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SV40LT基因过表达慢病毒载体的构建与包装

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实验动物科学 2016年第2期33卷 25-28页

作者：游颖沈欢欢马雨楠曾林军事医学科学院实验动物中心北京100071

目的构建SV40LT基因过表达慢病毒载体,并对其进行慢病毒包装,为建立永生化的uncv小鼠胚胎成纤维细胞奠定基础。方法从293T细胞中获得SV40LT基因,将其克隆到p Lenti-GFP质粒中,构建重组穿梭质粒p Lenti-GFP-SV40LT,测序鉴定后分别将鉴定... 详细信息

目的构建SV40LT基因过表达慢病毒载体,并对其进行慢病毒包装,为建立永生化的uncv小鼠胚胎成纤维细胞奠定基础。方法从293T细胞中获得SV40LT基因,将其克隆到p Lenti-GFP质粒中,构建重组穿梭质粒p Lenti-GFP-SV40LT,测序鉴定后分别将鉴定的阳性p Lenti-GFP-SV40LT和包装质粒p MD2.0G和ps PAX2共转染293T细胞,包装产生慢病毒。结果 SV40LT基因过表达慢病毒载体的构建与包装成功。结论 SV40LT基因过表达慢病毒载体构建与包装的成功为uncv小鼠胚胎成纤维细胞的永生化提供了工具。

关键词： SV40LT 慢病毒永生化

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犬细小病毒的进化

畜牧兽医科技信息 2004年第7期20卷 23-24页

作者：杨敬军事医学科学院实验动物中心北京100071

犬细小病毒(CPV)可引起犬的严重的出血性肠炎,是重要的致病因子,1978年最初从美国分离到,并迅速传播到世界各地,致许多犬死亡,这个毒株命名为CPV2型(CPV-2),以和非致病性的犬细小病毒和犬微小病毒进行区分.CPV-2出现后,又分离到新的抗... 详细信息

犬细小病毒(CPV)可引起犬的严重的出血性肠炎,是重要的致病因子,1978年最初从美国分离到,并迅速传播到世界各地,致许多犬死亡,这个毒株命名为CPV2型(CPV-2),以和非致病性的犬细小病毒和犬微小病毒进行区分.CPV-2出现后,又分离到新的抗原变异株CPV2a型(CPV-2a)和CPV2b型(CPV-2b).1985年,CPV-2a和CPV-2b完全取代了CPV-2.对于CPV进化的机制有多种猜想,广泛接受的猜想有两种,一种认为CPV-2的出现是从猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)的变种进化而来,一种认为它是从感染其它食肉动物如水貂或狐狸的极相关的病毒进化而来.研究这个新病原的出现,了解病毒的进化,有助于了解新发现的疾病.

关键词：犬细小病毒出血性肠炎宿主范围

N2a细胞增殖的痒病小鼠适应毒株RML的致病特性分析

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畜牧兽医学报 2015年第2期46卷 257-263页

作者：吴晓东邹艳丽刘雨田李金明张永强刘珊王志亮扬州大学兽医学院中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病研究中心国家BSE参考实验室

为鉴定细胞体外增殖的痒病小鼠适应毒株RML的致病特性,包括致病性和株系特征等,用RML感染的N2a(Sc-N2a)细胞裂解物接种C57BL/6J小鼠进行研究。结果显示:经(200±28)d的潜伏期后,C57BL/6J小鼠全部发病死亡,临床症状均表现为共济失调,而接... 详细信息

为鉴定细胞体外增殖的痒病小鼠适应毒株RML的致病特性,包括致病性和株系特征等,用RML感染的N2a(Sc-N2a)细胞裂解物接种C57BL/6J小鼠进行研究。结果显示:经(200±28)d的潜伏期后,C57BL/6J小鼠全部发病死亡,临床症状均表现为共济失调,而接种N2a细胞裂解物的C57BL/6J小鼠与接种Sc-N2a细胞裂解物的PrP基因敲除小鼠均正常存活。Sc-N2a细胞增殖的PrPSc与发病小鼠脑组织中PrPSc具有同样的糖基化模式,三种糖基化PrPSc具相同的迁移率,而且均是以单糖基化形式为主。发病小鼠的病理学研究结果显示:脑部的海绵状空泡主要分布于脑干、大脑、小脑、丘脑;脑部的PrPSc主要分布于大脑皮质、海马、丘脑,在小脑、四迭体、嗅球有少量的分布。小鼠回归试验表明:Sc-N2a细胞增殖的PrPSc对小鼠具致病性,并保留RML的株系特征,是TSEs研究的理想细胞模型。

