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黄芪六一汤抗糖尿病肾病的药效组分筛选研究

药物评价研究 2024年第4期47卷 730-745页

作者：王群唐甜甜刘文吴增光张楠楠陈晓兰韩伟金阳贵州中医药大学药学院贵州贵阳550005 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550025

目的对黄芪六一汤中黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、黄芪多糖及甘草酸、甘草总黄酮、甘草多糖分别进行提取、分离,并筛选具有防治糖尿病肾病作用的药效组分。方法单因素法筛选树脂型号、上样浓度和体积、洗脱溶剂及用量建立大孔吸附树脂法对... 详细信息

目的对黄芪六一汤中黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、黄芪多糖及甘草酸、甘草总黄酮、甘草多糖分别进行提取、分离,并筛选具有防治糖尿病肾病作用的药效组分。方法单因素法筛选树脂型号、上样浓度和体积、洗脱溶剂及用量建立大孔吸附树脂法对黄芪总皂苷、总黄酮进行富集分离;运用碱液萃取法对甘草酸、甘草总黄酮进行分离,采用水提醇沉法对黄芪多糖、甘草多糖进行纯化。12周龄雄性db/m小鼠8只作为对照组,将12周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、黄芪六一汤和各组分的高、低剂量(临床等效剂量的4、1倍)组,小鼠一般情况及血生化指标以盐酸罗格列酮片(RSG)为阳性对照;尿白蛋白(U-Alb)水平以缬沙坦分散片(API)为阳性对照,每组8只。各组小鼠分别在ig给药12周前、后,称质量。禁食12 h,自由饮水,收集24 h尿液,马斯亮蓝法检测24 h U-Alb浓度;尾静脉采血测空腹血糖(FBG);摘取眼球取血,采用全自动生化分析仪检测血清血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量。对照组、模型组及黄芪六一汤高、低剂量组小鼠肾组织经固定、石蜡包埋切片,Masson染色后,光学显微镜下观察。结果制得的黄芪总黄酮、黄芪总皂苷、黄芪多糖、甘草酸、甘草总黄酮、甘草多糖质量分数分别为(70.58±2.16)%、(72.97±1.06)%、(67.12±2.60)%、(81.02±1.04)%、(53.56±1.63)%、(64.62±1.27)%。与模型组比较,给予黄芪六一汤治疗后的各组小鼠肾纤维化程度较轻;与给药前比较,模型组小鼠体质量显著减轻(P<0.05),甘草总黄酮高、低剂量和甘草多糖低剂量组体质量显著降低(P<0.05、0.01),其他给药组无显著差异;与模型组比较,黄芪六一汤、黄芪总皂苷、黄芪多糖、黄芪总黄酮、甘草酸FBG、24 h U-Alb显著降低(P<0.05、0.01),黄芪总皂苷、黄芪六一汤、黄芪总黄酮、甘草酸组Scr显著降低(P<0.05、0.01),黄芪六一汤、黄芪多糖、甘草酸、黄芪总黄酮组BUN显著降低(P<0.05、0.01),黄芪六一汤、黄芪总皂苷、甘草酸、黄芪多糖高剂量组TG显著降低(P<0.05、0.01),黄芪六一汤、黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、黄芪多糖组TC显著降低(P<0.05、0.01)。结论各组分确定的制备工艺稳定、科学、可行;黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、黄芪多糖、甘草酸可能是黄芪六一汤防治糖尿病肾病的药效物质基础。

关键词：黄芪六一汤大孔树脂碱液萃取糖尿病肾病黄芪总皂苷黄芪总黄酮黄芪多糖甘草酸

艳山姜挥发油纳米乳的制备及其体内分布情况考察

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 126-133页

作者：徐金转张莉莉周正莉徐珊周翔黄磊巩仔鹏陈艺沈祥春贵州医科大学药学院贵州省天然药物资源高效利用工程中心天然药物资源优效利用重点实验室贵州省药物制剂重点实验室贵阳550025

