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双重核酸纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly毒素基因方法的建立及试剂盒的研制

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南方医科大学学报 2025年

作者：刘岩杨建宇周钰娇丁文博张先宇高林然潘蓓珍杨继飞赵云冬北华大学医学技术学院临床生化及分子生物学检验教研室

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA，以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因，分别用6-FAM标记p... 详细信息

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA，以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因，分别用6-FAM标记prfA上游引物5'端，Biotin标记prfA下游引物5'端，Digoxin标记hly上游引物5'端和Biotin标记hly下游引物5'端，建立单核细胞增生李斯特菌的毒素基因检测方法，通过克隆转化、测序分析，克隆阳性对照品，研发试剂盒并对试剂盒特异性、灵敏度、复现性及稳定性进行评价，并通过样品检测对试剂盒进行验证。结果水煮法提取的单核细胞增生李斯特菌浓度为148.81±0.97 ng/μL,A260/A280在1.8～2.0范围内；PCR产物经克隆转化、测序对比，与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%；特异性检测，仅单核细胞增生李斯特菌为阳性结果，与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌无交叉反应；灵敏度检测，最低检测限为10-2 ng/μL，比琼脂糖凝胶电泳高10倍；复现性检测，不同实验室不同人员分别对核酸试纸条进行验证，结果一致；稳定性检测，在第6、9、12月对核酸试纸条进行验证，稳定性较好。样品检测结果显示，本试剂盒可准确快速的检出样品中单核细胞增生李斯特菌。结论本研究所研发的单核细胞增生李斯特菌双重毒素检测试剂盒可同时检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因，具有特异性强、灵敏度高、复现性好、稳定性好等优点，对保障食品安全具有现实意义。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfA hly 双重核酸试纸条

大学生就业观念引导的思政工作路径研究——以贵州医科大学医学检验技术专业为例

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中外企业文化 2021年第5期 65-66页

作者：苏曦贵州医科大学贵州贵阳550000

随着经济转型、行业调整以及大学教育向大众化的转变,如何引导大学生适时调整就业观念已经成为高校开展就业指导工作的当务之急。本文阐述分析大学生就业观念中普遍存在的传统体制观,以及缺乏主见、盲目跟风、习惯性逃避等现象,结合医... 详细信息

随着经济转型、行业调整以及大学教育向大众化的转变,如何引导大学生适时调整就业观念已经成为高校开展就业指导工作的当务之急。本文阐述分析大学生就业观念中普遍存在的传统体制观,以及缺乏主见、盲目跟风、习惯性逃避等现象,结合医学检验行业发展态势,探讨通过就业形势教育、实习规划调整、专业导师计划、情怀教育强化等工作路径,帮助学生调整观念,助力其就业。

关键词：就业观念医学检验路径

2019—2023年某院难治性耐药铜绿假单胞菌感染临床特征及危险因素

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中华医院感染学杂志 2025年 764-768页

作者：张争赵越黄雅轩张莉滟王蔚莎梅州市第三人民医院检验科南方医科大学附属广东省人民医院/广东省医学科学院检验科南加州大学AlfredE.Mann药学与制药科学学院

目的探讨难治性耐药铜绿假单胞菌（DTR-PA）感染的临床特征及危险因素,评估患者预后,为有效防控DTR-PA提供理论依据。方法收集广东省人民医院2019年1月—2023年12月确诊的DTR-PA感染患者病历资料95例,定义为感染组。同时按照年龄相近... 详细信息

