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SD大鼠乳鼠原代皮质神经元和小胶质细胞同时提取并培养的实验方法

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中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1395-1400页

作者：何龙才宋文学明江陈光唐王军浩廖益东崔君拴徐卡娅贵州医科大学贵州省贵阳市550004 贵阳市第一人民医院贵州省贵阳市550002 贵州医科大学附属医院神经外科贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院高压氧科贵州省贵阳市550004

背景:原代皮质神经元和小胶质细胞在探索神经系统疾病细胞疗法中起着至关重要的作用,而目前获得2种细胞的方法大多较繁琐,需分别单独提取。因此找到一种便捷、快速可同时提取2种细胞的方法十分关键。目的:探索一种新型同时提取原代皮质... 详细信息

背景:原代皮质神经元和小胶质细胞在探索神经系统疾病细胞疗法中起着至关重要的作用,而目前获得2种细胞的方法大多较繁琐,需分别单独提取。因此找到一种便捷、快速可同时提取2种细胞的方法十分关键。目的:探索一种新型同时提取原代皮质神经元及小胶质细胞的方法。方法:取24 h内新生SD大鼠乳鼠,将大脑取出放入装有DMEM的培养皿中,去除软脑膜后备用。同一脑组织,先提取原代神经元,再将剩余脑组织用于提取小胶质细胞,整个过程在冰上操作。原代皮质神经元提取培养步骤:镊子夹取2.0-3.0 mm厚度大脑皮质组织置于培养皿,用木瓜蛋白酶消化20 min,中止消化后吹打组织呈互相粘连的组织悬液,吸上清细胞悬液,过滤、分装到15 mL离心管中,离心并重悬后将细胞接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板爬片上放入细胞培养箱,每隔1 d观察神经元形态,第7天进行MAP2和β-Tubulin免疫荧光染色鉴定。小胶质细胞提取培养步骤:夹取上一步取皮质后剩余脑组织,厚度8-10 mm,置于培养皿,用胰酶消化20 min,中止消化后吹打组织呈匀浆,然后将匀浆转移到培养瓶中培养,第14天将培养瓶封口后进行恒温水平摇床振荡2 h,小胶质细胞脱落于上清中;取纯化后的小胶质细胞继续培养3 d进行Iba1免疫荧光染色鉴定。结果与结论:(1)神经元培养24 h后贴壁、胞体变大,部分神经元长出突触;培养到第3,5天时胞体进一步增大,大部分神经元已呈突触形态,部分神经元成团生长;第7天时,神经元突触延长增粗并互相连接成网。经β-Tubulin、MAP2免疫荧光染色鉴定为神经元。(2)小胶质细胞培养第1天换液后可见细胞贴壁生长;第3,5,7天时细胞密度均较小,细胞形态呈高亮椭圆或圆形,但已基本成团块状生长于其他细胞上层;第10天时小胶质细胞密度明显增大;第14天时小胶质细胞呈致密团块状生长于其他细胞上层,此时可进行分离纯化。取分离纯化后细胞再培养至第3天,经Iba1免疫荧光鉴定为小胶质细胞,且纯度大于95%。(3)结果表明,经此法提取并培养获得的原代皮质神经元和小胶质细胞纯度高、形态好、成活率高。

关键词：原代皮质神经元小胶质细胞 SD大鼠细胞提取细胞培养

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铜元素影响糖尿病并发症的发生与发展

中国组织工程研究 2025年第17期29卷 3641-3649页

作者：罗云彩孟茂花李英王欢陆婧舒佳玉李文杰孙金熠董强贵州医科大学口腔医学院贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属口腔医院修复种植科贵州省贵阳市550004

背景:铜作为一种机体生长与发展所必需的微量元素,参与机体氧化还原、能量生成、信号转导及骨代谢等许多过程。在糖尿病患者体内铜稳态的失衡会导致氧化应激的升高和抗氧化机制受损,刺激炎症递质和炎症因子的生成,从而导致细胞毒性及机... 详细信息

