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遗传多样性高血压小鼠模型的建立与基因转录调控分析

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中国实验动物学报 2024年第5期32卷 576-584页

作者：黄智滨潘吉荣张伶燕赵大路王谦魏承志马旭白琳秦川中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所北京100021 国家人类疾病动物模型资源库国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室新发与再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京市人类重大疾病动物模型工程技术研究中心国家动物模型技术创新中心北京100021 昌平实验室(CPNL) 北京102206 呼吸健康与共病国家重点实验室北京100005

目的探讨13个品系的遗传多样性高血压小鼠的血压表型差异、肾病理变化以及相关致病通路。方法将13个品系的遗传多样性小鼠分别与Cckbr-/-小鼠进行杂交,得到不同遗传背景的Cckbr+/+、Cckbr+/-、Cckbr-/-3种基因型的小鼠。利用BP-2000无... 详细信息

目的探讨13个品系的遗传多样性高血压小鼠的血压表型差异、肾病理变化以及相关致病通路。方法将13个品系的遗传多样性小鼠分别与Cckbr-/-小鼠进行杂交,得到不同遗传背景的Cckbr+/+、Cckbr+/-、Cckbr-/-3种基因型的小鼠。利用BP-2000无创血压分析系统测量小鼠血压,利用Western Blot检测小鼠肾CCKBR蛋白表达变化,利用苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化(IHC)检测小鼠肾组织病理学变化,利用转录组测序(RNA-Seq)分析筛选原发性高血压致病相关通路。结果3个特定小鼠品系(A/J、LOT、FIM)中,收缩压(systolic blood pressure,SBP)Cckbr-/-组较Cckbr+/+组具有显著性差异(P<0.05)。HE染色及IHC发现高血压对小鼠造成了一定程度的肾损伤。通过GO与Pathway富集分析,发现差异表达基因富集在新陈代谢与昼夜节律调节等方面。结论遗传多样性高血压小鼠在血压表型、病理特征及基因表达等方面呈现显著性差异,有效模拟了人群的遗传异质性对疾病表型的影响。

关键词：遗传多样性小鼠 Cckbr 原发性高血压动物模型

熵权法结合响应面法优化新疆沙枣花黄酮类成分的提取工艺及其体内外抗氧化活性研究

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中国食品添加剂 2024年第2期35卷 67-78页

作者：郭敬宇苏伟航王忠孙芸新疆医科大学中医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学实验动物中心乌鲁木齐830011

基于熵权法结合响应面法优化新疆沙枣花黄酮类成分提取工艺;并用乙醇氧化损伤的方法建立小鼠模型,给小鼠饲喂新疆沙枣花黄酮类成分提取物,检测并评价新疆沙枣花黄酮类成分提取物的体内外抗氧化活性。结果表明新疆沙枣花黄酮类成分最佳... 详细信息

基于熵权法结合响应面法优化新疆沙枣花黄酮类成分提取工艺;并用乙醇氧化损伤的方法建立小鼠模型,给小鼠饲喂新疆沙枣花黄酮类成分提取物,检测并评价新疆沙枣花黄酮类成分提取物的体内外抗氧化活性。结果表明新疆沙枣花黄酮类成分最佳提取工艺参数为乙醇浓度80%,超声时间48 min,料液比1∶27(g/mL),超声功率400 W;饲喂高剂量新疆沙枣花黄酮类成分提取物的小鼠血清中T-SOD、GSH-Px活力高于模型组(P<0.05),MDA浓度低于模型组(P<0.05),给药组小鼠血清中T-AOC均高于模型组(P<0.05);当新疆沙枣花黄酮类成分提取物浓度为0.8 mg/mL时,总抗氧化能力和对·OH的清除率分别为1.17%、51.38%;当提取物浓度为0.1 mg/mL时,对DPPH、ABTS自由基的清除率分别为93.68%、71.90%。新疆沙枣花黄酮类成分提取工艺稳定、可行,且其提取物具有较好的抗氧化活性。

