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miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞及人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的影响

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中国组织工程研究 2024年第13期28卷 2017-2023页

作者：袁媛园潘露周绍兰梁燕许键炜徐文贵州医科大学附属口腔医院贵州省贵阳市550004 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004

背景:microRNA-26b(miR-26b)对干细胞的多种功能具有重要的调节作用,但其对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞生物学特性的影响尚不清楚。目的:探讨miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的... 详细信息

背景:microRNA-26b(miR-26b)对干细胞的多种功能具有重要的调节作用,但其对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞生物学特性的影响尚不清楚。目的:探讨miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的影响。方法:培养及鉴定人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞;用miR-26 mimics(实验组)和miRNAs mimics对照(对照组)转染2种细胞,构建过表达模型用于后续实验。CCK-8法检测过表达miR-26b细胞的增殖能力;Transwell和划痕实验分析过表达miR-26b细胞的迁移能力;RT-qPCR法检测过表达miR-26b细胞成骨诱导后成骨标志物的表达。结果与结论:①转染miR-26b模拟物可提高2种细胞中miR-26b表达量,促进人脱落乳牙牙髓干细胞增殖,对人脐带间充质干细胞的扩增无明显影响;②相较于对照组,2种细胞过表达miR-26b后迁移能力增强;③miR-26b在2种细胞成骨分化过程中表达水平降低;④相较于对照组,2种细胞过表达miR-26b后,成骨相关基因骨钙素、骨桥素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平均下调。结果表明,过表达miR-26b能促进人脱落乳牙牙髓干细胞增殖、迁移,抑制其成骨分化;也促进人脐带间充质干细胞迁移,抑制其成骨分化,但对其增殖无明显影响。

关键词： miR-26b 人脱落乳牙牙髓干细胞人脐带间充质干细胞迁移增殖成骨分化

Tet-On系统中多西环素对MBD1诱导表达的调控研究

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生物技术通报 2024年

作者：卢茜袁月李丹张鹏基础医学院生物学教研室组织工程与干细胞实验中心功能核酸生物药研究重点实验室贵州医科大学

【目的】构建甲基结合蛋白1(MBD1)的Tet-On可诱导表达质粒和293T细胞，探讨多西环素（Dox）对MBD1表达的影响，并通过分析细胞中质粒启动子CpG甲基化水平反映MBD1调控机制。【方法】使用MBD1引物扩增293T的MBD1表达序列，将其连接于Tet... 详细信息

【目的】构建甲基结合蛋白1(MBD1)的Tet-On可诱导表达质粒和293T细胞，探讨多西环素（Dox）对MBD1表达的影响，并通过分析细胞中质粒启动子CpG甲基化水平反映MBD1调控机制。【方法】使用MBD1引物扩增293T的MBD1表达序列，将其连接于Tet-On诱导表达质粒的多克隆位点；将构建成功的质粒用电转染的方法转入MBD1 KO 293T，使用荧光显微镜及Western blot验证获得的MBD1恢复的293T(MBD1 RE 293T)；使用不同浓度Dox诱导MBD1表达，利用Western blot检测单克隆细胞中MBD1的表达情况；使用同一浓度Dox诱导MBD1表达，在12、24、48、96、144、192 h收集细胞，利用Western blot检测细胞中MBD1的表达情况；使用亚硫酸氢盐测序方法检测Dox诱导后细胞内可诱导质粒启动子CpG甲基化情况。【结果】成功构建Tet-On诱导表达MBD1质粒；和未诱导细胞相比，Dox诱导后转染细胞MBD1蛋白重新表达；随着Dox浓度的升高细胞中MBD1的表达逐渐增多；相同浓度Dox诱导后，从12-96 h细胞内MBD1的表达逐渐升高，但144 h后MBD1表达下降；细胞内质粒启动子CpG甲基化检测显示，与96 h相比，144和192 h质粒启动子甲基化水平逐渐升高；在诱导144 h加入甲基转移酶抑制剂地西他滨（Decitabine）后，质粒启动子甲基化水平降低，MBD1表达升高。【结论】Tet-On可诱导细胞中重新表达MBD1蛋白，并且表达量与Dox浓度正相关，但长时间诱导后细胞内质粒CpG甲基化水平升高，影响细胞中MBD1的表达。

关键词： Tet-On MBD1 MBD1ΔCXXC3 甲基化 HEK293T

复合压电薄膜生物相容性及电输出性能与兔骨髓间充质干细胞的成骨分化

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中国组织工程研究 2024年第13期28卷 1969-1975页

作者：王桢许顺恩汤耿罗四维滕建祥谢孟利何佳林叶川贵州医科大学附属医院骨科贵州省贵阳市550004 贵州医科大学贵州省贵阳市550004 组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 贵州师范大学机械与电气工程学院贵州省贵阳市550025

