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家蝇AMP17基因的克隆及其分子特性和表达模式研究

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中国病原生物学杂志 2017年第11期12卷 1079-1083,1098页

作者：陶如玉李妍马慧玲付萍吴建伟国果贵州医科大学第二附属医院检验科贵州凯里556000 贵州医科大学基础医学院

目的克隆家蝇AMP17基因并进行、序列分析,对其时空表达模式进行初步探索。方法从微生物诱导的家蝇转录组数据库中筛选差异高表达唾液腺蛋白AMP17基因。以该基因的cDNA文库质粒为模板进行PCR扩增,运用生物信息学方法对其编码蛋白进行结... 详细信息

目的克隆家蝇AMP17基因并进行、序列分析,对其时空表达模式进行初步探索。方法从微生物诱导的家蝇转录组数据库中筛选差异高表达唾液腺蛋白AMP17基因。以该基因的cDNA文库质粒为模板进行PCR扩增,运用生物信息学方法对其编码蛋白进行结构与功能分析。取家蝇不同生活史时期标本(卵,各龄幼虫,蛹,雄雌成虫)及3龄幼虫不同组织部位(体壁、气管、唾液腺、脂肪体、马氏管及中肠)标本,采用实时荧光定量PCR检测AMP17基因表达情况。结果 PCR扩增得到约495bp的特异性AMP17基因片段。AMP17基因ORF全长495bp,编码164个氨基酸,理论分子质量单位17.4×103,等电点为6.09,整个多肽链表现为亲水性。该蛋白属于分泌蛋白,主要分布在细胞外(包括细胞壁)。磷酸化位点分析该蛋白,有5个丝氨酸、3个苏氨酸、1个色氨酸可能成为蛋白激酶磷酸化位点。其二级结构中主要以α-螺旋,不规则卷曲和延伸链为蛋白最大量的结构元件。时空表达谱显示,家蝇不同发育时期中,以卵期作为参照,AMP17基因在3龄及雄成虫时期表达量高,表达水平排列顺序为3龄幼虫>雄成虫>1龄幼虫>雌成虫>蛹期>2龄幼虫>卵,3龄幼虫时期表达量比卵期上调了20 320.98倍(P<0.01);雄成虫上调了10 936.37倍(P<0.01)。以体壁作为参照,AMP17基因在家蝇3龄幼虫不同组织的表达以马氏管表达最高,比体壁上调了2.40倍(P<0.05);其次为唾液腺,比体壁上调了1.31倍(P<0.01)。结论成功克隆了家蝇AMP17基因并初步探索了其时空表达模式,为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：家蝇 AMP17基因生物信息学分析表达模式

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现代预防医学 2023年第12期50卷 2227-2232页

作者：黄昶煜东朱丽英李程程许永劼杨婷婷韦思佳李兴潘卫贵州医科大学附属医院产前诊断中心贵州医科大学医学检验学院贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州中医药大学

目的研究大黄素减少非酒精性脂肪肝病细胞模型脂滴蓄积的可能机制。方法 GEO数据库比较人肝组织中伊洛魁族同源盒基因5(Iroquois homeobox 5,IRX5)基因的mRNA表达量；4周龄db/m小鼠与db/db小鼠经12周维持饲料饲养后取肝组织，H&E实验... 详细信息

