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单细胞转录组测序技术在骨质疏松症研究中的应用与进展

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2812-2821页

作者：孙成涛孙广江戚晓楠程茗姚啸生辽宁中医药大学辽宁省沈阳市110847 辽宁中医药大学附属第二医院骨伤一科辽宁省沈阳市110034 辽宁中医药大学附属医院骨伤一科辽宁省沈阳市110032 中国医科大学沈阳市第四人民医院辽宁省沈阳市110031

背景:骨质疏松导致的脆性骨折发病率逐年上升,亟需探索其病理生理、潜在生物标志物、治疗靶点及有效药物。骨微环境中存在多种细胞,对骨代谢的维持至关重要。近几年,单细胞RNA测序(scRNA-seq)技术被开发用于表征单个细胞的转录组,并逐... 详细信息

背景:骨质疏松导致的脆性骨折发病率逐年上升,亟需探索其病理生理、潜在生物标志物、治疗靶点及有效药物。骨微环境中存在多种细胞,对骨代谢的维持至关重要。近几年,单细胞RNA测序(scRNA-seq)技术被开发用于表征单个细胞的转录组,并逐步应用到骨质疏松症防治的研究。目的:综述单细胞转录组测序技术在骨质疏松症研究中的应用与进展。方法:由第一作者使用计算机检索Web of Science,PubMed和中国知网数据库中2009-2023年出版的文献,英文检索词为:“single-cell RNA sequencing,bone marrow derived stromal cells,osteoblasts,osteocytes,osteoclasts,immune cells,Bone marrow vascular endothelial cells”;中文检索词为:“单细胞转录组测序,骨髓间充质干细胞,成骨细胞,骨细胞,破骨细胞,免疫细胞,骨髓血管内皮细胞”;通过阅读筛选相关文献,最终纳入89篇文献进行综述分析。结果与结论:①单细胞转录组测序技术能够深入了解细胞发育、增殖、分化的轨迹及其调控机制。②影响骨密度的候选基因主要富集在骨髓间充质干细胞亚群,其中Sox9是关键的转录因子。③成骨细胞不同亚群中差异表达Runx2控制骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化。④破骨细胞分化过程中RAB38与组蛋白修饰和转录调控动态变化有关。⑤单细胞层面研究证实,骨微环境中存在多种细胞间通讯,破骨细胞可能通过CD160-TNFRSF14配体-受体结合进行细胞间通讯;中性粒/单核细胞与成骨细胞间可能通过RESISTIN通路进行交互;浆样树突状细胞与成骨细胞系通过表皮生长因子通路进行交流;均可以为靶点预测和药物研发提供方向。⑥新的骨髓毛细血管内皮细胞亚群,称为S型内皮细胞,完全起源于骨骺次级骨化中心,甚至比H型血管更具有可塑性。⑦文章从细胞角度总结单细胞转录组测序技术在表征不同骨组织细胞的分化命运和分化轨迹、识别新的细胞亚群、鉴定细胞调控因子及明确细胞间通讯的研究进展,为探讨骨质疏松症的病理机制、筛选潜在诊断标志物、预测治疗靶点及探究药物作用机制提供细胞层面的信息。⑧未来单细胞测序技术将向单细胞多组学(基因组、蛋白组学及代谢组学)方向及结合其他诸如空间转录组技术为骨组织细胞变化提供更有价值的信息。

关键词：单细胞转录组测序骨质疏松骨代谢骨髓间充质干细胞骨细胞破骨细胞骨免疫学骨髓血管内皮细胞

人脐带间充质干细胞共培养联合人参皂苷Rg1对心力衰竭细胞模型的影响

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中国组织工程研究 2025年第31期29卷 6625-6633页

作者：任疏桐郝苗刘越侯平全娟花辽宁中医药大学辽宁省沈阳市110000 沈阳市第四人民医院中医科辽宁省沈阳市110031 沈阳医学院中医教研室辽宁省沈阳市110031 辽宁中医药大学附属医院辽宁省沈阳市110000 广东医科大学附属医院广东省湛江市524000

