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龟鹿二仙胶含药血清对膝骨关节炎小鼠软骨细胞模型自噬和凋亡的影响及作用机制研究

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中医正骨 2025年

作者：沈默金郑珍萍吴伟欣杨美鑫顾富城耿秋东王和鸣李楠福建中医药大学中医学院中医骨伤及运动康复教育部重点实验室

目的:探讨龟鹿二仙胶含药血清对白细胞介素-1β诱导的膝骨关节炎（knee osteoarthritis,KOA）小鼠软骨细胞模型自噬和凋亡的影响及作用机制。方法:将10只SD大鼠随机分为龟鹿二仙胶含药血清制备组和空白血清制备组,分别给予龟鹿二仙胶药... 详细信息

目的:探讨龟鹿二仙胶含药血清对白细胞介素-1β诱导的膝骨关节炎（knee osteoarthritis,KOA）小鼠软骨细胞模型自噬和凋亡的影响及作用机制。方法:将10只SD大鼠随机分为龟鹿二仙胶含药血清制备组和空白血清制备组,分别给予龟鹿二仙胶药液和生理盐水灌胃,连续灌胃1周后,采集腹主动脉血,制备龟鹿二仙胶含药血清和空白血清。取培养至第2代的C57BL/6小鼠膝关节软骨细胞,分为空白血清组、模型组、龟鹿二仙胶含药血清组。模型组、龟鹿二仙胶含药血清组加入终浓度为10 ng·mL-1的白细胞介素-1β,诱导培养24 h后,空白血清组、模型组加入10%空白血清,龟鹿二仙胶含药血清组加入10%龟鹿二仙胶含药血清,继续培养24 h。采用流式细胞分析仪检测各组软骨细胞凋亡率,采用电子显微镜观察各组软骨细胞自噬小体,分别采用实时定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）、UNC-51样自噬激活激酶1 （UNC-51 like autophagy activating kinase 1,ULK1）、自噬相关蛋白5（autophagy related protein 5,ATG5）、微管相关蛋白1轻链3B（microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-13、趋化因子配体2（chemokine ligand 2,CCL2）的mRNA和蛋白表达水平。结果:（1）软骨细胞凋亡率检测结果。模型组软骨细胞凋亡率高于空白血清组（P=0.000）,龟鹿二仙胶含药血清组软骨细胞凋亡率低于模型组（P=0.000）。（2）软骨细胞自噬小体观察结果。空白血清组可见双层膜封闭的球状自噬小体,模型组自噬小体数量较空白血清组减少,龟鹿二仙胶含药血清组自噬小体数量较模型组增加。（3）软骨细胞自噬和凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平检测结果。模型组软骨细胞AMPK、ULK-1、ATG5、LC3B、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均低于空白血清组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.002,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）,mTOR、Bax、MMP-13、CCL2的mRNA和蛋白表达水平均高于空白血清组（P=0.002,P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.004,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;龟鹿二仙胶含药血清组软骨细胞AMPK、ULK1、ATG5、LC3B、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均高于模型组（P=0.000,P=0.003,P=0.001,P=0.001,P=0.001;P=0.020,P=0.002,P=0.000,P=0.008,P=0.004）,mTOR、Bax、MMP-13、CCL2的mRNA和蛋白表达水平均低于模型组（P=0.008,P=0.001,P=0.000,P=0.000;P=0.040,P=0.000,P=0.001,P=0.000）。结论:龟鹿二仙胶含药血清能够增强KOA软骨细胞自噬,抑制其凋亡与细胞外基质降解,且龟鹿二仙胶含药血清可能通过激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路发挥作用。

关键词：骨关节炎,膝龟鹿二仙胶软骨细胞自吞噬细胞凋亡信号传导 TOR丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶小鼠

基质金属蛋白酶-9及金属蛋白酶组织抑制剂-1在孕鼠胎盘形成中期的表达模式

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四川动物 2016年第5期35卷 703-708页

作者：魏孟梅吴曙光赵海贵阳中医学院药学院贵阳550002 贵阳中医学院实验动物研究所贵阳550002

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）在孕鼠胎盘形成中期的表达模式。方法 HE染色观察孕鼠第9天至第14天（D9-D14）胎盘形态结构的变化,同时免疫组织化学法检测相应天数胎盘中MMP-9和TIMP-1的表达情... 详细信息