关键词：新疆沙枣花熵权法响应面法抗氧化活性

2021―2022年川渝部分地区PRRSV分子流行病学及ORF5遗传特征分析

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 437-444页

作者：赵自亮左妤祺赵康燕方思颖程钟坤崔羽丹朱桓奕倪兴维徐婷婷刘霞赵光伟西南大学动物医学院重庆荣昌402460 贵州省动物疫病预防控制中心贵州贵阳550008

为了解我国川渝地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行情况及分子特征,本试验以RT-PCR方法对2021―2022年间收集的来自川渝地区的临床样本进行PRRSV检测,并进一步对阳性样本的O... 详细信息

为了解我国川渝地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行情况及分子特征,本试验以RT-PCR方法对2021―2022年间收集的来自川渝地区的临床样本进行PRRSV检测,并进一步对阳性样本的ORF5基因进行测序分析,探究其流行现状以及遗传变异情况。结果显示,川渝两地PRRSV阳性率为20.5%(40/195),其中四川PRRSV阳性率为18.1%(15/83),重庆为22.3%(25/112)。对其中23份阳性样本的ORF5基因分析显示,所获PRRSV均为基因Ⅱ型,包含谱系1、3、5和8,以NADC30类毒株为主;其中四川地区毒株与上海、辽宁、湖南等地区毒株存在较近的亲缘关系,重庆地区与当地毒株的同源性较高;与目前临床中使用的疫苗毒株比较,发现23株临床样本ORF5序列中有3个B细胞表位和1个T细胞表位与疫苗株存在较大差异。本试验结果表明PRRSV感染在川渝部分地区仍较为严重,美洲型NADC30类毒株是当前流行的优势毒株,且与疫苗株存在一定的变异,该结果对川渝地区PRRSV的防控具有借鉴意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学 ORF5基因遗传变异分析

MiR-127调控绵羊骨骼肌细胞增殖分化及其转录因子PAX3筛选

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畜牧兽医学报 2024年

作者：贾宇航郭良富张茹楠赵阿勇刘玉芳储明星中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室浙江农林大学动物科技学院动物医学院郓城县畜牧服务中心

旨在探究miR-127对绵羊骨骼肌成肌细胞增殖与分化的影响，并通过鉴定miR-127上游核心启动子区域筛选调控其表达的转录因子。本研究以体外分离培养的小尾寒羊胎羊骨骼肌原代成肌细胞为试验材料，过表达或干扰miR-127后，采用RT-qPCR、Ed... 详细信息

旨在探究miR-127对绵羊骨骼肌成肌细胞增殖与分化的影响，并通过鉴定miR-127上游核心启动子区域筛选调控其表达的转录因子。本研究以体外分离培养的小尾寒羊胎羊骨骼肌原代成肌细胞为试验材料，过表达或干扰miR-127后，采用RT-qPCR、EdU染色、流式细胞仪分析、免疫荧光染色等方法探究miR-127对绵羊成肌细胞增殖、凋亡和分化的影响。基于生物信息学分析和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-127核心启动子区域及其转录因子。结果表明，在绵羊成肌细胞中过表达miR-127后，促进了细胞增殖相关基因PCNA、CDK4的表达（P实验中，过表达miR-127显著增加了成肌细胞分化相关基因MYOD1和MYHC mRNA的表达水平（P<0.05），显著增加MYHC的阳性肌管面积（P<0.05）。抑制miR-127表达则出现与上述相反的结果。这些结果表明，miR-127显著促进了绵羊成肌细胞增殖、分化，并抑制其凋亡。为进一步揭示调控miR-127表达的调控因子，双荧光素酶活性检测结果显示，miR-127上游1 500～1 800 nt（miR-127-P6）区段活性最高，推断其为miR-127的核心启动子区。生物信息学预测表明，在miR-127核心启动子区存在一个与转录因子PAX3的结合位点。在绵羊成肌细胞中过表达转录因子PAX3后，miR-127启动子活性和miR-127的表达均极显著增加（P<0.01）。本研究表明，绵羊miR-127显著促进绵羊骨骼肌成肌细胞增殖分化，减少了成肌细胞凋亡，进而参与骨骼肌成肌细胞的发育过程；进一步研究发现绵羊miR-127上游的1 500～1 800 nt是其核心启动子区，转录因子PAX3正向调节miR-127的转录。本研究为进一步探究绵羊肌肉生长发育性状的分子机制提供了理论参考。

