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基于LC-MS代谢组学黔产石韦利尿通淋物质基础的研究与质量评价

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基于LC-MS代谢组学黔产石韦利尿通淋物质基础的研究与质量评价

作者：王亚茹贵阳中医学院

学位级别：硕士

目的:石韦为水龙骨科植物庐山石韦Pyrrosia sheareri(Bak.)Ching、石韦Pyrrossia lingua(Thunb)Farwell和有柄石韦Pyrrossiapetiolosa(Christ)Ching的干燥叶,具有清热燥湿,利尿通淋的功效,贵州地区由于水质偏硬,得泌尿系结实的患者较多,而石韦在贵州大部分地区均有,且资源丰富;但到目前为止对石韦利尿、通淋的相关研究未见报道。本课题通过急性毒性实验得到黔产石韦不同极性部位的给药量,根据动物模型筛选出黔产石韦利尿通淋的有效部位,对有效部位进行代谢组学研究,得出黔产石韦利尿通淋的药效物质基础,差异性代谢产物以及差异性代谢路径,基于利尿通淋的药效物质基础建立黔产三种石韦的质量评价。方法:(1)将黔产石韦分为六个不同的极性部位,进行各个部位的急性毒性实验。(2)建立利尿动物模型,筛选出黔产石韦利尿作用的有效部位。(3)建立通淋(肾结石)动物模型,筛选出黔产石韦通淋作用的有效部位。(4)采用LC-MS技术对黔产石韦利尿通淋的有效部位进行分析,筛选出利尿通淋的药效物质基础。(5)采用LC-MS技术对黔产石韦利尿通淋有效部位代谢组学研究,通过PCA、PLS-DA、OPLS-DA建模,筛选出差异性的代谢产物以及代谢路径。(6)采集黔产三种石韦各十个批次(石韦、有柄石韦、庐山石韦)。(7)按照《中国药典》项下进行性状鉴别、显微鉴别以及水分、总灰分、浸出物的含量,采用LC-MS技术测量黔产三种石韦中咖啡因的含量,以咖啡因、酒石酸、柠檬酸为对照品,采用LC-MS/MS技术进行黔产三种石韦的质量评价。结果:(1)黔产石韦各个极性部位均无毒,得出各个部位的最大给药量。(2)利尿的有效部位为石油醚和二氯甲烷部位,且从均数上看,石油醚部位的利尿效果略优于二氯甲烷部位。(3)黔产石韦利尿通淋的有效部位均为石油醚和二氯甲烷部位。且利尿的结果从均数上看,石油醚部位的效果略优于二氯甲烷部位,并且在利尿的同时没有导致电解质的紊乱.而通淋是促进尿钙、尿草酸排泄,使大鼠结石形成率明显降低;且有效部位均能提高肾组织抗氧化能力,减轻氧化应激反应,这很可能是其发挥防治肾结石保护作用的多途径作用机制之一。(4)通过对石油醚,二氯甲烷部位进行研究得出主要的化合物为有机酸,氨基酸以及衍生物等。(5)对黔产石韦利尿活性部位代谢组学研究,得出代谢产物的变化主要引起了组氨酸,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢路径的变化。(6)对黔产石韦通淋活性部位代谢组学研究,得出代谢产物的变化主要是引起鞘脂类代谢路径的紊乱。(7)采集并鉴定了贵州不同产地的30批石韦样品,经鉴定确定了黔产三种石韦药材的性状鉴别及显微鉴别均符合《中国药典》的要求;测的黔产三种石韦30批药材的水分含量在8.8～13.0%之间;总灰分含量在1.23～6.69%之间;浸出物含量在0.0060～0.0142%之间;咖啡因的含量在0.0312～0.3003mg/g之间,在石韦与庐山石韦中的含量较有柄石韦中的高,咖啡因、酒石酸和柠檬酸在黔产三种石韦中的含量差异较大。结论:黔产石韦利尿通淋的有效部位为石油醚,二氯甲烷部位,且在利尿的同时不影响电解质代谢的紊乱,通淋的同时提高肾组织抗氧化能力,减轻氧化应激反应。在生成肾结石模型的同时造成了鞘脂类代谢路径的紊乱,黔产石韦发挥利尿通淋的同时有组氨酸,甘氨酸、丝氨酸,苏氨酸代谢的参与;不同产地或者同一产地的不同石韦品种化学成分存在差别,在临床上用于利尿通淋的药效时需要进行辨证。

