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金钗石斛根茎叶转录组测序及木脂素合成相关基因分析

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时珍国医国药 2024年第1期35卷 236-242页

作者：于莹陈宏宇王媛王欣睿骆文慧杨奕樱贵州中医药大学基础医学院贵州贵阳550025 贵州中医药大学分子诊断研究中心贵州贵阳550025 贵州中医药大学药学院贵州贵阳550025

目的研究金钗石斛根、茎、叶基因表达差异情况,同时分析木脂素合成途径关键酶基因表达特性,为金钗石斛木脂素合成分子机制研究提供参考。方法以金钗石斛为材料,分别提取根、茎、叶的总RNA,利用DNBSEQ平台进行转录组测序及生物信息学... 详细信息

目的研究金钗石斛根、茎、叶基因表达差异情况,同时分析木脂素合成途径关键酶基因表达特性,为金钗石斛木脂素合成分子机制研究提供参考。方法以金钗石斛为材料,分别提取根、茎、叶的总RNA,利用DNBSEQ平台进行转录组测序及生物信息学分析。结果金钗石斛根和叶相比差异表达基因较多,叶和茎相比差异表达基因较少,有879个基因是3个样本比较组所共有的。GO分类中差异表达基因主要富集在生物学过程中,KEGG富集分析中差异表达基因主要被富集到α-亚麻酸代谢途径、甘油磷脂代谢途径、氰基氨基酸代谢途径等途径中。在木脂素合成相关基因中,发现2个CAD基因、1个DIR基因、4个UGT基因在根、茎、叶中的表达模式与木脂素含量分布一致。结论该研究获得了金钗根、茎、叶中差异表达基因信息,筛选到了与木脂素合成相关基因,初步构建了金钗石斛木脂素合成网络图,为开展金钗石斛木脂素合成分子机制研究提供数据支持。

关键词：金钗石斛木脂素转录组差异表达基因代谢通路

铁皮石斛DoPLR基因的克隆、序列分析及表达分析

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时珍国医国药 2024年第7期35卷 1776-1780页

作者：于莹陈宏宇彭松平杨奕樱贵州中医药大学基础医学院贵州贵阳1550025 贵州中医药大学分子诊断研究中心贵州贵阳550025 贵州中医药大学药学院贵州贵阳550025

目的进一步阐明铁皮石斛(Dendrobium officinale)中木脂素生物合成的分子调控机制,克隆铁皮石斛木脂素合成关键酶基因DoPLR,分析其序列特征及表达模式。方法根据NCBI中铁皮石斛PLR基因序列设计特异引物,利用PCR技术克隆铁皮石斛DoPLR基... 详细信息

目的进一步阐明铁皮石斛(Dendrobium officinale)中木脂素生物合成的分子调控机制,克隆铁皮石斛木脂素合成关键酶基因DoPLR,分析其序列特征及表达模式。方法根据NCBI中铁皮石斛PLR基因序列设计特异引物,利用PCR技术克隆铁皮石斛DoPLR基因,利用生物信息学软件分析DoPLR基因及编码蛋白的结构特征。利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测DoPLR基因在铁皮石斛不同组织部位、不同非生物胁迫、不同激素处理等情况下的表达模式。结果克隆获得铁皮石斛DoPLR基因,该基因的开放阅读框(ORF)长度为933bp,编码310个氨基酸,蛋白相对分子质量和等电点分别为36.4 KDa和6.54;该蛋白含有NAD(P)~+结合结构域,为亲水性蛋白,可能在细胞核中发挥作用,有29个磷酸化位点;该蛋白二级结构含有37.42%的α-螺旋、7.42%的β-折叠、36.77%的无规则卷曲和18.39%的延伸链;聚类分析表明该蛋白与亚麻LuPLR蛋白聚在一个分支上;互作蛋白分析表明丝氨酸苏氨酸蛋白激酶、转录因子bHLH63等蛋白可能与该蛋白发挥作用密切相关;qRT-PCR结果表明,DoPLR基因在不同组织部位、不同激素处理、不同非生物胁迫下的表达模式均存在差异,推测该基因可能参与铁皮石斛对非生物胁迫和激素的响应。结论克隆获得了铁皮石斛DoPLR基因,分析了其序列特征和表达模式,为深入研究DoPLR基因的功能和铁皮石斛木脂素生物合成分子机制奠定基础。

