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甲型流感病毒H1N1血凝素茎部亚单位疫苗与不同佐剂组合在小鼠中诱导的免疫应答与保护

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病毒学报 2024年第1期40卷 1-12页

作者：王瑭琪韩瑞雯程雪婷邴佳洛李佳孙树才郭俊佳翟程程郭晓炎王东红王文玲周剑芳邓瑶谭文杰温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会生物安全重点实验室北京102206 新乡医学院公共卫生学院公共卫生新乡453003 河北医科大学第二医院核医学科石家庄050000

通过真核表达系统表达并纯化流感病毒H1N1血凝素(Haemagglutinin,HA)茎部,将其与不同佐剂联合免疫小鼠,评价其免疫原性及攻毒保护效果。本研究以密码子优化且结构修饰的甲型流感病毒A/Brisbane/59/2007(H1N1)的HA茎部为目的基因构建真... 详细信息

通过真核表达系统表达并纯化流感病毒H1N1血凝素(Haemagglutinin,HA)茎部,将其与不同佐剂联合免疫小鼠,评价其免疫原性及攻毒保护效果。本研究以密码子优化且结构修饰的甲型流感病毒A/Brisbane/59/2007(H1N1)的HA茎部为目的基因构建真核表达质粒pcDNA3.1‐MiniHA(H1),转染HEK‐293T细胞,通过镍离子亲和层析柱纯化Mini‐HA。将Mini‐HA分别与Al(OH)_(3)、Al(OH)_(3)+CPG ODN、AddaS03^(TM)三种佐剂联合免疫小鼠,通过ELISA、ELISPOT和细胞内因子染色进行体液与细胞免疫检测,以H1N1‐PR8进行攻毒保护试验,监测小鼠存活率、体重变化、肺病毒载量以及肺组织病理变化,评估其保护效果。结果显示,Mini‐HA表达形成三聚体结构,Mini‐HA各组初次免疫后即可检测到针对HA茎部及全长HA的特异性IgG,加强免疫后抗体滴度显著增高;Mini‐HA联合Al(OH)_(3)+CPG ODN佐剂可以刺激Th1型细胞因子分泌,联合AddaS03^(TM)佐剂可以刺激Th1/Th2型细胞因子分泌;攻毒保护试验中,Mini‐HA联合Al(OH)_(3)+CPG ODN或AddaS03^(TM)佐剂组小鼠存活率达100%,体重下降低于5%,其中Mini‐HA联合AddaS03^(TM)佐剂组肺组织结构完整,仅见小部分肺泡腔代偿性扩张以及少量淋巴细胞浸润。本研究成功纯化了HA茎部蛋白Mini‐HA,联合佐剂免疫小鼠具有良好的免疫原性,以AddaS03^(TM)佐剂效果最好,可以诱导产生特异性体液与细胞免疫应答,保护小鼠抵御H1N1‐PR8流感病毒的攻击,有效抑制病毒复制、减少肺组织病理损伤。

关键词：流感亚单位疫苗佐剂血凝素茎部免疫原性

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大麻二酚对小鼠肝纤维化抗氧化作用

中国公共卫生 2022年第2期38卷 181-185页

作者：马润舒远辉谢娜周艳项一宁王豫萍贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫检验科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院病理科

目的探讨大麻二酚(CBD)对四氯化碳(CCL_(4))构建小鼠肝纤维化模型的抗氧化作用。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组,每组8只,依次为对照组,模型组,低、高剂量CBD组(4、8 mg/kg),秋水仙素组(0.2 mg/kg)。对照组小鼠腹腔注射花生油,剩余小... 详细信息

目的探讨大麻二酚(CBD)对四氯化碳(CCL_(4))构建小鼠肝纤维化模型的抗氧化作用。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组,每组8只,依次为对照组,模型组,低、高剂量CBD组(4、8 mg/kg),秋水仙素组(0.2 mg/kg)。对照组小鼠腹腔注射花生油,剩余小鼠按照5 mL/kg注射30%CCL_(4),每周2次,连续10周。CBD组和秋水仙素组在造模的同时每次注射相应剂量药物,对照组和模型组注射生理盐水。自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT);天狼星红染色检查肝组织胶原沉积情况;试剂盒检测肝组织氧化应激相关成分超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA);蛋白印迹(WB)检测肝组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基gp91phox、核转录相关因子(Nrf2)表达情况。结果与模型组比较,低、高剂量CBD组和秋水仙素组肝指数[分别为(4.71±0.34)%、(4.68±0.20)%、(4.24±0.40)%]、血清ALT含量[分别为(79.38±14.79)、(87.13±9.40)、(77.88±3.76)U/L]明显降低(P<0.05),胶原沉积显著减少(P<0.05),肝组织SOD活力[分别为(259.90±36.05)、(223.13±37.49)、(246.39±53.49)U/mgprot]、GSH含量[分别为(63.07±16.71)、(100.38±22.44)、(96.39±19.40)nmol/mgprot]明显增高(P<0.05),而MDA含量[分别为(2.48±0.43)、(2.74±0.88)、(2.84±0.87)nmol/mgprot]显著降低(P<0.05),gp91蛋白表达降低(P<0.05),Nrf2蛋白表达增加(P<0.05)。结论CBD对CCL_(4)诱导的小鼠肝纤维化有一定的保护作用,其作用机制可能与调节gp91、Nrf2蛋白表达,减少自由基、抑制脂质过氧化相关。