关键词： N2a细胞痒病小鼠适应毒株RML PrPSc 致病性株系特征

猕猴B病毒gC蛋白特异性抗原表位的合成和表达

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中国比较医学杂志 2012年第7期22卷 21-24页

作者：隋丽华孙兆增刘一张小飞崔晓霞赵彦斌刘冰许琴曾林军事医学科学院实验动物中心北京100071

目的获得B病毒gC蛋白的特异性表位抗原。方法利用长片段基因合成的方法,合成B病毒C蛋白的特性抗原表位基因,将该基因连接到pMAL-5x载体,转化到BL21受体菌进行表达,并纯化表达产物。结果成功的获得了B病毒gC蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白... 详细信息

目的获得B病毒gC蛋白的特异性表位抗原。方法利用长片段基因合成的方法,合成B病毒C蛋白的特性抗原表位基因,将该基因连接到pMAL-5x载体,转化到BL21受体菌进行表达,并纯化表达产物。结果成功的获得了B病毒gC蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可溶的形式表达。结论利用原核表达系统,可以产生B病毒gC蛋白的可溶性抗原,可以作为B病毒的检测抗原。

关键词：猕猴B病毒 C蛋白抗原表位合成与表达

明胶海绵/β-磷酸三钙复合物联合不同剂量碱性成纤维细胞生长因子诱导骨再生的评价

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中国组织工程研究 2019年第2期23卷 190-195页

作者：崔婷婷邱泽文贵林仲维剑马国武大连医科大学口腔医学院附属口腔医院辽宁省大连市116023 大连医科大学实验动物中心辽宁省大连市116044

背景:目前,常用的提高组织再生率的方法是将生长因子与支架材料相结合,因此基因增强的骨组织工程方法越来越受到重视。目的:评价明胶海绵/β-磷酸三钙复合物联合不同剂量碱性成纤维细胞生长因子的骨再生效果。方法:取40只雄性SD大鼠,制... 详细信息

背景:目前,常用的提高组织再生率的方法是将生长因子与支架材料相结合,因此基因增强的骨组织工程方法越来越受到重视。目的:评价明胶海绵/β-磷酸三钙复合物联合不同剂量碱性成纤维细胞生长因子的骨再生效果。方法:取40只雄性SD大鼠,制备颅骨缺损模型,随机分4组干预,于骨缺损处分别植入单纯明胶海绵/β-磷酸三钙复合物、载10,100,200ng碱性成纤维细胞生长因子的明胶海绵/β-磷酸三钙复合物。植入后8周取植骨材料及其下的颅骨,通过大体和组织学观察分析成骨情况。结果与结论:各组明胶海绵/β-磷酸三钙复合物被大量的纤维结缔组织包裹,纤维结缔组织中可见大量的新生血管及淋巴细胞,在β-磷酸三钙颗粒周围可见巨噬细胞,β-磷酸三钙颗粒未见明显吸收,β-磷酸三钙与颅骨间有新骨形成,新骨骨小梁之间有较多活跃的骨细胞,编织骨结构紊乱,编织骨下方为成熟的板层骨,是未破坏的原有颅骨;载100ng碱性成纤维细胞生长因子的明胶海绵/β-磷酸三钙复合物组新骨形成量最多,单纯明胶海绵/β-磷酸三钙复合物组新骨形成量最少。结果表明,碱性成纤维细胞生长因子联合明胶海绵/β-磷酸三钙复合物可促进骨缺损中的骨再生,其中以100 ng碱性成纤维细胞生长因子促进骨再生效果最好。

关键词：骨再生 bFGF 碱性成纤维细胞生长因子明胶海绵/β-磷酸三钙复合物组织工程动物实验生物材料成纤维细胞生长因子2 磷酸钙类骨再生组织工程

镉污染对鲫鱼体内Cu^(2+)和Zn^(2+)含量的影响

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河北渔业 2002年第2期 9-10页

作者：赵守城陈贵良赵沉浮华北煤炭医学院生物科学系 063000 华北煤炭医学院实验动物中心 063000

随着工业的发展,有毒金属污染问题日益突出.有关镉污染对水生生物的毒性效应已见报道,但这些研究主要集中在确定动物体内的积累量及对鱼类肾脏、卵巢(1,2,3)等组织的损伤方面.本文通过模拟镉污染水体,研究镉对鲫鱼体内Cu2+和Zn2+含量的... 详细信息

随着工业的发展,有毒金属污染问题日益突出.有关镉污染对水生生物的毒性效应已见报道,但这些研究主要集中在确定动物体内的积累量及对鱼类肾脏、卵巢(1,2,3)等组织的损伤方面.本文通过模拟镉污染水体,研究镉对鲫鱼体内Cu2+和Zn2+含量的影响,为全面评价镉污染对鲫鱼的毒性效应提供依据.

