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ERBB4、NRG1基因真核表达载体构建及其在番鸭神经细胞中的表达

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农业生物技术学报 2021年第5期29卷 952-962页

作者：罗林丽杨胜林周璇张芸杨世皓祝永才贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州省畜禽遗传资源管理站

酪氨酸激酶受体4 (receptor tyrosine protein kinase 4, ERBB4)、神经调节蛋白1 (neuregulin 1,NRG1)基因在神经系统中都发挥着重要作用,且ERBB4基因在攻击行为番鸭(Cairna moschata)脑组织中的表达量较高。为进一步探索ERBB4、NRG1基... 详细信息

酪氨酸激酶受体4 (receptor tyrosine protein kinase 4, ERBB4)、神经调节蛋白1 (neuregulin 1,NRG1)基因在神经系统中都发挥着重要作用,且ERBB4基因在攻击行为番鸭(Cairna moschata)脑组织中的表达量较高。为进一步探索ERBB4、NRG1基因在番鸭神经细胞中的表达情况,构建p EGFP-C1-ERBB4和pDsRED-C1-NRG1真核表达载体,将其转染番鸭神经细胞,运用qRT-PCR技术检测ERBB4、NRG1基因表达量和NRG1-ERBB4信号通路的下游基因衔接蛋白基因(Src homolog and collagen homolog, Shc)、生长因子受体结合蛋白2基因(growth factor receptor bound protein 2, Grb2)的表达情况。结果显示,转染pEGFP-C1-ERBB4、p DsRED-C1-NRG1细胞中ERBB4、NRG1表达极显著高于转染pEGFP-C1、p DsRED-C1空载体细胞(P实验组相比,转染pEGFPC1-ERBB4、pDsRED-C1-NRG1细胞中Shc、Grb2表达均极显著上调(P<0.01)。本研究结果表明在番鸭神经细胞中ERBB4或NRG1表达上调均显著增加对方的表达,并提高NRG1-ERBB4信号通路下游基因Shc、Grb2的表达。本研究结果为进一步探讨ERBB4、NRG1基因在番鸭攻击行为中的作用机制提供了一定基础依据。

关键词：番鸭 ERBB4基因 NRG1基因表达攻击行为

pEGFP-N3-LPL重组真核表达载体的构建及在Vero细胞中的表达

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西南大学学报（自然科学版） 2012年第4期34卷 40-45页

作者：赵佳福许厚强乜玉丽陈祥张勇高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学贵阳550025

目的:构建贵州白香猪LPL基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pEGFP-N3-LPL,转染Vero细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用HindⅢ和BamHⅠ两种限制性内切酶获得LPL基因编码区片段和pEGFP-N3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化... 详细信息

目的:构建贵州白香猪LPL基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pEGFP-N3-LPL,转染Vero细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用HindⅢ和BamHⅠ两种限制性内切酶获得LPL基因编码区片段和pEGFP-N3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆,进行菌落PCR、双酶切及测序鉴定.使用Lipofectamine2000将重组质粒转染Vero细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mRNA检测.结果:成功构建重组真核表达载体pEGFP-N3-LPL,经mRNA检测,实验组在1 500bp处出现特异性条带,说明重组载体已在Vero细胞中获得表达.结论:本试验构建的真核细胞表达载体pEGFP-N3-LPL,为进一步阐明LPL基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础.

关键词：脂蛋白酯酶 pEGFP-N3 载体 Vero细胞真核表达荧光检测

猪Calsarcin-2基因第1内含子遗传多态性分析

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中国畜牧兽医 2012年第4期39卷 139-143页

作者：吴眩许厚强乜玉丽陈祥张勇贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖人才基地贵州贵阳550025

以大约克猪、长白猪、杜洛克猪和贵州白香猪杂交及回交的后代为研究对象,根据NCBI公布的序列设计了4对引物,采用测序、PCR-SSCP技术对Calsarcin-2基因第1内含子进行了单核苷酸多态性检测和基因型分析,探讨Calsarcin-2基因第1内含子多态... 详细信息

以大约克猪、长白猪、杜洛克猪和贵州白香猪杂交及回交的后代为研究对象,根据NCBI公布的序列设计了4对引物,采用测序、PCR-SSCP技术对Calsarcin-2基因第1内含子进行了单核苷酸多态性检测和基因型分析,探讨Calsarcin-2基因第1内含子多态性与肉质性状的关系。结果发现2个SNPs(T613C、C936G),群体遗传学分析表明,在所检测的各多态位点上,不同群体间不同基因型的分布都存在着极显著差异(P<0.01),结合品种特性分析表明,613及936位点所检测的不同基因型和肉质可能具有一定的相关性。