背景:目前,如何促进细胞扩增、减少细胞损失、提高细胞归巢率、减少细胞凋亡是人脐带间充质干细胞临床前研究的主要问题。人参皂苷Rg1可在体外或体内促进间充质干细胞在不同微环境中的增殖、分化,其可能是提高人脐带间充质干细胞移植效... 详细信息

背景:目前,如何促进细胞扩增、减少细胞损失、提高细胞归巢率、减少细胞凋亡是人脐带间充质干细胞临床前研究的主要问题。人参皂苷Rg1可在体外或体内促进间充质干细胞在不同微环境中的增殖、分化,其可能是提高人脐带间充质干细胞移植效率的候选药物。目的:探讨人脐带间充质干细胞共培养联合人参皂苷Rg1对戊巴比妥钠诱导的心衰细胞模型的影响。方法:将H9C2细胞分为5组:对照组、戊巴比妥钠组、人脐带间充质干细胞组、人参皂苷Rg1组、人脐带间充质干细胞+人参皂苷Rg1组。对照组H9C2细胞用正常DMEM培养基培养24 h,其他组H9C2细胞用含0.8%戊巴比妥钠的DMEM培养基培养7 min构建心衰细胞模型。建模后,分别用人脐带间充质干细胞、人参皂苷Rg1单独或共同处理。采用CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,按试剂盒说明检测Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性,ELISA测定上清液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平,RT-qPCR测定细胞中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6、Bax和Bcl-2 mRNA表达,Western blot测定细胞中Bax、Bcl-2、Toll样受体4、p65和p-p65蛋白表达。结果与结论:①与戊巴比妥钠组比较,人脐带间充质干细胞组、人参皂苷Rg1组和人脐带间充质干细胞+人参皂苷Rg1组H9C2细胞活力和EdU阳性率升高,TUNEL阳性率以及Bax mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高,Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性降低,Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性升高,H9C2细胞上清液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平降低,H9C2细胞中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6 mRNA表达降低,Toll样受体4和p-p65蛋白表达降低,差异均有显著性意义(P<0.05);②与人脐带间充质干细胞组和人参皂苷Rg1组比较,人脐带间充质干细胞+人参皂苷Rg1组上述指标进一步改善(P<0.05)。结果表明:人脐带间充质干细胞联合人参皂苷Rg1提高了戊巴比妥钠诱导的心衰细胞活力,并抑制了Toll样受体4/核因子κB通路介导的炎症。

关键词：人脐带间充质干细胞 H9C2细胞心力衰竭人参皂苷Rg1 戊巴比妥钠 Toll样受体4 核因子κB

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葛根素治疗糖尿病视网膜病变的疗效观察

中国中西医结合杂志 2000年第8期20卷 574-576页

作者：任平胡惠君张瑞辽宁中医学院附属医院沈阳110032

目的 :运用活血化瘀、通经活络原理 ,观察葛根素对糖尿病视网膜病变患者视网膜中央动静脉血流参数及血液流变学影响。方法 :30例糖尿病视网膜病变 ,随机分为治疗组 (15例 )和对照组 (15例 )。治疗组在常规降血糖药物治疗的同时 ,加用葛... 详细信息

目的 :运用活血化瘀、通经活络原理 ,观察葛根素对糖尿病视网膜病变患者视网膜中央动静脉血流参数及血液流变学影响。方法 :30例糖尿病视网膜病变 ,随机分为治疗组 (15例 )和对照组 (15例 )。治疗组在常规降血糖药物治疗的同时 ,加用葛根素 4 0 0mg ,每日 1次 ,静脉滴注 ;对照组加用弥克保 50 0 μg ,每日 1次 ,肌肉注射。均 3周为 1个疗程 ,连续用药 2个疗程 ,观察用药前后血液流变学各项指标及视网膜中央动静脉血流参数。结果 :治疗组治疗前后比较 ,红细胞聚集指数、全血比粘度、血浆比粘度、纤维蛋白原及血沉比治疗前均有明显改善 (P <0 0 5,P <0 0 1) ;两组治疗后比较有显著性差异 (P <0 0 5)。治疗组治疗前后视网膜中央动脉的收缩峰值血液速度 (PSV)、舒张末期血流最大速度 (EDV)、加速度 (A)、视网膜中央静脉回流速度 (CRV)均有改善 (P <0 0 5) ,裸眼视力均有不同程度的提高。结论 :葛根素具有降低血液粘稠度 ,改善微循环的作用 ,对糖尿病视网膜病变有肯定的治疗作用。