关键词：大麻二酚四氯化碳肝纤维化氧化应激

南京地区健康人群血清可溶性程序性死亡蛋白-1参考区间的建立

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临床检验杂志 2024年第3期42卷 186-192页

作者：潘婕徐琴张俊欧明蓉陈琳沈瀚陈雨欣南京医科大学鼓楼临床医学院南京210008 句容市人民医院检验科江苏句容212499 南京大学医学院附属鼓楼医院检验科南京210008

目的探讨健康人群血清可溶性程序性死亡蛋白-1(soluble programmed cell death protein-1,sPD-1)水平及其影响因素,初步建立南京地区健康人群血清sPD-1水平的参考区间。方法本研究纳入2023年5月至9月在南京鼓楼医院及句容人民医院进行... 详细信息

目的探讨健康人群血清可溶性程序性死亡蛋白-1(soluble programmed cell death protein-1,sPD-1)水平及其影响因素,初步建立南京地区健康人群血清sPD-1水平的参考区间。方法本研究纳入2023年5月至9月在南京鼓楼医院及句容人民医院进行体检的健康人群375例,其中男性194例,女性181例。留取健康人群的血清标本,采用基于新型探针生物传感器的全自动荧光免疫分析法(tests-on-probes,TOP法)检测血清sPD-1水平,并分析性别、年龄及其他实验室指标对sPD-1的影响;采用非参数法计算总体及不同年龄段健康人群血清sPD-1水平的参考区间。结果健康人群血清sPD-1水平为108.82(92.80,134.95)pg/mL,男性和女性健康人群血清sPD-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。进一步将健康人群按照年龄分为临床与实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institutes,CLSI)C28-A3文件推荐的非参数法计算sPD-1参考区间,健康人群总体血清sPD-1水平的参考区间(第2.5%~97.5%百分位的浓度范围)为66.7~214.7 pg/mL;将健康人群分为<40岁、40~64岁、≥65岁3个年龄段,其对应的血清sPD-1在第2.5%~97.5%百分位的浓度范围分别为71.9~202.7 pg/mL、59.4~220.0 pg/mL、69.6~229.0 pg/mL。结论本研究初步建立了南京地区血清sPD-1健康人群以及分为3个年龄段的参考区间。

关键词：可溶性程序性死亡蛋白-1 参考区间荧光免疫分析法

肝素酶在人β-防御素-3抗甲型流感病毒的作用研究

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中国病原生物学杂志 2022年第1期17卷 14-17,21页

作者：杨小余马贵凤唐源罗红江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州医科大学实验动物中心

目的探讨肝素酶在人β-防御素-3(Humanβ-defensin 3,HBD3)抗甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)中的作用。方法采用CCK8法检测肝素酶对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性情况;经肝素酶处理BEAS-2B细胞,并在4℃下与HBD3和IAV病毒液孵育... 详细信息

目的探讨肝素酶在人β-防御素-3(Humanβ-defensin 3,HBD3)抗甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)中的作用。方法采用CCK8法检测肝素酶对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性情况;经肝素酶处理BEAS-2B细胞,并在4℃下与HBD3和IAV病毒液孵育2 h,分为未处理组(HBD3+IAV),肝素酶+HBD3+IAV组,提取细胞总RNA和总蛋白,采用qRT-PCR检测感染细胞中的NP mRNA表达水平,Western blot和免疫共沉淀检测HBD3和IAV HA蛋白表达水平以及HBD3和HA蛋白的相互作用。试验设未经肝素酶处理BEAS-2B细胞对照组。结果肝素酶作用48 h,其浓度在30 U/mL以下浓度时对细胞无毒性作用;HBD3干预IAV感染细胞后细胞中的NP mRNA表达水平显著降低(t=12.81、26.13、28.68,P<0.01),经肝素酶处理IAV感染的细胞其NP mRNA表达水平升高(t=-4.55,P<0.05),结果显示HBD3可抑制病毒复制,而经肝素酶处理IAV感染的细胞其病毒未减少,表明只使用肝素酶不能降低病毒感染;与未经肝素酶处理的细胞相比,经肝素酶处理的细胞中HBD3和HA蛋白表达水平降低,以及HBD3和HA蛋白的相互作用显著降低(P<0.01),表明HBD3和肝素酶共同作用可降低HA的表达来阻止IAV进入细胞。结论肝素酶和HBD3共同作用可以抑制病毒进入细胞,具有抗甲型流感病作用。