目的:制备包载艳山姜挥发油(EOFAZ)的口服纳米乳,考察其体外促吸收效果和体内分布情况。方法:将醋柴胡多糖(VBCP)和牛血清白蛋白(BSA)通过Maillard反应进行偶联,制备多糖-蛋白偶联物VBCP-BSA。以VBCP-BSA为乳化剂,维生素B12(VB_(12))为... 详细信息

目的:制备包载艳山姜挥发油(EOFAZ)的口服纳米乳,考察其体外促吸收效果和体内分布情况。方法:将醋柴胡多糖(VBCP)和牛血清白蛋白(BSA)通过Maillard反应进行偶联,制备多糖-蛋白偶联物VBCP-BSA。以VBCP-BSA为乳化剂,维生素B12(VB_(12))为吸收促进剂,中链甘油三酯与EOFAZ混合作为油相,通过高能外力乳化法制备负载EOFAZ的纳米乳,对该纳米乳的粒径及粒径分布、表面Zeta电位、EOFAZ含量、外观形态等进行表征,并利用荧光素示踪法考察荧光素标记的EOFAZ纳米乳在体外的吸收效果及体内的分布情况。结果:VBCP与BSA通过Maillard反应48 h后形成偶联物VBCP-BSA,并具有较高的接枝度。以VBCP-BSA为乳化剂,制备得到均一的粉色纳米乳液EOFAZ@VBCP-BSA/VB_(12)。该纳米乳的粒径80%,其具有良好的体外吸收效果,口服后能增强肝脏蓄积。结论:设计的蛋白多糖纳米乳能够有效负载EOFAZ,促进口服吸收,增强肝脏分布,可为口服EOFAZ保肝制剂的开发提供实验依据。

关键词：纳米乳多糖-蛋白偶联物维生素B_(12)(VB_(12)) 艳山姜挥发油(EOFAZ) 口服制剂体内分布肝靶向

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稀花八角枫的化学成分研究

中国中药杂志 2024年第3期49卷 735-743页

作者：金倩倩杨婷朱敏汇张美秦汪洋潘洁王永林李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

对稀花八角枫70%乙醇提取物化学成分进行研究。采用D-101大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱技术对稀花八角枫70%乙醇提取物的化学成分进行分离纯化,从中分离鉴定出19个化合物,分别为4-环己烯-1α,2α,3α-三醇-1-O-β-D-葡萄糖苷... 详细信息

对稀花八角枫70%乙醇提取物化学成分进行研究。采用D-101大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱技术对稀花八角枫70%乙醇提取物的化学成分进行分离纯化,从中分离鉴定出19个化合物,分别为4-环己烯-1α,2α,3α-三醇-1-O-β-D-葡萄糖苷(1)、1β,4α,6α,13-tetrahydroxy-eudesm-11(12)-ene(2)、蔗糖(3)、1′-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1″→6′)-β-D-glucopyranoside(4)、双(2-乙基己基)苯-1,2-二羧酸酯(5)、(Z)-10-二十碳烯酸(6)、di-O-methylcrenatin(7)、甲基-α-D-呋喃果糖苷(8)、β-胡萝卜苷(9)、丁香酸(10)、香草酸(11)、二十八烷醇(12)、isoarborinol(13),2,7-dihydroxy-6-methyl-4-(1-methylethyl)-1-naphthalenecarboxylate(14)、香草醛(15)、松柏醛(16)、9(11)-去氢麦角甾醇过氧化物(17)、5α,8α-过氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(18)、β-谷甾醇(19)。其中化合物1和2为新化合物,化合物5~11、13、15~18为首次从八角枫属中分离得到。通过脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型对化合物1进行了抗炎活性测定,结果显示,化合物1对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成具有一定的抑制作用,其抑制率为54.57%。

关键词：稀花八角枫化学成分分离鉴定

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS联合网络药理学及分子对接探究白及治疗黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的“异病同治”物质基础和作用机制

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中国中药杂志 2024年第13期49卷 3552-3565页

作者：刘春花付昌丽孙佳陆苑潘洁李勇军王永林黄勇潘卫东贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550014

