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北京市西部山区犬利什曼原虫病的诊断和分析

中国兽医杂志 2024年第6期60卷 54-58页

作者：杜鹃张玮吴迪于海浪杨璐苗东影李刚陈会玲李蕊赵浩军北京市动物疫病预防控制中心北京大兴100026 北京市门头沟区动物疫病预防控制中心北京门头沟102308

本试验对在北京市西部山区调查发现的1例犬利什曼原虫病临床疑似病例开展了诊断和分析,采用血液检查、淋巴穿刺液显微镜检查、血清胶体金抗体检测、皮屑样品荧光定量PCR检测以及核糖体DNA转录间隔区I(ITS-1)基因扩增和测序分析对病例开... 详细信息

本试验对在北京市西部山区调查发现的1例犬利什曼原虫病临床疑似病例开展了诊断和分析,采用血液检查、淋巴穿刺液显微镜检查、血清胶体金抗体检测、皮屑样品荧光定量PCR检测以及核糖体DNA转录间隔区I(ITS-1)基因扩增和测序分析对病例开展全面诊断。结果显示,该病例红细胞数、血红蛋白、红细胞压积、淋巴细胞百分比、白蛋白、碱性磷酸酶低于参考范围,球蛋白、钙离子、肌酸激酶高于参考范围,呈现寄生虫感染的典型特征;显微镜下可以观察到明显利什曼原虫虫体;胶体金抗体检测和荧光定量PCR检测结果均为阳性;基因序列分析结果显示本病例ITS-1基因与以色列婴儿利什曼原虫KM677134.1聚为一支。结合地理来源,表明该地区流行株为山丘型婴儿利什曼原虫。

关键词：利什曼原虫诊断分析

鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 165-173页

作者：赵雪丽闫若潜王华俊王淑娟马震原谢彩华柴茂杨海波王翠刘影王东方河南省动物疫病预防控制中心、河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室郑州450008

建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性... 详细信息

建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。

关键词：猪圆环病毒2型 rep基因猪圆环病毒3型 cap基因双重TaqMan MGB FQ-PCR

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县级兽医实验室防疫能力提升建设

现代畜牧科技 2024年第3期 136-139页

作者：张雷李照伟李涛柯西洋刘霞张爱琼贵州省毕节市七星关区动物疫病预防控制中心贵州毕节551700 贵州省动物疫病预防控制中心贵州贵阳550008 贵州省毕节市动物疫病预防控制中心贵州毕节551700

兽医实验室作为动物疫病防控体系中的核心技术环节,在动物疫情风险评估、疫病监测诊断、预警预报等方面发挥至关重要的作用。随着规模化养殖企业的增多,养殖人员对动物疫病防控技术的需求越来越高,迫切需要全方位的疫病诊断检测服务。此... 详细信息

兽医实验室作为动物疫病防控体系中的核心技术环节,在动物疫情风险评估、疫病监测诊断、预警预报等方面发挥至关重要的作用。随着规模化养殖企业的增多,养殖人员对动物疫病防控技术的需求越来越高,迫切需要全方位的疫病诊断检测服务。此外,养殖从业者的生产经营理念发生根本转变,“防重于治”的疫病防控观念已为广大养殖工作者所接受。因此,加强兽医实验室防疫能力提升建设十分必要。

关键词：兽医实验室布局优化能力提升

非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 118-130页

作者：刘影闫若潜王东方杨海波赵美雪宋丹赵雪丽谢彩华王淑娟马震原柴茂王翠刘梅芬河南省动物疫病预防控制中心河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室郑州450008

建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应... 详细信息

建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应程序等反应条件,建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和重复性,对130份临床样品进行检测,并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10^(-1)~10^(5) copies/μL模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增,但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.53%~3.14%,重复性良好;对ASFV和HP-PRRSV的最低检测模板浓度均为10 copies/μL;利用建立的二重FQ-PCR方法对130份临床样品进行检测,检测结果与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和HPPRRSV二重FQ-PCR检测方法,为ASFV和HP-PRRSV的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。