目的探讨难治性耐药铜绿假单胞菌（DTR-PA）感染的临床特征及危险因素,评估患者预后,为有效防控DTR-PA提供理论依据。方法收集广东省人民医院2019年1月—2023年12月确诊的DTR-PA感染患者病历资料95例,定义为感染组。同时按照年龄相近、同期住院等原则,采用病例-对照（1:1）研究方法,随机选取95例非DTR-PA感染患者的临床资料为非感染组。收集两组患者的基本信息及临床诊疗数据,分析DTR-PA感染特征及危险因素,并评估患者预后。结果临床所分离的DTR-PA主要来源于呼吸道分泌物78株,患者主要分布于重症监护室（ICU）59例、呼吸科13例和老年医学科8例,临床表现主要为发热、呼吸困难、湿啰音以及咳嗽。感染组患者有呼吸道疾病（P<0.001）、肾脏疾病（P=0.008）、神经系统疾病（P=0.005）、糖尿病（P=0.017）和肝脏疾病史（P=0.007）,以及氨基糖苷类药物的既往使用率（P=0.002）和既往使用≥3种抗菌药物情况高于非感染组。多因素分析显示,患者有呼吸道疾病史（OR=2.813,95%CI:1.366～5.792,P=0.005）、糖尿病史（OR=2.465,95%CI:1.129～5.382,P=0.024）和神经系统疾病史（OR=2.386,95%CI:1.151～4.944,P=0.019）是DTR-PA感染的危险因素。DTR-PA感染组的病死率为30.53%,高于非感染组的6.32%（χ2=18.527,P<0.001）。结论DTR-PA感染病死率高,患者有呼吸道疾病史、糖尿病史和神经系统疾病史可能是其感染的重要危险因素。临床应加强对DTR-PA的防范意识,以遏制医院感染的发生。

关键词：难治性耐药铜绿假单胞菌临床特征危险因素临床预后

大麻素受体-2激动剂AM1241对急性肝损伤小鼠肝组织炎性体NLRP3影响

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中国公共卫生 2019年第5期35卷 571-573页

作者：吴雅锋龙翠珍舒远辉何萍谷俊莹杨蕾王豫萍贵州医科大学医学检验学院

目的探讨大麻素CB2受体激动剂AM1241对刀豆蛋白A(ConA)所致急性小鼠肝损伤影响及机制。方法随机将40只8周龄C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组、激动剂(AM1241)3、12mg/kg组(于造模前1h分别腹腔注射AM12413、12mg/kg),除对照组外,其... 详细信息

目的探讨大麻素CB2受体激动剂AM1241对刀豆蛋白A(ConA)所致急性小鼠肝损伤影响及机制。方法随机将40只8周龄C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组、激动剂(AM1241)3、12mg/kg组(于造模前1h分别腹腔注射AM12413、12mg/kg),除对照组外,其余组小鼠尾静脉注射ConA20mg/kg复制小鼠急性肝损伤模型,对照组采用相同溶剂和方法。造模8h后留取血清检测丙氨酸转氨酶(ALT),Westernblot法分别检测炎性体3相关核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLRs)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)蛋白的表达量,利用试剂盒检测肝组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果与对照组[(28.5±7.4)U/L]比较,模型组小鼠血清ALT水平[(6132.5±1300.8)U/L]明显升高(P<0.05),肝组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达均明显增强(P<0.05);与模型组比较,AMl2413、12mg/kg组小鼠血清ALT水平[分别为(2696.5±956.3)、(534.6±128.6)U/L]明显降低(P<0.05),肝组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达均有所降低(P<0.05);与对照组比较,AMl241组小鼠肝组织中IL-1β含量也明显降低(P<0.05)。结论CB2受体激动剂AMl241对ConA所致急性小鼠肝损伤有一定的拮抗作用,其机制可能与AM1241抑制小鼠肝组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达,减少肝组织中炎性因子IL-1β含量有关。

关键词：急性肝损伤大麻素受体2 AM1241 核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLRs)

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

预后营养指数对腹膜透析患者心血管疾病死亡的影响:一项多中心回顾性队列研究

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中国全科医学 2025年第5期28卷 568-574页

作者：朱露艾军廖生武黄淑婷龚妮容孔耀中刘德慧窦献蕊张广清南方医科大学南方医院肾内科广东省广州市510515 南方医科大学护理学院广东省广州市510515 南方医科大学南方医院医技片区党总支广东省广州市510515 广东省佛山市第一人民医院肾内科 528000 江西省赣州市人民医院肾内科 341000 南方医科大学顺德医院(顺德区第一人民医院)肾内科广东省佛山市528300 南方医科大学南方医院院办公室广东省广州市510515

