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基于UPLC-QqQ-MS/MS测定人参属中药对甲亢大鼠类固醇激素含量的影响

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质谱学报 2024年第4期45卷 540-551,I0004页

作者：金墨竹刘琳琳窦德强辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

本研究利用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS/MS)联用技术定量测定甲亢大鼠血清中肾上腺素和多种类固醇激素,探讨血清中类固醇激素含量与甲状腺功能亢进的相关性,以及不同药性人参属中药红参和人参叶对甲亢高代谢的改善... 详细信息

本研究利用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS/MS)联用技术定量测定甲亢大鼠血清中肾上腺素和多种类固醇激素,探讨血清中类固醇激素含量与甲状腺功能亢进的相关性,以及不同药性人参属中药红参和人参叶对甲亢高代谢的改善作用。采用主成分分析(PCA)、Spearman检验进行肾上腺素和类固醇激素与甲状腺功能的相关性分析。结果表明,UPLC-QqQ-MS/MS能够快速检测待测物的含量和变化,灵敏度高、重现性好、准确率高且分析速度快。与空白组相比,甲亢大鼠血清中类固醇激素含量均有不同程度的降低,给予不同药性人参属中药后均出现升高。类固醇激素水平异常在一定程度上与甲状腺激素有关,皮质酮和肾上腺素可作为中药调节类固醇激素代谢的关键指标;睾酮可作为寒性中药调节类固醇激素的生物标志物;肾上腺素和雄烯二酮可作为温性中药调节类固醇激素的生物标志物。该方法能够系统、快速、准确、高效地完成大鼠血清中类固醇激素含量的测定,为类固醇激素的分析测定提供方法参考。

关键词：甲亢肾上腺素类固醇激素超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS/MS) 红参人参叶定量测定

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牛蒡根中多酚成分对脂肪酶的抑制作用

食品工业科技 2024年第3期45卷 10-17页

作者：刘亿许枬王祎曲扬辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

为明确牛蒡根中多酚成分对脂肪酶的抑制作用,本文提取并富集牛蒡根中的多酚成分,采用福林-西奥卡特(Folin-Ciocalteu)法测定总酚含量;HPLC-UV法测定多酚部位中指标性成分的含量;对硝基苯基丁酸酯(p-NPB)法测定牛蒡根多酚和其指标性成分... 详细信息

为明确牛蒡根中多酚成分对脂肪酶的抑制作用,本文提取并富集牛蒡根中的多酚成分,采用福林-西奥卡特(Folin-Ciocalteu)法测定总酚含量;HPLC-UV法测定多酚部位中指标性成分的含量;对硝基苯基丁酸酯(p-NPB)法测定牛蒡根多酚和其指标性成分对脂肪酶的抑制效果、抑制类型,采用等效线图解法和药物联合指数(CI)测定牛蒡根中的多酚单体化合物联合使用时的抑制作用。结果表明,富集后的牛蒡根多酚部位的总多酚含量达到51.23%,5种指标性成分的含量占纯化后牛蒡根多酚含量的12.87%,牛蒡根多酚对脂肪酶半数抑制浓度IC_(50)值为1.706 mg/mL,抑制类型为可逆性竞争型抑制。新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、绿原酸和异绿原酸A对脂肪酶的IC_(50)值分别为0.872、0.910、0.280、0.847、0.244 mg/mL。绿原酸和异绿原酸A浓度比为1:2.15时,CI值为0.549,咖啡酸和异绿原酸A浓度比为1:0.87时,CI值为0.282,对脂肪酶具有协同抑制作用。本研究为探究牛蒡根降脂功效的物质基础及其降脂的机制提供了实验依据,为牛蒡根的开发奠定基础。

关键词：牛蒡根多酚脂肪酶抑制

小柴胡汤在恶性肿瘤全程管理中的应用研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第12期30卷 219-231页

作者：赵越王文萍李晓斌王华伟曹莹辽宁中医药大学研究生学院沈阳110847 辽宁中医药大学附属医院沈阳110032

恶性肿瘤已超过中风及冠心病跃升成为全球70岁前的主要死因,其发病率正逐年增长,严重影响我国人民生活水平及社会经济发展。外科手术、放射治疗、化学治疗、靶向治疗、免疫治疗是西医干预肿瘤的主要手段,对延长患者生存期具有重要意义,... 详细信息