关键词：非洲猪瘟病毒高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重FQ-PCR

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一株牛呼吸道冠状病毒的分离鉴定及部分生物学特征

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畜牧兽医学报 2024年第7期 3094-3104页

作者：班玛王清陈曦岳怡苏玉蓉岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院四川省阿坝州动物疫病预防控制中心

牛冠状病毒（bovine coronavirus, BCoV）是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒（BRCV）并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子，经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样... 详细信息

牛冠状病毒（bovine coronavirus, BCoV）是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒（BRCV）并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子，经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种人盲肠腺癌细胞（HCT-8）,分离纯化后，对引起细胞病变的病毒分离株的S和HE基因进行序列测定和系统发育分析，并将病毒分离株接种BALB/c小鼠进行致病性研究。结果显示，成功分离到1株致细胞病变的毒株，经荧光定量PCR、间接免疫荧光和电镜观察鉴定为BRCV,蚀斑纯化后计算病毒TCID50为10-8.46·0.1 mL-1。S基因和HE基因序列分析表明两种基因均发生重组事件；S蛋白具有2个独特的氨基酸突变（A33G和A975V）,分别位于S1亚基的受体结合域和S2亚基；HE基因具有2个独特的氨基酸突变（L235R和L365F）,分别位于凝集素域和近膜端域。分离株对4周龄BALB/c小鼠具有较强的致病性，能够引起小鼠呼吸加快和腹泻等临床症状，剖检和组织病理学显示肺和肠道出血，病毒主要分布在肺和肠组织，以肺组织中病毒载量最高。本研究首次在国内肉牛中分离到1株BRCV,S和HE基因分子有独特氨基酸突变，成功建立了小鼠感染模型，为进一步研究BCoV的生物学特性和遗传进化提供了参考。

关键词：牛呼吸道冠状病毒 S基因 HE基因小鼠致病性

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新版人畜共患传染病名录病种检测技术浅析

浙江畜牧兽医 2024年第1期49卷 12-17页

作者：吕伟军沈红霞池丽娟杨磊孙思琪周炜浙江省动物疫病预防控制中心浙江杭州311119 中国动物疫病预防控制中心

习近平总书记在中共中央政治局第三十三次集体学习时强调“要实行积极防御、主动治理,坚持人病兽防、关口前移,从源头前端阻断人兽共患病的传播路径”。目前,有记载的人兽共患病有200余种,有些病种尚无有效检测标准,有些病种检测方法林... 详细信息

习近平总书记在中共中央政治局第三十三次集体学习时强调“要实行积极防御、主动治理,坚持人病兽防、关口前移,从源头前端阻断人兽共患病的传播路径”。目前,有记载的人兽共患病有200余种,有些病种尚无有效检测标准,有些病种检测方法林林总总,有些病种已有检测用试剂盒但尚未标准化或尚未在较大范围内试用、验证。如何切实有效开展针对性防控、严守生物安全底线,是每一个畜牧兽医工作者需要面对的问题。

关键词：人兽共患病人畜共患传染病传播路径关口前移积极防御安全底线集体学习主动治理

猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 413-418页

作者：周建浩王东方刘影王淑娟马震原谢彩华赵雪丽杨海波冯桂丹康台生胡煜锋李博文闫若潜河南农业大学动物医学院郑州450046 河南省动物疫病预防控制中心/河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室郑州450008 河南科技大学动物科技学院洛阳471000 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异... 详细信息

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR 方法建立

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基于鸭疫里氏杆菌qac基因的检测与分析

养禽与禽病防治 2024年第6期 21-24页

作者：包涛涛慕江静杨先富吴通奎彭彩丽袁俊贵州省黔东南州动物疫病预防控制中心贵州凯里556000 贵州省凯里市万潮镇农业综合服务中心贵州凯里556000

为掌握qac基因在RA中携带情况,科学地为临床实践提供数据支持。以前期分离的7株鸭疫里默氏杆菌(RA)为研究对象,通过设计qacA/B、qacC、qacG、qacJ、qacE、qacE△1、qacF以及qacE1-sul1等qac基因扩增引物开展PCR检测。结果显示,检出qacE... 详细信息

