检索结果-南通市图书馆

载富血小板血浆水凝胶对L929细胞氧化损伤的保护作用

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中国组织工程研究 2024年

作者：王自林牟秋菊刘宏杰申玉雪祝丽丽贵州医科大学附属医院输血科贵州医科大学医学检验学院临床检验基础与血液学检验教研室

背景：在慢性创面愈合过程中，活性氧的过量生成可能会损害L929成纤维细胞的功能，从而延缓创面修复，因此保护成纤维细胞免受氧化应激的影响对于促进创面愈合非常重要。目的：评估羧甲基壳聚糖-氧化硫酸软骨素/富血小板血浆(CMC-OCS/P... 详细信息

背景：在慢性创面愈合过程中，活性氧的过量生成可能会损害L929成纤维细胞的功能，从而延缓创面修复，因此保护成纤维细胞免受氧化应激的影响对于促进创面愈合非常重要。目的：评估羧甲基壳聚糖-氧化硫酸软骨素/富血小板血浆(CMC-OCS/PRP)水凝胶对H2O2刺激下L929细胞的保护作用。方法：制备CMC-OCS/PRP水凝胶，表征水凝胶的微观形貌、降解性能、清除H2O2与羟基自由基的能力及生物相容性。取生长状态良好的L929细胞，分5组培养：对照组常规培养，H2O2组加入H2O2,CMC-OCS组加入羧甲基壳聚糖-氧化硫酸软骨素水凝胶浸提液+H2O2,PRP组加入富血小板血浆凝胶浸提液+H2O2,CMC-OCS/PRP组加入羧甲基壳聚糖-氧化硫酸软骨素/富血小板血浆水凝胶浸提液处理+H2O2，每组先加入水凝胶浸提液处理6 h，然后再加入H2O2处理24 h。培养结束后，检测细胞活性氧及丙二醛水平，细胞凋亡、胶原纤维Ⅰ蛋白表达。在加入H2O2的情况下，将上述水凝胶浸提液分别与L929成纤维细胞直接或间接共培养36 h，通过划痕实验、Transwell小室实验检测细胞的迁移能力。结果与结论：(1)CMC-OCS/PRP水凝胶具有均匀相互关联的多孔结构及良好的降解能力，体外可有效清除H2O2与羟基自由基，并且具有良好的生物相容性；(2)与对照组比较，H2O2组细胞凋亡率、细胞活性氧与丙二醛水平升高(P0.05)；与H2O2组比较，CMC-OCS组、CMC-OCS/PRP组细胞活性氧水平降低(P0.05)；与H2O2组比较，PRP组、CMC-OCS组、CMC-OCS/PRP组细胞迁移数量、迁移面积均增加(P<0.05)，并且以CMC-OCS/PRP组增加最显著；(4)在氧化应激条件下，CMC-OCS/PRP水凝胶可改善成纤维细胞的迁移能力，抗细胞凋亡并保护细胞伸展功能。

关键词：富血小板血浆羧甲基壳聚糖氧化硫酸软骨素水凝胶 L929细胞抗氧化

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m6A相关基因在宫颈癌中的表达及临床分析

基因组学与应用生物学 2022年第1期41卷 185-192页

作者：许修颖龚荣府杨娉娉方文贵州医科大学医学检验学院临床生化教研室贵阳550004

为探讨宫颈癌(cervical cancer,CC)中N6-甲基腺苷(m6A)修饰相关基因的表达及临床意义,从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中下载3个宫颈癌mRNA表达相关的数据集,筛选出m6A相关基因(METTL3、METTL14、METTL16、WTAP、KIAA1429、RBM15、ZC3H13、FTO、ALKBH5、YTHDF1/2/3、YTHDC1、HNRNPA2B1、HNRNPC)在宫颈癌中的表达情况。对RBM15进行生物信息学分析,利用UALCAN分析RBM15表达与临床病理特征的关系,LinkedOmics数据库用于RBM15相关共表达基因分析,STRING构建蛋白质相互作用网络,利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析RBM15与宫颈癌患者预后关系。GEO数据库差异分析结果显示RBM15在宫颈癌中的表达呈上升趋势(P临床病理特征有关(P学意义(HR=1.32,P=0.24)。本研究筛选了m6A相关基因在宫颈癌中的差异表达情况,并对RBM15进行生物信息学的分析,为RBM15在宫颈癌中的作用分析提供新的思路。

