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抑制自噬增强盐酸阿霉素诱导的人结直肠癌细胞凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第3期38卷 237-243页

作者：汤弘婷吴道秋杨瀚林杨娟张艺李梦醒刘虹麟李琴山贵州医科大学医学检验学院临床生物化学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院血液科贵州贵阳550004 北京中日友好医院临床医学研究所北京100000 贵州省产前诊断中心贵州贵阳550004

目的探讨盐酸阿霉素(DOX)抑制结直肠癌HT29、 HCT15细胞增殖的可能机制。方法 HT29、 HCT15细胞采用(0、 0.08、 0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/L DOX处理24、 48、 72 h,CCK-8法检测细胞增殖活性确定DOX最佳处理浓度和处理时间。将... 详细信息

目的探讨盐酸阿霉素(DOX)抑制结直肠癌HT29、 HCT15细胞增殖的可能机制。方法 HT29、 HCT15细胞采用(0、 0.08、 0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/L DOX处理24、 48、 72 h,CCK-8法检测细胞增殖活性确定DOX最佳处理浓度和处理时间。将HT29、 HCT15细胞分别设为对照组(只加DMSO处理)和(0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/LDOX处理组,Western blot法检测抑制自噬对凋亡的影响时添加3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、 3-MA联合DOX组。集落形成实验检测结直肠癌细胞的集落形成能力,Western blot法检测细胞B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、 beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的蛋白表达。结果 DOX抑制结直肠癌细胞的增殖和集落形成,促进细胞发生凋亡,呈浓度依赖性;DOX促进细胞发生自噬,beclin 1和LC3Ⅱ表达增加,呈浓度依赖性;抑制自噬后可增加DOX对结直肠癌细胞的促凋亡作用。结论 DOX抑制结直肠癌细胞增殖并促进其凋亡且抑制自噬有促凋亡作用。

关键词：结直肠癌(CRC) 盐酸阿霉素(DOX) 细胞凋亡自噬

蓝莓及蓝莓联合益生菌对酒精性脂肪性肝病的保护作用

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贵州医科大学学报 2018年第11期43卷 1241-1246,1251页

作者：沈艳艳任婷婷贵州医科大学医学检验学院临床生物化学教研室贵州贵阳550004

目的:分析蓝莓及蓝莓联合益生菌对酒精性脂肪性肝病(AFLD)肝损伤的保护作用及机制。方法:58只C57BL/6J小鼠分为正常控制组(CG组)、模型组(MG组)、蓝莓干预组(BJ组)、蓝莓联合益生菌干预组(BJB组)、SIRT1 siRNA阻断组(SI组)、蓝莓+SIRT1... 详细信息

目的:分析蓝莓及蓝莓联合益生菌对酒精性脂肪性肝病(AFLD)肝损伤的保护作用及机制。方法:58只C57BL/6J小鼠分为正常控制组(CG组)、模型组(MG组)、蓝莓干预组(BJ组)、蓝莓联合益生菌干预组(BJB组)、SIRT1 siRNA阻断组(SI组)、蓝莓+SIRT1阻断组(BJSI组)及蓝莓联合益生菌+SIRT1阻断组(BJBSI组),MG组为10只、其余每组8只;除CG组外,其余6组喂饲利伯De Carli'82饲料复制AFLD模型(所有小鼠均于造模成功后改喂普通饲料),喂饲造模饲料前7 d BJ组、BJB组小鼠分别进行蓝莓、蓝莓联合益生菌预防灌胃;SI组造模成功后,给予慢病毒质粒包装SIRT1 siRNA腹部肝区注射; BJSI组、BJBSI组小鼠造模成功后,分别进行蓝莓、蓝莓联合益生菌干预,同时慢病毒质粒包装SIRT1 siRNA腹部肝区注射;造模喂饲12周时,采用病理学方法确认造模情况,造模成功后10 d时各组小鼠眼框取血、颈椎脱臼处死后取肝组织,采用病理学方法观察各组小鼠肝组织学改变,生化方法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)水平,ELISA法检测小鼠肝组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平。结果:病理检测结果显示,HE染色见MG组有重度脂肪变性、大小不等的脂滴弥漫沉积在胞浆,油红染色呈现染成红色的脂滴大量沉积,呈重度脂肪肝变,提示造模成功; CG组、BJ组、BJB组肝组织脂质沉积较MG组、SI组、BJSI组及BJBSI组肝组织明显减少,肝损害程度减轻; BJ组、BJB组血清TG、TC、LDL-c、MDA、ALT及AST较MG组、SI组、BJSI组和BJBSI组降低,HDL-c、SOD、GSH和SIRT1蛋白水平较MG组、SI组、BJSI组和BJBSI组升高(P <0. 05),且BJB组变化大于BJ组、BJBSI组变化小于BJSI组,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:蓝莓及蓝莓联合益生菌具有抗氧化活性,能拮抗酒精诱导的脂代谢紊乱和脂质过氧化,减轻氧化应激,从而减轻AFLD肝损伤,其机制可能与上调小鼠肝脏SIRT1的表达有关。

