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人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原表位区预测及其小鼠多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第4期39卷 363-370页

作者：王金丽张新展高义沙周莉莉孙达权贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的优化人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原后制备小鼠抗多克隆抗体,并鉴定抗体特异性.方法利用生物信息学方法预测SHISAL1蛋白的抗原表位区,选取SHISAL1蛋白第28~97位氨基酸残基组成的多肽作为抗原,并命名为(SHISAL1-N);利用分子克隆技术,... 详细信息

目的优化人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原后制备小鼠抗多克隆抗体,并鉴定抗体特异性.方法利用生物信息学方法预测SHISAL1蛋白的抗原表位区,选取SHISAL1蛋白第28~97位氨基酸残基组成的多肽作为抗原,并命名为(SHISAL1-N);利用分子克隆技术,将其编码序列克隆后插入pET-28a载体中构建重组质粒pET28a-SHISAL1-N.然后将pET28a-SHISAL1-N和已构建的pET28a-SHISAL1全长重组质粒转化BL21(DE3),用异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达.两种蛋白纯化后分别免疫雌性昆明小鼠,Western blot法、免疫沉淀及免疫荧光细胞化学染色法观察两种抗体的特异性与灵敏性.结果成功构建pET28a-SHISAL1-N重组质粒,诱导两种融合蛋白表达,获得两种类型的SHISAL1小鼠多克隆抗体.Western blot结果表明以SHISAL1为免疫原所制备的抗体特异性和灵敏性较差,而以SHISAL1-N免疫原所制备的抗体能特异性识别不同的细胞内源性的SHISAL1蛋白;免疫沉淀结果表明SHISAL1-N抗体可以结合肝癌细胞中的SHIISAL1蛋白;免疫荧光细胞化学染色结果证明SHISAL1-N抗体与细胞质中的SHISAL1蛋白特异性结合.结论成功优化SHISAL1抗原并制备了小鼠抗人SHISAL1多克隆抗体,可应用于Western blot实验、免疫沉淀和免疫荧光细胞化学染色.

关键词： Shisa样蛋白1(SHISAL1) 抗原表位多肽原核表达多克隆抗体

抑制自噬增强盐酸阿霉素诱导的人结直肠癌细胞凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第3期38卷 237-243页

作者：汤弘婷吴道秋杨瀚林杨娟张艺李梦醒刘虹麟李琴山贵州医科大学医学检验学院临床生物化学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院血液科贵州贵阳550004 北京中日友好医院临床医学研究所北京100000 贵州省产前诊断中心贵州贵阳550004

目的探讨盐酸阿霉素(DOX)抑制结直肠癌HT29、 HCT15细胞增殖的可能机制。方法 HT29、 HCT15细胞采用(0、 0.08、 0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/L DOX处理24、 48、 72 h,CCK-8法检测细胞增殖活性确定DOX最佳处理浓度和处理时间。将... 详细信息

目的探讨盐酸阿霉素(DOX)抑制结直肠癌HT29、 HCT15细胞增殖的可能机制。方法 HT29、 HCT15细胞采用(0、 0.08、 0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/L DOX处理24、 48、 72 h,CCK-8法检测细胞增殖活性确定DOX最佳处理浓度和处理时间。将HT29、 HCT15细胞分别设为对照组(只加DMSO处理)和(0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/LDOX处理组,Western blot法检测抑制自噬对凋亡的影响时添加3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、 3-MA联合DOX组。集落形成实验检测结直肠癌细胞的集落形成能力,Western blot法检测细胞B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、 beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的蛋白表达。结果 DOX抑制结直肠癌细胞的增殖和集落形成,促进细胞发生凋亡,呈浓度依赖性;DOX促进细胞发生自噬,beclin 1和LC3Ⅱ表达增加,呈浓度依赖性;抑制自噬后可增加DOX对结直肠癌细胞的促凋亡作用。结论 DOX抑制结直肠癌细胞增殖并促进其凋亡且抑制自噬有促凋亡作用。

关键词：结直肠癌(CRC) 盐酸阿霉素(DOX) 细胞凋亡自噬

2020~2022年贵州省临床实验室常规生化项目应用批长度Westgard西格玛规则的室内质量控制策略分析

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现代检验医学杂志 2024年第2期39卷 184-191页

作者：张淑俊袁薇孙建超杨敬源李梅张娜佳贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵阳561113 贵州省临床检验中心质量管理科贵阳550002 贵州省疾病预防控制中心贵阳550004