关键词：绵羊成肌细胞增殖分化 miR-127 转录因子PAX3

棕色绿僵菌胞外酶的诱导及发酵液生化特性研究

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动物医学进展 2024年第5期45卷 50-55页

作者：李倩楠马园郝陆瑶张艳妮郭志凯丁玉林杜山王瑞内蒙古农业大学兽医学院/国家级动物医学实验教学中心内蒙古呼和浩特010018

为了研究不同液体培养基及诱导物对棕色绿僵菌作用过程中胞外酶的最佳诱导条件和发酵液的生化性质,从而在对家畜外寄生虫进行防治过程中更好地利用该菌,在前期研究基础上,试验使用培养效果较好的3种液体培养基加入不同诱导物对棕色绿僵... 详细信息

为了研究不同液体培养基及诱导物对棕色绿僵菌作用过程中胞外酶的最佳诱导条件和发酵液的生化性质,从而在对家畜外寄生虫进行防治过程中更好地利用该菌,在前期研究基础上,试验使用培养效果较好的3种液体培养基加入不同诱导物对棕色绿僵菌进行液体发酵培养,检测发酵液的蛋白质含量、蛋白酶活性、磷酸酶活性以及杀蝇蛆效力等,确定该菌产生胞外酶和杀虫作用最适的培养基与诱导物。结果表明,蝇蛆三期幼虫诱导的枸橼酸培养基发酵液蛋白质浓度较高达404.45 mg/L、蛋白酶活性42.28 U/mL、酸性磷酸酶活性37.06 U/L、碱性磷酸酶11.04 U/L,同时杀蝇蛆效力也是最高的,达60%。因此,枸橼酸液体培养基是产生胞外蛋白质最佳培养基,较好的诱导物为蝇蛆三期幼虫。说明不同培养基及诱导物对棕色绿僵菌的代谢进程会产生显著影响,导致其代谢过程中分泌的蛋白质含量、蛋白酶和磷酸酶的活性产生明显差异,对杀蝇蛆效率产生影响。

关键词：昆虫寄生性真菌棕色绿僵菌蝇蛆胞外酶发酵液

基于内质网自噬系统探究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎的防治作用

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中草药 2024年第11期55卷 3705-3715页

作者：张荣展汤甜甜黄芳宋婧周佳中国药科大学中药学院中药药理与中医药学系江苏南京211198 厦门大学实验动物中心福建厦门361102

目的研究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎(hyperlipidemia acute pancreatitis,HLAP)的防治作用及机制。方法雄性C57BL/6J小鼠以高脂饮食喂养,ig泽泻汤干预8周后,ip雨蛙素(50μg/kg)制备HLAP模型。采用试剂盒检测小鼠血清中三酰甘油(triglyc... 详细信息