关键词：蓝莓益生菌酒精性脂肪性肝病氧化应激脂质过氧化沉默信息因子1

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蓝莓对非酒精性脂肪性肝病的保护作用

贵州医科大学学报 2018年第11期43卷 1247-1251页

作者：沈艳艳任婷婷贵州医科大学医学检验学院临床生物化学教研室贵州贵阳550004

目的:探讨蓝莓对大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用及机制。方法:30只SD大鼠随机均分为正常对照组(CG组)、模型组(MG组)及蓝莓干预组(BJ组),CG组给予普通饲料喂养、正常饮食,MG组、BJ组喂饲复合型高脂饲料复制NAFLD实验动物模型,12周... 详细信息

目的:探讨蓝莓对大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用及机制。方法:30只SD大鼠随机均分为正常对照组(CG组)、模型组(MG组)及蓝莓干预组(BJ组),CG组给予普通饲料喂养、正常饮食,MG组、BJ组喂饲复合型高脂饲料复制NAFLD实验动物模型,12周时MG组取2只大鼠行肝脏病理切片鉴定造模是否成功; BJ组喂饲造模饲料前7 d给予蓝莓原浆(15 mg/100 g)灌胃,造模成功后,喂饲普通饲料,继续蓝莓干预10 d;于造模后第10天取各组大鼠肝脏及血清标本,观察大鼠肝组织病理学变化,全自动生化分析仪检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLc)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c); ELISA法检测小鼠肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。结果:造模后第10天,CG组HE染色肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列,肝索排列整齐; MG组HE染色可见重度脂肪变性,肝小叶结构紊乱,肝细胞胞浆中出现大小不等的脂滴,提示造模成功; BJ组肝细胞排列正常,在中央静脉周围排列呈放射状,比较MG组,脂肪变性明显减轻,接近CG组;与MG组比较,BJ组大鼠血清ALT、AST、TG、TC及LDL-c水平降低,HDL-c水平升高,肝组织中SOD、GSH水平升高,MDA水平降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:蓝莓对大鼠NAFLD肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与蓝莓能增加大鼠肝脏抗氧化酶系表达,拮抗脂质诱导的脂代谢紊乱和氧化应激有关。

关键词：蓝莓非酒精性脂肪性肝病肝损伤肝脏功能脂质代谢氧化应激免疫组织化学法

沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖及凋亡的影响

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中国组织工程研究 2023年第24期27卷 3838-3844页

作者：张艺吴道秋汤弘婷李梦醒刘虹麟陈忠良李琴山贵州医科大学医学检验学院临床生物化学教研室贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院血液科贵州省贵阳市550004 北京中日友好医院临床医学研究所北京市100000 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院贵州省产前诊断中心贵州省贵阳市550004

