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皱皮香猪泛素化连接酶2基因结构变异的差异表达研究

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畜牧兽医学报 2025年第1期56卷 136-146页

作者：周显珊黄世会牛熙冉雪琴王嘉福贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州大学农业生物工程研究院贵阳550025

旨在解析CUL2基因的结构变异是否影响基因表达及其与香猪皱皮严重程度之间的联系。本研究取200头6月龄皱皮香猪和普通香猪的皮肤和血样,采用PCR方法检测基因组中CUL2-I3-sv300位点的多态性分布,利用UCSC等在线软件分析该结构变异包含的... 详细信息

旨在解析CUL2基因的结构变异是否影响基因表达及其与香猪皱皮严重程度之间的联系。本研究取200头6月龄皱皮香猪和普通香猪的皮肤和血样,采用PCR方法检测基因组中CUL2-I3-sv300位点的多态性分布,利用UCSC等在线软件分析该结构变异包含的功能元件,预测CUL2基因与其它基因间的互作网络,并应用RT-qPCR和Western blot技术检测CUL2以及皮肤胶原蛋白生成相关基因的表达量变化。结果表明,猪群中结构变异CUL2-I3-sv300表现出丰富的多态性,普通香猪中检测到缺失突变基因型MM、杂合型WM和野生型WW,而皱皮香猪中未检测到WW基因型;且皱皮香猪的M等位基因频率显著增加(P生物信息学分析提示,结构变异CUL2-I3-sv300中含有一个短散在元件(short interspersed nuclear element, SINE)、3个内含子剪切抑制子(intronic splicing silencers, ISS)和4个RNA结合蛋白位点(RNA binding protein sites, RBPs)等功能元件;预测CUL2可直接调控HIF-1α,进一步调控VEGFA、MMP-1、MMP-9,最终影响皮肤胶原蛋白的生成。经皮肤样品检测,MM型皱皮CUL2的mRNA表达量明显高于其它基因型;且MM型皱皮CUL2的蛋白表达量高于MM型普通皮肤的相应值。同时,MM型皱皮的MMP-1、MMP-9表达量高于普通皮肤,HIF-1α、VEGFA、COL1A1、COL3A1、COL6A3基因表达量却低于普通皮肤。推测缺失型结构变异因丢失了SINE等功能元件,可促进皱皮CUL2等的表达,抑制胶原蛋白生成,进而加重香猪体侧皮肤褶皱的严重程度。

关键词：皱皮香猪 CUL2基因胶原蛋白皮肤褶皱生物信息学分析

猪XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白的制备与鉴定

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中国农业大学学报 2025年第1期30卷 131-141页

作者：杨利杜露平侯立婷张浩明于晓明李兰乔绪稳张元鹏秦竹王义伟郑其升陈瑾程海卫江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省食品质量与安全重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300

为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特... 详细信息

为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特异性纳米抗体;利用SOE-PCR技术将该纳米抗体和猪O型FMDV特异性纳米抗体Nb205连接,构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白。结果表明:1)成功原核表达猪XCR1目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot结果显示,其相对分子量大小约35 ku,符合预期。2)羊驼血清效价为1∶64000,满足建库要求;构建的噬菌体展示文库库容量约为1.91×10^(8)CFU/mL,插入率为91.3%,多样性好;经3轮亲和筛选成功获得了纳米抗体Nb75,间接ELISA结果显示该纳米抗体能特异性与XCR1结合。3)利用SOE-PCR技术成功构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205;SDS-PAGE和Western blot显示,该蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,且呈现二聚体结构,间接ELISA结果显示Nb75-205能同时与XCR1目的蛋白和FMDV抗原结合。综上,本研究采用噬菌体展示技术成功获得猪XCR1特异性纳米抗体,并构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205,且该蛋白为天然二聚体结构,与XCR1目的蛋白和FMDV抗原均具有较好的结合活性,为进一步开展FMDV抗原的猪XCR1靶向提呈研究奠定基础。

关键词：趋化因子受体1 双特异纳米抗体二聚体 FMDV

饲粮中添加刺梨渣对鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学的影响

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中国畜牧兽医 2025年第1期52卷 80-93页

作者：冯轶杨芸芸罗永荣吴鹏王艳杨颖陈江凤姜海波文明贵州大学动物科学学院贵阳550025 安顺市农业科学院畜牧水产兽医研究所安顺561000 贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵阳550025

[目的]探究饲粮中添加刺梨渣(Rosa roxburghii Tratt. residue)对鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学的影响,以期为刺梨渣饲料在贵州山区农村稻田养鱼中的推广应用提供科学依据。[方法]选取180尾健康无病、初始体重为25 g... 详细信息