背景心血管疾病(CVD)是腹膜透析(PD)患者死亡的主要原因,而营养不良是PD患者发生CVD及死亡的重要危险因素之一。预后营养指数(PNI)作为一种综合评估患者免疫、炎症和营养状态的指标,因其具有便利性与可靠性等优点,在肿瘤等多种疾病的预... 详细信息

背景心血管疾病(CVD)是腹膜透析(PD)患者死亡的主要原因,而营养不良是PD患者发生CVD及死亡的重要危险因素之一。预后营养指数(PNI)作为一种综合评估患者免疫、炎症和营养状态的指标,因其具有便利性与可靠性等优点,在肿瘤等多种疾病的预后评估中得到了广泛应用。然而,不同时间点的营养状态与PD患者预后之间的关系仍有待进一步探究。目的探讨PD患者首年PNI与CVD死亡之间的关系。方法本研究为多中心、回顾性观察性队列研究,纳入2000-01-01—2019-07-01在南方医科大学南方医院、南方医科大学顺德医院、佛山市第一人民医院以及赣州市人民医院4所中心置管并开始接受PD治疗的1640例PD患者作为研究对象。对患者进行随访,随访截止时间为2021-07-01,终点事件为CVD死亡并记录患者生存时间及具体死亡原因。应用限制性立方条图(RCS)分析PNI与PD患者CVD死亡风险之间的非线性关联;采用Kaplan-Meier法绘制PD患者的生存曲线,绘制PNI预测PD患者CVD死亡的受试者工作特征(ROC)曲线,并根据最佳截断值(cut-off=40.46)将患者分为低PNI组703例与高PNI组937例;采用Log-rank检验和Cox风险回归模型分析探讨PNI对PD患者CVD死亡的影响。结果本研究中位随访时间为30个月,随访期间共148例患者死亡,其中CVD死亡73例(49.32%)。RCS结果表明,PNI与CVD死亡事件呈线性关联(P for Nonlinear=0.655)。ROC曲线显示,PNI预测PD患者CVD死亡的曲线下面积(AUC)为0.717(95%CI=0.659~0.775,P<0.001),灵敏度为74.0%,特异度为58.6%。Kaplan-Meier生存分析结果显示,低PNI组CVD生存率低于高PNI组(χ^(2)=26.685,P<0.001)。多因素Cox风险回归模型分析,校正性别、年龄及CVD病史等混杂因素后,低PNI组仍是CVD死亡的独立预测因素(HR=7.76,95%CI=1.72~35.06,P=0.008),亚组分析结果仍稳健,无明显交互作用。结论PNI降低是PD患者CVD死亡的独立影响因素,PD首年PNI评分在评估PD患者预后有一定的指导意义。

关键词：慢性肾脏病腹膜透析预后营养指数心血管死亡预后队列研究回顾性研究影响因素分析

水相合成近红外CdTe量子点用于体液中硫醇的检测

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化学学报 2014年第1期72卷 75-82页

作者：崔晓腾吕玉洋刘颖吴伯岳天津医科大学医学检验学院天津300203

通过降低反应物中三．半胱氨酸（L-Cys）的比例，在水相快速合成了近红外CdTe量子点，使之对巯基化合物产生荧光响应．并以此构建了一种基于表面配体缺失的CdTe近红外荧光量子点的巯基探针，为生物样品中的硫醇检测提供简便经济、高灵... 详细信息

