检索结果-南通市图书馆

杜仲泛应激蛋白基因EuUSP1的克隆和功能分析

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植物生理学报 2024年第1期60卷 130-140页

作者：胡盼赵德刚贵州大学生命科学学院农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵阳550025 贵州省农业科学院贵州省农业生物技术重点实验室植物保育技术应用工程研究中心贵阳550006

泛应激蛋白(universal stress protein,USP)是植物抵抗胁迫的保护蛋白。为探究杜仲泛应激蛋白基因EuUSP1的分子结构和功能,本研究以杜仲组培苗为材料,通过RT-PCR和RACE克隆EuUSP1 cDNA,进行生物信息学分析,构建了过表达载体遗传转化三... 详细信息

泛应激蛋白(universal stress protein,USP)是植物抵抗胁迫的保护蛋白。为探究杜仲泛应激蛋白基因EuUSP1的分子结构和功能,本研究以杜仲组培苗为材料,通过RT-PCR和RACE克隆EuUSP1 cDNA,进行生物信息学分析,构建了过表达载体遗传转化三星烟草进行功能分析,并利用qPCR技术进行时空表达特征分析。结果表明,该基因转录cDNA全长782 bp,ORF长495 bp,5′UTR 149 bp,3′UTR 138 bp,编码蛋白164个氨基酸残基。EuUSP1在杜仲幼茎的表达量高于幼叶和幼根,且在7月表达显著高于其他时期。过表达EuUSP1对烟草植株形态没有明显影响,但在干旱胁迫下,转EuUSP1基因植株缓解干旱引起的萎蔫。在干旱胁迫10 d时转基因烟草植株叶片的CAT、SOD和POD活性显著高于野生型,分别为237.3、533.65和8800 U·g^(-1)。干旱胁迫前转基因植株MDA含量显著低于野生型,为6.99 nmol·g^(-1)。综上说明EuUSP1有助于增强抗旱性。

关键词：杜仲 EuUSP1基因抗逆性

利用RNAi和Gene-Deletor技术创制抗褐化马铃薯新种质

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分子植物育种 2023年

作者：方圆赵德刚贵州大学生命科学学院农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵州省农业科学院贵州省植物保育技术应用工程研究中心

马铃薯多酚氧化酶(polyphenol oxidase， PPO)是导致马铃薯发生褐变的关键酶类，在PPO基因家族中StPOT32基因在马铃薯块茎中的表达占主导地位。本研究为获得抗褐化能力强且符合转基因安全的马铃薯新种质，从四倍体栽培品种马铃薯Desire... 详细信息

马铃薯多酚氧化酶(polyphenol oxidase， PPO)是导致马铃薯发生褐变的关键酶类，在PPO基因家族中StPOT32基因在马铃薯块茎中的表达占主导地位。本研究为获得抗褐化能力强且符合转基因安全的马铃薯新种质，从四倍体栽培品种马铃薯Desiree中克隆得到StPOT32基因中保守结构域Tyrosinase的片段。以该保守结构域为干涉靶点，利用实验室前期构建的Gene-Deletor载体p9286，构建以块茎特异启动子patatin驱动靶基因干涉、冷诱导块茎融合启动子PCL驱动Gene-Deletor系统表达的干涉载体p9286-StPPOi，通过农杆菌介导遗传转化马铃薯品种Desiree，获得16株PPO基因沉默的阳性马铃薯转基因植株，转基因马铃薯块茎PPO酶活性相较于转空载体降低了56.8%，褐变指数相较于转空载体降低了80.78%。冷诱导(2 ℃， 3 d)启动基因删除后，在48个马铃薯块茎中有33个未检测到外源基因，外源基因删除效率为68.75%，在48个转空载体的马铃薯块茎中有32株未检测到外源基因，外源基因删除效率为66.67%。成功创制了抗褐化能力强的马铃薯新种质，为创制符合转基因安全的马铃薯新种质提供了新的技术途径。

关键词：马铃薯多酚氧化酶 RNAi 褐变 Gene-Deletor

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基于转录组的小黄姜密码子偏好性分析

分子植物育种 2022年

作者：王润英赵德刚赵懿琛贵州大学生命科学学院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵州省农业科学院贵州省植物保育技术应用工程研究中心贵州大学茶学院