目的研究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎(hyperlipidemia acute pancreatitis,HLAP)的防治作用及机制。方法雄性C57BL/6J小鼠以高脂饮食喂养,ig泽泻汤干预8周后,ip雨蛙素(50μg/kg)制备HLAP模型。采用试剂盒检测小鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平及淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶(lipase,LPS)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;采用油红O染色观察肝脏组织脂质蓄积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏、胰腺组织病理学变化;采用Western blotting检测胰腺组织中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子E2相关基因(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、免疫球蛋白重链结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)、真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、p-eIF2α、Bcl-2相互作用蛋白(Bcl-2 interacting coiled-coil protein-1,Beclin-1)、自噬蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、自噬蛋白12(autophagy-related protein 12,ATG12)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,LC3-Ⅱ/Ⅰ)及溶酶体相关膜蛋白1(lysosomal associated membrane protein 1,LAMP-1)表达。采用棕榈酸(200 mmol/L)和雨蛙素(10 nmol/L)处理胰腺腺泡AR42J细胞构建HLAP细胞模型,给予泽泻汤干预后,采用试剂盒检测细胞培养上清液中LPS、T-SOD活性;采用DCFH-DA荧光探针、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及MMP水平;采用透射电镜观察细胞超微结构及自噬变化;采用Western blotting检测细胞中HO-1、Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ和LAMP-1表达。结果与模型组比较,泽泻汤能够降低小鼠血清中TC、TG水平及AMY、LPS活性(P<0.05、0.01、0.001),抑制肝脏组织中的脂滴蓄积,减轻肝脏及胰腺组织病理损伤,同时上调血清及胰腺腺泡细胞中SOD、CAT活性(P<0.05、0.01),下调ROS水平(P<0.001),上调胰腺组织及细胞中HO-1、Nrf2、LAMP1表达(P<0.05、0.01、0.001),下调Keap1、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、ATG12及LC3-Ⅱ/Ⅰ表达(P<0.05、0.01、0.001)。结论泽泻汤可以防治HLAP,其作用机制可能与抑制内质网应激诱导的过度自噬、恢复自噬通量有关。

关键词：泽泻汤高脂血症急性胰腺炎氧化应激线粒体功能障碍内质网应激自噬白术内酯Ⅱ 白术内酯Ⅲ 泽泻醇A 泽泻醇B 23-乙酰泽泻醇B 23-乙酰泽泻醇C

偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒制备及免疫原性评价

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生物工程学报 2024年

作者：张越茹毅郝荣增杨洋赵陇和李亚军杨锐卢炳州郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院

本研究旨在利用铁蛋白制备携带非洲猪瘟病毒p30蛋白的纳米颗粒抗原，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟纳米疫苗研究提供实验基础。首先，将编码p30蛋白和Spytag标签的基因序列融合后插入pCold-I载体，得到pCold-p30质粒。将编码S... 详细信息

本研究旨在利用铁蛋白制备携带非洲猪瘟病毒p30蛋白的纳米颗粒抗原，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟纳米疫苗研究提供实验基础。首先，将编码p30蛋白和Spytag标签的基因序列融合后插入pCold-I载体，得到pCold-p30质粒。将编码Spycatcher与铁蛋白的基因序列融合后插入pET-28a（+）载体，得到pET-F-np质粒，并分别在大肠杆菌中诱导表达。然后，将亲和层析纯化后的p30蛋白与铁蛋白在体外偶联结合，用分子筛纯化后得到偶联p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒F-p30，利用粒径仪、透射电镜观察形态结构。将F-p30纳米颗粒蛋白免疫小鼠，评估其体液和细胞免疫应答。试验结果表明，本研究成功制备出偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒，颗粒结构约20 nm。F-p30在体外能被小鼠骨髓源树突状细胞（bone marrow derived cells， BMDC）高效摄取，与p30蛋白相比， F-p30纳米颗粒免疫小鼠诱导产生更高水平的特异性抗体和细胞因子，更有利于刺激淋巴结滤泡辅助T细胞(follicular helper T cell， TFH)、生发中心B细胞（germinal center B cells， GCB）和脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖。综上，本研究成功制备了偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒，能显著增强p30蛋白的免疫原性，有助于非洲猪瘟疫苗的研究。

关键词：非洲猪瘟 p30蛋白铁蛋白纳米颗粒免疫原性

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FOXN1基因敲除兔嵌合体的建立

中国比较医学杂志 2024年第4期34卷 35-40页

作者：刘天平黎桂玲刘科陈傍柱王刚顾为望五邑大学药学与食品工程学院广东省医学大动物模型重点实验室广东江门529020 广东省医学实验动物中心南方医科大学附属广东省人民医院(广东省医学科学院)广东佛山528248