关键词：葛根素糖尿病视网膜病变中医药疗法疗效

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下肢深静脉血栓做腹部超声的临床意义

中国临床医学影像杂志 2005年第2期16卷 103-105页

作者：白静慧陆恩祥郑熙文洪林巍辽宁中医学院附属医院超声科辽宁沈阳110032 辽宁中医学院附属医院超声科

目的:应用腹部超声证实部分下肢深静脉血栓(DVT)与腹部疾病具有相关性。方法:对100例经超声诊断的下肢DVT患者,应用追踪探查方法,对DVT患者进行腹部超声检查,寻找是否存在导致DVT的腹部原因。结果:100例DVT患者中恶性肿瘤9例(9%),良性肿... 详细信息

目的:应用腹部超声证实部分下肢深静脉血栓(DVT)与腹部疾病具有相关性。方法:对100例经超声诊断的下肢DVT患者,应用追踪探查方法,对DVT患者进行腹部超声检查,寻找是否存在导致DVT的腹部原因。结果:100例DVT患者中恶性肿瘤9例(9%),良性肿瘤2例(2%),先天性髂静脉受压4例(4%),下腔静脉先天畸形1例(1%),卵巢黏液性囊腺瘤盆腔漏液1例(1%)。结论:部分DVT是由腹部疾病引起,而此类腹部疾病大多可由超声诊断,应用腹部超声追踪导致下肢DVT形成的病因具有重要的临床意义。

关键词：静脉血栓形成腿超声检查

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12味中草药体外抗解脲支原体的药敏试验

中国中药杂志 2004年第11期29卷 98-99页

作者：梁学林田正阳丁原全娄志华辽宁中医学院附属医院辽宁中医学院附属医院辽宁沈阳110032

解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)具有致病性现已得到公认[1,2].泌尿生殖道解脲支原体感染属性传播疾病之一[3],临床多采用大环内酯类和喹诺酮类抗生素治疗.由于抗生素的使用不规范,不系统,甚至于滥用,现已发现解脲支原体对抗生... 详细信息

解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)具有致病性现已得到公认[1,2].泌尿生殖道解脲支原体感染属性传播疾病之一[3],临床多采用大环内酯类和喹诺酮类抗生素治疗.由于抗生素的使用不规范,不系统,甚至于滥用,现已发现解脲支原体对抗生素产生耐药.笔者采用中药治疗泌尿生殖道解脲支原体感染,临床收到较满意的疗效.为了探求中药抗支原体的抗菌作用,笔者采用微量稀释法测定了12味中草药对7株解脲支原体标准株的体外抑制效应,旨在了解中药对解脲支原体的抑菌效果,为临床进一步开展中医药治疗泌尿生殖系支原体感染性疾病提供实验依据.……

关键词：解脲支原体标准株黄柏保温箱蒲公英黄波罗清热燥湿药清热解毒药中药煎剂中草药生药浓度

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扫描电镜在中药显微鉴定中的应用

中草药 2004年第8期35卷 133-135页

作者：苑冬敏鞠庆波康廷国辽宁中医学院附属医院辽宁中医学院辽宁沈阳110032

扫描电子显微镜是1964年以后迅速发展的一种新型电子光子仪器,成像原理类似于电视摄影显像方式,利用细聚焦电子束在样品表面扫描时激发产生的某些物理信号来调制成像.扫描电镜样品制备方法简单,放大倍数可以从20倍连续调节到20万倍,景... 详细信息

扫描电子显微镜是1964年以后迅速发展的一种新型电子光子仪器,成像原理类似于电视摄影显像方式,利用细聚焦电子束在样品表面扫描时激发产生的某些物理信号来调制成像.扫描电镜样品制备方法简单,放大倍数可以从20倍连续调节到20万倍,景深较大,成像富立体感.近年来,鉴于扫描电镜在立体、清晰、多观察角度等方面均较普通光学显微镜有不可比拟的优越性,使得其在中药显微鉴定领域中的应用越来越受到重视.笔者利用各种检索方法,对20余年的相关文献进行了详细查阅,现就扫描电镜在显微鉴定领域中的应用作一介绍.