关键词：铁皮石斛木脂素 PLR基因序列分析表达分析

基于代谢组学分析仿野生石栽金钗石斛不同生长年限茎的次生代谢物差异

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中国实验方剂学杂志 2024年第10期30卷 169-175页

作者：王勤杜光映贵州中医药大学药物物理研究中心贵阳550025

目的:通过研究仿野生石栽金钗石斛Dendrobium nobile茎中不同生长年限次生代谢化合物积累的变化特征,为合理规划金钗石斛采收期提供理论依据。方法:运用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)对1年生、2年生、3年生的金钗石斛茎中次生代谢... 详细信息

目的:通过研究仿野生石栽金钗石斛Dendrobium nobile茎中不同生长年限次生代谢化合物积累的变化特征,为合理规划金钗石斛采收期提供理论依据。方法:运用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)对1年生、2年生、3年生的金钗石斛茎中次生代谢物进行检测分析,利用Analyst 1.6.3软件处理质谱数据,对所有样品进行主成分分析(PCA),聚类热分析,偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),以变量重要性投影(VIP)值>1、差异倍数(FC)≥2和FC≤0.5的筛选差异次生代谢物,依据相对分子质量、碎片离子和质谱数据库对差异次生代谢物进行鉴定,基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库鉴定富集的通路。结果:3个生长时期的金钗石斛茎中共鉴定出1317个次生代谢物,其中黄酮类、酚酸类、生物碱类和萜类化合物整体占比可达76.55%。通过对不同生长年限样品进行两两比较,与金钗石斛的1年生茎比较,2年生茎共有289个差异次生代谢物,其中上调255个,下调34个;3年生茎共有682个差异次生代谢物,其中上调502个,下调180个。与金钗石斛的2年生茎比较,3年生茎共有602个差异次生代谢物,其中上调405个,下调197个。随着金钗石斛生长年限的增加,对上调前10的差异代谢物进行排序,主要为山柰酚衍生物、车叶草苷酸、芹菜素衍生物、金圣草黄素衍生物、异鼠李素衍生物、花旗松素衍生物、槲皮素衍生物等黄酮类、酚酸类、苯丙素类和萜类化合物。KEGG富集分析显示,随着生长年限增加,次生代谢物在类黄酮生物合成、黄酮和黄酮醇生物合成、次生代谢物生物合成及苯丙素生物合成途径均发生了显著富集。结论:仿野生石栽金钗石斛随生长年限增加,可明显提升黄酮类、酚酸类、苯丙素类和萜类化合物等次生代谢物积累水平。生产实践中可按照不同生长年限进行等级划分,有利于提高金钗石斛的药用价值和经济价值。

关键词：金钗石斛广泛靶向代谢组学次生代谢物生长年限超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS) 仿野生栽培黄酮类化合物

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不同寄主植物桑寄生内生真菌多样性研究

分子植物育种 2024年

作者：李姝臻刘梦辉任艳妃吴慧芳罗永娟张永笛杨水琴刘晓龙郑亚强贵州中医药大学药用虫草资源及利用研究中心贵州中医药大学桑寄生资源及利用研究中心

桑寄生是一种极具药用价值的寄生性植物，开展其内生真菌的研究对于开发利用该植物和研究其寄生性生物学特性具有重要意义。为探究桑寄生内生真菌的群落组成及多样性，本研究采用形态特征和ITS序列分析方法，对寄生桃树(Prunus persica... 详细信息