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS联合网络药理学及分子对接技术探究白及“异病同治”黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的物质基础和分子机制。利用HPLC建立17批不同产地白及指纹图谱,进行相似度评价;进一步通过UHPLC-Q-... 详细信息

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS联合网络药理学及分子对接技术探究白及“异病同治”黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的物质基础和分子机制。利用HPLC建立17批不同产地白及指纹图谱,进行相似度评价;进一步通过UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS分析,获得17批白及的共有化学成分;针对共有化学成分,根据生物利用度和类药性筛选活性成分,利用TCMSP和SwissTargetPrediction数据库获取白及活性成分的作用靶点。在DrugBank、TTD、GeneCards数据库中检索疾病相关靶点,绘制韦恩图,获得白及与疾病的共有靶点作为“异病同治”靶点;借助STRING数据库建立蛋白质相互关系,并在Bioconductor数据库中对“异病同治”靶点进行KEGG和GO分析;使用Cytoscape 3.7.2软件构建“白及化学成分-异病同治靶点”网络和蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,拓扑分析筛选出关键活性成分和核心靶点;最后,运用AutoDock Vina 1.1.2软件对活性成分与核心靶点进行分子对接验证。指纹图谱有13个共有峰,不同批次间指纹图谱的相似度在0.941~0.998。鉴定出白及的化学成分53个,17批白及的共有化学成分18个;网络药理学筛选到白及治疗4种疾病的药效物质基础是多糖类、联菲类、二氢菲类和联苄类等11个化合物,异病同治靶点42个,这些靶点参与细胞对化学应激的反应、活性氧的反应和蛋白激酶B信号转导的正调控等生物过程,涉及PI3K-Akt、ErbB、Rap1、FoxO、MAPK和雌激素等121条信号通路;分子对接显示关键活性成分与核心靶点亲和力好。该研究初步阐释了白及通过多成分、多靶点和多通路联合作用发挥治疗黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的“异病同治”的作用,为其深入开发和应用提供了一定的理论基础。

关键词：白及指纹图谱成分分析网络药理学异病同治分子对接

戊己丸对吲哚美辛诱导大鼠胃溃疡的保护作用研究

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中华中医药学刊 2024年第6期42卷 129-134,I0019-I0025页

作者：张环刘文伍天苔李和蓉金阳张明杜华康王守莉石惠云贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025

目的研究戊己丸对吲哚美辛诱导的大鼠胃溃疡的保护作用,并初步探索其可能的作用机制。方法 36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(奥美拉唑,20 mg/kg)、戊己丸低、中、高(2.52、5.04、10.08 g/kg生药量)剂量组,每组6只。各组... 详细信息

目的研究戊己丸对吲哚美辛诱导的大鼠胃溃疡的保护作用,并初步探索其可能的作用机制。方法 36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(奥美拉唑,20 mg/kg)、戊己丸低、中、高(2.52、5.04、10.08 g/kg生药量)剂量组,每组6只。各组大鼠灌胃相应药物或0.5%羧甲基纤维素钠(Carboxymethyl Cellulose, CMC-Na)水溶液,1次/d,连续7 d,于末次给药1 h后,除正常组外,其余各组均给予吲哚美辛(60 mg/kg)灌胃造模;6 h后处死大鼠,收集血清和胃组织。通过改良Guth法计算胃溃疡指数和溃疡抑制率,染色观察比较各组大鼠胃组织病理学变化;使用试剂盒测定胃组织中丙二醛(Malonaldehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)和环氧合酶1(Cyclooxygenase-1,COX-1),血清中一氧化氮(Nitric Oxide, NO)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)的含量;TUNEL染色法比较各组大鼠胃组织细胞凋亡情况;免疫组化法测定胃组织中环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)、NF-κB(p65)蛋白的表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠胃组织黏膜层、黏膜下层、肌层及浆膜部分结构受损,胃溃疡指数和胃组织细胞凋亡百分比显著升高(P<0.01);MDA、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01),COX-1、NO、IL-10和SOD水平显著降低(P<0.01);COX-2和NF-κB(p65)蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,各给药组均能改善胃组织损伤状况;戊己丸中、高剂量组和奥美拉唑组均能显著降低(P<0.01)胃溃疡指数和升高溃疡抑制率,升高COX-1、NO、IL-10水平,降低MDA、COX-2、TNF-α、IL-6和NF-κB(p65)水平,各给药组均明显降低大鼠胃组织细胞凋亡百分比,其中戊己丸中剂量组表现出良好的作用。结论戊己丸对吲哚美辛诱导的大鼠胃溃疡有明显的保护作用,其作用机制可能与改善氧化应激抑制、炎症反应和减少细胞凋亡有关。