为研究小黄姜功能基因的表达情况及密码子偏好性。本研究使用Illumina HISeq;2000对小黄姜转录组测序，根据小黄姜测序结果中筛出的10 521条完整开放阅读框序列，用CodonW计算小黄姜密码子偏好性指标。共获得175 994条Unigenes。注释到... 详细信息

为研究小黄姜功能基因的表达情况及密码子偏好性。本研究使用Illumina HISeq;2000对小黄姜转录组测序，根据小黄姜测序结果中筛出的10 521条完整开放阅读框序列，用CodonW计算小黄姜密码子偏好性指标。共获得175 994条Unigenes。注释到的Unigenes有92 670条（52.66%），其中注释到NR数据库的Unigenes最多。GO注释包含生物过程、细胞组成和分子功能，分别注释到21、12、11个GO terms。有34 841个基因注释到COG中，包括25个子类。小黄姜基因的GC12、GC3s和平均GC含量分别为51.28%、51.44%、51.29%，密码子偏好性受到突变和选择等要素影响。本研究共筛出23个小黄姜最优密码子，除UGA外，其余最优密码子第三位碱基为G/C。此研究为小黄姜基因功能解析、外源基因的改良及表达提供理论依据。

关键词：小黄姜转录组功能注释密码子偏好性

缺素培养对杜仲幼苗生长及橡胶生物合成的影响

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西部林业科学 2022年第1期51卷 95-101,109页

作者：毛永洁赵德刚贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院/山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省农业科学院贵州省植物保育技术应用工程研究中心贵州贵阳550006

为研究缺素处理对杜仲幼苗橡胶合成的影响,以华仲15号当年生种子为材料,以Hoagland营养液配方为基础营养液,对杜仲幼苗分别进行13种必需营养元素N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl的缺素培养,观察幼苗缺素特征及缺素培养... 详细信息

为研究缺素处理对杜仲幼苗橡胶合成的影响,以华仲15号当年生种子为材料,以Hoagland营养液配方为基础营养液,对杜仲幼苗分别进行13种必需营养元素N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl的缺素培养,观察幼苗缺素特征及缺素培养对杜仲幼苗生长发育和橡胶生物合成的影响。结果显示,(1)缺素处理的杜仲幼苗叶长、叶宽、根茎长均比全营养液培育的植株矮小,地上部分生长受抑制,使根冠比有所提高;(2)缺素导致生长素合成关键酶即色氨酸转氨酶TAA活性极显著下降;(3)缺N、缺K、缺Ca、缺Mg、缺S、缺Mn、缺B、缺Mo培养下杜仲幼苗含胶量降低,缺K、缺Fe、缺Mn、缺B、缺Zn、缺Cu、缺Cl培养下杜仲幼苗橡胶分子量降低。研究表明:缺素处理不仅影响杜仲幼苗时期的生长发育,还使橡胶生物合成受到影响,在杜仲大面积种植中为杜仲提供必需营养元素,避免缺素导致产胶量的下降。

关键词：杜仲必需元素缺素症状含胶量橡胶分子量

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杜仲EuERD16基因的克隆及功能分析

基因组学与应用生物学 2023年第4期42卷 373-383页

作者：李波曾琴赵丹赵德刚贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵阳550025 贵州省农业科学院贵州省生物技术研究所/植物保育技术应用工程研究中心贵阳550006

脱水诱导早期应答(Early Responsive to Dehydration,ERD)基因是在干旱胁迫下可以快速应答的基因。本研究克隆了杜仲(Eucommia ulmoides)EuERD16基因,对其进行生物信息学分析,采用实时定量PCR技术分析EuERD16基因在杜仲不同组织和胁迫... 详细信息