目的研究大黄素减少非酒精性脂肪肝病细胞模型脂滴蓄积的可能机制。方法 GEO数据库比较人肝组织中伊洛魁族同源盒基因5(Iroquois homeobox 5,IRX5)基因的mRNA表达量；4周龄db/m小鼠与db/db小鼠经12周维持饲料饲养后取肝组织，H&E实验观察小鼠肝组织病变；Western Blot实验和免疫组化实验观察小鼠肝组织IRX5表达量；大黄素干预游离脂肪酸诱导的HepG2非酒精性脂肪肝细胞模型，油红O染色观察细胞脂滴蓄积程度，并使用Image-Pro Plus 6.0软件计算阳性面积比；Western Blot实验检测HepG2细胞IRX5,固醇调节元件结合转录因子1(Sterol Regulatory Element Binding Transcription Factor 1,SREBF-1),脂肪酸合成酶(Fatty Acid Synthase, FASN),乙酰辅酶A羧化酶1(Acetyl-CoA Carboxylase 1 Antibody, ACC1)的表达；肝细胞过表达IRX5的同时大黄素处理，油红O染色观察细胞脂滴蓄积程度，Image-Pro Plus 6.0软件计算阳性面积比，Western Blot实验检测IRX5及SREBF-1,FASN,ACC1表达量。结果人脂肪肝组织中IRX5基因的mRNA表达量高于健康肝组织(Z=-2.36,P<0.05);12周后，db/db小鼠出现明显肝脂肪空泡样变，伴随IRX5表达量升高(t=-8.17,P<0.05);大黄素干预后，脂肪酸诱导的HepG2细胞脂滴蓄积下降(d-BSA对照培养基状态下t=45.69,P<0.05;400μM油酸培养基状态下t=16.38,P<0.05;500μM游离脂肪酸培养基状态下t=45.33,P<0.05;),下调了IRX5及脂质新生相关因子SREBF-1,FASN,ACC1(使用40μM大黄素干预时，对于SREBF-1:t=0.26,P=0.807,对于FASN:t=5.73,P<0.05,对于ACC1:t=13.62,P<0.05;使用60μM大黄素干预时，SREBF-1:t=4.07,P<0.05,对于FASN:t=14.49,P<0.05,对于ACC1:t=33.34,P<0.05;使用80μM大黄素干预时，SREBF-1:t=16.75,P<0.05,对于FASN:t=23.14,P<0.05,对于ACC1:t=41.49,P<0.05);而过表达IRX5部分逆转了大黄素的降脂及大黄素对脂质新生相关因子的抑制作用。结论 IRX5在脂肪肝组织中表达增高，大黄素可能通过抑制IRX5蛋白水平，下调脂质新生相关因子表达，减少游离脂肪酸诱导的脂肪肝细胞模型脂滴蓄积。

关键词： IRX5 非酒精性脂肪肝大黄素脂肪酸代谢

缺氧微环境下HIF-1α通过PD-L1调控肝癌恶性生物学行为和上皮间质转化的机制研究

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安徽医药 2025年第1期29卷 189-195,F0003页

作者：李昂查文章轩福明王宏伟周勇徐州医科大学盐城临床学院江苏盐城224005 江苏大学盐城临床医学院江苏盐城224005

目的探讨缺氧微环境下,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通过程序性死亡配体1(PD-L1)调控肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的机制。方法选取2016年9月至2018年9月在徐州医科大学附属盐城临床学院确诊治疗的57例肝癌病人作为研究对象。... 详细信息

目的探讨缺氧微环境下,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通过程序性死亡配体1(PD-L1)调控肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的机制。方法选取2016年9月至2018年9月在徐州医科大学附属盐城临床学院确诊治疗的57例肝癌病人作为研究对象。免疫组织化学检测HIF-1α、PD-L1的表达水平,统计学分析HIF-1α、PD-L1与肝癌病人临床病理及总生存期之间的关系。通过氯化钴建立肝癌细胞缺氧模型,用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测不同浓度氯化钴作用下细胞存活率;划痕实验、Transwell实验检测缺氧细胞及亲本细胞迁移、侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测缺氧细胞及亲本细胞HIF-1α、PD-L1蛋白表达水平。设计针对HIF-1α的siRNA(小干扰RNA,small interfering RNA)及PD-L1质粒,脂质体转染肝癌细胞氯化钴缺氧细胞,划痕实验、Transwell侵袭实验检测转染前后细胞迁移、侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测转染前后细胞HIF-1α、PD-L1、上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,HIF-1α、PD-L1在肝癌组织中高表达(P检验方法显示:HIF-1α、PD-L1高表达组病人的总生存期较低表达组明显降低(P<0.05)。与常氧细胞相比,缺氧细胞穿透小室的细胞数显著增加[(429.33±12.01)个比(244.3±8.14)个,t=−22.08,P<0.001],氯化钴缺氧肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力增强,HIF-1α、PD-L1表达水平明显增加(P<0.05)。与亲本细胞相比,HIF-1αsiRNA作用后肝癌缺氧细胞增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),且PD-L1、波形蛋白(Vimentin)及扭曲相关蛋白1(Twist1)蛋白表达明显降低,而上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白表达明显增加(P<0.05);HIF-1αsiRNA和PD-L1质粒共转染后,可逆转HIF-1αsiRNA介导的侵袭、迁移能力的改变及EMT相关指标的改变。结论HIF-1α、PD-L1在肝癌中高表达,两者高表达预示肝癌病人预后较差。缺氧微环境下,HIF-1α可通过PD-L1调控肝癌恶性生物学行为及上皮间质转化进程。

关键词：癌,肝细胞缺氧微环境缺氧诱导因子-1α 程序性死亡受体-配体1 上皮间质转化

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吴茱萸碱作用mTOR信号通路引起胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