关键词：宫颈癌 m6A修饰 RBM15 生物信息学预后

多色流式细胞术检测微小残留病变在CD19-CAR-T桥接allo-HSCT治疗B-ALL患者监测的意义和价值

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中华检验医学杂志 2022年第8期45卷 813-819页

作者：陈曼赵玮傅旻婧王爱先张改玲邱丽媛王榕赵艳丽张弦王卉河北燕达陆道培医院检验科廊坊065201 北京陆道培医院病理与医学检验科北京100176 贵州医科大学检验医学院临床微生物与免疫学教研室贵阳550025

目的探讨多色流式细胞术(MFC)监测微小残留病变(MRD)在CD19嵌合抗原受体T细胞(CD19-CAR-T细胞)治疗后桥接异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗难治、复发急性B淋巴细胞白血病(r/r B-ALL)患者过程中的意义和价值。方法收集2019年1月至7... 详细信息

目的探讨多色流式细胞术(MFC)监测微小残留病变(MRD)在CD19嵌合抗原受体T细胞(CD19-CAR-T细胞)治疗后桥接异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗难治、复发急性B淋巴细胞白血病(r/r B-ALL)患者过程中的意义和价值。方法收集2019年1月至7月河北燕达陆道培医院收治的r/r B-ALL患者37例,年龄15(6,19)岁,其中男24例,女13例,均为经CD19-CAR-T细胞免疫治疗桥接allo-HSCT治疗的患者。采用多色流式细胞技术以胞浆CD79a抗体设B细胞门监测患者在CART治疗前第0天、治疗后第15天、第28天及移植后骨髓、脑脊液样本、组织样本的MRD值评估肿瘤细胞残存以及肿瘤累及位置,监测CD19阳性B细胞在移植前恢复情况及CD19阳性B细胞恢复距离CAR-T细胞回输天数评估CAR-T细胞实际杀伤效果,同时进行患者各时间点外周血CAR-T细胞计数等。采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析单因素累积生存差异。结果(1)37例患者中8例死亡,29例存活。5例患者移植后复发,其中复发患者4例死亡,1例存活。(2)死亡组患者在CAR-T细胞免疫治疗后到桥接移植前MFC-MRD阴性缓解率为5/8,低于存活组28/29(χ^(2)=7.540,P=0.006);回输第15天阴性缓解率为3/8,低于存活组24/29(χ^(2)=6.512,P=0.011);回输第28天阴性缓解率为3/8,低于存活组26/29(χ^(2)=10.065,P=0.002)。而死亡组伴髓外MFC-MRD阳性肿瘤浸润率为(7/8)高于存活组(14/29)(χ^(2)=3.931,P=0.047)。CAR-T细胞免疫治疗后,死亡组CD19阳性细胞恢复时间即CAR-T细胞可对CD19阳性细胞杀伤时间42.00(30.00,49.00)d短于生存组55.00(41.50,73.50)d(Z=0.022,P=0.020)。结论利用多色流式细胞术检测B-ALL患者微小残留病变发现,在CD19-CAR-T细胞免疫治疗后到桥接allo-HSCT前、回输第15天、回输第28天等时间点,阳性结果均提示预后不良。这一结果为临床进行对症治疗提供一定指导意义。

关键词：白血病,B细胞嵌合抗原受体T细胞异基因造血干细胞移植微小残留病变多色流式细胞技术

临床免疫学检验技术课程教学中融入思政教育的探索与实践

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国际检验医学杂志 2022年第13期43卷 1661-1664页

作者：黄琳燕郝婷婷李朋朋李世宝齐素华曾令宇徐州医科大学医学技术学院临床微生物学与免疫学检验教研室江苏徐州221004

立德树人是高等教育事业的中心环节。根据临床免疫学检验技术课程特点融入思想政治(简称“思政”)教育元素,提高课程教学质量是医学高等院校培养高质量人才的重中之重。本文阐述了临床免疫学检验技术课程中融入思政教育元素的总体设计... 详细信息

立德树人是高等教育事业的中心环节。根据临床免疫学检验技术课程特点融入思想政治(简称“思政”)教育元素,提高课程教学质量是医学高等院校培养高质量人才的重中之重。本文阐述了临床免疫学检验技术课程中融入思政教育元素的总体设计和实施方式,以及实施效果,旨在把思政教育的元素贯穿临床免疫学检验技术教学全过程,实现全程、全方位育人。