脱水诱导早期应答(Early Responsive to Dehydration,ERD)基因是在干旱胁迫下可以快速应答的基因。本研究克隆了杜仲(Eucommia ulmoides)EuERD16基因,对其进行生物信息学分析,采用实时定量PCR技术分析EuERD16基因在杜仲不同组织和胁迫下的表达情况,进而构建过表达载体,采用农杆菌介导法获得过表达EuERD16基因烟草(Nicotiana tabacum)植株,分析EuERD16基因在烟草中的抗旱功能。结果发现,EuERD16基因的CDS序列长度为387 bp,编码128个氨基酸,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtERD16序列相似性较高,均为1个泛素单体(76个氨基酸)融合1个60S核糖体亚基L40(52个氨基酸),属于泛素延伸蛋白亚族,该基因启动子区域含有光、干旱和低温等响应元件。在杜仲幼苗中,EuERD16基因在茎和根中表达较高,在成年期杜仲树中,EuERD16基因在3月、5月的雌雄叶和7月的雌果中表达较高,并受到20%PEG6000模拟干旱、蓝光和低温胁迫的信号诱导。干旱胁迫下,转EuERD16基因烟草比野生型烟草的萎蔫程度轻,且其CAT、SOD、POD酶活性和脯氨酸含量显著高于对照组的(P研究杜仲抗旱分子机制提供了参考。

关键词：杜仲 EuERD16基因泛素延伸蛋白表达分析干旱胁迫

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杜仲种子人工老化对活力的影响

植物生理学报 2022年第10期58卷 1890-1898页

作者：张娟李悦欣赵德刚贵州大学生命科学学院/农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵阳550025 贵州省农业科学院贵州省农业生物技术重点实验室植物保育技术应用工程研究中心贵阳550006

杜仲(Eucommia ulmoides)是杜仲科杜仲属植物,为第三纪孑遗树种,近缘种已灭绝。杜仲种子采收以后活力会迅速下降。为探究其原因,本研究以‘华仲15号’杜仲种子为材料,采用高温(40℃)高湿(相对湿度95%)人工老化处理,分析老化过程中杜仲... 详细信息

杜仲(Eucommia ulmoides)是杜仲科杜仲属植物,为第三纪孑遗树种,近缘种已灭绝。杜仲种子采收以后活力会迅速下降。为探究其原因,本研究以‘华仲15号’杜仲种子为材料,采用高温(40℃)高湿(相对湿度95%)人工老化处理,分析老化过程中杜仲种子生理生化变化及膜结构相关基因表达特征,发现随人工老化时间增加,种子活力不断下降,相对电导率及丙二醛(MDA)含量上升,可溶性蛋白和可溶性糖含量均下降,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性降低,膜结构相关基因EuPLD、Eu LOX和Eu LEA表达水平上调。结果说明杜仲种子人工老化过程中活力降低与种子膜损伤及膜结构相关基因表达水平变化有关。研究结果为判断杜仲种子老化程度以及研究延缓种子老化措施提供理论基础。

关键词：杜仲人工老化种子活力老化生理膜结构相关基因

辣椒籽不溶性膳食纤维碱法提取工艺研究及其理化性质分析

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食品与发酵工业 2023年第10期49卷 206-212,229页

作者：鲜诗敏赵德刚杨红贵州大学生命科学学院农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创制教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省农业科学院辣椒研究所贵州省农业生物技术重点实验室植物保育技术应用工程研究中心贵州贵阳550006

以辣椒籽为材料,采用碱法提取辣椒籽不溶性膳食纤维(insoluble dietary fiber,IDF);以辣椒籽IDF提取率为指标,通过单因素试验结合响应面分析对提取工艺进行优化,确定最优提取条件,并分析最优条件下提取的IDF成分组成和微观结构。结果表... 详细信息

以辣椒籽为材料,采用碱法提取辣椒籽不溶性膳食纤维(insoluble dietary fiber,IDF);以辣椒籽IDF提取率为指标,通过单因素试验结合响应面分析对提取工艺进行优化,确定最优提取条件,并分析最优条件下提取的IDF成分组成和微观结构。结果表明,最佳工艺条件为:NaOH浓度0.26 mol/L、碱解时间94 min、碱解温度40℃、料液比1∶18(g∶mL),此时IDF提取率可达68.01%,与理论值67.83%相比,差异不显著;IDF的持水力、持油力以及膨胀力均随目数的增加而显著下降(P研究将为辣椒籽IDF的开发应用提供数据支撑。