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中国中药杂志 2015年第16期40卷 3262-3266页

作者：刘鑫杨丽毕瑩王良宏黄海贵州省人民医院检验科贵州贵阳550004 贵州医科大学医学检验学院临床生化教研室贵州贵阳550004

吴茱萸碱(evodiamine)是中药吴茱萸最主要的具有抗肿瘤活性的生物碱之一,研究初步探讨吴茱萸碱作用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用机制,为其抗肿瘤机制的探索及胃癌临床治疗奠定基础。采用MTT法... 详细信息

吴茱萸碱(evodiamine)是中药吴茱萸最主要的具有抗肿瘤活性的生物碱之一,研究初步探讨吴茱萸碱作用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用机制,为其抗肿瘤机制的探索及胃癌临床治疗奠定基础。采用MTT法观察吴茱萸碱单独作用对SGC-7901细胞及对人外周血单个核细胞(PBMCs)的细胞毒效应。Real-time PCR,Western blot分别检验吴茱萸碱单独或联合胱天蛋白酶抑制剂(z-VAD-fmk)作用后,m TOR,p70S6K和4EBP1基因表达以及m TOR和p-m TOR蛋白表达。结果表明,吴茱萸碱抑制SGC-7901细胞增殖存在时间剂量依赖性,且对人PBMCs无细胞毒作用。吴茱萸碱及联合z-VAD-fmk分别作用后,细胞变圆,漂浮于培养基中;与对照组比较,2种处理方法均能抑制m TOR,p70S6K和4EBP1基因表达,存在显著性差异,且与吴茱萸碱单独作用比较,联合z-VAD-fmk作用对基因表达抑制率加强;Western blot结果显示吴茱萸碱可以抑制m TOR和p-m TOR蛋白的表达无论是否有z-VAD-fmk的参与,且z-VAD-fmk阻断胱天蛋白酶作用后,抑制率增强。综上说明吴茱萸碱可能通过m TOR信号通路促进胃癌SGC-7901细胞凋亡。

关键词：吴茱萸碱 mTOR信号途径胃癌SGC-7901细胞细胞凋亡

农业社会化服务对长江经济带农业生态效率的影响——基于劳动力和资本要素配置视角

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华东经济管理 2025年第1期39卷 21-30页

作者：陈卫洪于晴贵州大学经济学院贵州贵阳550000

农业社会化服务是实现农业生产绿色转型的重要途径。文章基于2009—2021年长江经济带110个地级市面板数据对农业生态效率进行测算,并采用固定效应模型、中介效应模型和门槛效应模型探究农业社会化服务对农业生态效率的影响及内在机制。... 详细信息

农业社会化服务是实现农业生产绿色转型的重要途径。文章基于2009—2021年长江经济带110个地级市面板数据对农业生态效率进行测算,并采用固定效应模型、中介效应模型和门槛效应模型探究农业社会化服务对农业生态效率的影响及内在机制。研究发现:长江经济带农业生态效率总体上呈“U”型变化趋势,上游农业生态效率高于中游、下游及总体区域;农业社会化服务对农业生态效率具有显著的促进作用,且可以通过优化劳动力和资本要素配置间接提升农业生态效率。门槛检验进一步表明,农业社会化服务对农业生态效率的影响呈现边际效应递增的非线性特征。由此,长江经济带应加快完善农业社会化服务体系,以促进农业生态效率提升。

关键词：农业社会化服务劳动力资本要素配置农业生态效率

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广西乡镇卫生院住院患者多重慢病共患模式、住院服务利用及相关影响因素的研究

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中国全科医学 2025年

作者：奚谦申颖赵璨纪淑妤彭厚瑄覃金琼王璇郑艳萍左延莉广西医科大学第一附属医院全科医学科江南区延安镇卫生院广西医科大学全科医学院龙圩区新地镇卫生院马山县周鹿中心卫生院覃塘区东龙中心卫生院博白县东平中心卫生院良庆区那陈镇卫生院

背景目前，我国农村基层医疗机构住院患者多重慢病流行现状、住院服务利用及相关影响因素仍不明，不利于农村居民多重慢病的有效防治。目的本研究旨在调查广西乡镇卫生院住院患者多重慢病的共患模式、住院服务利用情况及相关影响因素... 详细信息