关键词：黔产石韦急性毒性实验利尿通淋 LC-MS 代谢组学质量评价

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六经形层理论指导推拿临床的理论探讨

辽宁中医杂志 2017年第1期44卷 141-143页

作者：杨硕张军秦元星莫倩邢袁若愚麦雪珠司元红贵阳中医学院针灸推拿学院贵州贵阳550002 贵阳中医学院研究生院贵州贵阳550002

对病变层次的准确判断是决定推拿临床疗效的关键。"六经形层理论"将人体病变层次分为太阳、阳明、少阳、太阴、少阴、厥阴,太阳主皮毛,阳明肌肉,少阳主腠理,太阴主胸腹,少阴主血脉、骨,厥阴主筋膜,推拿依据此理论作用于不同的层次从而... 详细信息

对病变层次的准确判断是决定推拿临床疗效的关键。"六经形层理论"将人体病变层次分为太阳、阳明、少阳、太阴、少阴、厥阴,太阳主皮毛,阳明肌肉,少阳主腠理,太阴主胸腹,少阴主血脉、骨,厥阴主筋膜,推拿依据此理论作用于不同的层次从而产生不同的临床效应。

关键词：推拿理论六经形层临床指导

隔药灸脐法对原发性痛经大鼠神经-内分泌-免疫网络的调控与影响

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时珍国医国药 2017年第2期28卷 497-499页

作者：陈盼碧杨孝芳王兴桂杨志虹冯麟宣锦贵阳中医学院针灸推拿学院贵州贵阳550002

目的从神经-内分泌-免疫网络的角度探讨隔药灸脐法治疗原发性痛经的机制。方法将40只雌性Wistar大鼠,随机分为造模组(30只)和空白组(10只,A组),用缩宫素制备大鼠痛经模型,造模成功后,将30只痛经模型大鼠随机分为模型组(B组)、隔药灸脐... 详细信息

目的从神经-内分泌-免疫网络的角度探讨隔药灸脐法治疗原发性痛经的机制。方法将40只雌性Wistar大鼠,随机分为造模组(30只)和空白组(10只,A组),用缩宫素制备大鼠痛经模型,造模成功后,将30只痛经模型大鼠随机分为模型组(B组)、隔药灸脐组(C组)、隔淀粉灸脐组(D组)。隔药灸脐组采用隔药灸神阙穴,隔淀粉灸脐组采用隔淀粉灸神阙穴。比较各组大鼠30min内扭体次数,测定各组大鼠血浆中β-内啡肽(β-EP)水平、子宫组织PGE_2、PGF_(2α)含量及脾脏NK细胞活性。结果与空白组比较,模型组扭体次数较多(P<0.01);与模型组相比,隔药灸脐组、隔淀粉灸脐组均能减少30min内扭体反应次数(P<0.01),隔药灸脐组30min内扭体次数最少(P<0.01)。与空白组比较,模型组血浆β-EP含量显著降低,子宫组织中PGE_2含量明显降低(P<0.01)、PGF_(2α)含量明显升高(P<0.01),脾脏NK细胞活性含量明显降低(P<0.01);与模型组比较,隔药灸脐组、隔淀粉灸脐组血浆中β-EP的含量明显升高(P<0.01),子宫组织中PGE2含量明显升高,PGF_(2α)的含量明显降低,脾脏NK细胞活性含量明显升高(P<0.01);其中尤以隔药灸脐组对血浆β-EP、子宫组织PGE_2、PGF_(2α)含量及脾脏NK细胞活性含量影响最为明显。结论隔药灸脐法治疗原发性痛经疗效显著,其机制与调节神经-内分泌-免疫网络有关,可升高血浆β-EP含量,降低子宫组织中PGF_(2α)含量、升高PGE_2含量,提高脾脏NK细胞活性。

关键词：隔药灸脐法原发性痛经 NEI网络

针刺五脏俞对中风偏瘫患者肢体功能增效研究及血浆NPY变化的观察

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针刺五脏俞对中风偏瘫患者肢体功能增效研究及血浆NPY变化的观察

作者：漆丽贵阳中医学院

学位级别：硕士

目的:本课题通过对中风偏瘫病名、病因、病机、针灸治疗方法和治疗机理的文献进行整理、归纳和总结出有效的穴位和治疗方法,从中发现目前存在的问题,并以此为切入点进行相关的临床研究。临床研究部分旨在通过观察针刺五脏俞合传统肢体... 详细信息