关键词：显微鉴定纹饰花粉形态扫描电镜非腺毛扫描电子显微镜垂周壁雕纹

彩色多普勒超声对布加综合征血管病变的诊断价值

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中国临床医学影像杂志 2006年第4期17卷 233-235页

作者：徐佳宴金刚白静慧辽宁中医学院附属医院超声科辽宁沈阳110032 辽宁中医学院辽宁沈阳110032 辽宁省肿瘤医院超声科辽宁沈阳110042

布加综合征(BCS)是由各种原因引起的肝静脉或肝段下腔静脉梗阻或闭塞,使血流回流受阻,血液淤滞,最终导致肝硬化门脉高压和其他下腔静脉阻塞引起的症候群。本文应用二维超声及彩色多普勒超声检查24例BCS,对其声像图特点进行分析,重点评... 详细信息

布加综合征(BCS)是由各种原因引起的肝静脉或肝段下腔静脉梗阻或闭塞,使血流回流受阻,血液淤滞,最终导致肝硬化门脉高压和其他下腔静脉阻塞引起的症候群。本文应用二维超声及彩色多普勒超声检查24例BCS,对其声像图特点进行分析,重点评价彩色多普勒超声对BCS血管病变的诊断价值。[第一段]

关键词：肝静脉血栓形成超声检查,多普勒,彩色

松脂醇二葡萄糖苷激活Wnt/β-catenin信号通路保护成骨细胞

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中国组织工程研究 2025年第2期29卷 339-346页

作者：余鹏孟东方李慧英刘洪飞贺自克河南中医药大学骨伤学院河南省郑州市450000 河南中医药大学第一附属医院河南省郑州市450000 辽宁中医药大学辽宁省沈阳市110847 河南省中医院河南省郑州市450000

背景:松脂醇二葡萄糖苷可以促进骨形成与骨基质的合成,加速骨组织修复,但其对成骨细胞的影响和作用机制仍需进一步探索。目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨松脂醇二葡萄糖苷对地塞米松干预成骨细胞的影响和作用机制。方法:设置不同... 详细信息

背景:松脂醇二葡萄糖苷可以促进骨形成与骨基质的合成,加速骨组织修复,但其对成骨细胞的影响和作用机制仍需进一步探索。目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨松脂醇二葡萄糖苷对地塞米松干预成骨细胞的影响和作用机制。方法:设置不同浓度的地塞米松组和松脂醇二葡萄糖苷组对成骨细胞干预24 h,筛选最佳干预浓度;使用地塞米松、松脂醇二葡萄糖苷和Wnt/β-catenin抑制剂XAV-939对成骨细胞进行干预,设置对照组、地塞米松组、抑制剂组、松脂醇二葡萄糖苷组、松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组。CCK-8法检测细胞活性,检测各组细胞碱性磷酸酶和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性,Annexin V/PI染色与EdU法检测细胞凋亡与增殖情况,Real-Time qPCR检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达水平,Western Blot检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达水平。结果与结论:①地塞米松和松脂醇二葡萄糖苷干预成骨细胞24 h后,发现浓度为10μmol/L的地塞米松细胞抑制率为实验最佳干预浓度;松脂醇二葡萄糖苷浓度在100μmol/L时,细胞增殖最为明显;②与地塞米松组比较,松脂醇二葡萄糖苷组的碱性磷酸酶活性显著增强(P<0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性显著降低(P<0.05);Annexin V/PI染色和EdU法细胞增殖检测结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可抑制地塞米松干预后成骨细胞的凋亡,促进成骨细胞增殖;③与地塞米松组和抑制剂组比较,松脂醇二葡萄糖苷组和松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组中Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);④结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可以抑制地塞米松干预后的成骨细胞凋亡,通过激活Wnt/β-catenin信号通路来保护成骨细胞活性,促进成骨细胞增殖,可能发挥延缓激素性股骨头坏死的作用。