背景:研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉... 详细信息

背景:研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉默MKRN1基因的细胞系有着可逆的优势,且可规避上述缺点,对于深入研究MKRN1的生物学功能有重要的意义。目的:构建Tet-on慢病毒系统介导的MKRN1基因沉默载体,研究沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖、凋亡的影响。方法:采用RNAi技术,针对MKRN1基因设计3条shRNA(命名为sh1,sh2,sh3),将3条shRNA序列连入四环素诱导表达载体pTripz中验证连入序列;通过三质粒系统转染HEK-293T细胞,并用含有1 mg/L强力霉素的完全培养基培养,进行慢病毒包装,收取48 h及72 h病毒液,将其浓缩后感染HEK-293T细胞,感染48 h后用荧光显微镜观察病毒感染效率。通过实时荧光定量PCR、Western blot检测MKRN1的敲减效率;Western blot检测四环素诱导表达系统是否构建成功;通过集落形成实验及Western blot检测沉默MKRN1表达后对HEK-293T细胞增殖、凋亡能力的影响。结果与结论:(1)设计的3条MKRN1-短发夹RNA(sh1、sh2、sh3),均成功连入Tet-on载体,且各组载体序列正确;通过慢病毒成功感染HEK-293T细胞;(2)实时荧光定量PCR及Western blot检测发现3条shRNA序列中1号序列敲低MKRN1水平明显降低(P生物学功能奠定基础,也为研究其他基因的生物学功能提供一个方法学上的参考。

关键词： MKRN1基因四环素诱导调控表达系统基因表达调控慢病毒

基于G4-配体的DNA模拟酶在生物传感中的发展与应用

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第12期38卷 1621-1629页

作者：戴枫陈卓颖段晓雷遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563000 遵义医科大学检验医学院临床生物化学检验教研室贵州遵义563000

鸟苷酸-四联体DNA(G4 DNA)是由富含串联重复鸟苷酸(G)的DNA或RNA序列形成的G4片层,并堆叠而成一类独特的核酸二级结构。G4 DNA结合多种特异性配体可形成具有催化过氧化氢活性的G4 DNA模拟酶(G4 DNAzyme)。由于G4 DNAzyme存在着序列构成... 详细信息

鸟苷酸-四联体DNA(G4 DNA)是由富含串联重复鸟苷酸(G)的DNA或RNA序列形成的G4片层,并堆叠而成一类独特的核酸二级结构。G4 DNA结合多种特异性配体可形成具有催化过氧化氢活性的G4 DNA模拟酶(G4 DNAzyme)。由于G4 DNAzyme存在着序列构成简便灵活、适合多样传感平台检测等特点,其在新型生物传感方法研发、医学检测新技术研究等领域中应用前景广阔。本文主要依据G4 DNA结合配体的不同,对近年来新发展出的G4 DNAzyme进行分类与回顾,归纳为含氯化血红素(hemin)的G4-Hemin DNAzyme与非G4-Hemin DNAzyme。前者是目前G4 DNA模拟酶的研究主流——本文主要归纳了G4-Hemin DNAzyme在金属阳离子、生物小分子及生物大分子的检测分析方向上所取得的重要研究进展,并阐述其在生物传感领域的影响和优势;后者中的配体则主要包括金属阳离子N-甲基吗啡啉(4-methylmorpholine,NMM)、硫磺素T(thioflavin T,ThT)及新型金属配体(Cu2+Ce3+)等。本文归纳其构成多样的G4 DNAzyme在生物传感领域、医学检测方向的最新研究进展与应用实例。全文最后对G4 DNAzyme的未来研究方向,以及进一步提高其催化检测灵敏度和准确性的积极作用提出展望。

关键词：鸟嘌呤-四聚体配体 DNA模拟酶氯化血红素医学检验新技术

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞System Xc-/GSH/GPX4铁死亡通路的表达及其对炎症因子分泌的影响

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安徽医科大学学报 2024年第1期59卷 64-70页

作者：刘灿马武开陈昌明安阳蒋总黄海贵州医科大学医学检验学院临床生物化学与分子生物学教研室贵阳550004 贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵阳550004