[目的]探究饲粮中添加刺梨渣(Rosa roxburghii Tratt. residue)对鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学的影响,以期为刺梨渣饲料在贵州山区农村稻田养鱼中的推广应用提供科学依据。[方法]选取180尾健康无病、初始体重为25 g±1 g的鲤鱼,随机分为正常组(基础饲料中不添加刺梨渣)和刺梨渣饲喂组(基础饲料中添加0.4%刺梨渣),每组设3个重复,每个重复30尾,试验期60 d。试验结束后,采集鲤鱼中段肠道,通过显微镜观察、ELISA检测和基于液相色谱的代谢组学技术分析鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学。[结果]与正常组相比,饲喂刺梨渣对鲤鱼肠道的正常结构无不良影响,且肠道绒毛长度和肌层厚度均极显著增加(P<0.01);刺梨渣饲喂组鲤鱼肠道中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低(P<0.05);刺梨渣饲喂组共显著富集到2-酮丁酸、L-(+)-乳酸、丙酸、琥珀酸、D-天冬氨酸、D-谷氨酰胺、黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶和D-焦谷氨酸等85种差异代谢物,这些代谢物主要富集到丙酸盐代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢,嘌呤代谢,嘧啶代谢等代谢通路。[结论]饲粮中添加刺梨渣可提高鲤鱼肠道组织抗氧化性能和免疫指标,可通过影响嘌呤和嘧啶代谢以及相关代谢物D-谷氨酰胺、黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、2′-脱氧尿苷-5′-单磷酸盐和尿嘧啶等来改善鲤鱼肠道健康,进而提高机体免疫力。

关键词：刺梨渣鲤鱼肠道组织形态抗氧化能力免疫力代谢组学

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鞭毛蛋白的表达及其免疫增强效力评价

中国动物传染病学报 2025年

作者：侯立婷刘昆昆安俊星于晓明秦竹杜露平张元鹏陈瑾郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室南京农业大学动物医学院

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达... 详细信息

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达这两种蛋白，并进行纯化与鉴定。获得这两种蛋白后，进一步检测这两种蛋白体外对DC2.4细胞的TLR 5的激活和相关细胞因子的表达情况，并对其在PEDV疫苗上的免疫增强效力进行了评价。结果表明，1)两种蛋白在原核表达系统中均以可溶形式表达；2)添加鞭毛蛋白刺激后，DC 2.4细胞中TLR5及相关细胞因子的表达水平显著提高；3)FliC和FliC△D2D3均能显著提高小鼠和仔猪免疫后的PEDV特异性的IgG抗体水平，其中FliC△D2D3的免疫效果优于全长的FliC。该研究不仅有助于了解鞭毛蛋白FliC在免疫调节中的作用，也为基于鞭毛蛋白的免疫增强剂的开发提供了基础。

关键词：鞭毛蛋白FliC、FliC 免疫增强剂 PEDV

免疫增强剂CVC1302调控体细胞高频突变的机制研究

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华中农业大学学报 2025年第1期44卷 211-216页

作者：杜露平鲁海燕侯立婷于晓明程海卫张元鹏陈瑾郑其升侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品技术创新中心/江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA... 详细信息

为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA206,每只50μg NP-OVA,免疫后14 d,利用流式分选获得生发中心B细胞,利用巢氏PCR扩增B细胞免疫球蛋白序列可变区VH_(186.2),Western blot检测诱导活化的胞苷脱氨酶(AID)、Pax5表达水平,β-actin作为内参,比较组间AID、Pax5表达差异;利用荧光定量PCR检测AID、Pax5基因转录水平。试验结果显示:CVC1302显著诱导生发中心B细胞免疫球蛋白序列VH186.2突变频率,试验组W33L突变频率为62.2%,而对照组仅为20.25%;CVC1302可提升AID蛋白、Pax5蛋白表达水平,其中试验组AID蛋白相对表达水平为0.72,对照组仅为0.16,试验组Pax5蛋白相对表达水平为0.62,对照组仅为0.26;CVC1302增强AID基因、Pax5基因转录水平,相较于对照组分别提高2.36、4.13倍。推断CVC1302依赖Pax5介导AID表达,调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变。

关键词：免疫增强剂CVC1302 体细胞高频突变免疫机制生发中心B细胞胞苷脱氨酶 Pax5

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免疫增强剂CVC1302介导Tfh细胞分化机制分析

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中国农业大学学报 2025年第1期30卷 179-187页

作者：杜露平鲁海燕李明举侯立婷于晓明程海卫张元鹏秦竹李兰张浩明杨利王义伟陈瑾郑其升侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品技术创新中心/江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300 烟台市动物疾病预防与控制中心山东烟台264033

为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T... 详细信息

为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T-bet、GATA3和RORγt的转录水平,STAT3信号通路活化水平,Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例及STAT3信号通路抑制后反向验证Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例。结果表明:1)免疫增强剂CVC1302极显著促进小鼠骨髓DC分泌IL-6和IL-21。2)细胞共培养试验显示,CVC1302可显著促进STAT3磷酸化水平,表明STAT3信号通路被激活。3)利用STAT3信号通路抑制剂后,CD4^(+)T细胞分化为Tfh细胞的水平显著降低,表明CVC1302依赖STAT3信号通路激活介导初始CD4+T细胞分化为Tfh细胞。综上,本研究推断CVC1302通过促进DC分泌IL-6和IL-12,并激活STAT3信号通路介导Tfh细胞的分化,旨在为后续免疫增强剂的开发提供思路。