背景目前，我国农村基层医疗机构住院患者多重慢病流行现状、住院服务利用及相关影响因素仍不明，不利于农村居民多重慢病的有效防治。目的本研究旨在调查广西乡镇卫生院住院患者多重慢病的共患模式、住院服务利用情况及相关影响因素，为深入了解农村基层医疗机构住院诊疗所面临的多重慢病现况及改善相应的医疗卫生服务质量提供流行病学依据。方法采用多阶段分层抽样法与整群抽样法，随机抽取广西南宁市、梧州市、柳州市、玉林市和贵港市5市中10家乡镇卫生院，通过住院系统和慢性病管理系统收集以上10家乡镇卫生院，从2021年1月—2023年6月期间去识别化的所有多重慢病住院患者病历资料。采用Kruskal-Wallis H检验、 Mann-Whitney U检验和多分类Logistic回归分析等统计学方法，探查广西乡镇卫生院多重慢病住院患者人口学特征、多重慢病的患病率、共患慢病数量、共患模式、住院次数以及影响共患慢病病种数和住院次数的因素。结果最终纳入9 330例多重慢病住院患者，平均年龄为（68.1±11.8）岁，多重慢病患病率为31.24%(9 330/29 865)。共患慢病病种数以2种居多（53.22%），其次为3种（28.76%）、4种（12.92%）及≥5种（5.10%）。高血压是最常见的共患慢病，高血压、慢性颈腰椎病、慢性胃肠道疾病、脑卒中、糖尿病、高脂血症及慢性肺病的组合是患2种、3种、4种及≥5种慢病中最高发的共患模式；患2种、3种、4种及≥5种慢病的住院次数中位数波动于1～3次，患2种、3种及4种慢病中患病率前10位共患模式的住院次数之间有显著差异。增龄、高BMI、女性、正在吸烟或戒烟、饮酒、医保类型、少数民族、婚姻状况与共患慢病数量增加相关（P<0.05）；增龄、女性、少数民族、婚姻状况、低文化程度、正在吸烟或戒烟、饮酒、共患慢病数量、医保类型与住院次数增多相关（P<0.05）。结论广西乡镇卫生院住院患者多重慢病患病率较高；高血压是最常见的共患慢病，其与慢性颈腰椎病、慢性胃肠道疾病、脑卒中、糖尿病、高脂血症及慢性肺病的多元组合构成患病率最高的共患模式。共患慢病数量和住院服务利用的影响因素复杂多样，应采取多层面的防治策略和措施应对农村基层医疗机构所面临的多重慢病的挑战。

关键词：慢性病共病乡镇卫生院共患慢病数量共患模式住院服务利用影响因素分析

强直性脊柱炎患者外周血CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-调节性T细胞水平变化及临床意义

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中国免疫学杂志 2020年第13期36卷 1625-1630页

作者：张宇马莉吴青青沈雪贵州医科大学医学检验学院贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵阳550004

目的:探讨CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:选取2017年9月~2019年3月于我院初次就诊的AS患者77例(非活动期47例、活动期30例)及健康对照者59例。流式细胞... 详细信息

目的:探讨CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:选取2017年9月~2019年3月于我院初次就诊的AS患者77例(非活动期47例、活动期30例)及健康对照者59例。流式细胞术(FCM)检测外周血CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-Treg比例,流式细胞微球芯片捕获技术(CBA)检测血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-17A水平,分析Treg细胞与AS疾病活动度和临床炎症活动指标的相关性。结果:AS活动组CD4^+CD25^high CD127^low Treg细胞比例低于AS非活动组和正常对照组(P0.05)。AS活动组血清IFN-γ水平显著高于AS非活动组和健康对照组(P0.05)。AS患者CD4^+CD25^high CD127^low Treg细胞比例与BASDAI、ESR、Hs-CRP呈负相关(r=0.654、0.517、0.577,P<0.01)。CD8^+CD28+Tc细胞比例及CD8^+CD28+/CD8^+CD28^-与BASDAI呈正相关(r=0.276、0.246,P<0.05)。结论:降低AS患者外周血CD4^+CD25^high CD127^low和CD8^+CD28^-Treg细胞比例、提高炎症细胞因子水平可能在AS疾病发生发展中起重要作用。

关键词：强直性脊柱炎调节性T细胞细胞因子活动度

慢性鼻窦炎多重耐药菌感染危险因素Logistic回归分析

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中国医学科学院学报 2018年第6期40卷 803-808页

作者：谢朝云陈东陈应强熊芸孙静杨忠玲贵州医科大学第三附属医院感染管理科贵州都匀558000 贵州医科大学第三附属医院耳鼻喉科贵州都匀558000 贵州医科大学第三附属医院感染科贵州都匀558000 贵州医科大学第三附属医院检验科贵州都匀558000