背景:铜作为一种机体生长与发展所必需的微量元素,参与机体氧化还原、能量生成、信号转导及骨代谢等许多过程。在糖尿病患者体内铜稳态的失衡会导致氧化应激的升高和抗氧化机制受损,刺激炎症递质和炎症因子的生成,从而导致细胞毒性及机体受损。近年来,铜在糖尿病中发挥的作用备受关注,也有研究证实铜在糖尿病的病理进程中起着关键的调节作用。目的:概述当前铜元素在糖尿病系统性并发症中作用的研究进展,为其今后的研究和治疗提供参考依据。方法:由第一作者在PubMed、Web of Science、中国知网和万方数据库中检索建库至2024年5月有关铜元素在糖尿病系统性并发症中作用的文献,中文检索词为“铜,糖尿病,糖尿病并发症,糖尿病心肌病,糖尿病肾病,糖尿病视网膜病,糖尿病性骨质疏松,糖尿病牙周炎”;英文检索词为“copper,Cu,diabetes,diabetic complications,diabetic cardiomyopathy,diabetic nephropathy,diabetic retinopathy,diabetic osteoporosis,diabetic periodontitis”。筛选后纳入95篇文献进行综述。结果与结论:①铜元素参与糖尿病并发症的发生发展过程,铜元素对机体的损伤多为干扰机体氧化还原水平而导致;②在糖尿病心肌病中,体循环中Cu2+增加而心肌细胞对铜离子摄取障碍,具有氧化还原活性的Cu2+以及铜蓝蛋白在心肌细胞外的积累诱导心肌细胞铜氧化应激,导致急性心功能损害;③在糖尿病肾病中,过量铜元素的毒性作用可导致肾小管上皮细胞的颗粒状变性和空泡变性,近端小管坏死,最终导致慢性或急性肾功能衰竭;④糖尿病患者体内过量的铜可以产生活性氧,直接或间接影响具有抗氧化功能的铜蛋白功能,从而损伤视网膜细胞;⑤在糖尿病性骨质疏松患者中,体内蓄积的铜元素诱导脂质过氧化,干扰骨代谢,铜主要通过抑制超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和碱性磷酸酶活性来影响成骨细胞的作用;⑥过量铜元素会促进炎症反应来加重牙周组织炎症变化。

关键词： 2型糖尿病糖尿病并发症铜元素糖尿病心肌病糖尿病肾病糖尿病性视网膜病变糖尿病性骨质疏松糖尿病牙周炎

围产期间充质干细胞及联合水凝胶治疗宫腔粘连的作用和机制

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中国组织工程研究 2025年第31期29卷 6792-6799页

作者：钟敏王成范振海李林艳余丽梅遵义医科大学附属医院妇产科(产前诊断中心) 贵州省遵义市563003 遵义医科大学附属医院贵州省生物制造实验室贵州省遵义市563003 遵义医科大学附属医院贵州省细胞工程中心贵州省遵义市563003 遵义医科大学教育部省部共建组织损伤修复与再生医学协同创新中心贵州省遵义市563003

背景:中、重度宫腔粘连的临床治疗效果差,粘连分离术后复发率高,严重影响育龄期女性的生殖健康,是临床亟需解决的难题。围产期间充质干细胞及其联合水凝胶的应用具有独特的优势,它们在宫腔粘连方面的治疗作用尤其受到关注。目的:总结围... 详细信息