目的了解2020~2022年贵州省常规生化项目室内质量控制(internal quality control,IQC)情况,并运用分析批长度西格玛规则为常规生化项目选择恰当的IQC策略。方法从参加2020~2022年贵州省临床检验中心常规生化项目第一次室间质量评价(exte... 详细信息

目的了解2020~2022年贵州省常规生化项目室内质量控制(internal quality control,IQC)情况,并运用分析批长度西格玛规则为常规生化项目选择恰当的IQC策略。方法从参加2020~2022年贵州省临床检验中心常规生化项目第一次室间质量评价(external quality assessment,EQA)计划的实验室中筛选出统一采用英国朗道公司生产的两个浓度水平室内质控品的41家、41家和52家实验室,根据其IQC信息计算变异系数(coefficient of variation,CV),将CV与WS/T403-2012标准等不精密度性能规范进行比较,分析近年来贵州省常规生化项目的IQC情况;每年从中随机抽取15家回报三酰甘油项目结果的实验室并计算σ值,根据分析批长度Westgard西格玛规则流程图为其选择合适的质控策略,计算质量目标指数(quality goal index,QGI)以评价各实验室检测系统的分析性能。结果当月CV中,Ca,TP 2个项目满足WS/T403-2012标准的实验室比例较低,而P,CK,LDH等7个项目通过率均在80%以上,且呈逐年上升趋势;P,CK,LDH等7个项目符合生物医学变异(适当)性能规范的实验室比例均达90%,但Na,Ca,Cl等5个项目比例较低。累积CV中P,CK,LDH等10个项目满足生物医学变异(适当)性能规范的实验室比例在90%以上。对于三酰甘油项目,2020年~2022年分别有2家、5家、13家实验室达到6σ水平;与2020年和2021年相比,2022年σ值变化趋势上升(t=3.855,3.511,P≤0.001),表明这些实验室分析性能越来越好。结论贵州省部分常规生化项目的IQC水平在逐年提升。分析批长度Westgard西格玛规则为贵州省各实验室设计个性化质控规则,提高实验室的检测能力,更好地服务临床。

关键词：室内质量控制 Westgard西格玛规则质量目标指数质控规则

重症肌无力患者治疗间期外周血记忆T细胞和滤泡T细胞及相关细胞因子水平变化的监测

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第3期38卷 257-262页

作者：马岚吴通前何菁菁沈雪余芳贵州医科大学医学检验学院临床微生物及免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004

目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细... 详细信息

目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、中枢记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+))细胞、效应记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-)细胞、滤泡辅助T(CD4^(+)CXCR5^(+))细胞、滤泡调节T(CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+))细胞所占百分比情况;利用流式液相蛋白定量技术(CBA)检测外周血白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-12、IL-17及γ干扰素(IFN-γ)的水平;ELISA检测IL-7及AChR抗体的含量。结果与健康对照相比,MG患者外周血中CD4^(+)CXCR5^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞及CD4/CD8比值未见明显变化,CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+)T细胞明显降低,CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+)T细胞明显增加;MG患者IL-2、IL-4、IL-12、IL-17及IFN-γ水平均高于健康对照,而IL-7低于健康对照,AChR抗体水平无明显变化。各细胞因子水平与各T细胞亚群间未发现有明显相关性。结论治疗间期MG患者存在较为独特的记忆T细胞和滤泡T细胞表型及相关细胞因子水平变化。

关键词：重症肌无力记忆T细胞滤泡T细胞细胞因子细胞免疫

P3肽抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化的分子机制

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中国药理学通报 2023年第9期39卷 1711-1717页

作者：李佳慧蒋宇恒王承瑾江林邓艳张礼林许庆忠李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的观察P3肽对RAW264.7巨噬细胞脂质沉积的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法筛选P3肽及氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的作用浓度,并用80 mg·L^(-1)的ox-LDL诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞;分别采用... 详细信息

目的观察P3肽对RAW264.7巨噬细胞脂质沉积的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法筛选P3肽及氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的作用浓度,并用80 mg·L^(-1)的ox-LDL诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞;分别采用油红O染色和总胆固醇含量测定试剂盒,检测细胞内脂质沉积及总胆固醇含量;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及Western blot检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的mRNA和蛋白表达变化;分别应用肝X受体(liver X receptor,LXR)的激动剂T0901317、GW3965,以及LXR抑制剂GSK2033进一步验证P3肽调控ABCA1、ABCG1表达的作用机制。结果P3肽明显减少RAW264.7细胞内脂质沉积,降低细胞内总胆固醇含量,上调ABCA1、ABCG1mRNA和蛋白表达;P3肽上调ABCA1、ABCG1的作用与LXR激动剂T0901317、GW3965相似;加入抑制LXR基因转录的抑制剂GSK2033后,P3肽对ABCA1、ABCG1的基因表达无上调作用。结论P3肽可减少RAW264.7巨噬细胞内脂质积聚,抑制泡沫细胞的形成,其作用机制可能与激活LXR-ABCA1/ABCG1通路有关。