目的建立F0代FOXN1基因敲除兔嵌合体,以探究普通饲养环境免疫缺陷兔活体保种的方法。方法首先,利用CRISPR/Cas9技术,将构建好的sgRNA和Cas9蛋白注入兔二细胞期胚胎的一个细胞中,以获得FOXN1基因编辑嵌合体胚胎。然后,胚胎移植至代孕母... 详细信息

目的建立F0代FOXN1基因敲除兔嵌合体,以探究普通饲养环境免疫缺陷兔活体保种的方法。方法首先,利用CRISPR/Cas9技术,将构建好的sgRNA和Cas9蛋白注入兔二细胞期胚胎的一个细胞中,以获得FOXN1基因编辑嵌合体胚胎。然后,胚胎移植至代孕母兔。最后,通过PCR技术以及Sanger测序方法鉴定F0代仔兔基因型,并观察其在普通饲养环境生长发育的情况。结果PCR结合Sanger测序结果表明FOXN1基因敲除兔嵌合体构建成功。经观察,嵌合体在普通环境下生长发育良好,无免疫缺陷表型。结论本研究初步建立了在普通环境下可正常生长发育的FOXN1基因敲除兔嵌合体,为后续进一步繁育FOXN1免疫缺陷兔奠定了研究基础。

关键词： FOXN1 基因敲除兔免疫缺陷嵌合体

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二仙汤对少弱精子症小鼠Keap1/Nrf2/HO-1通路的影响

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中国医院药学杂志 2024年第6期44卷 641-647页

作者：江晓翠萧闵刘祺王望周艳艳吕银娟赵敏曹继刚湖北中医药大学实验动物中心湖北武汉430065 湖北省中医院泌尿外科湖北武汉430061 湖北中医药大学基础医学院湖北武汉430065 湖北时珍实验室湖北武汉430065

目的:探讨二仙汤对少弱精子症小鼠生精功能和精子质量的影响及其作用机制。方法:48只成年雄性SPF级KM小鼠,随机数字法分为空白组,模型组,二仙汤高、中、低剂量组和维生素E组,每组8只。除空白组外,其余各组以1.25g·kg^(–1)腺嘌呤灌胃... 详细信息

目的:探讨二仙汤对少弱精子症小鼠生精功能和精子质量的影响及其作用机制。方法:48只成年雄性SPF级KM小鼠,随机数字法分为空白组,模型组,二仙汤高、中、低剂量组和维生素E组,每组8只。除空白组外,其余各组以1.25g·kg^(–1)腺嘌呤灌胃构建少弱精子症小鼠模型。造模完成后,二仙汤高、中、低剂量组分别灌胃给予11.7,5.85,2.93 g·kg^(–1)二仙汤,维生素E组灌胃给予0.013 g·kg^(–1)维生素E,连续灌胃21 d后取材。测定睾丸、附睾指数;苏木素-伊红染色观察睾丸组织病理变化并对睾丸生精功能评分;全自动精子分析仪检测精子密度和活动率;生化试剂盒检测睾丸组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA);蛋白免疫印迹法检测睾丸组织Kelch-样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH related protein 1,Keap1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应检测睾丸组织Keap1、Nrf2、HO-1 m RNA表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠附睾指数、睾丸指数,睾丸生精功能,精子密度及活动率,睾丸组织SOD、CAT活性,Nrf2、HO-1蛋白及其m RNA表达水平均降低,睾丸MDA含量、Keap1蛋白及其m RNA表达水平均升高(P<0.01);与模型组比较,二仙汤高、中剂量组小鼠上述指标均有显著逆转(P<0.05,P<0.01)。结论:二仙汤可能通过调控Keap1/Nrf2/HO-1信号通路减轻睾丸组织氧化应激损伤,提高生精功能,改善少弱精子症。

关键词：二仙汤少弱精子症氧化应激 Keap1/Nrf2/HO-1 精子质量

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