关键词：戊己丸胃溃疡吲哚美辛非甾体抗炎药

舒肝宁注射液及其方中黄芩提取物在大鼠肝微粒体、尿液、粪便、胆汁中的代谢比较研究

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中国中药杂志 2024年

作者：何峰周杨彭玥郑林王玲黄勇迟明艳贵州医科大学药学院贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心

比较舒肝宁注射液和黄芩提取物中黄芩苷及其类似物的代谢差异。12只SD大鼠随机分为舒肝宁注射液组和黄芩提取物组，每组6只，将肝微粒体与药物共孵育后收集样品，采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive ... 详细信息

比较舒肝宁注射液和黄芩提取物中黄芩苷及其类似物的代谢差异。12只SD大鼠随机分为舒肝宁注射液组和黄芩提取物组，每组6只，将肝微粒体与药物共孵育后收集样品，采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS）分析肝微粒体中各组药物的原型成分与代谢产物。另取12只SD大鼠随机分为舒肝宁注射液组和黄芩提取物组，每组6只，尾静脉给予4.2 mL·kg-1的舒肝宁注射液或黄芩提取物，给药48 h后收集大鼠尿液、粪便和胆汁，采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS分析各生物样品中的原型及代谢产物。结果表明，舒肝宁注射液及黄芩提取物在肝微粒体中共鉴定出原型成分5个，代谢产物8个；在大鼠尿液、粪便和胆汁中均鉴定出5个原型成分。其中，在尿液中鉴定了15个代谢物，粪便中检测到9个代谢物，在胆汁中鉴定了12个代谢物。比较二者黄芩苷在代谢途径及代谢物数量上的差异，发现二者在肝微粒体、尿液、胆汁和粪便中葡萄糖醛酸化为黄芩苷和黄芩素的主要代谢途径，且存在部分甲基化产物及葡萄糖结合产物。舒肝宁注射液复方与黄芩提取物中，黄芩苷在尿样中代谢产物的数量和种类存在差异，表明二者在代谢上存在差异，说明中药成方中其余成分的存在会导致体内主要成分代谢产物发生变化。

关键词：舒肝宁注射液茵陈蒿汤黄芩提取物 UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS 肝微粒体胆汁尿液粪便

舒肝宁注射液与方中黄芩提取物在大鼠胆汁、尿液、粪便中排泄的比较研究

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中国中药杂志 2024年第3期49卷 809-818页

作者：周杨王玲巩仔鹏李月婷金阳郑林黄勇何峰贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室/贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/国家苗药工程技术研究中心贵州贵阳550004

黄芩提取物是舒肝宁注射液中重要的组分之一。该研究建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定舒肝宁注射液及方中黄芩提取物的5种成分在大鼠胆汁、尿液和粪便中含量的方法,揭示舒肝宁注射液与单味黄芩提取物在大鼠体内... 详细信息