为掌握qac基因在RA中携带情况,科学地为临床实践提供数据支持。以前期分离的7株鸭疫里默氏杆菌(RA)为研究对象,通过设计qacA/B、qacC、qacG、qacJ、qacE、qacE△1、qacF以及qacE1-sul1等qac基因扩增引物开展PCR检测。结果显示,检出qacE与qacE△1阳性,qacE阳性检出率为57.14%(4/7),qacE△1阳性检出率为42.86%(3/7),同时携带qacE与qacE△1菌株检出率为28.57%(2/7)。结果表明,qacE与qacE△1基因均能从RA中检测出,且存在RA菌株同时携带qacE与qacE△1。本研究旨在为临床RA的消毒剂抗性研究提供一定数据参考。

关键词：鸭疫里默氏杆菌季铵盐类耐药检测

2020-2022年华中地区部分猪场猪圆环病毒3型的分子流行特征与遗传变异分析

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中国农业科学 2024年第3期57卷 613-626页

作者：李博天李春琪刘国平谢军曾攀赵润泽李桐裴洁郭利伟伍锐谭磊长江大学动物科学技术学院湖北省动物疫病预防控制中心四川农业大学动物医学院

【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点，为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3 500份临床采集样品进行real-ti... 详细信息

【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点，为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3 500份临床采集样品进行real-time PCR检测，分析不同猪群、不同组织器官、不同排毒量和对应流行病学症状特点关系。对部分阳性样本PCV3全基因组进行扩增、测序和分析。【结果】50.86%(1 780/3 500)被检样本为PCV3核酸阳性，不同发育阶段猪群PCV3均易感，保育猪、哺乳仔猪、生长育肥猪PCV3阳性率较高，分别为70.44%(498/707)、67.19%(596/887)、41.75%(177/424)。在不同组织器官和样品中，淋巴结、肺脏、产后胎盘样本PCV3阳性率为67.05%(59/88)、63.79%(74/116)、49.11%(55/112)，血液、初乳样本PCV3阳性率分别为56.09%(502/895)、44.20%(278/629)，且鼻拭子和唾液中均检出PCV3。出现猪繁殖障碍症状、厌食症状和呼吸障碍症状的猪群PCV3阳性率高，分别为44.43%(399/898)、36.43%(431/1183)、28.04%(233/831)。24条PCV3全基因组序列长度均为2000 nt，其全基因核苷酸序列同源性为98.4%—100%，与参考株PCV3全基因组的同源性为97.4%—99.5%。遗传进化分析结果显示，23株PCV3属于PCV3b亚型，1株属于PCV3a亚型。Rep氨基酸序列比对结果发现，PCV3-L2、L23和L14株分别在(N124I)、(A183E)和(V244I)出现独特变异位点；Cap蛋白氨基酸序列比对结果发现，PCV3-L15、L21、L3和L19株分别在(T45P)、(R2K)、(R14K)和(F7L)出现独特变异位点。【结论】PCV3可感染不同发育阶段猪群，且分布于不同组织器官中；PCV3可通过垂直传播(如初乳和精液)和水平传播(如口鼻分泌物和唾液)感染猪群；PCV3感染可能与生猪繁殖障碍、呼吸障碍和多器官炎症和关节炎症密切相关。此外，被调查地区规模化猪场同时流行PCV3a和PCV3b两种亚型，其中PCV3b亚型为优势毒株。研究通过全基因组氨基酸序列分析发现部分独特变异位点位于Cap蛋白，这可能导致Cap蛋白赋予的免疫原性发生变化。对PCV3全基因序列的遗传进化做出详细阐述，为未来的PCV3疫苗研究奠定基础。

关键词：猪圆环病毒3型病毒载量全基因组扩增遗传进化分析