关键词：甲型流感病毒人β-防御素3 肝素酶糖胺聚糖蛋白

紫薯花青素的提取及其对小鼠免疫调节活性的研究

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长治医学院学报 2024年第3期38卷 180-183页

作者：郝广萍宋善友公维丽赵欣晨山西医科大学汾阳学院医学检验系山西汾阳032200 山西医科大学汾阳学院卫生信息管理系齐鲁工业大学(山东省科学院)生物研究所山东省生物传感器重点实验室

目的:探讨采用微波辅助法提取的紫薯花青素对小鼠的免疫调节作用。方法:选取新鲜紫薯5 g,微波辅助法获得紫薯花青素的粗提物(3.8±0.6)mg。取64只4周龄昆明小鼠为实验对象,分为对照组(生理盐水100 mg·kg^(-1))和不同剂量紫薯花青素低... 详细信息

目的:探讨采用微波辅助法提取的紫薯花青素对小鼠的免疫调节作用。方法:选取新鲜紫薯5 g,微波辅助法获得紫薯花青素的粗提物(3.8±0.6)mg。取64只4周龄昆明小鼠为实验对象,分为对照组(生理盐水100 mg·kg^(-1))和不同剂量紫薯花青素低、中、高处理组(40 mg·kg^(-1)、80 mg·kg^(-1)、160 mg·kg^(-1)),每组各16只,每日灌胃处理,30 d后进行小鼠免疫器官指数、腹腔巨噬细胞的吞噬功能以及脾细胞的增殖能力免疫实验测定。结果:与对照组比较,不同剂量紫薯花青素处理组的脾脏指数均显著提高(P0.05);不同剂量紫薯花青素处理组的巨噬细胞吞噬率与吞噬指数均明显增强,中高剂量组增加更加显著(P免疫水平,提高小鼠脾淋巴细胞的增殖能力;表明紫薯花青素具有一定的免疫调节功能。

关键词：紫薯花青素提取免疫调节

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85例结节性红斑患者复发因素分析

赣南医学院学报 2024年第3期44卷 244-247,254页

作者：赖忆玲廖明意温燕华郑威叶小英赣南医科大学第一临床医学院江西赣州341000 赣南医科大学第一附属医院输血科江西赣州341000 赣南医科大学第一附属医院皮肤科国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心分中心银屑病规范化诊疗中心江西赣州341000

目的:探讨结节性红斑(Erythema nodosum,EN)复发的有关因素。方法:将2016年1月—2022年6月在赣南医科大学第一附属医院诊断为EN的患者分为复发组(26例)和未复发组(59例),对其临床资料进行回顾性对比分析。采用χ^(2)检验及t检验比较2组... 详细信息

目的:探讨结节性红斑(Erythema nodosum,EN)复发的有关因素。方法:将2016年1月—2022年6月在赣南医科大学第一附属医院诊断为EN的患者分为复发组(26例)和未复发组(59例),对其临床资料进行回顾性对比分析。采用χ^(2)检验及t检验比较2组临床特征及实验室检验指标,并对其进行多因素Logistic回归分析;比较EN患者结核菌素纯蛋白衍生物(Purified protein derivative of tuberculin,PPD)试验与结核感染T细胞斑点试验(T cell spot test of tuberculosis infection,T-SPOT.TB)的结果。结果:EN的复发与发病部位(χ^(2)=8.137,P=0.004)、C反应蛋白(χ^(2)=5.412,P=0.020)、中性粒细胞数目(χ^(2)=8.485,P=0.014)有关;多因素Logistic回归分析显示,发病部位(OR=5.394,95%CI=1.744~16.689)、C反应蛋白偏高(OR=3.383,95%CI=1.006~11.375)为EN复发的独立危险因素(P<0.05);T-SPOT.TB结果阳性时抗结核治疗的复发率(10%)比PPD试验结果阳性的复发率(81.4%)低(P<0.05)。结论:EN的复发与发病部位、C反应蛋白、中性粒细胞数目有关;影响EN复发的独立危险因素为发病部位、C反应蛋白;T-SPOT.TB与PPD试验联合应用有助于发现EN患者的结核感染,2项结果阳性时抗结核治疗的EN复发率较低。

关键词：结节性红斑结核复发结核感染T细胞斑点试验结核菌素纯蛋白衍生物试验

以马尔尼菲篮状菌肺炎起病的X连锁高IgM综合征婴儿1例

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中国真菌学杂志 2024年第2期19卷 173-176页