背景:可控的压电效应能促进组织的再生与修复,压电材料在负重组织工程领域应用广泛。目的:制备一种可促进骨组织再生的压电薄膜材料,探究其结构表征、电输出性能、生物相容性及其电输出对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:以聚3... 详细信息

背景:可控的压电效应能促进组织的再生与修复,压电材料在负重组织工程领域应用广泛。目的:制备一种可促进骨组织再生的压电薄膜材料,探究其结构表征、电输出性能、生物相容性及其电输出对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:以聚3-羟基丁酸酯4-羟基丁酸酯(poly-3-hydroxybutyrateco/4-hydroxybutyrate,P34HB)为原料,加入质量比分别为0%,5%,10%,15%,20%的锡钛酸钡钙(Ba0.94Ca0.06Sn0.08Ti0.92O3,BCST)粉末,以二氯甲烷为溶剂,通过真空干燥方法制得150-200μm厚度BCST/P34HB压电薄膜材料,经油浴极化后,检测其表面形貌、物相组成、压电系数和开路电压,以及BCST/P34HB在110 Hz、0.25 N力幅度下的电输出对兔骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响。结果与结论:①扫描电镜、X射线衍射、水接触角、压电系数检测及电输出性能测试显示,当BCST质量比增加至20%时,BCST/P34HB压电薄膜有着良好的压电性能(d33=5.9 pC/N)及电输出性能(180 mV),更接近500 mV的合适电刺激成骨范围;②活死染色显示,与兔骨髓间充质干细胞共培养第1天,15%组与20%组显示出较少的红色荧光;当培养到第5天时,各组绿色荧光数量较第1天明显增多,10%组、15%组和20%组未见红色荧光,仅0%组和5%组有少量的红色荧光;③阿尔玛蓝染色显示,与兔骨髓间充质干细胞共培养第1,3,5天,随着时间的增加,各组细胞都呈现出增长的趋势,当培养到第5天时,20%组的细胞量明显高于0%组(P干细胞成骨分化能力。

关键词：骨组织工程 P34HB 压电材料薄膜材料成骨分化

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彗星实验方法的优化及影响因素的分析

安徽医科大学学报 2024年第2期59卷 219-223页

作者：范南英张鹏贵州医科大学基础医学院生物学教研室贵阳550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550025

目的为了更有效地检测细胞DNA损伤,对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法以传统碱性彗星实验为基础,对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为DNA损伤诱导剂... 详细信息

目的为了更有效地检测细胞DNA损伤,对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法以传统碱性彗星实验为基础,对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为DNA损伤诱导剂诱导HL-60细胞作为该实验的阳性对照。结果优化后的实验结果显示,制胶方法由三步法进步为两步法,以PBS为琼脂糖溶剂,0.8%正常熔点琼脂糖制备底层胶,0.7%低熔点琼脂糖与细胞悬液混合作为第二层胶,制胶效果好,操作更简单省时,较好地解决了脱胶问题。裂解1 h,1 V/cm电压电泳,获得了具有代表性的彗星图像,结果易于判读,能有效避免假阳性结果。并对不同浓度H_(2)O_(2)诱导的HL-60细胞DNA损伤情况进行比较,成功建立了彗星实验的阳性对照。结论与传统方法相比,优化后的彗星实验方法成本更低,更简单、快速、准确,重复性也更好,能够快速检测细胞中的DNA损伤。

关键词：彗星实验 HL-60 DNA损伤模型

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稀花八角枫的化学成分研究

中国中药杂志 2024年第3期49卷 735-743页

作者：金倩倩杨婷朱敏汇张美秦汪洋潘洁王永林李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

对稀花八角枫70%乙醇提取物化学成分进行研究。采用D-101大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱技术对稀花八角枫70%乙醇提取物的化学成分进行分离纯化,从中分离鉴定出19个化合物,分别为4-环己烯-1α,2α,3α-三醇-1-O-β-D-葡萄糖苷... 详细信息

对稀花八角枫70%乙醇提取物化学成分进行研究。采用D-101大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱技术对稀花八角枫70%乙醇提取物的化学成分进行分离纯化,从中分离鉴定出19个化合物,分别为4-环己烯-1α,2α,3α-三醇-1-O-β-D-葡萄糖苷(1)、1β,4α,6α,13-tetrahydroxy-eudesm-11(12)-ene(2)、蔗糖(3)、1′-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1″→6′)-β-D-glucopyranoside(4)、双(2-乙基己基)苯-1,2-二羧酸酯(5)、(Z)-10-二十碳烯酸(6)、di-O-methylcrenatin(7)、甲基-α-D-呋喃果糖苷(8)、β-胡萝卜苷(9)、丁香酸(10)、香草酸(11)、二十八烷醇(12)、isoarborinol(13),2,7-dihydroxy-6-methyl-4-(1-methylethyl)-1-naphthalenecarboxylate(14)、香草醛(15)、松柏醛(16)、9(11)-去氢麦角甾醇过氧化物(17)、5α,8α-过氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(18)、β-谷甾醇(19)。其中化合物1和2为新化合物,化合物5~11、13、15~18为首次从八角枫属中分离得到。通过脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型对化合物1进行了抗炎活性测定,结果显示,化合物1对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成具有一定的抑制作用,其抑制率为54.57%。