关键词：猪 Calsarcin-2基因肉质 PCR-SSCP

香猪睾丸间质细胞 TAS 1R3基因干扰后对自噬相关因子的影响

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1525-1534页

作者：王涵蒙利洁刘文娇徐永健龚婷贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在探究 TAS1 R3基因通过mTOR对从江香猪自噬相关基因表达的影响。本试验选择30日龄健康雄性从江香猪3头,采集睾丸组织并培养出睾丸间质细胞。将构建成功的干扰载体和空载体转染至细胞中,利用qRT-PCR检测其对 TAS 1R3基因表达影响,运用... 详细信息

旨在探究 TAS1 R3基因通过mTOR对从江香猪自噬相关基因表达的影响。本试验选择30日龄健康雄性从江香猪3头,采集睾丸组织并培养出睾丸间质细胞。将构建成功的干扰载体和空载体转染至细胞中,利用qRT-PCR检测其对 TAS 1R3基因表达影响,运用qRT-PCR和Western blot检测 TAS1 R3基因干扰后对味觉受体第一家族一号受体(TAS1R1)、细胞外信号调节激酶1(ERK1 ) 、细胞外信号调节激酶2(ERK2)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、 BECN1 和微管相关蛋白1轻链3β(MAP1LC3B)表达的影响。结果表明,当 TAS 1R3基因被干扰后,相较于shRNA-NC对照组, TAS 1R1、 ERK 1、 ERK 2、 mTOR 基因mRNA表达量均极显著降低( P <0.01),自噬因子 BECN1 和 MAP 1LC3B表达量极显著升高( P <0.01)。Western blot结果表明当 TAS 1R3基因被干扰后,与 shRNA-NC 对照组相比,蛋白T1R3、T1R1、p-mTOR、p-S6K1、p-ERK12均极显著降低( P <0.01),而自噬蛋白 Beclin 1 表达量极显著升高( P <0.01)。本试验通过将 TAS 1R3基因干扰载体转染至睾丸间质细胞,发现当 TAS 1R3基因被干扰后可通过影响 mTOR 基因的表达,调控其下游自噬因子的表达,提示 TAS 1R3基因与睾丸间质细胞的自噬密切相关,这为进一步研究 TAS 1R3基因通过调节自噬影响香猪生殖活动提供了借鉴。

关键词：从江香猪 T1R3 RNA干扰睾丸间质细胞自噬

关岭牛MEF2A基因干扰载体构建及其转染对成肌细胞的影响

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畜牧兽医学报 2023年第2期54卷 584-595页

作者：孙金魁许厚强石鹏飞阮涌贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干... 详细信息

旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干扰序列和1对NC阴性对照序列,将其连接至pGPU6-GFP-Neo载体上,转染重组载体至关岭牛成肌细胞。采用qRT-PCR法筛选干扰效率最佳的载体,并检测干扰MEF2A基因对肌生成因子MEF2B、MEF2C、MEF2D,周期与凋亡因子CDK2、CCNA2、BCL2 mRNA表达水平的影响;随后利用流式细胞仪与酶标仪探究干扰载体对成肌细胞增殖生长的影响,各试验组别设置3个生物学重复。同时运用在线软件预测牛MEF2A蛋白理化性质与网络谱图。结果显示,本研究成功筛选出干扰效率最佳的shRNA-MEF2A-3载体(P<0.01)。MEF2A基因被抑制后,成肌细胞中MEF2B、MEF2C与MEF2D基因表达量均极显著上调(P<0.01);CDK2与BCL2表达量皆显著下调(P<0.05),CCNA2表达量极显著下调(P<0.01);与对照组相比,干扰组细胞周期明显延长,干扰组成肌细胞在6 h后的增殖活性均极显著低于对照组(P<0.01)。由此可初步推测,MEF2A干扰载体成功转染至牛成肌细胞后,可有效抑制MEF2A基因表达,改变基因表达模式,影响了关岭牛成肌细胞的分裂增殖,为进一步探究MEF2A基因对关岭牛肉质性状调控机制和挖掘地方种质资源提供数据支撑。

关键词：关岭牛 MEF2A基因干扰成肌细胞细胞增殖

贵州黑山羊和黔北麻羊LEPR基因第7、8、10和18外显子的多态性分析

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基因组学与应用生物学 2016年第12期35卷 3351-3357页