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）在孕鼠胎盘形成中期的表达模式。方法 HE染色观察孕鼠第9天至第14天（D9-D14）胎盘形态结构的变化,同时免疫组织化学法检测相应天数胎盘中MMP-9和TIMP-1的表达情况。结果 HE染色结果显示孕鼠D11时胎盘的3层结构开始形成,包括蜕膜区（Dec）、海绵滋养细胞层（Sp）和迷路区（Lab）;随着妊娠天数的增加,Dec区域逐渐缩小,Sp和Lab区域增大;免疫组化表明,MMP-9和TIMP-1均表达于细胞浆和细胞核中,MMP-9强表达于D9和D10胎盘的外胎盘锥中,D10～D13的Dec、Sp和D11～D13的滋养巨细胞中。MMP-9在D11的Lab,D12的Dec和Lab,D13的Dec、Sp、Lab区域中的阳性细胞的积分光密度值与D14胎盘中对应值比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;TIMP-1在D9～D12的Dec区域中的阳性细胞的积分光密度值与D14胎盘中对应值比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;MMP-9/TIMP-1在D9、D11的Dec及D12的Lab区域中的比值与D14胎盘中对应值比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,在D10、D12的Dec和D13的Lab区域中的比值与D14胎盘中对应值比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论 MMP-9和TIMP-1在孕鼠胎盘中的协同表达可能参与调节胎盘的形成。

关键词：金属蛋白酶金属蛋白酶组织抑制剂胎盘外胎盘锥

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贵州小型猪主要病原微生物与寄生虫的控制

四川动物 2009年第5期28卷 749-750页

作者：田维毅钱宁王文佳吴曙光贵阳中医学院微生物教研室贵阳550002 贵阳中医学院实验动物研究所

@@ 封闭群实验用贵州小型猪Sus scrofa domestica var. mino guizhounensis Yu是目前国内最主要的实验用小型猪种群之一(甘世祥, 1994).开展实验动物微生物与寄生虫的控制与监测,对保证实验动物和动物实验的质量和维护人类健康具有重要... 详细信息

@@ 封闭群实验用贵州小型猪Sus scrofa domestica var. mino guizhounensis Yu是目前国内最主要的实验用小型猪种群之一(甘世祥, 1994).开展实验动物微生物与寄生虫的控制与监测,对保证实验动物和动物实验的质量和维护人类健康具有重要意义(孙靖,2005).本研究探索了环境消毒、体内外驱虫、疫苗接种等措施对贵州小型猪病原生物的携带和免疫状况的影响.

关键词：贵州小型猪病原生物控制

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基于动物福利的贵州小型猪饲养管理

黑龙江畜牧兽医 2013年第2期 135-136页

作者：吴曙光詹新义王明镇王兴友钱宁贵阳中医学院实验动物研究所贵阳550002

为了在贵州小型猪日常饲养管理中保障动物福利,基于动物福利要求对贵州小型猪环境设施、饲养管理制度、疾病防疫制度、安乐死、不同生理时期的特殊管理进行研究,充分考虑和体现动物生存的五大基本要求。结果表明:已初步构建符合动物福... 详细信息

为了在贵州小型猪日常饲养管理中保障动物福利,基于动物福利要求对贵州小型猪环境设施、饲养管理制度、疾病防疫制度、安乐死、不同生理时期的特殊管理进行研究,充分考虑和体现动物生存的五大基本要求。结果表明:已初步构建符合动物福利要求的小型猪管理方法体系。

关键词：贵州小型猪动物福利饲养管理

慢性疲劳综合征小鼠的空间学习和记忆功能降低

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四川动物 2016年第6期35卷 879-883页

作者：赵海姚刚钱宁陈明飞杨智吴曙光贵阳中医学院实验动物研究所贵阳550002

目的对比分析慢性疲劳综合征小鼠与正常小鼠之间空间学习记忆功能存在的差异性。方法采用复合刺激法复制慢性疲劳综合征(CFS)小鼠模型,随后采用Morris水迷宫检测CFS小鼠与正常组小鼠之间空间学习记忆功能存在的差异。结果模型组小鼠寻... 详细信息

目的对比分析慢性疲劳综合征小鼠与正常小鼠之间空间学习记忆功能存在的差异性。方法采用复合刺激法复制慢性疲劳综合征(CFS)小鼠模型,随后采用Morris水迷宫检测CFS小鼠与正常组小鼠之间空间学习记忆功能存在的差异。结果模型组小鼠寻找隐藏平台的潜伏期、总路程、平均游泳速度及目标象限滞留时间占总时间的百分比均显著低于正常组(P<0.05),正常组小鼠寻找隐藏平台主要采用空间搜索策略,而CFS小鼠主要采用重复环绕搜索策略。结论 CFS小鼠的空间学习和记忆功能降低。