恶性肿瘤已超过中风及冠心病跃升成为全球70岁前的主要死因,其发病率正逐年增长,严重影响我国人民生活水平及社会经济发展。外科手术、放射治疗、化学治疗、靶向治疗、免疫治疗是西医干预肿瘤的主要手段,对延长患者生存期具有重要意义,但存在不良反应多、易耐药等弊端。中医药在肿瘤治疗中的疗效确切、应用广泛,成为了近年的研究热点。小柴胡汤出自《伤寒杂病论》,由柴胡、黄芩、人参、半夏、炙甘草、生姜、大枣组成,具有和解少阳、调和寒热阴阳、疏肝解郁之功效。该方及以其为基础变化的方药被广泛应用于肿瘤的各个阶段。该研究对近10年来小柴胡汤在肿瘤领域的国内外研究进行总结,探究小柴胡汤在阻断癌前病变、控制恶性肿瘤发展、降低干预后不良反应发生、缓解常见并发症上的作用及机制,以期拓展临床用药思路。

关键词：小柴胡汤恶性肿瘤癌症全程管理癌前病变

基于“辨状论质”理论的龙胆性状与质量相关性研究

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天然产物研究与开发 2024年

作者：刘佳怡尹海波王丹杜俊楠刘师慧骆佳熠叶秋鞠金炳倩辽宁中医药大学药学院辽宁中医药大学杏林学院

为了探寻评价龙胆质量的性状指标，探讨其与主要活性成分之间的相关性。采用游标卡尺、硬度计、色差仪、电子舌和高效液相色谱法（HPLC）测定龙胆根长、顶端直径、中端直径、末端直径、须根数、硬度、表面断面色度值和苦味值及5种环烯... 详细信息

为了探寻评价龙胆质量的性状指标，探讨其与主要活性成分之间的相关性。采用游标卡尺、硬度计、色差仪、电子舌和高效液相色谱法（HPLC）测定龙胆根长、顶端直径、中端直径、末端直径、须根数、硬度、表面断面色度值和苦味值及5种环烯醚萜类成分含量，对性状指标与成分含量进行相关性分析、回归分析、主成分分析（principal components analysis，PCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）和聚类分析。SPSS 22.0相关性结果显示，龙胆根长、硬度、上端直径、中端直径、表面明度L*1、色差值E*ab1和苦味值与龙胆中马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量呈显著相关性，说明龙胆根越长，硬度越大，上端和中端直径越粗，表皮颜色越浅，味道越苦，则马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量越高。以性状指标苦味、硬度、顶端直径、中端直径、末端直径、根长、表面明度L*1、色差值E*ab1和马钱苷酸、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷含量为变量，采用K-均值聚类方法，将32批龙胆划分为3个等级，并通过OPLS-DA模型实现有效鉴别，且各等级之间的龙胆在性状和成分含量上都有显著差异。龙胆的性状指标(根长、硬度、顶端直径、中端直径、表面明度L*1、色差值E*ab1、苦味值)可作为评价龙胆质量的依据，且传统对龙胆记载的“根条粗长，黄色或棕黄色，断面黄白色，味极苦龙胆为佳”都有所证明。因此可以根据龙胆的性状判断其质量，为建立客观科学评价龙胆质量提供基础和理论依据。

关键词：龙胆性状内在含量辨状论质相关性

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路探讨补中益气汤干预NOD.H-2^(h4)小鼠AIT细胞焦亡的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第12期30卷 8-15页

作者：王智民杨潇陈怡然刘子玉刘庆阳高城翰王琛高天舒辽宁中医药大学第一临床学院沈阳110847 辽宁中医药大学附属医院沈阳110032 辽宁中医药大学附属第二医院沈阳110034 辽宁中医药大学针灸推拿学院沈阳110847 山东中医药大学第一临床医学院济南250199

目的:基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠细胞焦亡的作用机制。方法:60只NOD.H-2h4小鼠分为正常组、模型组、补中益气汤低、中、高剂... 详细信息

目的:基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠细胞焦亡的作用机制。方法:60只NOD.H-2h4小鼠分为正常组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量(4.10、8.19、16.38 g·kg^(-1))组和硒酵母片(0.26 mg·kg^(-1))组,每组10只。除正常组外,其余各组均给予0.05%碘化钠(NaI)灌胃8周造模,继续给药干预8周。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)、甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠甲状腺组织病理学改变;免疫组化法检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺组织中细胞焦亡相关蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TPO-Ab、Tg Ab水平显著升高(P<0.01),甲状腺滤泡或增大呈立方状,或破坏萎缩,滤泡周围可见大量淋巴细胞浸润;与模型组比较,给药组TPO-Ab、Tg Ab水平显著降低(P<0.01),滤泡形态结构有所改善,淋巴细胞浸润程度有所减轻,其中补中益气汤中剂量组降低和改善效果最为明显。与正常组比较,模型组小鼠甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达显著增加(P<0.01),NLRP3、剪切的(cleaved) Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,给药组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),其中补中益气汤中剂量组降低效果最为明显,给药组NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤可改善AIT,其机制可能是通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制细胞焦亡实现的。