目的:本课题通过对中风偏瘫病名、病因、病机、针灸治疗方法和治疗机理的文献进行整理、归纳和总结出有效的穴位和治疗方法,从中发现目前存在的问题,并以此为切入点进行相关的临床研究。临床研究部分旨在通过观察针刺五脏俞合传统肢体取穴对中风后偏瘫患者肢体功能、日常综合能力及其血浆中神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)含量影响,初步探讨五脏俞是否有增强中风后偏瘫肢体功能恢复的作用?是否通过抑制血浆NPY含量增加发挥作用? 方法:凡符合研究条件的中风偏瘫患者,按照随机单盲法进行分组,分为五脏俞合传统肢体穴位组(治疗组),单纯传统肢体穴位组(对照组),每组30例,分别进行治疗前后患者肢体功能、日常生活能力(ADL)及综合能力的恢复程度评分,治疗前后血浆NPY含量的测定。结果:1.治疗组和对照组经治疗后总积分有不同程度的升高,与治疗前比较差异均有显著性(P针灸临床治疗选穴提供理论和实验依据。

关键词：五脏俞针刺中风偏瘫 NPY

柴胡龙牡汤对精神分裂症大鼠模型刻板行为和胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响

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现代预防医学 2011年第7期38卷 1296-1297页

作者：李东阳周秀芳孙晓东陈涛鲁娜贵阳中医学院医学人文系

[目的]观察柴胡龙牡汤对精神分裂症大鼠模型刻板行为和GFAP表达的影响。[方法]将44只大鼠分为4组,空白组腹腔注射生理盐水。剩余3组均用氯胺酮造模(腹腔注射氯胺),其中氯氮平组从d4开始加用氯氮平灌胃,柴胡龙牡汤组从d4开始加用柴胡龙... 详细信息

[目的]观察柴胡龙牡汤对精神分裂症大鼠模型刻板行为和GFAP表达的影响。[方法]将44只大鼠分为4组,空白组腹腔注射生理盐水。剩余3组均用氯胺酮造模(腹腔注射氯胺),其中氯氮平组从d4开始加用氯氮平灌胃,柴胡龙牡汤组从d4开始加用柴胡龙牡汤灌胃。[结果]模型组刻板行为较空白组明显增多;氯氮平组和柴胡龙牡汤组刻板行为均较模型组明显减少;柴胡龙牡汤组刻板行为较氯氮平组增多。模型组GFAP表达较空白组明显增多;氯氮平组GFAP表达较模型组明显减少;柴胡龙牡汤组GFAP表达较模型组明显减少;柴胡龙牡汤组GFAP表达较氯氮平组增多。[结论]柴胡龙牡汤对精神分裂症大鼠模型前额叶GFAP和刻板行为有一定的影响。

关键词：柴胡龙牡汤氯氮平精神分裂症模型刻板行为 GFAP

耳针对四氧嘧啶性糖尿病家兔胰岛组织结构及超微结构的影响

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中国中西医结合杂志 1997年第S1期17卷 118-120页

作者：陈向华刘卓佑安徽中医学院针灸系合肥230038 贵阳医学院

我们曾报道了耳针具有降低四氧嘧啶性糖尿病家兔的血糖,改善其临床症状的作用。在此基础上,本研究进一步观察了耳针对该病家兔胰岛组织结构及超微结构的影响。实验取得了一些有意义的结果,为临床运用耳针治疗糖尿病提供了形态学基础。... 详细信息

我们曾报道了耳针具有降低四氧嘧啶性糖尿病家兔的血糖,改善其临床症状的作用。在此基础上,本研究进一步观察了耳针对该病家兔胰岛组织结构及超微结构的影响。实验取得了一些有意义的结果,为临床运用耳针治疗糖尿病提供了形态学基础。现报告如下。材料与方法1 动物造模及分组本实验选用贵阳医学院实验动物中心提供的健康白毛家兔,体重1.80～2.30kg,雄性,双耳无损伤,随机分为实验组10只(注药后死亡2只),对照组12只(注药后死亡4只)。

关键词：实验组中医学院无损伤四氧嘧啶性糖尿病超微结构观察家兔组织结构胰岛次级溶酶体耳针治疗

子午流注纳甲法治疗中风后抑郁症的临床疗效研究

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子午流注纳甲法治疗中风后抑郁症的临床疗效研究

作者：谢睿贵阳中医学院

学位级别：硕士

目的：本课题通过观察子午流注纳甲法治疗中风后抑郁症(Post Stroke Dep-ression, PSD)的临床疗效,研究探讨中风后抑郁症有效的临床治疗方法;探讨社会支持与中风后抑郁症发生之间的关系。方法：观察57例病人,其中子午流注纳甲法组30例... 详细信息