背景:中、重度宫腔粘连的临床治疗效果差,粘连分离术后复发率高,严重影响育龄期女性的生殖健康,是临床亟需解决的难题。围产期间充质干细胞及其联合水凝胶的应用具有独特的优势,它们在宫腔粘连方面的治疗作用尤其受到关注。目的:总结围产期间充质干细胞及其联合水凝胶治疗宫腔粘连的研究进展。方法:以“间充质干细胞,围产期,水凝胶,宫腔粘连,子宫内膜损伤”为中文检索词,以“mesenchymal stem cells,perinatal period,hydrogel,intrauterine adhesions,endometrium injury”为英文检索词,检索2010-2024年发表的相关文献,检索数据库包括PubMed、中国知网及万方数据库,对80篇符合入组标准的文献进行综述分析。结果与结论:①与其他来源间充质干细胞相似,围产期间充质干细胞对宫腔粘连具有良好治疗作用,可满足自体或异体移植。②移植的细胞来源于脐带、羊膜、胎盘和脐血,这些围产期间充质干细胞移植治疗宫腔粘连的作用和机制涉及定植分化、细胞免疫、旁分泌作用,及促进内膜再生与血管新生、抗内膜细胞凋亡、抑制上皮间质化、抗纤维化及调节相关信号通路。③围产期间充质干细胞联合水凝胶在宫腔粘连的治疗中具有协同效应,在间充质干细胞效应基础上,水凝胶还发挥了支撑及维持间充质干细胞持续释放、促进细胞迁移、黏附等作用,有助于更好地促进子宫内膜再生和抗纤维化,有利于修复受损的子宫内膜,提高子宫内膜容受性和生育力,降低复发率。④已有少量临床试验初步验证了脐带间充质干细胞、水凝胶治疗宫腔粘连的有效性和安全性,尚需深入研究围产期间充质干细胞与水凝胶等高分子生物材料的相互作用,及其联合应用治疗宫腔粘连的其他作用和分子机制。

关键词：干细胞间充质干细胞围产期水凝胶宫腔粘连薄型子宫内膜纤维化工程化干细胞

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基于生物信息学对骨关节炎铁超载关键基因的筛选与验证

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中国组织工程研究 2025年第9期29卷 1972-1980页

作者：邓柯淇李光第 GOSWAMI ASHUTOSH 刘星余何孝勇贵州医科大学贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院骨外科贵州省贵阳市550004

背景:铁超载是指体内铁积累过多的情况,可引起各种组织的病理改变。目前,对于骨关节炎中铁超载相关的分子机制和潜在基因靶点,仍有待进一步的研究和探索。目的:通过生物信息学手段分析骨关节炎铁超载关键基因,并利用动物实验加以验证,... 详细信息

背景:铁超载是指体内铁积累过多的情况,可引起各种组织的病理改变。目前,对于骨关节炎中铁超载相关的分子机制和潜在基因靶点,仍有待进一步的研究和探索。目的:通过生物信息学手段分析骨关节炎铁超载关键基因,并利用动物实验加以验证,以期为铁超载角度防治骨关节炎提供新的思路。方法:使用GEO数据库和GeneCards数据库筛选出与骨关节炎相关的基因和铁超载相关的基因。然后,取两者的交集,得到骨关节炎和铁超载共同相关的基因集合。采用GO和KEGG富集分析筛选这些基因的功能和通路。为了进一步研究这些基因之间的相互作用,构建PPI网络,并利用Cytoscape软件的5种计算方法来识别骨关节炎铁超载的关键基因(Hub基因)。将12只雄性SD大鼠分为骨关节炎组与对照组(正常大鼠),每组6只,骨关节炎组大鼠采用改良Hulth方法建立膝骨关节炎模型,并使用PCR检测Hub基因在两组大鼠膝关节组织中的表达情况。结果与结论:①共获得51个骨关节炎铁超载基因,GO富集分析表明其主要参与细胞因子受体结合、趋化因子受体结合、细胞因子活性、生长因子受体结合及寡糖结合等过程;②KEGG富集分析表明骨关节炎铁超载基因主要参与肿瘤坏死因子信号通路、脂质和动脉粥样硬化等信号通路;③构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,进一步分析获得细胞间黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、肿瘤坏死因子配体超家族成员11(tumor necrosis factor superfamily member 11,TNFSF11)、骨髓瘤细胞癌基因(myelocytomatosis oncogene,MYC)、Janus激酶2(janus kinase 2,JAK2)及白细胞介素6,5个骨关节炎铁超载Hub基因,动物实验证实其在对照组与骨关节炎组大鼠膝关节组织中的表达有显著差异(P<0.05);④结果显示,ICAM-1,TNFSF11,MYC,JAK2及白细胞介素6可作为骨关节炎铁超载的关键基因,有望成为防治骨关节炎的新靶点。