黄芩提取物是舒肝宁注射液中重要的组分之一。该研究建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定舒肝宁注射液及方中黄芩提取物的5种成分在大鼠胆汁、尿液和粪便中含量的方法,揭示舒肝宁注射液与单味黄芩提取物在大鼠体内的排泄过程差异,探讨黄芩配伍前后5种成分的体内排泄过程规律。大鼠分别尾静脉注射4.2 mL·kg^(-1)的舒肝宁注射液和黄芩提取物,观察48 h内大鼠胆汁、尿液和粪便中黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和野黄芩苷的动态排泄情况。结果显示,大鼠静脉注射舒肝宁注射液和黄芩提取物后,除黄芩苷外,其余4种指标成分均以较高的比例以原型成分排泄。各成分在尿液中排泄量较大,在粪便和胆汁中的排泄量较少。黄芩提取物经配伍后,5种指标成分在大鼠体内的累积排泄量均降低。其中,黄芩素在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了26.67%、48.11%、31.01%;黄芩苷在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了70.69%、19.43%、31.22%。研究表明,黄芩提取物中的5种指标成分主要经肾脏排泄,且注射液中其他组分可能会延缓其排泄过程,延长在体内的滞留时间。该研究对阐明舒肝宁注射液配伍合理性具有重要的意义。

关键词：舒肝宁注射液黄芩提取物 UPLC-MS/MS 排泄胆汁尿液粪便

基于UPLC-MS/MS的舒肝宁注射液与黄芩提取物中5种成分的组织分布比较研究

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中国中药杂志 2024年第17期49卷 4768-4776页

作者：鲁婷婷王玲田燕迟明艳黄勇巩仔鹏郑林何峰贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心国家苗药工程技术研究中心贵州贵阳550004

该研究建立了一种超高液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,测定给予舒肝宁注射液或黄芩提取物后5种指标成分在大鼠组织器官中的含量,研究二者经时动态变化规律和差异,探讨黄芩配伍前后对5种成分组织分布的影响。大鼠尾静脉注射舒肝... 详细信息

该研究建立了一种超高液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,测定给予舒肝宁注射液或黄芩提取物后5种指标成分在大鼠组织器官中的含量,研究二者经时动态变化规律和差异,探讨黄芩配伍前后对5种成分组织分布的影响。大鼠尾静脉注射舒肝宁注射液或黄芩提取物后,分别于0.17、0.5、1、2 h 4个时间点采集心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、脑组织样品,采用UPLC-MS/MS检测5种指标成分(黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、野黄芩苷)在2组大鼠组织中的浓度。结果表明建立的UPLC-MS/MS测定方法简便快速且专属稳定。组织分布结果表明,给予舒肝宁注射液和黄芩提取物后,5种指标成分在体内分布广泛且存在一定差异,2组中黄芩苷、黄芩素和千层纸素A在肾和肝组织、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在肾和脑组织以及野黄芩苷在肾和心组织中分布较多。配伍组方后在心、肝、肾、肠组织中黄芩苷和肝、肾组织中黄芩素以及肺组织中千层纸素A含量均显著增加。研究表明,舒肝宁注射液与黄芩提取物中的5种成分在大鼠体内分布广泛且无蓄积情况,黄芩配伍组方后可增加有效成分在大鼠体内的分布,为从体内过程角度阐释舒肝宁注射液的配伍合理性提供依据。

关键词：舒肝宁注射液黄芩提取物 UPLC-MS/MS 组织分布

UPLC-MS/MS法同时测定阿胶中18种核苷、游离氨基酸的含量

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中成药 2024年第7期46卷 2140-2146页

作者：杨帅郑林迟明艳巩仔鹏李月婷魏茂陈黄勇贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵阳新天药业股份有限公司贵州贵阳550018

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定阿胶中Asp、Guad、Adeno、Arg、Ade、Cyti、Phe、Leu、Ile、Glu、Ser、Gln、Gly、Ala、Hyp、Thr、Pro、Lys的含量。方法分析采用WatersBEHC18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm);流动相乙腈(含0.1%甲酸)-水;体积流量0.35mL/min;柱温45℃;电喷雾离子源;正离子扫描;多反应监测模式。再采用层次聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘判别分析进行化学模式识别。结果18种核苷、游离氨基酸在各自范围内线性关系良好(r≥0.9990),平均加样回收率98.0%~104.9%,RSD1.6%~4.9%。17批样品聚为2类,2种主成分累积方差贡献率为60.75%,Leu、Phe、Ade和Guad是潜在指标成分。结论该方法稳定可靠,可用于阿胶的质量控制。

关键词：阿胶核苷游离氨基酸含量测定 UPLC-MS/MS 化学模式识别