桑寄生是一种极具药用价值的寄生性植物，开展其内生真菌的研究对于开发利用该植物和研究其寄生性生物学特性具有重要意义。为探究桑寄生内生真菌的群落组成及多样性，本研究采用形态特征和ITS序列分析方法，对寄生桃树(Prunus persica)、柘树(Maclura tricuspidata)、朴树(Celtis sinensis)、李子树(Prunus cerasifera)、紫叶李(Prunus cerasifera f. atropurea)、皂荚树(Gleditsia sinensis)和桑树(Morus alba)的桑寄生根、茎和叶的内生真菌种类及组成进行了系统研究。结果显示，从桑寄生内共分离获得823株内生真菌，隶属于2门、4纲、13目、25科、43属，其中57株菌株分类地位尚不明确。子囊菌门(Ascomycota)为优势门；座囊菌纲(Dothideomycetes)和粪壳菌纲(Sordariomycetes)为优势纲；格孢腔菌目(Pleosporales)、间座壳菌目(Diaporthales)和葡萄座腔菌目(Botryosphaeriales)为优势目；葡萄座腔菌科(Botryosphaeriaceae)和小双腔菌科(Didymellaceae)以及间座壳菌科(Diaporthaceae)为优势科；新壳梭孢属(Neofusicoccum)和间座/腐皮壳菌属(Diaporthe)为优势属。从不同组织分布来看，不同寄主来源的桑寄生其内生真菌组成存在较大差异，间座/腐皮壳菌属(Diaporthe)、链格孢属(Alternaria)新壳梭孢属(Neofusicoccum)在不同寄主植物桑寄生中均存在，但其组织分布不同。从多样性指数来看，不同寄主植物桑寄生不同组织的内生真菌多样性之间存在较大差异。本研究结果有助于进一步探究桑寄生内生真菌物种组成、影响因素以及内生真菌功能的开发。

关键词：桑寄生不同寄主内生真菌多样性

丹酚酸B通过线粒体凋亡途径干预动脉粥样硬化的作用机制研究

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中国现代医药杂志 2024年第6期26卷 22-27页

作者：黄应湾杨奕樱吴晓迪宋雪杨玉婷罗世芬贵州中医药大学护理学院贵州贵阳550025 贵州中医药大学基础医学院贵州贵阳550025 贵州中医药大学分子诊断研究中心贵州贵阳550025

目的探讨丹酚酸B通过线粒体凋亡途径干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用机制。方法将小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养后分为空白组,细胞色素C(Cytochrome C,cytC)组,丹酚酸B低、中、高浓度组。各组干预时间均为24h。用噻唑蓝(MTT... 详细信息

目的探讨丹酚酸B通过线粒体凋亡途径干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用机制。方法将小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养后分为空白组,细胞色素C(Cytochrome C,cytC)组,丹酚酸B低、中、高浓度组。各组干预时间均为24h。用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞存活率,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用蛋白免疫印迹(Western Blotting)法分别检测cytC的释放和B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9(Cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)和Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达水平。结果与空白组比较,cyt C组细胞活性降低(P<0.05),细胞平均凋亡率较高(P<0.05);cyt C组中促凋亡蛋白cyt C、Bax、Caspase-3及Caspase-9的表达均升高(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2的表达下降(P<0.05)。与cytC组比较,丹酚酸B低、中浓度组细胞活性均上升(P<0.01,P<0.05),各组促凋亡蛋白cytC、Bax、Caspase-3及Caspase-9表达均下降(P<0.01,P<0.05),丹酚酸B中、低浓度组细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达升高(P<0.01)。丹酚酸B中、高浓度组与空白组细胞平均凋亡率比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论丹酚酸B通过降低cytC、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达抑制cytC诱导的RAW264.7细胞凋亡,发挥在AS发展进程中改善粥样斑块沉积的作用,可能与抑制线粒体凋亡途径相关。