关键词：骨关节炎铁超载关键基因差异基因生物信息学动物实验实验验证生物标志物

生物可吸收板与微型钛板在不同骨质下颌骨骨折固定中的有限元分析

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 818-826页

作者：周宗昊罗思阳陈佳文陈光能冯红超贵州医科大学口腔医学院贵州省贵阳市550004 贵阳市口腔医院贵州省贵阳市550000

背景:下颌骨骨折在坚强内固定后的愈合受多种因素影响,包括接骨板的材料、骨折部位以及患者骨密度等,然而,目前对于不同骨质下下颌骨骨折固定稳定性关系的研究相对较少,并且缺乏科学的依据。目的:利用有限元法分析生物可吸收板和微型钛... 详细信息

背景:下颌骨骨折在坚强内固定后的愈合受多种因素影响,包括接骨板的材料、骨折部位以及患者骨密度等,然而,目前对于不同骨质下下颌骨骨折固定稳定性关系的研究相对较少,并且缺乏科学的依据。目的:利用有限元法分析生物可吸收板和微型钛板固定不同骨质条件下颌骨骨折的稳定性。方法:根据ZARB和LEKHOLM提出的骨质分类方法,分别建立Ⅰ-Ⅳ类下颌骨骨折三维有限元模型,每类骨质条件下分别模拟下颌骨正中、体部和下颌角3个部位的骨折模型,采用生物可吸收板(或微型钛板)对上述骨折进行内固定,模拟健侧咬合状态,利用有限元分析骨折段的相对位移与内固定物应力分布情况。结果与结论:①随着骨质等级的增加,内固定物的最大应力值基本呈逐渐增加趋势,微型钛板组、生物可吸收板组下颌体部Ⅳ类骨质下的内固定物最大应力值最高,分别为382.74,96.11 MPa;在相同骨质条件下,钛板组各部位骨折模型的内固定物最大应力值均高于生物可吸收板组。②对于Ⅲ和Ⅳ类下颌骨正中部骨折,微型钛板组、可吸收板固定组骨折断端位移较大,超过了骨愈合极限值(大于150μm);对于Ⅳ类骨质下颌骨体部骨折,生物可吸收板组骨折断端位移超过了愈合极限值,微型钛板组骨折断端位移接近愈合极限值;在相同骨质条件与骨折部位下,微型钛板组骨折断端位移要小于生物可吸收板组。③结果显示,两种内固定物的强度和刚度均足以支持Ⅰ-Ⅳ类骨质下颌骨3种部位骨折的骨愈合,并且生物可吸收板的固定稳定性与微型钛板几乎相同,可以提供骨折早期的愈合条件。在治疗下颌骨骨折时应将下颌骨骨质类型纳入考虑因素,下颌骨骨质等级越高,骨折固定的稳定性越差,术后更易发生骨愈合不良等并发症。

关键词：生物可吸收板微型钛板三维有限元分析下颌骨骨折固定方法骨质

工作嵌入和工作满意度对临床护士组织沉默与心理资本的链式中介效应

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中国心理卫生杂志 2025年第1期39卷 94-99页

作者：亓金风张雨邹智张文令许丽丽李温霞单单单河南省人民医院麻醉与围术期医学科(放射科) 河南省护理重点实验室郑州大学人民医院河南大学人民医院郑州450003 河南省胸科医院郑州450003

目的:探讨临床护士工作嵌入和工作满意度在心理资本与组织沉默间的链式中介效应。方法:选取412名临床护士(男145人,女267人),采用护士组织沉默测评问卷(NOSAQ)、心理资本量表(PCQ-24)、工作嵌入量表(JES)、护士工作满意度评定量表(NJSS... 详细信息

目的:探讨临床护士工作嵌入和工作满意度在心理资本与组织沉默间的链式中介效应。方法:选取412名临床护士(男145人,女267人),采用护士组织沉默测评问卷(NOSAQ)、心理资本量表(PCQ-24)、工作嵌入量表(JES)、护士工作满意度评定量表(NJSS)进行测量。采用SPSS宏程序PROCESS及Bootstrap法探讨中介作用。结果:NOSAQ得分与PCQ-24、JES和NJSS得分均呈负相关(r=-0.55、-0.59、-0.51,均P<0.01);工作嵌入和工作满意度在心理资本与组织沉默间起链式中介作用(95%CI:-0.26~-0.04),中介效应占总效应的14.7%。结论:临床护士的组织沉默与心理资本、工作嵌入和工作满意度的关系密切。

