0.086,两种方法的一致性为微弱。从2头牛体内收集到成虫和虫卵,从2头羊体内收集到成虫。共取5条成虫和2份虫卵提取DNA,PCR扩增共获得7条约550 bp的条带。BLAST比对分析结果显示,4条序列与来自中国的巨片形吸虫ITS2(GenBank:HQ700438)的序列一致性分别96.62%、95.91%、95.74%和92.97%,鉴定为巨片形吸虫;3条序列与来自中国的肝片形吸虫ITS2(GenBank:JF496717)的序列一致性分别为95.69%、99.80%和99.23%,鉴定为肝片形吸虫。系统进化树分析结果显示,本研究鉴定的肝片形吸虫与来自中国(GenBank:JF496717)、肯尼亚(GenBank:MZ396926)、埃及(GenBank:MW620063)的肝片形吸虫聚在同一分支上;巨片形吸虫与来自中国(GenBank:HQ700438)和印度(GenBank:OL691113)的巨片形吸虫聚在同一分支上。结论内蒙古乌审旗地区牛、羊均存在肝片形吸虫和巨片形吸虫感染,片形吸虫的感染率较高。

关键词：片形吸虫肝片形吸虫巨片形吸虫血清抗体 ELISA 分子鉴定牛羊内蒙古

血链球菌cpnp培养上清液抑制铜绿假单胞菌生长和生物膜的作用

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中国微生态学杂志 2024年第6期36卷 637-646,656页

作者：高毅敏李娜李新鸣金慧张家鑫耿大升孙贺刘光焱马明月沈阳医学院基础医学院沈阳110034 辽宁省环境污染与微生态重点实验室沈阳医学院附属中心医院检验科沈阳医学院附属第二医院检验科

目的研究血链球菌cpnp培养上清液抑制铜绿假单胞菌生长和生物膜形成、破坏成熟生物膜的作用,以及其联合抗生素的抑菌作用,为利用呼吸道共生菌制剂干预铜绿假单胞菌呼吸道定植,减少呼吸道感染提供依据。方法采用牛津杯法测定血链球菌c... 详细信息

目的研究血链球菌cpnp培养上清液抑制铜绿假单胞菌生长和生物膜形成、破坏成熟生物膜的作用,以及其联合抗生素的抑菌作用,为利用呼吸道共生菌制剂干预铜绿假单胞菌呼吸道定植,减少呼吸道感染提供依据。方法采用牛津杯法测定血链球菌cpnp对铜绿假单胞菌生长的抑制作用。使用96孔板法测定血链球菌cpnp培养上清液联合头孢他啶对铜绿假单胞菌生长的抑制作用。体外建立铜绿假单胞菌生物膜模型,利用结晶紫半定量法、刚果红染色法、RT-qPCR法测定血链球菌cpnp培养上清液对生物膜形成的抑制作用;利用结晶紫半定量法、MTT法测定血链球菌cpnp培养上清液对成熟生物膜的破坏作用;采用光镜和电镜观察生物膜的形态。结果血链球菌cpnp培养上清液对铜绿假单胞菌生长有抑制作用,与头孢他啶联用时表现出协同作用(P<0.001)。血链球菌cpnp培养上清液可减少铜绿假单胞菌生物膜形成量(P<0.001)、胞外多糖产量(P<0.001)及降低胞外多糖基因表达水平(P<0.050)。血链球菌cpnp培养上清液可减少成熟生物膜总量(P<0.001)和降低生物膜代谢活性(P<0.001)。结论血链球菌cpnp上清液和其联用抗生素能拮抗铜绿假单胞菌生长,并且上清液对其生物膜有良好的抑制和破坏作用。

关键词：血链球菌铜绿假单胞菌生物膜协同作用

犬支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和灭活疫苗初步应用

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中国兽医杂志 2024年第7期60卷 41-48页

作者：王潘龙赵悦孙强周昊尹月曲雪婷原昆鹏栾庆东陈淑贞卢艳敬臧立玉韩海峰尹燕博青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 青岛市即墨区畜牧业发展服务中心山东青岛266299 青岛博隆实验动物有限公司山东青岛266225 山西农业大学动物医学院山西晋中030801 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序... 详细信息

