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苗药四大血减轻大鼠的类风湿性关节炎:基于下调基质金属蛋白表达

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南方医科大学学报 2024年第4期44卷 739-747页

作者：李云飞杨婧怡张颖张财霞韦宇翔王怡颖吴宁孙见飞吴遵秋贵州医科大学基础医学院化学与生物化学实验室贵州贵阳561113

目的探究贵州苗医验方“四大血”(SX)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节骨、软骨破坏及滑膜血管新生的作用机制。方法将42只SD大鼠均分为空白组(Nor)、模型组(Mod)、雷公藤多苷片阳性对照组(GTW,40 g/kg)和SX高、中、低剂量组(SX40、20、... 详细信息

目的探究贵州苗医验方“四大血”(SX)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节骨、软骨破坏及滑膜血管新生的作用机制。方法将42只SD大鼠均分为空白组(Nor)、模型组(Mod)、雷公藤多苷片阳性对照组(GTW,40 g/kg)和SX高、中、低剂量组(SX40、20、10g/kg),7只/组。通过皮下注射牛型II胶原来建立CIA大鼠模型,并且通过每天经口灌胃的方式给予治疗,持续3周。采用AI评分分别于造模前,灌胃前1周,灌胃后1周,灌胃2周,灌胃3周观察大鼠后足关节病变情况。HE染色法观察大鼠关节滑膜病理变化,ELISA法检测TNF-α、IL-1β,Real-timePCR检测滑膜组织中NF-κBp65、MMP1、MMP2、MMP9mRNA表达水平,Westernblot检测滑膜组织中NF-κBp65、基质金属蛋白1(MMP1)、MMP2、MMP9蛋白表达水平。网络药理学获取SX外用途径治疗类风湿性关节炎(RA)中的重要靶蛋白,经拓扑分析后筛选出核心靶蛋白。结果GTW组和SX高、中、低剂量组足跖肿胀度及关节炎指数评分均小于Mod组(P<0.05)。光镜下观察大鼠关节滑膜病理组织切片,Mod组可见较多软骨细胞坏死,软骨下层骨组织受侵蚀,并有新生毛细血管形成;而GTW组和SX高、中、低剂量组中,软骨及骨损伤均有不同程度地降低,新生血管数量减少,随SX剂量增高,治疗效果呈逐渐增强的趋势。与Mod组相比,GTW组和SX高、中、低剂量组滑膜组织TNF-α、IL-1β、NF-κBp65、MMP1、MMP2、MMP9mRNA和蛋白表达量有不同程度地降低(P<0.05)。经网络药理学分析得到外用SX治疗RA中的核心靶蛋白—MMPs。结论SX可以改善CIA大鼠关节骨和软骨的破坏、减缓滑膜血管新生,其机制可能为调节MMP基因表达的TNF-α/IL-1β/NF-κB-MMP1、2、9信号转导途径,下调MMPs表达水平,此外可初步推断MMPs在除口服治疗途径以外仍发挥关键作用。

关键词：苗医药方“四大血” 类风湿性关节炎基质金属蛋白网络药理学关节骨和软骨的破坏

舒肝宁注射液与方中黄芩提取物在大鼠胆汁、尿液、粪便中排泄的比较研究

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中国中药杂志 2024年第3期49卷 809-818页

作者：周杨王玲巩仔鹏李月婷金阳郑林黄勇何峰贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室/贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/国家苗药工程技术研究中心贵州贵阳550004

黄芩提取物是舒肝宁注射液中重要的组分之一。该研究建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定舒肝宁注射液及方中黄芩提取物的5种成分在大鼠胆汁、尿液和粪便中含量的方法,揭示舒肝宁注射液与单味黄芩提取物在大鼠体内... 详细信息

黄芩提取物是舒肝宁注射液中重要的组分之一。该研究建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定舒肝宁注射液及方中黄芩提取物的5种成分在大鼠胆汁、尿液和粪便中含量的方法,揭示舒肝宁注射液与单味黄芩提取物在大鼠体内的排泄过程差异,探讨黄芩配伍前后5种成分的体内排泄过程规律。大鼠分别尾静脉注射4.2 mL·kg^(-1)的舒肝宁注射液和黄芩提取物,观察48 h内大鼠胆汁、尿液和粪便中黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和野黄芩苷的动态排泄情况。结果显示,大鼠静脉注射舒肝宁注射液和黄芩提取物后,除黄芩苷外,其余4种指标成分均以较高的比例以原型成分排泄。各成分在尿液中排泄量较大,在粪便和胆汁中的排泄量较少。黄芩提取物经配伍后,5种指标成分在大鼠体内的累积排泄量均降低。其中,黄芩素在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了26.67%、48.11%、31.01%;黄芩苷在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了70.69%、19.43%、31.22%。研究表明,黄芩提取物中的5种指标成分主要经肾脏排泄,且注射液中其他组分可能会延缓其排泄过程,延长在体内的滞留时间。该研究对阐明舒肝宁注射液配伍合理性具有重要的意义。