关键词： P3肽 RAW264.7细胞脂质沉积泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1 三磷酸腺苷结合盒转运体G1 肝X受体

蜱类对寄主气味的信息感应和蜱类信息素及其在防治中的应用

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寄生虫与医学昆虫学报 2024年第1期31卷 53-64页

作者：刘智通吴家红孙毅军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室北京市虫媒病与自然疫源性疾病重点实验室北京100071 贵州医科大学基础医学院贵阳561113

蜱是一种重要的媒介节肢动物,能够传播多种病原体,造成严重的经济损失并威胁公共健康。蜱类的危害与其释放的信息素以及相关的化学感应行为密切相关。本文综述了蜱类对寄主的气味感知、信息素的种类、化学感觉机制及其在防治中的应用等... 详细信息

蜱是一种重要的媒介节肢动物,能够传播多种病原体,造成严重的经济损失并威胁公共健康。蜱类的危害与其释放的信息素以及相关的化学感应行为密切相关。本文综述了蜱类对寄主的气味感知、信息素的种类、化学感觉机制及其在防治中的应用等几个方面,同时展望了其对蜱综合防治的应用前景,以期为蜱的防治提供依据与指导。

关键词：蜱信息素信息感应防治

基于HMGCR及PPARα信号通路探究雪莲果浸膏对高脂血症大鼠脂质代谢的影响

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南方医科大学学报 2023年第11期43卷 1977-1983页

作者：龚顺航杨杰张金涛吴兴林江山张誉麟龚广斌吴宁孙见飞吴遵秋贵州医科大学基础医学院化学与生物化学实验室贵州贵阳550025

目的探究雪莲果(Yacon)浸膏对高脂血症(HLP)大鼠脂质代谢的影响和改善血脂异常的作用机制。方法随机数表法取10只SD大鼠作为空白组(Normal),正常饮食;另取50只大鼠给予高脂饮食8周建立HLP模型,随机分为模型组(Mod)、非诺贝特阳性对照组(... 详细信息

目的探究雪莲果(Yacon)浸膏对高脂血症(HLP)大鼠脂质代谢的影响和改善血脂异常的作用机制。方法随机数表法取10只SD大鼠作为空白组(Normal),正常饮食;另取50只大鼠给予高脂饮食8周建立HLP模型,随机分为模型组(Mod)、非诺贝特阳性对照组(FEN,27 mg/kg),Yacon浸膏高、中、低剂量组(5、2.5、1.25 g/kg),10只/组。各组大鼠给予相应药物灌胃,Normal组、Mod组给予等体积生理盐水,干预8周。观察并记录大鼠体质量变化,采集肝脏、血清标本,计算肝脏系数;ELISA法检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;HE染色法观察肝组织病理变化;qPCR和Western blot法分别检测3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、过氧化物酶增殖物激活受体α(PPARα)、胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)mRNA及蛋白表达水平。结果FEN组和Yacon 5 g/kg组体质量增量、肝脏系数均低于Mod组(P<0.05);FEN组和Yacon 5 g/kg组血清TG、TC、LDL-C水平均低于Mod组(P<0.05),HDL-C水平高于Mod组(P<0.05);光镜下观察大鼠肝脏病理组织切片,Mod组可见脂肪样变性和空泡样改变等病理变化,药物各治疗组病理程度明显减轻且具有剂量依赖性;与Mod组相比,FEN组和Yacon 5 g/kg组大鼠肝组织中HMGCR mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.001),PPARα、CYP7A1、CPT-1 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.001)。结论Yacon浸膏可以降低HLP大鼠血清TG、TC水平,其机制可能与抑制肝脏HMGCR的表达和激活PPARα/CYP7A1/CPT-1信号通路,促进脂肪酸β氧化、胆汁酸代谢有关。