目的分析慢性鼻窦炎患者多重耐药菌感染的相关危险因素,为临床防控提供参考。方法收集2010年1月至2017年1月就诊并采集标本做细菌培养与药敏试验的慢性鼻窦炎患者221例临床资料,对细菌培养是否检出多重耐药菌进行危险因素分析。结果单... 详细信息

目的分析慢性鼻窦炎患者多重耐药菌感染的相关危险因素,为临床防控提供参考。方法收集2010年1月至2017年1月就诊并采集标本做细菌培养与药敏试验的慢性鼻窦炎患者221例临床资料,对细菌培养是否检出多重耐药菌进行危险因素分析。结果单因素分析显示患者联合使用抗菌药物(≥3种)、疼痛视觉模拟评分(高)、Lund-Kennedy评分(高)、病程(> 5年)、出现急性感染期频次(≥3次/年)、急性感染期持续时间(> 7 d)、反复上呼吸道感染(> 3次/年)、慢性中耳炎、吸烟史、变态反应性鼻炎、引流不畅、抗菌药物使用频次(≥3次/年)、抗菌药物使用种类(≥3种)、年龄(≥60岁)、抗菌药物使用时间(> 7 d)等8个变量是慢性鼻窦炎患者多重耐药菌感染危险因素(P均 3次/年)、吸烟史、变态反应性鼻炎、引流不畅、抗菌药物使用频次(≥3次/年)等仍是慢性鼻窦炎患者多重耐药菌感染的危险因素(P均<0. 05)。结论慢性鼻窦炎多重耐药菌感染与多种因素有关,临床应采用从主要危险因素入手的综合措施,减少多重耐药菌株的产生,提高疗效。

关键词：慢性鼻窦炎多重耐药菌危险因素 Logistic回归分析

下调ANRIL对Kasumi-1细胞增殖和凋亡的影响及其相关作用机制研究

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中国实验血液学杂志 2022年第4期30卷 984-989页

作者：张成思许建霞邓发滑胡华丽王斯奇黄海韦四喜贵州医科大学医学检验学院贵州省疾病预防控制中心贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004

目的:探讨下调ANRIL(Antisense non-coding RNA in the INK4 Locus)表达对Kasumi-1细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制。方法:使用重组慢病毒构建下调ANRIL表达的Kasumi-1细胞(sh-ANRIL组)及其对照组细胞(sh-NC组),荧光显微镜观察慢... 详细信息

目的:探讨下调ANRIL(Antisense non-coding RNA in the INK4 Locus)表达对Kasumi-1细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制。方法:使用重组慢病毒构建下调ANRIL表达的Kasumi-1细胞(sh-ANRIL组)及其对照组细胞(sh-NC组),荧光显微镜观察慢病毒对细胞的转染效率,RT-qPCR检测敲低效率及急性髓细胞白血病(AML)患者外周血和骨髓中ANRIL的表达水平。CCK-8法和流式细胞术检测下调ANRIL表达对Kasumi-1细胞增殖和凋亡的影响。Western blot检测下调ANRIL表达后Kasumi-1细胞中PI3K、AKT、p-AKT等相关蛋白分子的表达。结果:ANRIL在AML患者外周血和骨髓中呈高表达;重组慢病毒对Kasumi-1细胞的转染效率>90%,敲低效率为70%;CCK-8结果显示,下调Kasumi-1细胞中ANRIL表达能够显著抑制细胞增殖,当DNR作用24、48、72 h,sh-ANRIL组的细胞增殖抑制率分别为(47.40±1.49)%、(69.11±0.51)%和(91.82±1.10)%,均显著高于sh-NC组(40.69±1.70)%(P<0.05)、(58.93±1.74)%(P<0.01)和(82.93±0.37)%(P<0.001);流式细胞术分析显示,sh-ANRIL组细胞凋亡率为(10.29±0.58)%,显著高于sh-NC组的(5.42±0.67)%(P<0.01),当DNR作用24 h,sh-ANRIL组细胞凋亡率为(54.41±1.69)%,显著高于sh-NC组的(38.28±1.42)%(P<0.001);Western blot结果显示,sh-ANRIL组PI3K、p-AKT、PCNA、BCL-2蛋白水平较sh-NC组显著降低,而BAX蛋白的表达增加。结论:ANRIL可能通过PI3K/AKT信号通路影响Kasumi-1细胞增殖和凋亡,ANRIL是AML的潜在治疗靶点。

关键词： ANRIL PI3K/AKT 增殖凋亡