关键词： CVC1302 DC STAT3 Tfh细胞

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海藻糖在猪瘟病毒冻干过程中的保护作用研究

中国兽医科学 2025年

作者：左晓昕尹文竹吕芳赵艳红揭红英卢宇江苏省农业科学院动物免疫工程研究所兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心兽用疫苗分子设计与制剂农业农村部公共研发平台河北农业大学动物医学院

研究旨在探索不同浓度（0、5%、10%、15%和20%）的海藻糖(trehalose)对猪瘟病毒(CSFV)冻干的保护效果和作用机制，通过间接免疫荧光法检测猪瘟冻干制品的效价损失，偏光显微镜观察冰晶形貌，X射线衍射仪、差示量热扫描仪和傅里叶变换红... 详细信息

研究旨在探索不同浓度（0、5%、10%、15%和20%）的海藻糖(trehalose)对猪瘟病毒(CSFV)冻干的保护效果和作用机制，通过间接免疫荧光法检测猪瘟冻干制品的效价损失，偏光显微镜观察冰晶形貌，X射线衍射仪、差示量热扫描仪和傅里叶变换红外光谱仪器对制品结构进行表征。结果显示，添加海藻糖后能降低猪瘟病毒的冻干损失，其中15%的海藻糖保护效果最佳，残水率小于4%。作为冻干保护剂，海藻糖主要通过以下方式保护猪瘟病毒：调节冰晶尺寸与分布，减少冰晶对病毒颗粒的机械损伤，在干燥时其高玻璃化转变温度让制品形成无定形态糖玻璃结构，还能与亲水基团结合，起到替代部分水分子的作用，维持病毒结构的稳定性。

关键词：海藻糖猪瘟病毒真空冷冻干燥玻璃转变温度水合作用

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A型产气荚膜梭菌感染鸭回肠代谢组学分析

畜牧兽医学报 2023年第6期54卷 2555-2569页

作者：曾成容王娜毕文文梅世慧何广霞张峻杰陈泽文明周碧君贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵阳550025

旨在应用非靶向代谢组学技术探究A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens type A,CpA)感染鸭回肠差异代谢物变化特征。试验选取CpA感染37日龄健康雏鸭,采用剖检病理观察和PCR检测确定CpA感染成功后,使用液相色谱-质谱联用(liquid chro... 详细信息

旨在应用非靶向代谢组学技术探究A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens type A,CpA)感染鸭回肠差异代谢物变化特征。试验选取CpA感染37日龄健康雏鸭,采用剖检病理观察和PCR检测确定CpA感染成功后,使用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术检测对照组和CpA感染组感染66、90、114 h时鸭回肠的代谢组学,筛选并分析潜在的差异代谢物及相关代谢通路,最后选取对照组和CpA感染114 h组差异代谢物验证。结果表明:经剖检病理观察和病原核酸检测确定成功构建了鸭CpA感染模型;PCA图中回肠样本有部分重叠,提示感染组与对照组鸭回肠间可能存在相同的离子化合物;感染鸭66、90和114 h总差异代谢物种类分别有14、16和24种,富集的代谢通路分别有13、14和28条,主要集中在花生四烯酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、酪氨酸代谢等;同时差异代谢物验证结果显示,感染114 h回肠缬氨酸和丙氨酸含量变化趋势均与非靶向代谢组学检测结果一致。综上所述,CpA感染鸭的致病机制可能通过影响相关氨基酸的代谢通路,调控相关代谢产物的合成。

关键词： A型产气荚膜梭菌鸭代谢组学

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大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4965-4974页

作者：王联谢娜赵珮伶陈浩李芏酉王豫萍贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州省贵阳市550003 贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州省贵阳市550004

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路... 详细信息

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响,研究其抗肝纤维化的可能机制。方法:(1)体外实验:选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分6组培养:对照组常规培养24 h,单纯药物组加入大麻二酚培养24 h,造模组加入转化生长因子β1培养24 h,造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1,5μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后,检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。(2)动物体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组8只:假手术组不造模,造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型,造模3周后分别腹腔注射4,8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素,1次/d,连续给药7 d。给药结束后,检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。结果与结论:(1)体外实验:与对照组比较,造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达降低(P<0.05);两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显;(2)体内实验:与假手术组比较,模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P<0.05),肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P<0.05),转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P<0.05);两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组效果更明显;(3)结果表明,大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

关键词：大麻二酚肝星状细胞肝纤维化信号转导通路转化生长因子β1/Smad HSC-T6细胞