关键词：辣椒籽不溶性膳食纤维碱法响应面法理化性质

基于GEO数据库分析番茄干旱胁迫关键基因与信号通路

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山东农业大学学报（自然科学版） 2022年第3期53卷 355-361页

作者：杨巍唐兵周麟笔马关鹏谭国飞瞿飞王天文曾庆鸿王洪亮邓英贵州省农业科学院园艺研究所贵州贵阳550000 贵州省园艺工程技术研究中心贵州贵阳550006 贵州省农业科技发展中心贵州贵阳550000

为研究干旱胁迫对番茄生长的影响,本研究利用生物信息学分析方法筛选番茄干旱胁迫的关键基因,通过检索GEO数据库中关于番茄干旱胁迫的基因芯片数据,获取GSE39894和GSE106317两个数据集矩阵数据,利用GEO2R分析工具进行差异表达基因筛选,... 详细信息

为研究干旱胁迫对番茄生长的影响,本研究利用生物信息学分析方法筛选番茄干旱胁迫的关键基因,通过检索GEO数据库中关于番茄干旱胁迫的基因芯片数据,获取GSE39894和GSE106317两个数据集矩阵数据,利用GEO2R分析工具进行差异表达基因筛选,应用DAVID在线数据库对差异表达基因进行GO功能分析和KEEG通路富集分析,运用STRING数据库和Cystoscopes软件构建差异表达基因的蛋白互作网络,并使用MCODE及Cytohubba插件筛选出参与干旱胁迫的最显著模块及关键基因。本实验筛选出1583个差异表达基因,其中748个上调基因,835个下调基因,GO功能分析和KEEG通路富集分析表明,这些差异基因在代谢通路、次生代谢产物的生物合成、植物激素信号转导、苯丙烷生物合成等方面显著富集,蛋白互作网络分析筛选出K4C9D8_SOLLC、K4B0Q1_SOLLC、CB13_SOLLC、PSBP_SOLLC、K4BCF4_SOLLC等10个关键基因,这些差异表达基因很可能是番茄干旱胁迫潜在的生物标志物。

关键词： GEO数据库番茄干旱胁迫生物信息学

楠木叶片响应干旱胁迫的乙酰化蛋白质组学分析

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植物生理学报 2021年第6期57卷 1371-1380,1381页

作者：赵丹谢娜赵德刚贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室贵阳550025 贵州省农业科学院贵州省植物保育技术应用工程研究中心贵阳550006

本文以楠木(Phoebe zhennan)为材料,利用抗乙酰赖氨酸富集和高灵敏质谱联用技术,对干旱胁迫处理的楠木叶片乙酰化蛋白质组进行分析鉴定,获得差异修饰蛋白1890个,差异修饰位点2759个。生物信息学分析表明,干旱条件下大多数乙酰化蛋白参... 详细信息

本文以楠木(Phoebe zhennan)为材料,利用抗乙酰赖氨酸富集和高灵敏质谱联用技术,对干旱胁迫处理的楠木叶片乙酰化蛋白质组进行分析鉴定,获得差异修饰蛋白1890个,差异修饰位点2759个。生物信息学分析表明,干旱条件下大多数乙酰化蛋白参与代谢过程。乙酰化主要发生在有催化活性和结合活性的相关蛋白上,且38.9%的乙酰化蛋白定位在叶绿体中。乙酰化蛋白参与碳代谢、糖酵解/糖异生、三羧酸循环以及谷胱甘肽代谢等生物学过程,尤其在谷胱甘肽S-转移酶以及氧化还原酶等相关的结构域显著富集。通过测定抗氧化酶活性发现干旱胁迫使超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性增加,而抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性降低,推测抗坏血酸-谷胱甘肽循环以及谷胱甘肽代谢相关氧化还原酶等可能通过乙酰化响应干旱胁迫,调节抗氧化酶活性,消除活性氧对楠木的伤害。本研究报道了楠木响应干旱胁迫的差异乙酰化蛋白质组,为探索赖氨酸乙酰化在楠木干旱响应的作用机制提供参考。

关键词：楠木乙酰化蛋白质组干旱胁迫功能富集差异表达蛋白