关键词：组织沉默心理资本工作嵌入工作满意度护士

血小板衍生生长因子BB参与生长板损伤修复的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1497-1503页

作者：彭洪成彭国璇雷安毅林圆孙红宁旭尚显文邓进黄明智贵州医科大学附属医院骨科贵州省贵阳市550004 贵州医科大学临床医学院贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院急诊医学科贵州省贵阳市550004

背景:在生长板损伤炎症初期,血小板衍生生长因子BB通过促进间充质祖细胞浸润、软骨形成、成骨反应以及调控骨重塑来促进生长板损伤的修复。目的:总结血小板衍生生长因子BB在生长板损伤修复中的作用机制。方法:检索PubMed、维普、万方数... 详细信息

背景:在生长板损伤炎症初期,血小板衍生生长因子BB通过促进间充质祖细胞浸润、软骨形成、成骨反应以及调控骨重塑来促进生长板损伤的修复。目的:总结血小板衍生生长因子BB在生长板损伤修复中的作用机制。方法:检索PubMed、维普、万方数据和中国知网数据库,中文检索词为“生长板损伤,骨桥形成,血小板衍生因子BB,修复”,英文检索词为“growth plate injury,bone bridge,PDGF-BB,repair”,最终筛选66篇文章进行综述。结果与结论:生长板损伤经历早期炎症、血管重建、纤维骨化、结构重塑等病理进程,伴随着软骨细胞、血管内皮细胞、干细胞、成骨细胞、破骨细胞多种细胞交叉对话。血小板衍生生长因子BB作为损伤早期炎症反应的重要因子通过介导多种细胞炎症反应调控损伤修复过程,靶向血小板衍生生长因子BB介导的炎症刺激可能通过改善破骨细胞、成骨细胞、软骨细胞功能活性延缓生长板损伤骨桥形成进程,实现生长板损伤修复。血小板衍生生长因子BB对生长板损伤部位的血管生成和骨修复组织形成以及未损伤生长板的软骨内骨延长功能具有重要作用,抑制血小板衍生生长因子BB启动的血管形成与软骨内成骨之间的偶联效应将有可能实现生长板损伤修复。

关键词：生长板损伤骨桥血小板衍生生长因子BB 软骨再生综述

牙周膜干细胞外泌体对炎症环境来源牙周膜干细胞生物学特性的影响

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2744-2752页

作者：蒋志梁罗雅馨胡峥祺杨丽杨婵婵陈虹刘小艺黄艳杨琨遵义医科大学附属口腔医院贵州省遵义市563006 遵义医科大学附属口腔医院牙周科贵州省遵义市563006 遵义医科大学贵州省遵义市563006

背景:近年来牙周膜干细胞外泌体在牙周组织再生工程中的应用得到了广泛研究,但其对于炎症环境来源牙周膜干细胞的影响尚不清楚。目的:探讨健康和炎症环境来源牙周膜干细胞所分泌的外泌体对炎症环境来源牙周膜干细胞增殖及分化能力的影... 详细信息