某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序,对分离细菌进行鉴定,并对部分菌株进行药敏试验。选取1株致病性强的分离菌株制备支气管败血波氏杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗,进行免疫保护试验,分别采用1.0和0.5 mL剂量免疫小鼠,免疫后21 d攻毒;对养殖场临床发病犬和同群健康犬进行紧急免疫接种,剂量为4月龄以上犬每只1.0 mL、2~4月龄犬每只0.5 mL。对临床病死犬和攻毒死亡小鼠进行组织病理学观察。结果显示,从临床发病犬的鼻腔拭子、肺脏、气管和鼻腔黏液状分泌物共分离鉴定获得30株支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,临床分离菌株对环丙沙星和米诺环素高度敏感,但临床治疗效果不明显。免疫保护试验中,1.0 mL和0.5 mL蜂胶佐剂灭活疫苗对小鼠的保护率均可达100%;紧急免疫接种后,临床发病犬逐渐恢复,同群健康犬无新发病个体,疫苗免疫效果良好。组织病理学观察发现,临床病死犬和攻毒死亡小鼠均表现典型的支气管肺炎和肺气肿病变,肝细胞呈水泡样变。结果表明,支气管败血波氏杆菌是导致该场部分犬出现呼吸道疾病的病原体,蜂胶灭活疫苗可有效防控实验用比格犬支气管败血波氏杆菌感染。

关键词：比格犬支气管败血波氏杆菌 16S rRNA 组织病理学观察蜂胶佐剂灭活疫苗

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牛结节性皮肤病免疫抗体监测的Meta分析

畜牧兽医学报 2024年

作者：沈鹏王艺任炜杰杨永春宋厚辉王志亮南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏省外国专家工作室中国动物卫生与流行病学中心浙江农林大学动物科技学院.动物医学院

疫苗接种是预防牛结节性皮肤病（lumpy skin disease， LSD）的重要措施，但是疫苗接种后诱导的体液免疫应答水平参差不齐，目前尚缺乏评价疫苗免疫效果的有效手段。本文使用R软件利用Meta分析对已发表的LSD免疫抗体监测结果进行统计，... 详细信息

疫苗接种是预防牛结节性皮肤病（lumpy skin disease， LSD）的重要措施，但是疫苗接种后诱导的体液免疫应答水平参差不齐，目前尚缺乏评价疫苗免疫效果的有效手段。本文使用R软件利用Meta分析对已发表的LSD免疫抗体监测结果进行统计，并进行亚组分析，综合评价免疫抗体监测的意义。通过计算机分别检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库、PubMed、Web of science等中英文数据库，检索时限截止至2023年7月，收集LSD免疫抗体监测的相关文献，根据制定的文献纳入与排除标准，共纳入符合筛选条件的文献24篇，涉及羊痘疫苗的文献共有13篇，涉及LSD疫苗的文献共有13篇，其中2篇文献同时涉及羊痘疫苗和LSD疫苗，包含8 638例样本，其中阳性样本2 782份，结局指标为免疫抗体阳性率。Meta分析结果显示，羊痘疫苗的免疫抗体水平为41%（95% CI: 27%～55%），LSD疫苗的免疫抗体水平为73%（95% CI: 64%～86%），各文献间的同质性较低，两种疫苗之间无显著性差异（P=0.59>0.05），与羊痘疫苗接种（P=0.12>0.05）和LSD疫苗接种（P=0.077>0.05）相关的文献均提示未存在明显发表偏移；按养殖环境和检测方法分类进行亚组分析，不同养殖环境（P=0.84>0.05）和检测方法（P=0.40>0.05）均无显著性差异，两亚组均非异质性的主要来源。本文结果提示，使用免疫抗体监测方法评价免疫效果存在较大的不确定性，在实际工作中需要综合分析研判。

关键词：牛结节性皮肤病羊痘疫苗免疫抗体监测 Meta分析

刹车片颗粒及其主要成分硫化锑呼吸暴露对小鼠健康危害研究

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中国比较医学杂志 2024年第3期34卷 10-17页

作者：李彦红修晶辉周澧郭建国中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类动物模型三级实验室北京100021

目的研究刹车制动来源颗粒物对机体的潜在危害。方法研磨刹车片颗粒、硫化锑颗粒,小鼠通过气管灌注暴露1个月后,观察肺、心脏、肝等内脏器官病理改变,同时用流式细胞术分析外周血巨噬细胞和自然调节T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)... 详细信息

目的研究刹车制动来源颗粒物对机体的潜在危害。方法研磨刹车片颗粒、硫化锑颗粒,小鼠通过气管灌注暴露1个月后,观察肺、心脏、肝等内脏器官病理改变,同时用流式细胞术分析外周血巨噬细胞和自然调节T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)的变化。结果刹车片颗粒及硫化锑颗粒暴露小鼠肺泡壁外源物质沉积,血管周围出现明显的炎症细胞浸润并随着暴露浓度的增加而加重,同时可出现心脏血管炎症和微血栓以及肝细胞肿胀等病理改变;Treg细胞减少,硫化锑组和低剂量刹车片组巨噬细胞增加,同时M2型巨噬细胞比例下调。结论刹车片颗粒及其成分硫化锑颗粒暴露对小鼠肺、心脏、肝等脏器具有不同程度的毒性作用,并对免疫系统造成了影响,提示刹车来源的空气污染存在潜在健康危害。

关键词：刹车片颗粒硫化锑颗粒 PM_(2.5) 炎症免疫应答