作者：封竣淇徐伟康建兵钱成黄兰罗卫星蔡惠芬贵州大学动物科学学院贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025

为探究LEPR基因的遗传多态性,丰富山羊LEPR基因的研究,本研究以贵州黑山羊和黔北麻羊为试验材料,运用DNA池结合直接测序方法进行LEPR基因SNPs位点的筛选,从而对突变的SNPs位点进行RNA二级结构以及所编码蛋白质的二级结构和三级结构进行... 详细信息

为探究LEPR基因的遗传多态性,丰富山羊LEPR基因的研究,本研究以贵州黑山羊和黔北麻羊为试验材料,运用DNA池结合直接测序方法进行LEPR基因SNPs位点的筛选,从而对突变的SNPs位点进行RNA二级结构以及所编码蛋白质的二级结构和三级结构进行生物信息学分析。在试羊LEPR基因中共发现4个SNPs,分别为Exon7-T81C(同义突变)、Exon8-C39T(同义突变)、Exon10-A70G(Asn-Ser)和Exon18-C94T(Ser-Leu)。分析表明,4个位点突变前后的等位基因频率、mRNA二级结构的最小自由能、LEPR蛋白质二级结构和三级结构均有改变。结果表明,LEPR基因拥有较为丰富的遗传多态性。

关键词： LEPR SNPs 贵州黑山羊黔北麻羊生物信息学

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0~6周龄贵州黄鸡能量需要的研究

动物营养学报 2022年第4期34卷 2374-2382页

作者：杨德凤施晓丽李维饶永超陈大海陆龙超王小亚林家栋张福平贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州省畜禽遗传资源管理站贵阳550001

本试验研究了0~6周龄贵州黄鸡的能量需要,旨在为贵州黄鸡的科学养殖和制定其饲养标准提供理论依据和数据参考。采用单因素完全随机试验设计,选取健康1日龄贵州黄鸡雏鸡400只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复20只鸡。4组试验鸡饲粮能... 详细信息

本试验研究了0~6周龄贵州黄鸡的能量需要,旨在为贵州黄鸡的科学养殖和制定其饲养标准提供理论依据和数据参考。采用单因素完全随机试验设计,选取健康1日龄贵州黄鸡雏鸡400只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复20只鸡。4组试验鸡饲粮能量水平分别为10.03、11.71、12.54和13.16 MJ/kg,试验期为6周。通过饲养试验,测定每周的体重和采食量,计算平均日增重、平均日采食量和料重比;通过代谢试验,测定表观代谢能及养分表观代谢率;通过比较屠宰试验,测定鸡体能量、粗蛋白质和粗脂肪含量,计算鸡体能量、粗蛋白质和粗脂肪沉积率,确定饲粮适宜能量水平。结果显示:饲粮能量水平对0~6周龄贵州黄鸡的平均日增重、平均日采食量和料重比均有显著影响(P贵州黄鸡的各养分表观代谢率均有显著影响(P贵州黄鸡饲粮能量水平为12.54 MJ/kg。饲粮能量水平对0~6周龄贵州黄鸡的能量、粗脂肪以及粗蛋白质的摄入量和沉积率均有显著影响(P贵州黄鸡饲粮能量水平为12.54 MJ/kg。通过回归分析建立的0~6周龄贵州黄鸡的能量需要预测模型为AME G=377.70+1.6069NE G(R 2=0.7591,式中AME G为增重表观代谢能,NE G为增重净能),得出每千克代谢体重的维持表观代谢能需要量为377.70 kJ,其增重表观代谢能的增重净能转化率为62.23%。

关键词：贵州黄鸡能量水平能量需要量能量模型

黔北麻羊RARRES1基因的克隆表达及功能初步研究

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畜牧兽医学报 2020年第7期51卷 1548-1562页

作者：周志楠陈祥敖叶洪磊唐文陈浩瀚贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1(retinoic acid receptor responder 1,RARRES1)基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、... 详细信息