目的：本课题通过观察子午流注纳甲法治疗中风后抑郁症(Post Stroke Dep-ression, PSD)的临床疗效,研究探讨中风后抑郁症有效的临床治疗方法;探讨社会支持与中风后抑郁症发生之间的关系。方法：观察57例病人,其中子午流注纳甲法组30例,传统针刺组27例。两组均接受西医常规治疗和二级预防,包括对中风原发病的治疗、心理疏导、饮食调节和功能锻炼。子午流注纳甲法采用子午流注盘和子午流注纳甲法取穴表(见附三)进行推算当日当时所开穴位配合辩证取穴进行针刺,传统针刺采用石学敏编写的《针灸学》对郁症进行治疗取穴：水沟、内关、太冲、神门等穴位进行治疗。两组针刺得气留针,每日一次,每次30分钟,两周为1个疗程,共治疗2个疗程。应用国际公认的汉密尔顿抑郁量表(HAMD)及社会支持评定量表(SSRS)(包括客观支持、主观支持、对支持的利用度)对各组患者治疗前后的临床疗效进行比较。然后将各表分值分别进行组内与组间比较,并进行相关性分析,所得数据用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。结果：①两组自身治疗前后相比较：两组HAMD量表评分、SSRS评分(包括客观支持、主观支持、对支持的利用度),差异均具有显著性(P<0.01)。②治疗后两组之间比较：子午流注纳甲法治疗组HAMD量表评分与传统针刺组有显著性差异(P<0.05),子午流注纳甲法治疗组SSRS评分与传统针刺组有极显著性差异(P<0.01)。③两组患者治疗后SSRS的客观支持、主观支持、对支持的利用度子午流注纳甲法均优于传统针刺法,差异具有显著性(P<0.01)。结论：①子午流注纳甲法治疗中风后抑郁症具有较好的治疗效果。②缺乏社会支持可能是影响中风后抑郁症状的心理社会因素之一。

关键词：子午流注纳甲法中风后抑郁症汉密尔顿抑郁量表社会支持评定量表

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脐丹粉外敷对200例慢性病防治的疗效观察

陕西中医 1989年第1期10卷 33-34页

作者：焦新民,殷克敬,雷正权,贾成文,王春辉陕西中医学院针灸系陕西中医学院针灸系陕西中医学院针灸系陕西中医学院针灸系陕西中医学院针灸系

作者在学习民间敷脐疗法的经验,采用祛风、补气、补阳的中药制成“脐丹粉”,外敷于神阙穴,用于防治感冒、气管炎、咽炎等慢性病,有提高免疫力之效果。现将资料完整的200例小结于下。一般资料本组共200例,男75例,女125例,年龄10岁以下16... 详细信息

作者在学习民间敷脐疗法的经验,采用祛风、补气、补阳的中药制成“脐丹粉”,外敷于神阙穴,用于防治感冒、气管炎、咽炎等慢性病,有提高免疫力之效果。现将资料完整的200例小结于下。一般资料本组共200例,男75例,女125例,年龄10岁以下16例,11～20岁32例,21～30岁38例,31～40岁26例,40岁以上38例,最小1岁,最大70岁,病种有经常感冒者48例,急慢性气管炎14例,老年慢性支气管炎14例,慢性咽炎20例,喘息型支气管炎11例,其它31例。其中经常或每年冬天用丙种球蛋白者18例（有1例合并多种病者）,有时用者9例,经常服补药者27例,预防前后自身对照者169例,用脐丹粉治疗1疗程以内者97例,1+～2疗程者58例,2+～3疗程者32例,3疗程以上者13例。

关键词：慢性病/预防和控制慢性病/中医药疗法外治法

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蓝布正等四种药用植物化学成分的研究

蓝布正等四种药用植物化学成分的研究

作者：王莉宁贵阳中医学院

学位级别：硕士

贵州省地理气候环境独特并且居住着较多的少数民族,长期以来,少数民族采用民族医药治疗疾病,拥有很多疗效独特的民族药材和许多治疗疾病的土方验方,成为新药研究的重要资源。本论文在前期对贵州民族药的系统活性筛选的基础上,从贵州省... 详细信息