关键词：松脂醇二葡萄糖苷激素性股骨头坏死成骨细胞细胞活性 Wnt/β-catenin信号通路细胞增殖细胞凋亡

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探讨开心散改善阿尔茨海默病的作用机制

中国实验方剂学杂志 2025年第1期 20-29页

作者：何晓明王晓彤闵冬雨王欣欣程美佳刘勇明鞠业涛杨雅丽袁常斌于畅洋张力辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院

目的：基于网络药理学、分子对接及动物实验验证，探讨开心散治疗阿尔茨海默病（AD）的作用机制。方法：(1)采用中药系统药理数据分析平台（TCMSP）和中医药百科全书（ETCM）数据库获取开心散的活性成分及靶点；利用GeneCards、在线人... 详细信息

目的：基于网络药理学、分子对接及动物实验验证，探讨开心散治疗阿尔茨海默病（AD）的作用机制。方法：(1)采用中药系统药理数据分析平台（TCMSP）和中医药百科全书（ETCM）数据库获取开心散的活性成分及靶点；利用GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、TTD、PharmGKB和DrugBank数据库获取AD的相关靶点；对开心散的活性成分作用靶点与AD相关靶点取交集（共同靶点）；STRING数据库对共同靶点进行网络互作分析，构筑蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络；应用Cytoscape内的CytoNCA插件筛选出核心靶点；Metascape平台执行基因本体（GO）功能富集分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析；借助Cytoscape 3.8.2建立“药物-活性成分-靶点”互作网络；AutoDock Vina进行分子对接；(2)利用东莨菪碱（SCOP）造模，腹腔注射，每日1次。将32只雄性C57/BL6小鼠随机分为空白（CON）组（0.9%氯化钠，n=8）、模型（SCOP）组（3mg·kg-1·d-1,n=8）、盐酸多奈哌齐组（SCOP3mg·kg-1·d-1+盐酸多奈哌齐3mg·kg-1·d-1,n=8）、开心散组（SCOP 3 mg·kg-1·d-1+开心散6.5 g·kg-1·d-1,n=8）。各组小鼠0.9%氯化钠、开心散或盐酸多奈哌齐灌胃给药，2次/d，连续14 d。采用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力；苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠海马CA1区病理变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定小鼠血清乙酰胆碱（ACh）与乙酰胆碱酯酶（AChE）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠海马中信号转导和转录激活因子3(STAT3)、核转录因子（NF）-κB p65蛋白表达水平。结果：(1)共得到开心散73种活性成分，筛选出开心散对治疗AD的潜在作用靶点（共同靶点）578个；关键活性成分：山柰酚、吉九里香碱等；潜在核心靶点：STAT3、NF-κB p65等；GO功能富集分析得到3 124条生物功能、254条细胞构件、461条分子功能；KEGG通路富集分析获得248条通路，主要涉及癌症相关通路、TRP通路、环磷酸腺苷（cAMP）通路、NF-κB通路等；分子对接显示，关键活性成分与目标靶点结合力较稳定。(2)Morris水迷宫实验表示开心散可以改善SCOP诱导的小鼠学习记忆能力；HE染色及ELISA检测结果表明开心散对小鼠中枢神经损伤有改善；Western blot检测表明开心散对SCOP模型小鼠海马组织中NF-κB p65磷酸化与STAT3磷酸化水平有下调作用。结论：开心散可以改善SCOP模型小鼠的认知障碍功能，并且可能通过调节NF-κB p65、STAT3等靶点来参与NF-κB信号通路等，减少海马神经元损伤从而发挥治疗AD的作用。

关键词：开心散阿尔茨海默病网络药理学分子对接东莨菪碱作用机制实验验证