背景:近年来牙周膜干细胞外泌体在牙周组织再生工程中的应用得到了广泛研究,但其对于炎症环境来源牙周膜干细胞的影响尚不清楚。目的:探讨健康和炎症环境来源牙周膜干细胞所分泌的外泌体对炎症环境来源牙周膜干细胞增殖及分化能力的影响。方法:采用酶消化法分离培养健康牙周组织与牙周炎组织来源的人牙周膜干细胞,采用超速离心法提取两种来源人牙周膜干细胞的外泌体。选取生长状态良好的第3代炎症组织来源牙周膜干细胞,分3组培养:空白组常规培养,健康外泌体组加入健康组织来源外周膜干细胞分泌的外泌体,炎症外泌体组加入炎症组织来源人牙周膜干细胞分泌的外泌体,检测细胞增殖与克隆形成;在成骨诱导分化条件下,检测细胞碱性磷酸酶表达与矿化结节形成、成骨相关基因mRNA与蛋白的表达。结果与结论:①CCK-8检测与克隆形成实验显示,与空白组相比,两种来源外泌体均可促进炎症组织来源牙周膜干细胞的增殖与细胞集落形成(P<0.05),并且健康外泌体组的作用强于炎症外泌体组(P<0.05);②碱性磷酸酶与茜素红染色显示,与空白组相比,两种来源外泌体均可促进炎症组织来源牙周膜干细胞碱性磷酸酶的表达与矿化结节形成,并且健康外泌体组的促进作用强于炎症外泌体组;RT-PCR与Western Blot检测显示,与空白组相比,两种来源外泌体均可促进炎症组织来源牙周膜干细胞碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原mRNA与蛋白的表达(P<0.05),并且健康外泌体组的促进作用强于炎症外泌体组(P<0.05);③结果表明,人牙周膜干细胞分泌的外泌体能够促进炎症环境来源牙周膜干细胞的增殖及成骨分化能力,并且健康组织来源人牙周膜干细胞分泌外泌体的促进作用优于炎症组织来源人牙周膜干细胞分泌的外泌体。

关键词：牙周炎干细胞牙周膜干细胞外泌体细胞增殖成骨分化组织工程

间充质干细胞治疗再生障碍性贫血:抑制或激活其病理演变过程中的相关靶点

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中国组织工程研究 2025年第31期29卷 6800-6810页

作者：张溥链刘宝茹杨敏遵义医科大学附属医院血液内科贵州省遵义市563000

背景:目前再生障碍性贫血的主要治疗方法是进行造血干细胞移植和免疫抑制治疗。然而,治疗后的并发症和不良反应严重影响了再生障碍性贫血患者的预后和生活质量。间充质干细胞有着独特的低免疫原性,可抑制T淋巴细胞、B淋巴细胞、树突细... 详细信息

背景:目前再生障碍性贫血的主要治疗方法是进行造血干细胞移植和免疫抑制治疗。然而,治疗后的并发症和不良反应严重影响了再生障碍性贫血患者的预后和生活质量。间充质干细胞有着独特的低免疫原性,可抑制T淋巴细胞、B淋巴细胞、树突细胞、自然杀伤细胞的增殖与活化,调节机体免疫,为再生障碍性贫血和移植物抗宿主病带来了良好的细胞治疗前景。目的:综述近几年间充质干细胞在再生障碍性贫血中的应用进展,以及间充质干细胞与再生障碍性贫血发病机制之间的相关性,为再生障碍性贫血患者提供新的治疗理论基础和更有效的治疗方案。方法:检索2003年1月至2024年2月中国知网和PubMed数据库,中文检索词为“再生障碍性贫血,间充质干细胞,造血干细胞,造血,造血微环境,造血干细胞移植,生物学,免疫,移植物抗宿主病”;英文检索词为“aplastic anemia,mesenchymal stem cell,hematopoietic stem cell,hematopoiesis,hematopoietic microenvironment,hematopoietic stem cell transplantation,biology,immuno-modulatory,immune regulation,graft-versus-host disease,chronic graft-versus-host disease,acute graft-versus-host disease”。排除低质量、重复、内容陈旧的文献,最终纳入88篇文献进行综述分析。结果与结论:①间充质干细胞作为一种多能干细胞,可通过细胞间直接接触、分泌多种造血相关因子、参与造血相关通路来重塑造血功能;②与间充质干细胞联合免疫抑制剂输注、单纯间充质干细胞输注相比,间充质干细胞联合造血干细胞移植治疗再生障碍性贫血患者更能发挥两种干细胞的疗效,显著降低慢性和Ⅲ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病的发生率,提高患者的总生存期;③使用脐带来源和传代次数<6次的间充质干细胞,并且在造血干细胞移植前输注的方案可能是更有效的治疗选择;④间充质干细胞与再生障碍性贫血发病机制之间存在密切联系,通过抑制或激活再生障碍性贫血病理演变过程中相关的靶点,可能为再生障碍性贫血带来新的治疗方案。

关键词：再生障碍性贫血间充质干细胞造血干细胞移植细胞治疗造血微环境移植物抗宿主病发病机制综述

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