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)胱氨酸/谷氨酸逆转运体(System Xc-)/谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)铁死亡通路中相关基因与蛋白的表达及其对炎症因子分泌的影响。方法纳入RA患者及同期健康体检者各30例... 详细信息

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)胱氨酸/谷氨酸逆转运体(System Xc-)/谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)铁死亡通路中相关基因与蛋白的表达及其对炎症因子分泌的影响。方法纳入RA患者及同期健康体检者各30例,采用Ficoll-hypaque密度梯度离心法分离PBMC,将细胞分为健康对照、RA、铁死亡抑制剂、铁死亡诱导剂组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术FerroOrange荧光探针检测细胞内Fe 2+相对荧光强度、DHE荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)阳性细胞比例,蛋白免疫印迹及实时荧光定量PCR(qPCR)检测核转录因子红系2相关因子(Nrf2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、GPX4蛋白与mRNA的表达,流式细胞术检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1、IL-6的含量。结果与健康对照组比较,RA组PBMC内Fe 2+浓度和ROS水平升高,Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白和mRNA的表达降低,PBMC上清液中TNF-α、IL-1、IL-6的含量升高,差异均有统计学意义。与RA组比较,铁死亡抑制剂组PBMC内Fe 2+浓度和ROS水平降低,SLC7A11、GPX4蛋白和mRNA的表达升高,Nrf2蛋白的表达升高,PBMC上清液中IL-6的含量降低、TNF-α的含量升高,差异均有统计学意义。与RA组比较,铁死亡诱导剂组PBMC内ROS水平升高,SLC7A11蛋白和mRNA的表达降低,Nrf2蛋白的表达降低、GPX4蛋白的表达升高,PBMC上清液中TNF-α、IL-1的含量升高,差异有统计学意义。与铁死亡诱导剂组比较,RA患者PBMC细胞活力降低,差异有统计学意义(P<0.0001)。结论RA患者PBMC中存在铁死亡,抑制或诱导RA患者PBMC铁死亡,将抑制或促进炎性因子分泌。抑制RA患者PBMC铁死亡可能有助于治疗RA。

关键词：类风湿关节炎外周血单个核细胞铁死亡 System Xc-/GSH/GPX4

人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原表位区预测及其小鼠多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第4期39卷 363-370页

作者：王金丽张新展高义沙周莉莉孙达权贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的优化人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原后制备小鼠抗多克隆抗体,并鉴定抗体特异性.方法利用生物信息学方法预测SHISAL1蛋白的抗原表位区,选取SHISAL1蛋白第28~97位氨基酸残基组成的多肽作为抗原,并命名为(SHISAL1-N);利用分子克隆技术,... 详细信息

目的优化人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原后制备小鼠抗多克隆抗体,并鉴定抗体特异性.方法利用生物信息学方法预测SHISAL1蛋白的抗原表位区,选取SHISAL1蛋白第28~97位氨基酸残基组成的多肽作为抗原,并命名为(SHISAL1-N);利用分子克隆技术,将其编码序列克隆后插入pET-28a载体中构建重组质粒pET28a-SHISAL1-N.然后将pET28a-SHISAL1-N和已构建的pET28a-SHISAL1全长重组质粒转化BL21(DE3),用异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达.两种蛋白纯化后分别免疫雌性昆明小鼠,Western blot法、免疫沉淀及免疫荧光细胞化学染色法观察两种抗体的特异性与灵敏性.结果成功构建pET28a-SHISAL1-N重组质粒,诱导两种融合蛋白表达,获得两种类型的SHISAL1小鼠多克隆抗体.Western blot结果表明以SHISAL1为免疫原所制备的抗体特异性和灵敏性较差,而以SHISAL1-N免疫原所制备的抗体能特异性识别不同的细胞内源性的SHISAL1蛋白;免疫沉淀结果表明SHISAL1-N抗体可以结合肝癌细胞中的SHIISAL1蛋白;免疫荧光细胞化学染色结果证明SHISAL1-N抗体与细胞质中的SHISAL1蛋白特异性结合.结论成功优化SHISAL1抗原并制备了小鼠抗人SHISAL1多克隆抗体,可应用于Western blot实验、免疫沉淀和免疫荧光细胞化学染色.