关键词：稀花八角枫化学成分分离鉴定

机器学习法联合免疫细胞浸润分析铁死亡在慢性髓系白血病中的作用机制

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生物技术 2024年

作者：冯小云秦玉凤袁月李丹张鹏贵州医科大学组织工程与干细胞中心贵州医科大学生物学教研室贵州医科大学附属口腔医院

[目的]基于机器学习法筛选慢性髓系白血病(CML)中铁死亡关键基因,分析关键基因在CML中的潜在作用机制。[方法]将GEO数据库中的两个CML数据集(GSE5550和GSE24739)进行整合并消除批次效应;采用“LIMMA”R包在25例CML和16例对照样本中对铁... 详细信息

[目的]基于机器学习法筛选慢性髓系白血病(CML)中铁死亡关键基因,分析关键基因在CML中的潜在作用机制。[方法]将GEO数据库中的两个CML数据集(GSE5550和GSE24739)进行整合并消除批次效应;采用“LIMMA”R包在25例CML和16例对照样本中对铁死亡基因集进行差异分析;使用“ClusterProfiler”R包对差异基因进行GO和KEGG富集分析;使用SVM-RFE和LASSO回归两种筛选关键基因;通过Cytoscape软件构建关键基因MiRNA-TFm RNA调控网络;使用CIBERSORT算法分析CML中22种免疫细胞组分的组成模式以及关键基因与免疫细胞相关性。[结果]差异分析共获得出34个铁死亡差异基因,34个差异基因共富集出29条通路和388个GO条目。机器学习鉴定AKR1C1、DUSP1、FADS2和SLC1A4是CML的关键基因,并通过受试者工作特征曲线(ROC)验证。MiRNA-TFm RNA调控网络显示多个部分MiRNAs可以同时调控铁死亡特征基因,SLC1A4主要调控CLI3、CLI2、PCBP2、BRCA2、SP2和ZBTB17六个转录因子,而其他转录因子则通过MiRNA调控。免疫细胞浸润分析显示,SLC1A4与T滤泡辅助细胞静息相关。FADS2与B祖细胞、B记忆细胞、CD8 T细胞、T滤泡辅助细胞、NK静息细胞、巨噬细胞M0、树突状细胞和中性粒细胞相关。DUSP1与B记忆细胞静息相关。[结论] CML中4个铁死亡关键基因AKR1C1、DUSP1、FADS2和SLC1A4可作为CML的潜在生物标志物,其与免疫细胞浸润的关联可能为理解CML的发展提供新的见解。

关键词：慢性髓系白血病铁死亡机器学习法免疫细胞浸润 MiRNA-TF-m RNA调控网络

基于“蜘蛛网”模式辨析艾迪注射液抗肿瘤和心脏毒性保护作用的质量标志物研究

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中国中药杂志 2024年第8期49卷 2088-2105页

作者：王开靓蔡英刘春花孙佳潘洁李勇军陆苑贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 国家苗药工程技术研究中心贵州贵阳550004

在肿瘤治疗中,中药制剂发挥减毒和抗肿瘤作用的地位同等重要。国内外尚无综合“辨识”多种治疗作用中药制剂质量标志物(Q-marker)的报道。因此笔者以艾迪注射液(Aidi Injection,AD)为例,基于“蜘蛛网”模式综合辨识AD抗肿瘤作用和心脏... 详细信息