关键词：镉污染鲫鱼含量铜离子锌离子水体污染毒性效应

黄芪-莪术-重楼配伍降低血管内皮通透性抑制结肠癌转移作用的研究

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南京中医药大学学报 2022年第2期38卷 115-121页

作者：刘甜甜卞勇关汉卿梁研郭文晖余倩慧唐德才南京中医药大学中医学院·中西医结合学院江苏南京210023 南京中医药大学实验动物中心江苏南京210023

目的观察黄芪-莪术-重楼配伍对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)通透性与细胞紧密连接的影响及其抑制人结肠癌细胞系(HCT116)血行转移的作用机制。方法制备空白对照血清和黄芪-莪术-重楼配伍含药血清。构建HUVEC-HCT116共培养体系,实验分为共... 详细信息

目的观察黄芪-莪术-重楼配伍对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)通透性与细胞紧密连接的影响及其抑制人结肠癌细胞系(HCT116)血行转移的作用机制。方法制备空白对照血清和黄芪-莪术-重楼配伍含药血清。构建HUVEC-HCT116共培养体系,实验分为共培养模型组,黄芪-莪术-重楼配伍低、中、高剂量(2.1、4.2、8.4 g·kg^(-1))组。另设HUVEC单培养对照组。CCK-8法检测细胞增殖;FITC-dextran法、Transwell法检测HUVEC通透性与HCT116跨内皮迁移数量;免疫荧光法检测ZO-1蛋白的分布;Western blot法检测RhoA、ROCK及ZO-1蛋白表达量。结果黄芪-莪术-重楼配伍不同剂量含药血清处理48 h后,HUVEC增殖均显著减少(P<0.01)。与单培养对照组相比,共培养模型组FITC-dextran渗透量、跨越内皮迁移的HCT116细胞数量明显增加(P<0.01),ZO-1蛋白表达下调(P<0.01),RhoA、ROCK蛋白表达上调(P<0.01);与共培养模型组相比,黄芪-莪术-重楼配伍各剂量组FITC-Dextran渗透量、跨越内皮迁移的HCT116细胞数量均减少(P<0.05),ZO-1蛋白表达上调(P<0.05),RhoA、ROCK蛋白表达下调(P<0.05),且呈现剂量依赖性。结论黄芪-莪术-重楼配伍可能通过抑制RhoA/ROCK通路调控HUVEC紧密连接相关蛋白ZO-1的表达,降低血管内皮通透性,进而抑制结肠癌血行转移。

关键词：黄芪-莪术-重楼配伍结肠癌血管通透共培养紧密连接

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转基因动物模型的进展

实验动物科学与管理 2001年第2期18卷 43-44页

作者：栾蓉晖李瑞生军事医学科学院实验动物中心北京100071

1实验动物科学发展实验动物在药物开发和生物化学研究中一直被广泛的应用,在认识和治疗人类疾病过程中实验动物起到了重要的推动作用.目前,人们在实验动物方面的工作主要集中在(1)不断寻求提高动物质量.(2)获得实验结果的一致性和可靠性... 详细信息

1实验动物科学发展实验动物在药物开发和生物化学研究中一直被广泛的应用,在认识和治疗人类疾病过程中实验动物起到了重要的推动作用.目前,人们在实验动物方面的工作主要集中在(1)不断寻求提高动物质量.(2)获得实验结果的一致性和可靠性.(3)完善有关的动物福利法案.(4)开发研究新的动物模型.因此,随着生物科学的不断发展,在全球范围内已产生了实验动物科学和技术,建立了实验动物科学的主体内容[1].

关键词：实验动物转基因动物模型应用

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Wistar大鼠生长性能测定

上海实验动物科学 1994年第2期14卷 93-94页

作者：李善如王冬平中国军事医学科学院实验动物中心

测定了封闭群Ｗｉｓｔａｒ大鼠出生后１年内的生长性能。结果表明，该群大鼠随日龄增加，体重逐渐增大，累记生长曲线呈“Ｓ”型。雄性大鼠平均初生重为７．０６±０．６９ｇ，雌性为６．７６±０．７８ｇ５～４５ｄ间两者差异不显著（... 详细信息

测定了封闭群Ｗｉｓｔａｒ大鼠出生后１年内的生长性能。结果表明，该群大鼠随日龄增加，体重逐渐增大，累记生长曲线呈“Ｓ”型。雄性大鼠平均初生重为７．０６±０．６９ｇ，雌性为６．７６±０．７８ｇ５～４５ｄ间两者差异不显著（Ｐ＞Ｏ．０５，５５ｄ以后雄性极显著高于雌性（Ｐ＜０．０１）。雄性最大体重达７１０ｇ，雌性４５０ｇ。该群大鼠的绝对生长分别在３５、５５ｄ出现两次峰值，推测该大鼠的初情期为３５～４０ｄ，性成熟为５５ｄ左右。

关键词：大鼠 Wistar大鼠生长测定