贵州省地理气候环境独特并且居住着较多的少数民族,长期以来,少数民族采用民族医药治疗疾病,拥有很多疗效独特的民族药材和许多治疗疾病的土方验方,成为新药研究的重要资源。本论文在前期对贵州民族药的系统活性筛选的基础上,从贵州省民族药中选出4种民族药材进行化学成分的研究,其中两种民族药材进行了化学成分的系统研究,另外两种民族药材依据化学成分和药理作用的不同进行了化学成分的定向研究,同时进行了部分化合物的活性研究。一方面,希望能发现具有重要生物活性的先导化合物,为创新药物的研究开发打下物质基础;另一方面,希望能分离出高纯度(98%)以上、含量较高的有效成分,申报为法定对照品,为进一步提高民族药材和民族药制剂的质量控制标准提供科学依据。本论文涉及化学成分系统研究的两种民族药材为蔷薇科(Rosaceae)水杨梅属(Geum)植物——蓝布正(Geum japonicum Thunb. var. chinense F. Bolle)和蓼科(Polygonaceae)蓼属(Polygonum)植物——赤胫散(Polygonum runcinatum Buch.-*** Hems1.);化学成分定向分离的两种民族药材为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium)植物——巫山淫羊藿(Epimedium wushanense ***.)和蔷薇科蔷薇属植物——刺梨(Rosa roxbughii Tratt)。应用硅胶常压柱层析、减压柱层析、中压柱层析,反相(RP-18)柱层析,葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析,大孔吸附树脂(HPD-101)柱层析,半制备HPLC等多种分离材料和分离技术,结合UV、IR、NMR和MS等现代波谱分析方法和化学方法,从以上四种植物中分离38个并鉴定了22个化合物,其中有14个化合物为首次发现。化合物类型主要有五环三萜、黄酮、鞣质、有机酸等。此外,对蓝布正的部分化合物进行了生物活性筛选研究。蓝布正(G. japonicum Thunb. var. chinense F. Bolle)系蔷薇科(Rosaceae)水杨梅属(Geum)植物。分布于江苏、浙江、安徽、湖北、湖南、四川、贵州等地。贵州苗族用来治疗“眩晕病”效果明显。为了进一步揭示该植物的活性物质基础,对其化学成分进行研究。从蓝布正的乙醇提取液中分离了22个化合物并鉴定11个化合物,包括甾体、黄酮、三萜类等化合物,173-脱镁叶绿素乙酯(173-ethoxyphaeophorbide a 1),甘油-1-棕榈酸酯(glycerol 1- monopalmitate 3),β-谷甾醇(β-sitosterol,4),棕榈酸(palmitic acid,7),翻白叶苷A(potengrtilloside A,10),苦莓苷F1(niga-ichigoside F1,11),Kaji-ichigoside F1 ,12,Euscaphic acid,13,Tormentic acid 14,鞣酸花(Ellagic acid,16)3, 3′-二甲基鞣花酸(3, 3′-di-O-methyl ellagic acid 17),其中有6个化合物为首次发现。同时对化合物10、11、12进行了活性筛选,化合物10、11表现出对血小板聚集作用。赤胫散(P. runcinatum Buch.-*** Hems1.)为蓼科蓼属植物,又名花蝴蝶、蛇头蓼、血当归等,分布于台湾、湖北、湖南、广西、四川、贵州、云南等省,以根及全草入药,具有清热解毒、活血止血、解毒消肿之功效。主治急性胃肠炎、吐血咯血、痔疮出血、月经不调、跌打损伤、外用治乳腺炎、痈疖肿毒等。现代药理实验表明赤胫散的醇提物水溶液对G-志贺氏痢疾杆菌有明显的抑菌作用。为进一步揭示该植物的活性物质基础,我们对采于贵州省贵阳市的赤胫散进行化学成分研究。从赤胫散的乙醇提取液中分离鉴定8个化合物,包括甾体、黄酮、鞣酸花类等化合物,3,3′,4′-三甲基鞣花酸(3,3′,4′-trimethylellagic acid,1)、3,3′-二甲基鞣花酸(3,3′-di-O-methyl ellagic acid,2)、3,3′,4-三甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖(3,3′,4-tri-O-methylellagic acid-4′-O-β-D-glucoopyranoside,3)、3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖( 3 , 3′-di-O-methyl ellagic acid-4′-O-β-D-glucoopyranoside,4)、没食子酸(gallic acid,5)、没食子酸乙酯(ethyl 3,4,5-trihydro

关键词：蓝布正赤胫散鞣花酸淫羊藿朝藿定C 刺梨