在肿瘤治疗中,中药制剂发挥减毒和抗肿瘤作用的地位同等重要。国内外尚无综合“辨识”多种治疗作用中药制剂质量标志物(Q-marker)的报道。因此笔者以艾迪注射液(Aidi Injection,AD)为例,基于“蜘蛛网”模式综合辨识AD抗肿瘤作用和心脏保护作用的质量标志物。首先基于可测性原则,对方中化学成分进行定性分析,再对方中含量较高且可定量测定的成分进行定量分析,作为可测性评价指标;基于稳定性原则,考察光照和温度因素对AD各成分含量的影响,作为稳定性的评价指标;基于配伍原则,依据其原药材在复方中的君、臣、佐、使配伍规律归属化合物;基于有效性原则,评价候选质量标志物的抗肿瘤、抗血管生成活性及其分别协同阿霉素(doxorubicin,DOX)抗肿瘤、抗血管生成和降低心肌毒性的活性,作为有效性的评价指标。建立“配伍-含量-稳定性-抗肿瘤细胞活性-协同DOX抗肿瘤活性-抗血管生成活性-协同DOX抗血管生成活性”七维度蜘蛛网和“配伍-含量-稳定性-降低DOX心脏毒性作用”四维度蜘蛛网,综合辨析AD抗肿瘤和心脏毒性保护作用的质量标志物。结果筛选出12个成分作为AD的质量标志物,其中斑蝥素、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、黄芪皂苷Ⅱ、隐绿原酸和人参皂苷Rg_(2)为AD抗肿瘤的质量标志物,人参皂苷Rd、异嗪皮啶、紫丁香苷、刺五加苷E、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、王二酸作为AD心脏毒性保护作用的质量标志物。综合辨识出的12个质量标志物可覆盖全方4味药材,兼顾抗肿瘤和心脏毒性保护作用。这为AD的质量控制提供了科学依据,为辨识2种重要作用的中药制剂全面合理的质量标志物提供了有效方法。

关键词：艾迪注射液抗肿瘤作用心脏毒性保护作用质量标志物质量控制蜘蛛网模式

急性髓系白血病细胞条件培养液对间充质干细胞的生物学影响

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中国组织工程研究 2024年第31期28卷 4995-5002页

作者：张弛可王飞清吴丹杨波成金阳陈娟唐东昕刘洋李艳菊贵州医科大学贵州中医药大学第一附属医院贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州医科大学附属医院血液科

背景：目前，关于急性髓系白血病骨髓微环境中的骨髓间充质干细胞生物学功能及分子改变尚不完全清楚。目的：综合生物信息学和细胞实验探究急性髓系白血病患者来源骨髓间充质干细胞的生物学功能改变，并探讨急性髓系白血病细胞条件培养... 详细信息

背景：目前，关于急性髓系白血病骨髓微环境中的骨髓间充质干细胞生物学功能及分子改变尚不完全清楚。目的：综合生物信息学和细胞实验探究急性髓系白血病患者来源骨髓间充质干细胞的生物学功能改变，并探讨急性髓系白血病细胞条件培养液在其中的作用。方法：从GEO数据集中筛选差异基因进行富集分析，并构建蛋白质互作网络和获取Hub基因。培养急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞，使用急性髓系白血病细胞条件培养液处理健康供者的骨髓间充质干细胞，对各组细胞进行成脂诱导分化、成骨诱导分化、β-半乳糖苷酶染色、细胞周期检测和Hub基因的验证。结果与结论：(1)从GSE84881中获取急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞基因表达数据，筛选出184个上调基因和140个下调基因。(2)富集的生物学功能主要包括细胞周期、脂肪细胞分化、细胞代谢过程和MYC通路。根据Degree算法筛选出上调的10个Hub基因和下调的10个Hub基因。(3)通过体外细胞实验发现，与健康供者的骨髓间充质干细胞相比，急性髓系白血病患者骨髓间充质干细胞表面抗原未发生改变，但其成脂分化能力增强、成骨分化能力减弱、β-半乳糖苷酶阳性细胞数增多、细胞形态改变、细胞周期停滞、LGALS3表达增加以及MYC表达降低。经急性髓系白血病细胞条件培养液培养后，健康供者骨髓间充质干细胞出现相似改变。(4)结果表明，急性髓系白血病患者骨髓微环境中的间充质干细胞生物学功能发生改变，这为骨髓间充质干细胞与肿瘤的交互作用提供新的见解。

关键词：急性髓系白血病骨髓间充质干细胞条件培养液 GEO数据库生物信息学

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生物活性材料与牙周组织再生

生物工程学报 2024年第2期40卷 378-390页

作者：陈紫琴罗岚骆凯许雄程福建医科大学附属口腔医院福建医科大学口腔组织工程研究中心福建省高校口腔医学重点实验室福建省口腔疾病研究重点实验室福建福州350002

生物活性材料是一类经由材料表面或界面产生特殊生物或化学反应,从而影响组织和材料间的结合、诱发细胞活性或引导组织再生的生物材料。近年来,生物活性材料已广泛应用于牙周组织再生。本文对不同类型生物活性材料的特点及其在牙周组织... 详细信息

生物活性材料是一类经由材料表面或界面产生特殊生物或化学反应,从而影响组织和材料间的结合、诱发细胞活性或引导组织再生的生物材料。近年来,生物活性材料已广泛应用于牙周组织再生。本文对不同类型生物活性材料的特点及其在牙周组织再生中的作用进行综述,为推动其在牙周组织再生领域中的应用提供参考。

关键词：生物活性材料牙周组织再生组织工程