关键词：丹酚酸 B 线粒体凋亡途径小鼠单核巨噬细胞动脉粥样硬化

中药润燥灵联合艾拉莫德治疗原发性干燥综合征的临床疗效

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 127-133页

作者：罗淋铷马熙曾苹侯雷马武开贵州中医药大学贵阳550001

目的:探讨艾拉莫德联合中药润燥灵治疗原发性干燥综合征(pSS)的临床疗效及安全性。方法:将2021年1月至2022年6月来自贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科符合pSS西医和中医阴虚热毒证诊断标准的72例患者,随机分为观察组和对照组,每组... 详细信息

目的:探讨艾拉莫德联合中药润燥灵治疗原发性干燥综合征(pSS)的临床疗效及安全性。方法:将2021年1月至2022年6月来自贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科符合pSS西医和中医阴虚热毒证诊断标准的72例患者,随机分为观察组和对照组,每组各36例。观察组给予艾拉莫德联合中药润燥灵复方治疗,对照组给予艾拉莫德治疗,治疗12周,比较两组患者治疗前后临床症状,干燥综合征患者报告指数(ESSPRI),干燥综合征疾病活动度指标(ESSDAI),实验室指标包括红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白G(IgG)、泪流量Schirmer试验和唾液流量的改善情况,并观察两组患者不良反应发生情况。结果:观察组患者显效27例,无效9例,总有效率75.0%;对照组显效22例,无效14例,总有效率61.11%,观察组明显高于对照组,差异具有统计学意义(χ^(2)=4.428,P中医证候评分降低(P中医证候评分改善更明显(P研究,随访4周无特殊不适,1例出现恶心,对症处理后缓解。结论:艾拉莫德联合中药润燥灵复方治疗pSS具有较好的临床疗效和安全性。

关键词：干燥综合征艾拉莫德润燥灵临床疗效安全性

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刺梨WRKY基因家族鉴定及其在不同组织中的表达分析

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分子植物育种 2024年第4期22卷 1075-1085页

作者：田媛郑锦城贵州中医药大学药学院贵阳550025 贵州中医药大学基础医学院贵阳550025 贵州中医药大学药用植物病虫害研究中心贵阳550025

WRKY是植物中一类重要的转录因子,参与植物的生长发育和衰老调控以及响应生物和非生物胁迫。本研究基于刺梨不同组织的转录组测序数据,鉴定刺梨WRKY家族成员,并分析了家族成员间的进化关系、受选择压力水平、序列保守结构域特点以及在... 详细信息

WRKY是植物中一类重要的转录因子,参与植物的生长发育和衰老调控以及响应生物和非生物胁迫。本研究基于刺梨不同组织的转录组测序数据,鉴定刺梨WRKY家族成员,并分析了家族成员间的进化关系、受选择压力水平、序列保守结构域特点以及在不同组织中的表达情况。本研究共鉴定58个刺梨WRKY转录因子,依据拟南芥的分类方法,可分为Ⅰ(11个)、Ⅱ(36个)、Ⅲ(11个)三个家族,Ⅱ家族包含Ⅱa(3个)、Ⅱb(6个)、Ⅱc(13个)、Ⅱd(7个)和Ⅱe(7个)五个亚组,RrWRKY58游离在三个家族之外。刺梨58个WRKY蛋白序列长度介于145~1526 aa,分子量介于16.94~172842.37 kD之间,等电点介于4.61~9.84。其中RrWRKY31、RrWRKY32、RrWRKY47、RrWRKY48和RrWRKY56在WRKY结构域中的保守七肽WRKYGQK处发生了变异。选择压力分析表明,Ⅰ组、Ⅱ组中Ⅱa和Ⅲ组受到强烈的正选择作用(dn/ds>1),而Ⅱ组中的Ⅱb、Ⅱc、Ⅱd和Ⅱe均显著受到纯化选择作用(dn/ds0.1)。RrWRKY01、RrWRKY04、RrWRKY06、RrWRKY12、RrWRKY14和RrWRKY34六个基因在各器官组织中表达量相对较高(TPM>20),表明这些基因可能参与调控刺梨的茎、叶、花以及果的生长发育过程。在茎中表达丰度高的基因(TPM>50)最多(12个),其次分别是叶(8个),花(7个),幼果(7个)以及成熟的果实(6个)。本研究为进一步研究刺梨WRKY基因的功能奠定了基础。