关键词：舒肝宁注射液黄芩提取物 UPLC-MS/MS 排泄胆汁尿液粪便

基于“蜘蛛网”模式辨析艾迪注射液抗肿瘤和心脏毒性保护作用的质量标志物研究

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中国中药杂志 2024年第8期49卷 2088-2105页

作者：王开靓蔡英刘春花孙佳潘洁李勇军陆苑贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 国家苗药工程技术研究中心贵州贵阳550004

在肿瘤治疗中,中药制剂发挥减毒和抗肿瘤作用的地位同等重要。国内外尚无综合“辨识”多种治疗作用中药制剂质量标志物(Q-marker)的报道。因此笔者以艾迪注射液(Aidi Injection,AD)为例,基于“蜘蛛网”模式综合辨识AD抗肿瘤作用和心脏... 详细信息

在肿瘤治疗中,中药制剂发挥减毒和抗肿瘤作用的地位同等重要。国内外尚无综合“辨识”多种治疗作用中药制剂质量标志物(Q-marker)的报道。因此笔者以艾迪注射液(Aidi Injection,AD)为例,基于“蜘蛛网”模式综合辨识AD抗肿瘤作用和心脏保护作用的质量标志物。首先基于可测性原则,对方中化学成分进行定性分析,再对方中含量较高且可定量测定的成分进行定量分析,作为可测性评价指标;基于稳定性原则,考察光照和温度因素对AD各成分含量的影响,作为稳定性的评价指标;基于配伍原则,依据其原药材在复方中的君、臣、佐、使配伍规律归属化合物;基于有效性原则,评价候选质量标志物的抗肿瘤、抗血管生成活性及其分别协同阿霉素(doxorubicin,DOX)抗肿瘤、抗血管生成和降低心肌毒性的活性,作为有效性的评价指标。建立“配伍-含量-稳定性-抗肿瘤细胞活性-协同DOX抗肿瘤活性-抗血管生成活性-协同DOX抗血管生成活性”七维度蜘蛛网和“配伍-含量-稳定性-降低DOX心脏毒性作用”四维度蜘蛛网,综合辨析AD抗肿瘤和心脏毒性保护作用的质量标志物。结果筛选出12个成分作为AD的质量标志物,其中斑蝥素、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、黄芪皂苷Ⅱ、隐绿原酸和人参皂苷Rg_(2)为AD抗肿瘤的质量标志物,人参皂苷Rd、异嗪皮啶、紫丁香苷、刺五加苷E、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、王二酸作为AD心脏毒性保护作用的质量标志物。综合辨识出的12个质量标志物可覆盖全方4味药材,兼顾抗肿瘤和心脏毒性保护作用。这为AD的质量控制提供了科学依据,为辨识2种重要作用的中药制剂全面合理的质量标志物提供了有效方法。

关键词：艾迪注射液抗肿瘤作用心脏毒性保护作用质量标志物质量控制蜘蛛网模式

薯蓣丸联合依维莫司对TGF-β1诱导三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化的抑制作用

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中成药 2024年

作者：骆小珊谢甦冯豆豆蒙雁云赵晶哲谢青凌湘力贵州医科大学贵州医科大学附属医院

目的探究薯蓣丸联合依维莫司抑制TGF-β1诱导三阴性乳腺癌细胞4T1、MDA-MB-231上皮间质转化的作用。方法分别将4T1、MDA-MB-231细胞分为空白组、诱导组，诱导组用TGF-β1细胞因子干预使细胞发生上皮间质转化；后续实验分为模型组、薯蓣... 详细信息