关键词：雪莲果浸膏高脂血症脂质代谢 HMGCR PPARα

非特异性间质性肺炎关键基因与免疫细胞浸润分析及中药预测

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中草药 2023年第15期54卷 4934-4947页

作者：田仁伟张少谦太鹤蓓张雅婷陈明竹罗超吴文丽吴宁贵州医科大学基础医学院化学与生物化学实验室贵州贵阳550004

目的探寻非特异性间质性肺炎相关的关键基因、发病机制、免疫细胞浸润水平和潜在治疗中药。方法从GEO数据库获取基因芯片GSE110147,利用R语言“limma”等相关拓展包筛选差异表达基因,通过STRING和Cytoscape软件构建蛋白质互作网络图,并... 详细信息

目的探寻非特异性间质性肺炎相关的关键基因、发病机制、免疫细胞浸润水平和潜在治疗中药。方法从GEO数据库获取基因芯片GSE110147,利用R语言“limma”等相关拓展包筛选差异表达基因,通过STRING和Cytoscape软件构建蛋白质互作网络图,并筛选出关键基因。关键基因通过基因芯片GSE101286进行验证后,利用R语言“clusterProfiler”等拓展包及Cytoscape软件中的GlueGO插件进基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,再基于CIBERSORT反卷积算法分析免疫细胞浸润模式。最后将关键基因导入Coremine Medical数据库中进行相关中药预测。结果共筛选出407个差异基因和15个关键基因。GO分析显示,非特异性间质性肺炎与剪切体、翻译过程高度相关;KEGG富集结果显示非特异性间质性肺炎与RNA剪接体通路、内质网蛋白质加工通路联系最为密切。免疫细胞浸润分析显示非特异性间质性肺炎患者组织内静息的CD4^(+)记忆T细胞、嗜酸性粒细胞等浸润水平较高,而CD8^(+)T细胞、浆细胞、活化NK细胞和M1巨噬细胞浸润水平较低。通过关键基因筛选到18味中药,其中雷公藤和茯苓有较大治疗潜力。结论通过生物信息学方法,筛选非特异性间质性肺炎的关键基因,明确了潜在治疗中药,为非特异性间质性肺炎发病机制、治疗新靶点研究及新药研发提供新的方向。

关键词：非特异性间质性肺炎生物信息学关键基因免疫浸润雷公藤茯苓

Y染色体短串联重复序列微流控芯片复合扩增检测体系研究

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生物化学与生物物理进展 2024年第3期51卷 696-705页

作者：王道宇万群庄斌赵丽健韩俊萍李彩霞中国人民公安大学侦查学院北京100038 山东第一医科大学基础医学院济南250000 北京博奥晶典生物技术有限公司北京101111 北京市公安局朝阳分局刑事侦查支队北京100025 公安部鉴定中心现场物证溯源技术国家工程实验室北京市现场物证检验工程技术研究中心北京100038

目的构建Y染色体短串联重复序列(Y-STR)微流控芯片扩增检测试剂,并进行性能验证,实现Y-STR基因座的快速全集成检测。方法使用Y-STR微流控芯片检测体系,对其灵敏度、成功率和分型准确率、峰平衡性、精准性和准确性、检材适应性、混合物... 详细信息

目的构建Y染色体短串联重复序列(Y-STR)微流控芯片扩增检测试剂,并进行性能验证,实现Y-STR基因座的快速全集成检测。方法使用Y-STR微流控芯片检测体系,对其灵敏度、成功率和分型准确率、峰平衡性、精准性和准确性、检材适应性、混合物检测能力和抗抑制性进行验证评估。结果DNA标准品9948的模板量≥8 ng,血卡片数≥3片以及口腔拭子刮擦次数≥7次时可获得Y-STR完整分型;165份样本的全集成检测成功率为91.52%,分型准确率为99.74%;不同荧光通道之间的峰高比值为89.81%;10次运行的等位基因分型标准品的片段大小标准差均在0.5 bp以内,20份样本全集成检测的等位基因片段和相应的等位基因标准品之间的片段准确性均在0.5 bp以内;能够对口腔拭子、血卡、唾液卡、烟蒂、血棉签、布片精斑等检材进行准确分型;混合样本中较小贡献者与较大贡献者在1∶3的比例时可获得完整基因分型;在不同浓度的腐殖酸(50~400 mg/L)、靛蓝(20~100 nmol/L)、血红蛋白(100~500μmol/L)等抑制物的干扰下,该体系可获得完整基因分型。结论该体系可应用于国产Quick TargSeq法医DNA现场快速检测系统使用,可在法医学实践中选用。

关键词：法医物证学微流控芯片 Y染色体短串联重复序列