关键词： Shisa样蛋白1(SHISAL1) 抗原表位多肽原核表达多克隆抗体

基于细胞焦亡与免疫相关基因构建及验证肝细胞癌预后风险模型

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中国免疫学杂志 2024年第5期40卷 981-991页

作者：谢彬任婷婷贵州医科大学医学检验学院临床生化教研室贵阳550004

目的:利用生物信息学方法构建并验证细胞焦亡与免疫相关基因的肝细胞癌预后风险模型,根据其风险评分探索免疫相关性特征,以指导个性化免疫治疗。方法:从TCGA、GEO官网分别下载TCGA-LIHC和GSE14520基因表达谱,从INNATEDB和IMMPORT官网下... 详细信息

目的:利用生物信息学方法构建并验证细胞焦亡与免疫相关基因的肝细胞癌预后风险模型,根据其风险评分探索免疫相关性特征,以指导个性化免疫治疗。方法:从TCGA、GEO官网分别下载TCGA-LIHC和GSE14520基因表达谱,从INNATEDB和IMMPORT官网下载免疫相关基因。以TCGA为训练组,GEO为测试组,对训练组细胞焦亡基因表达谱采用Cox回归分析,筛选预后相关基因进行共识聚类分组,提取分组间差异基因与免疫相关基因的交集基因,对交集基因应用单因素Cox和Lasso回归分析,得到预后相关风险评分模型。根据训练组风险中位值划分高低风险组,利用测试组验证模型可行性,最后探索训练组富集分析(GO、KEGG、GSEA)、免疫相关性分析及模型基因蛋白表达情况。结果:共筛选出9个可靠的风险模型基因(ICAM1、S100P、FABP3、CCL20、HRG、IGHM、SPP1、C4BPA、C6)。GO富集分析显示风险差异基因主要参与各种代谢过程。KEGG富集分析显示风险差异基因主要参与补体和凝血级联信号通路。GSEA富集分析显示高风险组与致癌途径的激活密切相关。在免疫浸润、免疫相关通路及免疫检查点中发现高低风险组具有显著差异。HPA数据库证明ICAM1、S100P、SPP1模型基因免疫组化表达存在明显差异。结论:9个基因组成的风险模型可能成为肝细胞癌发生、发展及预后相关的潜在生物标志物,并为优化肝细胞癌的诊治提供新线索。

关键词：肝细胞癌细胞焦亡免疫相关基因预后免疫浸润

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P21参与肺癌耐药的研究进展

中国肺癌杂志 2020年第7期23卷 597-602页

作者：符甜梁爱玲刘勇军广东省医学分子诊断重点实验室东莞523808 广东医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室广东医科大学医学检验学院临床生物化学教研室

肺癌是全球发生率最高和死亡人数最多的恶性肿瘤。近些年肺癌的治疗取得重大突破,但是随着病情的进展,患者不可避免地出现耐药,药物疗效大大降低。P21蛋白是一种在肿瘤中发挥双重作用的蛋白,既能调控细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制细胞增... 详细信息

肺癌是全球发生率最高和死亡人数最多的恶性肿瘤。近些年肺癌的治疗取得重大突破,但是随着病情的进展,患者不可避免地出现耐药,药物疗效大大降低。P21蛋白是一种在肿瘤中发挥双重作用的蛋白,既能调控细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖,也能保护细胞抵抗凋亡,在肿瘤细胞耐药中发挥重要作用。本文就P21与肺癌耐药及其相关研究进行综述,为临床肺癌的个体化治疗与克服肺癌耐药提供新的思路。

关键词：肺肿瘤 P21 耐药