关键词：刺梨(Rosa roxburghii Tratt) WRKY 转录因子系统进化表达模式

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中国系统性红斑狼疮临床研究注册现状分析

中国皮肤性病学杂志 2024年第7期38卷 724-730页

作者：李开楊黄财玉石思罗梅黄敬唐云杨梅赵琦贵州中医药大学贵州贵阳550002 贵州中医药大学第一附属医院贵州贵阳550001 贵州中医药大学第二附属医院贵州贵阳550001

目的分析系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)相关临床研究的现状。方法检索ChiCTR(Chinese Clinical Trial Registry)数据库,检索建库至2023年11月20日SLE相关的临床研究,对相关注册信息进行归纳分析。结果共纳入SLE相... 详细信息

目的分析系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)相关临床研究的现状。方法检索ChiCTR(Chinese Clinical Trial Registry)数据库,检索建库至2023年11月20日SLE相关的临床研究,对相关注册信息进行归纳分析。结果共纳入SLE相关的临床研究79项,包括观察性研究39项,干预性研究35项,诊断试验2项,基础科学研究、病因学/相关因素研究和治疗研究各1项,招募样本总量14414例。干预措施主要有B细胞靶向治疗、传统疗法联合中医中药治疗、T细胞靶向治疗、干细胞移植治疗等。注册地区覆盖全国18个省、直辖市,涉及56家机构。经费来源主要为自筹19项、医院资助14项、国家财政和无经费资助各9项。共纳入26项随机对照试验研究中,仅有7项明确提出盲法。测量指标包括疗效指标和安全性指标。结论B细胞靶向治疗、传统疗法联合中医中药治疗、T细胞靶向治疗、干细胞移植治疗等干预研究是我国SLE相关临床研究的重点、热点方向,并且中医中药辅助或补充治疗展现出明显优势。此外,我国ChiCTR注册的SLE相关临床研究数量呈波动趋势,存在地区分布不均、研究设计欠规范、注册资料填写不完整、局限于单中心研究、样本量较少等情况。

关键词：系统性红斑狼疮临床研究中国临床试验注册中心 B细胞靶向治疗中医治疗 T细胞靶向治疗干细胞移植治疗

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水凝胶微针的进展

塑料 2024年第5期53卷 113-117+129页

作者：万开龙宋信莉沈丽杨小双石佳楠钱舒琪陈丽贵州中医药大学药学院国家苗药工程技术研究中心贵州中药炮制与制剂工程技术研究中心

水凝胶微针是由具有三维网络结构的水凝胶材料制备得到，微针针体可以刺穿皮肤角质层，吸收皮肤间质液后溶胀转化为凝胶态，该性质使其在药物经皮促渗及对皮肤内生物标志物的提取识别领域具有重要作用。水凝胶微针能增大药物的经皮渗透... 详细信息

水凝胶微针是由具有三维网络结构的水凝胶材料制备得到，微针针体可以刺穿皮肤角质层，吸收皮肤间质液后溶胀转化为凝胶态，该性质使其在药物经皮促渗及对皮肤内生物标志物的提取识别领域具有重要作用。水凝胶微针能增大药物的经皮渗透性，使用方便，由于针尖仅有微米级长度，使用时能达到无痛/微痛的目的，使用结束后，皮肤内无基质残留，还能通过改变水凝胶交联度调节释药速率。因此，总结了近年来水凝胶微针相关的国内外代表文献，介绍在制备工艺、性能评价方法及其应用的研究进展。

关键词：水凝胶微针制备工艺性能评价高分子材料应用