关键词：临床免疫学检验技术教学思政教育

登革病毒-2感染人脐静脉内皮细胞的磷酸化蛋白质组学分析

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南方医科大学学报 2023年第1期43卷 29-38页

作者：胡盼程瑶王远迎苟小琴刘华左丽吴宁贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院实验教学中心贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫教研室贵州贵阳550004

目的对登革病毒-2(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的差异磷酸化蛋白质进行分析以及初步探究DENV-2感染的可能致病机制。方法实验设置DENV-2感染HUVEC组和HUVEC空白对照组,每组3个重复。收集细胞沉淀后,利用SDT裂解法获取蛋白质,通... 详细信息

目的对登革病毒-2(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的差异磷酸化蛋白质进行分析以及初步探究DENV-2感染的可能致病机制。方法实验设置DENV-2感染HUVEC组和HUVEC空白对照组,每组3个重复。收集细胞沉淀后,利用SDT裂解法获取蛋白质,通过串联质谱标签(TMT)法对磷酸化蛋白质进行定性与定量分析,对鉴定到的差异磷酸化蛋白质进行氨基酸保守基序分析、亚细胞定位分析、蛋白质结构域分析、GO富集分析、KEGG通路分析和蛋白质互作(PPI)等生物信息学分析。利用Western blot检测JUN、MAP2K2和AKT1磷酸化蛋白的表达。结果共检测到1385个差异蛋白质上的2918个修饰肽段,其中有1346个修饰肽段显著上调(FC>1.2,P生物合成过程、吞噬体和白细胞跨内皮迁移处富集。对上调和下调的差异磷酸化蛋白分别进行蛋白质互作—KEGG联合分析,结果发现上调和下调的差异磷酸化蛋白质共富集到15条通路,且通过Western Blot检测与自噬途径相关的3个差异磷酸化蛋白质即JUN、MAP2K2和AKT1的表达,结果显示DENV-2组与空白组相比,p-JUN表达显著下调(1.48±0.01 vs 1.23±0.01,P<0.0001);p-AKT1表达显著上调(0.87±0.02 vs 1.01±0.01,P<0.001);p-MAP2K2表达显著上调(1.10±0.02 vs 1.29±0.05,P<0.01)。结论DENV-2感染HUVEC存在较多差异表达蛋白,p-JUN的下调、p-MAP2K2和pAKT1的上调提示3个能够调节自噬的磷酸化蛋白可能与DENV-2感染机制有关。

关键词：磷酸化组学登革病毒-2 人脐静脉内皮细胞

白纹伊蚊唾液源34ku-1基因的克隆表达及鉴定

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中国病原生物学杂志 2022年第3期17卷 308-313页

作者：陈素素吴家红程金芝赵久刚商正玲聂映牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安... 详细信息

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经PCR、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。

关键词：白纹伊蚊唾液腺 34ku-1重组蛋白原核表达多克隆抗体

LASS2诱导甲状腺未分化癌8505c细胞自噬、凋亡及相关机制的探讨

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中国病理生理杂志 2022年第9期38卷 1577-1584页

作者：赵青青余云艳王云何维杨艳陈锐杨小理程晓明遵义医科大学附属医院普外科贵州遵义563000 遵义医科大学免疫学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563000 遵义医科大学检验医学院贵州遵义563000

目的:研究LAG1长寿保障同系物2(LASS2)对甲状腺未分化癌细胞株8505c凋亡及自噬的影响及可能的分子机制。方法:用Adv-GFP或Adv-LASS2-GFP重组腺病毒感染8505c细胞,细胞分为阴性对照(NC)组、空载体组(Adv-GFP组)和实验组(Adv-LASS2-GFP组... 详细信息