通过降低反应物中三．半胱氨酸（L-Cys）的比例，在水相快速合成了近红外CdTe量子点，使之对巯基化合物产生荧光响应．并以此构建了一种基于表面配体缺失的CdTe近红外荧光量子点的巯基探针，为生物样品中的硫醇检测提供简便经济、高灵敏度和高选择性的新方法．在其它多种氨基酸和生物液体中主要离子、分子共存的情况下，我们所制备的近红外量子点对L—Cys、同型半胱氨酸（Hcy）和谷胱甘肽（GSH）的荧光检测中显示了良好的选择性和灵敏度．在血清和细胞提取液中，加标5．0gmol·L-1硫醇的回收率均在90％～109％范围内．该方法对L—Cys，Hcy和GSH的检出限（3s）分别为43，46和63nmol·L-1．

关键词：量子点水相合成近红外荧光检测硫醇

钙结合蛋白S100A4抑制剂Niclosamide调节支气管上皮细胞炎症反应

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中国免疫学杂志 2024年第11期40卷 2262-2266,2272页

作者：陈科莫诗卉晏世荣李静吴通前余芳贵州医科大学医学检验学院贵阳550004

目的:研究钙结合蛋白S100A4抑制剂Niclosamide对支气管上皮细胞炎症反应的潜在调控机制。方法:体外培养人支气管上皮细胞BEAS-2B,给予LPS刺激或Niclosamide预处理,RT-qPCR、Western blot检测相关细胞因子和信号分子表达,荧光探针检测细... 详细信息

目的:研究钙结合蛋白S100A4抑制剂Niclosamide对支气管上皮细胞炎症反应的潜在调控机制。方法:体外培养人支气管上皮细胞BEAS-2B,给予LPS刺激或Niclosamide预处理,RT-qPCR、Western blot检测相关细胞因子和信号分子表达,荧光探针检测细胞内ROS水平。结果:LPS刺激和Niclosamide预处理导致细胞ROS水平较对照组升高(P0.05)。Western blot结果显示:LPS组S100A4、STAT3、MAPK3/SIRT1、IL-1β和TNF-α蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05),而Occludin表达较对照组降低(P<0.05)。Niclosamide预处理后S100A4、STAT3、MAPK3/SIRT1、IL-1β和TNF-α表达较LPS组降低(P<0.05),而Occludin表达较LPS组升高(P<0.05)。结论:钙结合蛋白S100A4抑制剂Niclosamide可抑制支气管上皮细胞S100A4表达并抑制其炎症反应,可能与STAT3、MAPK3/SIRT1信号相关。

关键词：支气管上皮细胞 LPS S100A4 Niclosamide ROS 紧密连接炎症反应

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氢醌HQ对K562细胞WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响

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重庆医科大学学报 2018年第3期43卷 393-397页

作者：温缘缘肖芸赵雪万秀方郑丹张亚莉贵州医科大学医学检验学院贵阳550004

目的:探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对K562细胞中WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响。方法:K562细胞生长至对数期后,设置空白对照组,低(15μmol/L)、中(30μmol/L)、高(60μmol/L)剂量HQ组,重复间隔染毒72 h,空白对照组加入等量的PBS培养... 详细信息

目的:探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对K562细胞中WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响。方法:K562细胞生长至对数期后,设置空白对照组,低(15μmol/L)、中(30μmol/L)、高(60μmol/L)剂量HQ组,重复间隔染毒72 h,空白对照组加入等量的PBS培养。MTT比色法检测细胞存活率;重亚硫酸盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测细胞WRN基因甲基化水平;FQ-PCR法检测DNMT1基因的m RNA表达情况;免疫印迹法检测DNMT1基因的蛋白表达情况。结果:(1)MTT结果显示,细胞存活率随着HQ染毒浓度增加而下降(P=0.000)。(2)BSP检测结果显示,低、中、高剂量HQ组甲基化率与对照组比较,差异有统计学意义(χ~2=7.50,P=0.048)。(3)与对照组比较,低、中、高剂量HQ组DNMT1基因m RNA及蛋白表达量呈下降趋势(P=0.000)。结论:HQ染毒K562细胞可引起WRN基因甲基化水平增高,同时下调DNMT1基因的表达。

关键词：氢醌 K562细胞 WRN基因甲基化 DNMT1基因