目的探究薯蓣丸联合依维莫司抑制TGF-β1诱导三阴性乳腺癌细胞4T1、MDA-MB-231上皮间质转化的作用。方法分别将4T1、MDA-MB-231细胞分为空白组、诱导组，诱导组用TGF-β1细胞因子干预使细胞发生上皮间质转化；后续实验分为模型组、薯蓣丸组、依维莫司组、薯蓣丸联合依维莫司组，CCK8法、平板克隆法、细胞划痕实验、Transewll实验检测细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力，Westernblot法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP9、MMP2及PTEN、PI3K、Akt、mTOR蛋白表达。结果与空白组比较，诱导组4T1、MDA-MB-231细胞形态由上皮样转化为间质样，E-cadherin蛋白表达降低（P＜0.01），N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高（P＜0.05）；与模型组比较，各给药组2种细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力降低（P＜0.01），PTEN、E-cadherin蛋白表达升高（P＜0.05，P＜0.01），PI3K、Akt、mTOR、N-cadherin、Vimentin、MMP9、MMP2蛋白表达降低（P＜0.05，P＜0.01），以薯蓣丸联合依维莫司组更明显（P＜0.05，P＜0.01）。结论薯蓣丸联合依维莫司能抑制TGF-β1诱导三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化，效果优于药物单用，其机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路相关。

关键词：薯蓣丸依维莫司三阴性乳腺癌 TGF-β1 上皮间质转化 PI3K/Akt/mTOR信号通路

吴茱萸碱磷脂复合物自微乳给药系统的胃溃疡靶向效应及保护作用评价

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中草药 2024年第1期55卷 171-180页

作者：温健刘文宋朔尧李和蓉金阳张环石惠云王守莉贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 易慧生物技术(上海)有限公司上海200120 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的对吴茱萸碱磷脂复合物自微乳给药系统(evodiamine phospholipid complex self-emulsifying drug delivery system,Evo-PC-SMEDDS)的胃溃疡靶向效应进行评价,并验证其药效。方法通过分析荧光成像结果与激光共聚焦显微镜荧光成像结果... 详细信息

目的对吴茱萸碱磷脂复合物自微乳给药系统(evodiamine phospholipid complex self-emulsifying drug delivery system,Evo-PC-SMEDDS)的胃溃疡靶向效应进行评价,并验证其药效。方法通过分析荧光成像结果与激光共聚焦显微镜荧光成像结果,对该制剂的胃溃疡靶向性做出评价;通过胃组织形态学观察、HE染色结果,评价Evo-PC-SMEDDS对乙醇诱导的大鼠胃溃疡模型的改善作用,并计算胃溃疡指数、胃溃疡抑制率对胃溃疡情况进行量化和评分;通过测定胃分泌物与氧化应激相关因子,推测Evo-PC-SMEDDS可能的作用机制。结果动物荧光成像结果显示,Evo-PC-SMEDDS在大鼠体内存在胃滞留。通过激光共聚焦显微镜观察到,荧光探针FITC标记的Evo-PC-SMEDDS集中分布于模型大鼠的溃疡黏膜表面。药效学结果与HE染色分析结果均显示,Evo-PC-SMEDDS对乙醇诱导的大鼠胃溃疡模型有较好的保护作用,且测得给药组大鼠胃组织中的MPO和NO含量显著降低(P<0.01)。且与吴茱萸碱组相比,其胃组织中GSH水平显著提高(P<0.01),SOD活力更强,MDA含量更低。结论Evo-PC-SMEDDS在胃内滞留时间达到6 h,明显长于在正常大鼠的胃内滞留时间,推断Evo-PC-SMEDDS以胃内滞留方式实现溃疡部位的特异性分布。Evo-PC-SMEDDS对乙醇诱导的大鼠胃溃疡具有显著的保护作用,可通过口服给药方式及时、有效地抑制胃溃疡大鼠胃组织中过氧化脂质的产生,抑制胃液中H+分泌和胃蛋白酶的活性,减轻大鼠的胃溃疡损伤程度。

关键词：自微乳给药系统吴茱萸碱荧光成像激光扫描共聚焦显微镜胃溃疡靶向递送胃黏膜保护

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS联合网络药理学及分子对接探究白及治疗黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的“异病同治”物质基础和作用机制

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中国中药杂志 2024年第13期 3552-3565页

作者：刘春花付昌丽孙佳陆苑潘洁李勇军王永林黄勇潘卫东贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州医科大学药学院贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS联合网络药理学及分子对接技术探究白及“异病同治”黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的物质基础和分子机制。利用HPLC建立17批不同产地白及指纹图谱，进行相似度评价；进一步通过UHPLC-... 详细信息