作者：姚亚男吕雪盈李文敏袁凯旋廖亚龙张娟肖伟欢南方医科大学附属广东省人民医院(广东省医学科学院)检验科广州510080 广州南方学院广州510900

X连锁高IgM综合征(X-linked hyper-immunoglobulin M syndrome,XHIGM)是罕见的原发性免疫缺陷病,该病以反复感染为特征,易感染机会致病微生物。临床上以马尔尼菲篮状菌肺炎起病的XHIGM更为罕见。该文回顾性分析1例以马尔尼菲篮状菌肺炎... 详细信息

X连锁高IgM综合征(X-linked hyper-immunoglobulin M syndrome,XHIGM)是罕见的原发性免疫缺陷病,该病以反复感染为特征,易感染机会致病微生物。临床上以马尔尼菲篮状菌肺炎起病的XHIGM更为罕见。该文回顾性分析1例以马尔尼菲篮状菌肺炎起病的X连锁高IgM综合征婴儿的临床资料,实验室、影像学检查结果和诊疗经过并探讨其基因型,结合最新文献复习,以提高对该疾病的认识。

关键词： X连锁高IgM综合征马尔尼菲篮状菌婴儿基因型宏基因组学第二代测序技术

不同品牌ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中IL-8对比研究

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现代医药卫生 2024年第5期40卷 741-744,749页

作者：张梅阳小凤饶忠美余福勋叶芝旭贵州大学生物医学系贵州贵阳550000 遵义医科大学第一临床医学院儿科贵州遵义563000 贵州省人民医院儿科贵州贵阳550002 贵州省人民医院中心实验室贵州贵阳550002

目的对比研究2种不同品牌ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中人白细胞介素-8(IL-8)水平情况。方法不同浓度聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激A549细胞10、24 h,收集细胞上清液,共获得40份样本,分为1~10组,每组4份。采用2种ELISA试剂盒(试剂盒A... 详细信息

目的对比研究2种不同品牌ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中人白细胞介素-8(IL-8)水平情况。方法不同浓度聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激A549细胞10、24 h,收集细胞上清液,共获得40份样本,分为1~10组,每组4份。采用2种ELISA试剂盒(试剂盒A、试剂盒B)检测细胞培养上清液中IL-8水平,对比2个试剂盒检测得到的组间数据或同组数据的一致性或差异性。结果 2种试剂盒拟合曲线中相关系数值分别为:0.999 600、0.999 602,检测标准品结果相关性良好。试剂盒B检测样品1、2组中IL-8水平比较,差异有统计学意义(P0.05);2种试剂盒检测样品8、9组及样品9、10组中IL-8水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。仅试剂盒B检测样品1、5组中IL-8水平明显低于试剂盒A,差异有统计学意义(P<0.01)。结论不同品牌ELISA试剂盒均可用于检测IL-8水平,但检测结果仍在一定程度上存在差异。为避免实验误差,研究中应尽量选择同一个厂家生产的同品牌试剂盒。

关键词：酶联免疫吸附试验上皮细胞白细胞介素-8 细胞培养实验室检测

耐受性树突状细胞在胶原蛋白诱导性关节炎大鼠体内形成微嵌合体

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第11期38卷 967-971页

作者：包伦敏马贵兰龙调玉蒋红梅贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州贵阳550025 安顺市人民医院检验科贵州安顺561099

目的寻找耐受性树突状细胞(tDC)输注到胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型大鼠后形成微嵌合体的证据。方法骨髓来源的DC前体细胞经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)及核因子κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN decoy)诱导... 详细信息

目的寻找耐受性树突状细胞(tDC)输注到胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型大鼠后形成微嵌合体的证据。方法骨髓来源的DC前体细胞经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)及核因子κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN decoy)诱导成tDC,再用1,1′-十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基三碳氰基碘化物(DiR)标记后输注到CIA大鼠体内。在细胞输注的第4 h、 24 h、 5 d、 10 d、 15 d,用小动物活体成像系统观察荧光强度和分布,第15天处死大鼠,检测主要脏器荧光信号。结果 tDC高表达OX62,低表达CD80和CD86。荧光信号主要集中在胸腹部和左后关节,胸腹部荧光信号在24 h最强,左后关节荧光信号在5 d最强。在细胞输注的15 d仍能检测到荧光,并且病足左后关节始终保持较强荧光信号。离体器官肺、肝、脾、肠系膜淋巴结中荧光信号较强,肾荧光信号较弱,心脏几乎没有荧光。结论 tDC在病足关节、肺、肝、脾、肠系膜淋巴结形成微嵌合体。

关键词：耐受性树突状细胞(tDC) 胶原蛋白诱导性关节炎(CIA) 微嵌合类风湿性关节炎(RA)