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1(retinoic acid receptor responder 1,RARRES1)基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、高级结构、疏水性、氨基酸同源性及亚细胞定位,并构建系统进化树,同时应用qRT-PCR法检测RARRES1基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平,随后构建目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1 RNA干扰载体,并转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞,利用qRT-PCR法从细胞水平检测并分析目的基因真核表达载体与RNA干扰载体对目的基因RARRES1及多胎性状候选基因BMPR-IB mRNA表达的影响。qRT-PCR结果显示,RARRES1 mRNA在卵巢中的表达量最高,单羔组黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于多羔组(P遗传距离近,与鸡的同源性最低、遗传距离最远。经双酶切、测序验证后,表明目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1干扰载体构建成功。将各载体转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞后,与空白对照相比,重组质粒pEGFP-N3-RARRES1能极显著提高RARRES1与BMPR-IB的表达量(P<0.01)。在各干扰载体中,重组质粒pGPH1/GFP/Neo-RARRES1-4的抑制效率最好,能够显著与极显著下调RARRES1与BMPR-IB mRNA在卵泡颗粒细胞中的表达量(P<0.05,P<0.01)。本研究克隆了黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列并进行了生物信息学分析。将重组质粒pEGFP-N3-RARRES1、pGPH1/GFP/Neo-RARRES1成功转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞并验证其表达变化。结果表明,RARRES1可能对山羊多胎性状具有促进作用,为进一步探究RARRES1基因对山羊多胎性状的调控机理提供依据。

关键词：黔北麻羊 RARRES1基因超表达载体干扰载体卵泡颗粒细胞

基于线粒体全基因组的柴达木牛母系遗传多样性、群体结构及系统发育分析

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西北农林科技大学学报(自然科学版) 2025年第1期53卷 1-12页

作者：魏旭东刘瑞林李瑞哲张卫忠王启辉赵海明郭卫兴许正全尕藏当周韩赟雷初朝马志杰青海大学畜牧兽医科学院青海省高原家畜遗传资源保护与创新利用重点实验室青海西宁810016 农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室青海西宁810016 青海省格尔木市畜牧兽医站青海格尔木816000 青海省格尔木市郭勒木德乡畜牧兽医站青海格尔木816000 青海省格尔木市乌图美仁乡畜牧兽医站青海格尔木816000 青海省都兰县宗加镇畜牧兽医站青海海西州816102 青海省乌兰县畜牧兽医站青海海西州817100 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨陵712100

【目的】从全线粒体基因组水平探究柴达木牛的母系遗传多样性、群体结构及与其他黄牛品种间的遗传关系。【方法】采用全基因组重测序技术对60头柴达木牛进行重测序,获取每个个体的线粒体全基因组全序列,并从GenBank下载已公布的我国5个... 详细信息

【目的】从全线粒体基因组水平探究柴达木牛的母系遗传多样性、群体结构及与其他黄牛品种间的遗传关系。【方法】采用全基因组重测序技术对60头柴达木牛进行重测序,获取每个个体的线粒体全基因组全序列,并从GenBank下载已公布的我国5个北方黄牛品种(即蒙古牛、西藏牛、哈萨克牛、延边牛和安西牛)和2个国外培育品种(荷斯坦牛和日本和牛)的共129条线粒体全基因组相应序列进行综合分析,以揭示柴达木牛线粒体基因组遗传变异,明确其母系遗传多样性水平、群体遗传结构组成、母系遗传背景及与我国北方部分地方黄牛品种、国外培育品种间的遗传关系。【结果】①60头柴达木牛线粒体全基因组序列比对分析共发现346个多态位点,其中单一多态位点51个,简约信息位点295个;根据序列间核苷酸变异共确定37种单倍型(H1~H37)。遗传多样性分析显示,柴达木牛线粒体基因组单倍型多样度为(0.9810±0.0060),核苷酸多样度为(0.0033±0.0002),提示其拥有丰富的母系遗传多样性。②系统发育分析表明,柴达木牛拥有普通牛和瘤牛2大母系支系,且以普通牛T支系为主,拥有T1、T2、T3、T4、I1和I2共6种亚单倍型组,提示柴达木牛拥有普通牛和瘤牛血统,有两个母系起源。③群体遗传分化分析表明,柴达木牛与蒙古牛、西藏牛、哈萨克牛、延边牛、日本和牛遗传分化程度均很弱,而与安西牛、荷斯坦牛达到中等遗传分化程度。④聚类分析显示,柴达木牛与蒙古牛聚类关系最近,与西藏牛、哈萨克牛、安西牛、延边牛聚类关系相对较近,与日本和牛、荷斯坦牛聚类关系较远,其聚类结果与分化程度基本一致。【结论】柴达木牛拥有丰富的母系遗传多样性,由普通牛和瘤牛两个母系支系组成,含有T1、T2、T3、T4、I1和I2共6种亚单倍型组,推测其有2个母系起源。柴达木牛与蒙古牛亲缘关系最近,与西藏牛、哈萨克牛、延边牛、安西牛遗传关系较近,而与日本和牛、荷斯坦牛遗传关系较远。

关键词：柴达木牛 mtDNA 母系起源群体结构

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