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS联合网络药理学及分子对接技术探究白及“异病同治”黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的物质基础和分子机制。利用HPLC建立17批不同产地白及指纹图谱，进行相似度评价；进一步通过UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS分析，获得17批白及的共有化学成分；针对共有化学成分，根据生物利用度和类药性筛选活性成分，利用TCMSP和SwissTargetPrediction数据库获取白及活性成分的作用靶点。在DrugBank、TTD、GeneCards数据库中检索疾病相关靶点，绘制韦恩图，获得白及与疾病的共有靶点作为“异病同治”靶点；借助STRING数据库建立蛋白质相互关系，并在Bioconductor数据库中对“异病同治”靶点进行KEGG和GO分析；使用Cytoscape 3.7.2软件构建“白及化学成分-异病同治靶点”网络和蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络，拓扑分析筛选出关键活性成分和核心靶点；最后，运用AutoDock Vina 1.1.2软件对活性成分与核心靶点进行分子对接验证。指纹图谱有13个共有峰，不同批次间指纹图谱的相似度在0.941～0.998。鉴定出白及的化学成分53个，17批白及的共有化学成分18个；网络药理学筛选到白及治疗4种疾病的药效物质基础是多糖类、联菲类、二氢菲类和联苄类等11个化合物，异病同治靶点42个，这些靶点参与细胞对化学应激的反应、活性氧的反应和蛋白激酶B信号转导的正调控等生物过程，涉及PI3K-Akt、ErbB、Rap1、FoxO、MAPK和雌激素等121条信号通路；分子对接显示关键活性成分与核心靶点亲和力好。该研究初步阐释了白及通过多成分、多靶点和多通路联合作用发挥治疗黄褐斑、胃肠道出血、肺癌和支气管-肺炎性病变的“异病同治”的作用，为其深入开发和应用提供了一定的理论基础。

关键词：白及指纹图谱成分分析网络药理学异病同治分子对接

氧化苦参碱改善博来霉素诱导小鼠肺纤维化的作用及机制

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中华中医药杂志 2024年第2期39卷 755-760页

作者：梁语嫣刘绍欢罗梦晗沈祥春贵州医科大学贵安新区550025 贵州医科大学天然药物优效利用重点实验室贵安新区550025

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对博来霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化(PF)的抑制作用,并初步探索其作用机制。方法:将72只小鼠随机分为6组:空白组,模型组,OMT高、中、低剂量组(10、5、2.5 mg/mL),阳性组,每组12只。造模,灌胃干预后检测小鼠肺系数... 详细信息

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对博来霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化(PF)的抑制作用,并初步探索其作用机制。方法:将72只小鼠随机分为6组:空白组,模型组,OMT高、中、低剂量组(10、5、2.5 mg/mL),阳性组,每组12只。造模,灌胃干预后检测小鼠肺系数,HE和Masson染色观察肺组织病理改变,检测羟脯氨酸(Hyp)含量,ELISA检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-10含量,Western Blot检测肺组织TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达;体外实验采用TGF-β1作用肺成纤维细胞MRC-5细胞12 h,设空白组,模型组,OMT高、低剂量组(0.1、0.5 mg/mL),MTT检测细胞存活率,Western Blot检测TGF-β1、α-SMA蛋白表达。结果:与模型组比较,OMT高剂量组第21天肺系数和第7、21天血清中TGF-β1、IL-1β、TNF-α含量显著下降,IL-10含量显著增加(P<0.05,P<0.01);肺组织中HYP含量下降(P<0.05),OMT低剂量组肺组织TGF-β1和α-SMA蛋白表达下调(P<0.05)。与模型组比较,OMT高、低剂量组均能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞存活率下降(P<0.05);显著下调肺成纤维细胞中TGF-β1和α-SMA蛋白表达(P<0.05)。结论:OMT可能通过抑制肺成纤维细胞分化,调节炎症因子释放,下调TGF-β1和α-SMA蛋白表达而发挥治疗PF作用。

关键词：肺纤维化氧化苦参碱转化生长因子-β1 炎症因子 α-平滑肌肌动蛋白机制羟脯氨酸

恩格列净通过上调Epac1表达抑制炎症反应减轻2型糖尿病大鼠肾损伤

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第2期40卷 129-134页

作者：钱宇池万璐卢宇欣倪文静杨慧娟潘艳陈卫东蚌埠医科大学第一附属医院肾内科安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学临床检验诊断实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学基础医学机能学综合实验室安徽蚌埠233000