关键词：补中益气汤自身免疫性甲状腺炎细胞焦亡 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路

基于响应面法优化牛蒡子多糖提取工艺及对细胞抗炎作用研究

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天然产物研究与开发 2024年第1期36卷 102-108页

作者：潘博雅孟宪群康廷国尹海波许亮王丹辽宁中医药大学药学院大连116600

为了确定提取牛蒡子多糖的最佳工艺条件,并探究其抗炎作用。通过响应面法考察不同料液比,提取时间和提取温度对牛蒡子多糖提取率的影响;使用ELISA试剂盒测定不同RAW 264.7细胞处理组肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的水平;经Wes... 详细信息

为了确定提取牛蒡子多糖的最佳工艺条件,并探究其抗炎作用。通过响应面法考察不同料液比,提取时间和提取温度对牛蒡子多糖提取率的影响;使用ELISA试剂盒测定不同RAW 264.7细胞处理组肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的水平;经Western blot法检测髓样分化因子88(MyD88)、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达水平。结果显示牛蒡子多糖最优提取工艺条件为料液比1∶15(g/mL)、提取时间3 h、提取温度80℃,此时提取率为7.19%;牛蒡子多糖组对TNF-α和IL-6的分泌均有抑制作用并通过调控相关通路上的蛋白表达,起到免疫调控作用。该研究可为牛蒡子新药用成分的开发和应用奠定基础。

关键词：牛蒡子多糖响应面法提取工艺 RAW 264.7细胞抗炎

基于冠状动脉CT血管成像影像组学的稳定型心绞痛痰瘀互结证与气虚血瘀证鉴别研究

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北京中医药大学学报 2024年第4期47卷 545-554页

作者：魏东升齐佳杰刘孝生李路珍李涵刘雨婷邓成康戴旭赵宝英张哲辽宁中医药大学第一临床学院沈阳110847 辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室辽宁中医药大学附属医院

目的应用影像组学技术构建稳定型心绞痛痰瘀互结证与气虚血瘀证鉴别诊断模型。方法收集2021年1月—2022年1月辽宁中医药大学附属医院91例行冠状动脉CT血管成像的稳定型心绞痛患者,其中痰瘀互结证47例、气虚血瘀证44例,采用分层随机抽样... 详细信息

目的应用影像组学技术构建稳定型心绞痛痰瘀互结证与气虚血瘀证鉴别诊断模型。方法收集2021年1月—2022年1月辽宁中医药大学附属医院91例行冠状动脉CT血管成像的稳定型心绞痛患者,其中痰瘀互结证47例、气虚血瘀证44例,采用分层随机抽样方法将患者按照7∶3的比例分为训练集(64例)与测试集(27例),使用3D-slicer软件提取冠状动脉周围脂肪组织(PCAT)图像影像组学特征。使用主成分分析可视化痰瘀互结证与气虚血瘀证影像组学特征分布情况。采用最小绝对收缩和选择算子回归分析及支持向量机递归特征消除进行特征筛选,使用Logistics多因素回归算法构建鉴别诊断模型,在训练集与测试集中应用接受者操作特征(ROC)曲线对模型进行验证,评价影像组学特征鉴别痰瘀互结证与气虚血瘀证的效能。使用Spearman相关分析进行鉴别特征与临床理化数据的相关性分析。结果3D-slicer软件共提取出837个PCAT图像影像组学特征。主成分分析中第一主成分和第二主成分分别解释了77.9%和8.1%的总体变异,两证候组间存在较为明显的分离趋势。经过特征筛选,7个影像组学特征用于构建痰瘀互结证与气虚血瘀证的鉴别诊断模型。训练集中鉴别诊断模型的ROC曲线下面积(AUC)为0.844,测试集中AUC为0.834。Spearman相关性分析表明,鉴别特征与心肌肌钙蛋白I、中性粒细胞、甘油三酯、总胆固醇及白细胞具有明显相关性。结论基于PCAT的CT影像组学模型对稳定型心绞痛痰瘀互结证与气虚血瘀证具有较高的鉴别作用。

关键词：稳定型心绞痛影像组学冠状动脉CT血管成像鉴别诊断痰瘀互结证气虚血瘀证

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基于谱效关系的通关藤质量标志物筛选

中成药 2024年

作者：李思雨裴志东王嘉唯于丹陈月华张慧宋雅梅辽宁中医药大学药学院辽宁中医药大学附属第三医院

目的基于谱效关系筛选通关藤质量标志物。方法采用HPLC-VWD-ELSD法建立药材指纹图谱，MTT法表征其抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用。灰色关联分析、聚类分析、正交偏最小二乘法-判别分析筛选质量标志物，UPLC-Q-TOF/MS法鉴定其结构... 详细信息