目的:研究LAG1长寿保障同系物2(LASS2)对甲状腺未分化癌细胞株8505c凋亡及自噬的影响及可能的分子机制。方法:用Adv-GFP或Adv-LASS2-GFP重组腺病毒感染8505c细胞,细胞分为阴性对照(NC)组、空载体组(Adv-GFP组)和实验组(Adv-LASS2-GFP组)。感染48 h后提取各组细胞总RNA和蛋白,采用RT-qPCR和Western blot分别检测LASS2 mRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8和集落形成实验评价各组细胞增殖能力的差异;TUNEL染色评估各组细胞凋亡水平;透射电子显微镜观察细胞超微结构及自噬状态;Western blot检测各组细胞凋亡及自噬相关蛋白[细胞色素C(Cyto-C)、Bcl-2、Bax、p62、LC3-I、LC3-II和beclin-1]的表达水平;免疫共沉淀(CoIP)联合液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定与LASS2相互作用的蛋白,结合基因本体论(GO)数据库等分析并经Co-IP进一步验证互作关系。结果:与NC组和Adv-GFP组相比,Adv-LASS2-GFP组LASS2 mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.01),且随时间延长Adv-LASS2-GFP组细胞增殖能力显著被抑制,集落形成能力降低,细胞凋亡增加(P<0.01);透射电镜结果显示,与NC组和Adv-GFP组相比,Adv-LASS2-GFP组细胞可见双层膜结构的自噬小体及大量自噬溶酶体;Western blot结果显示,Adv-LASS2-GFP组Bcl-2和p62蛋白表达水平较NC组和Adv-GFP组均显著下调(P<0.01),Bax、Cyto-C和beclin-1表达及LC3-II/LC3-I比值均显著上调(P<0.01);Co-IP/LC-MS鉴定及GO等富集分析筛选出参与调控自噬信号通路且与LASS2相互作用的4个蛋白,分别为p62、HSC70、HSP90和CSNK2A1。Co-IP结果显示LASS2与p62不存在直接相互作用。结论:LASS2能促进8505c细胞凋亡并激活自噬,其作用机制可能是通过与p62/HSC70/HSP90/CSNK2A1相互作用而影响自噬和凋亡级联信号通路。

关键词： LAG1长寿保障同系物2 甲状腺未分化癌自噬细胞凋亡

前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂的研发进展及应用

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中国生物制品学杂志 2023年第11期36卷 1391-1396页

作者：王文岑代海兵(综述) 黄海鄢盛恺(审校) 贵州医科大学医学检验学院临床生化教研室贵州贵阳550000 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550000 遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563003

血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)最主要的致病因素,降脂治疗是预防和管理ASCVD的主要方式之一。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)可通过升高低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、炎性反应等促进动脉粥样硬化,而PCSK9抑制剂可靶向降低PCSK9水平,降脂效率高。联合他汀类或依折麦布治疗的基础上,还能带来更多的临床效益,随着研究的不断深入,已成为近年降脂药研究的热点。本文就PCSK9抑制剂的研发进展作一综述,以期为该类药物的临床应用提供参考。

关键词：前蛋白转化酶枯草溶菌素9 抑制剂动脉粥样硬化性心血管疾病

贵州省抑郁症患者刚地弓形虫感染状况调查及其基因型鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第4期34卷 355-360页

作者：邹彩艳何军尹继毕斌覃颖彭凤涛夏雨田梦圆李永念贵州医科大学检验学院临床微生物学与免疫学教研室贵阳550001 贵州省第二人民医院贵阳550004 郑州大学附属肿瘤医院病理科郑州450008 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550001

目的了解贵州省抑郁症患者弓形虫感染状况及弓形虫基因型。方法 ELISA检测141例抑郁症患者和150例健康对照外周血弓形虫特异性抗体（IgG、IgM）和循环抗原（CAg），PCR扩增血样弓形虫高重复DNA片段（529 bp），多重-巢式PCR-限制... 详细信息

目的了解贵州省抑郁症患者弓形虫感染状况及弓形虫基因型。方法 ELISA检测141例抑郁症患者和150例健康对照外周血弓形虫特异性抗体（IgG、IgM）和循环抗原（CAg），PCR扩增血样弓形虫高重复DNA片段（529 bp），多重-巢式PCR-限制性片段长度多态性（Mn-PCR-RFLP）方法鉴定弓形虫529 bp阳性样本的基因型。结果 ELISA检测结果显示，抑郁症患者组和健康对照组弓形虫抗体阳性率分别为21.3%（30/141）和7.3%（11/150），两者间差异有统计学意义（χ2=11.674，P〈0.05）；抑郁症患者组的IgG、IgM、CAg阳性率分别为18.4%（26/141）、1.4%（2/141）、1.4%（2/141）；健康对照组IgG阳性率为7.3%（11/150），与抑郁症患者组间差异有统计学意义（P〈0.05），未检测到IgM和CAg。PCR结果显示，抑郁症患者组检测出1例弓形虫核酸阳性，经Mn-PCR-RFLP方法鉴定其基因型，结果为非典型Toxo DB #9（Chinese 1型）。结论贵州省抑郁症患者弓形虫抗体阳性率高于健康人群，1例抑郁症患者感染的弓形虫基因型为Chinese 1型。

关键词：刚地弓形虫抑郁症感染