目的观察恩格列净(EM)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾损伤的治疗效果,并探讨其可能存在的机制。方法将SD雄性大鼠随机分为正常对照(NC)组、 T2DM组和EM组,每组6只。T2DM组和EM组,给予腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立T2DM模型,记录各组大鼠空腹... 详细信息

目的观察恩格列净(EM)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾损伤的治疗效果,并探讨其可能存在的机制。方法将SD雄性大鼠随机分为正常对照(NC)组、 T2DM组和EM组,每组6只。T2DM组和EM组,给予腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立T2DM模型,记录各组大鼠空腹血糖(FBG)和体质量。EM组给予EM溶液灌胃,其余两组予以等量的羧甲基纤维素钠溶液灌胃,给药12周。记录大鼠体质量和FBG后处死大鼠,留存腹主动脉血液和肾脏组织。全自动生化分析仪检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC);行Masson染色、过碘酸希夫(PAS)染色、 HE染色观察肾脏组织学变化,透射电镜观察肾脏超微结构变化;免疫组织化学染色法检测大鼠肾脏组织中环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白1(Epac1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)的表达和分布。结果与NC组相比,T2DM组大鼠体质量下降,FBG、 Scr、 BUN、 UA、 TC、 TG水平明显升高;肾小球基底膜增厚,足细胞足突融合,排列紊乱,内皮细胞窗孔消失;Epac1蛋白表达水平下降,TNF-α、 IL-1β、 IL-18的蛋白表达水平明显增高。与T2DM组相比,EM组大鼠体质量上升,FBG、 Scr、 BUN、 UA、 TC、 TG水平降低;肾损伤减轻,Epac1蛋白表达水平升高,TNF-α、 IL-1β、 IL-18的表达显著降低。结论 EM能够改善T2DM肾损伤。这种治疗效果是通过上调Epac1蛋白表达,抑制炎症反应介导的。

关键词：恩格列净环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白1(Epac1) 2型糖尿病(T2DM) 肾损伤炎症反应

急性髓系白血病细胞条件培养液对间充质干细胞的生物学影响

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中国组织工程研究 2024年第31期28卷 4995-5002页

作者：张弛可王飞清吴丹杨波成金阳陈娟唐东昕刘洋李艳菊贵州医科大学贵州中医药大学第一附属医院贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州医科大学附属医院血液科

背景：目前，关于急性髓系白血病骨髓微环境中的骨髓间充质干细胞生物学功能及分子改变尚不完全清楚。目的：综合生物信息学和细胞实验探究急性髓系白血病患者来源骨髓间充质干细胞的生物学功能改变，并探讨急性髓系白血病细胞条件培养... 详细信息

背景：目前，关于急性髓系白血病骨髓微环境中的骨髓间充质干细胞生物学功能及分子改变尚不完全清楚。目的：综合生物信息学和细胞实验探究急性髓系白血病患者来源骨髓间充质干细胞的生物学功能改变，并探讨急性髓系白血病细胞条件培养液在其中的作用。方法：从GEO数据集中筛选差异基因进行富集分析，并构建蛋白质互作网络和获取Hub基因。培养急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞，使用急性髓系白血病细胞条件培养液处理健康供者的骨髓间充质干细胞，对各组细胞进行成脂诱导分化、成骨诱导分化、β-半乳糖苷酶染色、细胞周期检测和Hub基因的验证。结果与结论：(1)从GSE84881中获取急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞基因表达数据，筛选出184个上调基因和140个下调基因。(2)富集的生物学功能主要包括细胞周期、脂肪细胞分化、细胞代谢过程和MYC通路。根据Degree算法筛选出上调的10个Hub基因和下调的10个Hub基因。(3)通过体外细胞实验发现，与健康供者的骨髓间充质干细胞相比，急性髓系白血病患者骨髓间充质干细胞表面抗原未发生改变，但其成脂分化能力增强、成骨分化能力减弱、β-半乳糖苷酶阳性细胞数增多、细胞形态改变、细胞周期停滞、LGALS3表达增加以及MYC表达降低。经急性髓系白血病细胞条件培养液培养后，健康供者骨髓间充质干细胞出现相似改变。(4)结果表明，急性髓系白血病患者骨髓微环境中的间充质干细胞生物学功能发生改变，这为骨髓间充质干细胞与肿瘤的交互作用提供新的见解。

关键词：急性髓系白血病骨髓间充质干细胞条件培养液 GEO数据库生物信息学