关键词： Morris水迷宫复合刺激认知功能空间学习和记忆

Caspase-3参与调节孕鼠中后期胎盘细胞凋亡的机制研究

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黑龙江畜牧兽医 2017年第8期 234-236,298页

作者：赵海陈明飞钱宁吴曙光姚刚贵阳中医学院实验动物研究所贵阳550002

为了观察孕鼠中后期胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达情况,探讨胎盘细胞凋亡的相关机制,试验首先称取孕鼠15~19 d胎盘和胚胎重量,随后采用苏木精-伊红(H.E.)染色方法观察胎盘形态学变化,免疫组化检测孕鼠中晚期胎... 详细信息

为了观察孕鼠中后期胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达情况,探讨胎盘细胞凋亡的相关机制,试验首先称取孕鼠15~19 d胎盘和胚胎重量,随后采用苏木精-伊红(H.E.)染色方法观察胎盘形态学变化,免疫组化检测孕鼠中晚期胎盘中凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-8的表达规律。结果表明:随着妊娠天数增加,胚胎重量逐渐增加,第15天、第17天胎盘重量处于水平状态,第19天时胎盘重量稍有下降。H.E.染色结果显示,随着妊娠天数的增加,成胶质细胞层的结构变得稀疏,同时失去了海绵状结构,滋养细胞数目呈现出逐渐减少的趋势。孕鼠中后期胎盘中只表达Caspase-3,不表达Caspase-8,第19天胎盘迷路区中Caspase-3阳性细胞的累积光密度(IOD)值与第15天和第17天迷路区Caspase-3阳性细胞的IOD值相比极显著增加(P<0.01)。说明Caspase家族通过Caspase-3可能参与调节孕鼠中后期胎盘细胞的凋亡过程。

关键词：胎盘 Caspase家族迷路层免疫组化凋亡

不同饲喂方式对幼龄贵州小型猪血液理化指标的影响

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黑龙江畜牧兽医 2013年第10期 63-64页

作者：王明镇吴曙光王兴友钱宁贵阳中医学院实验动物研究所贵阳550002

为了比较不同饲喂方式对幼龄贵州小型猪血液理化指标的影响,试验测定了30,60,90,120日龄贵州小型猪血液生理、生化指标。结果表明:相同日龄不同饲喂方式下幼龄贵州小型猪血液生理、生化指标差异不显著(P>0.05)。

关键词：幼龄贵州小型猪饲喂方式血液生理生化

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贵州小型猪生长曲线拟合分析

黑龙江畜牧兽医 2017年第11期 114-117页

作者：陈明飞赵海姚刚吴曙光贵阳中医学院实验动物研究所贵阳550002

为了研究贵州小型猪生长发育规律,指导贵州小型猪的生产和管理,试验测定了0~8月龄不同性别贵州小型猪的体重,并运用Gompertz、Logistic、Von Bertalanffy三种生长模型拟合其生长曲线。结果表明:三种模型均能较好地拟合贵州小型猪体重的... 详细信息

为了研究贵州小型猪生长发育规律,指导贵州小型猪的生产和管理,试验测定了0~8月龄不同性别贵州小型猪的体重,并运用Gompertz、Logistic、Von Bertalanffy三种生长模型拟合其生长曲线。结果表明:三种模型均能较好地拟合贵州小型猪体重的生长曲线,复相关指数(R^2)均高于0.99,结合残差平方和(E)和卡方(χ~2)适合性检验,Von Bertalanffy模型拟合精度更高,公、母猪的拟合方程分别为y=32.149(1-0.718e^(-0.161t))~3和y=42.568(1-0.736e^(-0.144t))~3。与母猪相比,公猪有较低的初始体重、极限体重、月增重和拐点体重。公猪拐点月龄为4.77月,母猪的拐点月龄为5.39月。

关键词：贵州小型猪生长曲线体重拟合模型 x^2适合性检验拟合精度

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封闭群贵州小型猪血液生理指标年龄变化观察

黑龙江畜牧兽医 2013年第9期 44-45页

作者：王明镇钱宁王兴友詹新义吴曙光贵阳中医学院实验动物研究所贵阳550002

为了观察贵州小型猪封闭群血液生理指标的年龄变化,试验检测了5个年龄段52头贵州小型猪血液生理指标,并对相关指标进行测定。结果表明:在不同年龄段贵州小型猪封闭群多个血液生理指标存在显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01)。

关键词：贵州小型猪封闭群血液生理年龄变化