目的基于谱效关系筛选通关藤质量标志物。方法采用HPLC-VWD-ELSD法建立药材指纹图谱，MTT法表征其抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用。灰色关联分析、聚类分析、正交偏最小二乘法-判别分析筛选质量标志物，UPLC-Q-TOF/MS法鉴定其结构。结果 30批药材指纹图谱中有15个共有峰（VWD条件下11个，ELSD条件下9个，两者重叠峰5个），相似度均大于0.9。各批药材平均细胞抑制率为58.55%，其中S8最高，为85.61%；S27最低，为34.17%。VWD条件下3～6号峰及ELSD条件下6、8、12、14号峰对抗肿瘤活性贡献较大，各批药材聚为4类，VWD条件下3、4、6、7号峰及ELSD条件下3、6、11、12、14号峰VIP值均大于1。质量标志物有7个，分别为tenacissosideG、tenacissosideH、tenacissosideI、tenacissosideC、marsdenosideC、tenacigenosideK、tenacigenosideA。结论本实验确定了通关藤抗肿瘤作用的质量标志物，可为该药材质量控制奠定基础。

关键词：通关藤指纹图谱抗肿瘤活性谱效关系质量标志物

关白附与禹白附对中风沙鼠影响差异的尿液代谢组学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第8期30卷 157-166页

作者：周丽婷曾琬婷贾茹徐慧颖丁奕辉董昊马浩文曲扬才谦辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的:采用非靶向代谢组学技术探究关白附与禹白附对中风沙鼠尿液代谢产物的影响差异,进而明确二者作用机制及其异同。方法:将24只沙鼠随机分成空白组、模型组、关白附组、禹白附组。除空白组外,其余各组均采用右侧单侧结扎沙鼠颈动脉构... 详细信息

目的:采用非靶向代谢组学技术探究关白附与禹白附对中风沙鼠尿液代谢产物的影响差异,进而明确二者作用机制及其异同。方法:将24只沙鼠随机分成空白组、模型组、关白附组、禹白附组。除空白组外,其余各组均采用右侧单侧结扎沙鼠颈动脉构建缺血性脑卒中模型。各给药组分别灌胃对应的药材全粉混悬液(0.586 mg·g^(-1)),共给药14 d。给药第0、3、7、14天,采用Longa评分法对各组沙鼠进行神经功能缺损评分。给药结束后收集各组沙鼠血清、脑组织及尿液,采用2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死率,利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对血清和脑组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的水平进行检测。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap-MS)对各组沙鼠进行尿液代谢组学分析,并采用多元统计分析对数据进行处理,以第一主成分的变量重要性投影(VIP)值>1且t检验P<0.05筛选差异代谢物。运用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库结合MetaboAnalyst 5.0软件对筛选出的差异代谢物进行代谢通路分析。结果:与空白组比较,模型组神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),与模型组比较,关白附和禹白附组在给药7 d和14 d后神经功能缺损评分明显降低(P<0.05);与空白组比较,模型组脑梗死率明显升高(P<0.05),与模型组比较,关白附和禹白附组脑梗死率明显降低(P<0.05);与空白组比较,模型组沙鼠血清和脑组织中IL-6、TNF-α、MDA水平明显升高(P<0.05),SOD、GSH、NO水平明显降低(P<0.05),与模型组比较,关白附和禹白附组均能不同程度下调IL-6、TNF-α、MDA水平并上调SOD、GSH、NO水平。尿液代谢组学共筛选出112个内源性差异代谢物,其中关白附和禹白附分别回调了其中16个和26个代谢物,可分别作为二者治疗中风沙鼠的潜在生物标志物。通路分析结果显示,关白附和禹白附均对精氨酸和脯氨酸代谢、嘧啶代谢、氨酰基-tRNA生物合成具有调节作用,而关白附还可调节核黄素代谢,禹白附还可调节嘌呤代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,花生四烯酸代谢,泛酸盐和辅酶A的生物合成及β-丙氨酸代谢。结论:关白附和禹白附均具有较好治疗中风的作用,其中关白附作用更强。关白附主要调节氨基酸代谢、氧化应激等,而禹白附主要涉及氨基酸代谢、脂质代谢和能量代谢等。

关键词：关白附禹白附代谢组学缺血性脑卒中多元统计分析生物标志物超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap-MS)