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黄芪水提物3种效应成分对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

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北京中医药大学学报 2024年第2期47卷 188-198页

作者：马盼刘汉滢彭美中牛艺婷杨美美徐艺宸刘卓容韩静北京中医药大学中医学院北京102488 证候与方剂基础研究北京市重点实验室证候与方剂基础研究教育部重点实验室(北京中医药大学) 北京中医药大学中医药研究院

目的考察黄芪水提物效应成分对高糖(25 mmol/L)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法给雄性SD大鼠连续灌胃黄芪水提物[20 g/(kg·d)]7 d,分别于末次灌胃后1、2、4 h取血,合并上清,行超高效液相色谱质谱(... 详细信息

目的考察黄芪水提物效应成分对高糖(25 mmol/L)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法给雄性SD大鼠连续灌胃黄芪水提物[20 g/(kg·d)]7 d,分别于末次灌胃后1、2、4 h取血,合并上清,行超高效液相色谱质谱(UPLC⁃MS)分析,筛选黄芪水提物在大鼠体内代谢后的效应成分。将细胞分为正常组、模型组、不同浓度效应成分组及效应成分配伍组。用CCK-8试剂盒检测细胞活力,探讨黄芪水提物效应成分的最佳浓度。通过活性氧(ROS)实验检测细胞氧化损伤情况。酶联免疫吸附测定法检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量;蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO⁃1)蛋白表达水平。结果芒柄花素、大豆苷元、毛蕊异黄酮是黄芪水提物的效应成分。与正常组比较,模型组细胞活力增加(P<0.05);与模型组比较,芒柄花素各浓度组(26、13、6.5μmol/L)细胞活力降低(P<0.05),大豆苷元高浓度组(0.11μmol/L)细胞活力降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组细胞ROS水平升高(P<0.05);与模型组比较,芒柄花素高、中浓度组(26、13μmol/L),大豆苷元不同浓度组(0.11、0.06、0.03μmol/L),毛蕊异黄酮高浓度组(7.00μmol/L)及各配伍组细胞ROS水平均降低(P<0.05)。效应成分配伍对细胞的抑制率高于单个效应成分,且高浓度配伍组抑制率最高。与正常组比较,模型组细胞Nrf2、HO⁃1蛋白表达量降低(P<0.05);与模型组比较,效应成分高浓度配伍组Nrf2、HO⁃1蛋白表达量升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组细胞SOD、CAT含量降低(P<0.05)、MDA含量升高(P<0.05);与模型组相比,效应成分高浓度配伍组SOD、CAT含量均升高(P<0.05)、MDA含量降低(P<0.05)。结论黄芪水提物效应成分芒柄花素、大豆苷元及毛蕊异黄酮有保护高糖诱导的HUVEC损伤的作用,其机制可能与调节Nrf2、HO⁃1、SOD、CAT及MDA表达,发挥抗氧化作用有关。

关键词：芒柄花素大豆苷元毛蕊异黄酮配伍黄芪核因子E2相关因子2/血红素氧合酶1信号通路人脐静脉内皮细胞糖尿病视网膜病变

中医面部色诊中医理论基础及客观化研究进展与展望

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中华中医药杂志 2024年第4期39卷 1908-1913页

作者：杨倮乐娜芦煜马雪玲刘红霞北京中医药大学北京102401 中国中医科学院中医药信息研究所北京100700 证候与方剂基础研究北京市重点实验室北京102401 证候与方剂基础研究教育部重点实验室(北京中医药大学) 北京102401

色诊是中医诊疗的重要手段,有着丰富的理论基础和临床经验。随着中医学科的进步以及计算机技术等信息处理科学的发展,色诊客观化研究取得了一定的成果和进展,初步实现了色诊的数字化、客观化,为中医色诊的临床应用提供了较为精确的量化... 详细信息

色诊是中医诊疗的重要手段,有着丰富的理论基础和临床经验。随着中医学科的进步以及计算机技术等信息处理科学的发展,色诊客观化研究取得了一定的成果和进展,初步实现了色诊的数字化、客观化,为中医色诊的临床应用提供了较为精确的量化指标。文章对色诊的中医理论基础以及相关客观化研究进行了梳理以及阐述,在此基础上进一步分析现有研究中的问题,展望未来研究方向,以期能为后续相关研究提供参考。

关键词：中医色诊色部客观化临床应用

丹参酮ⅡA通过抑制炎症因子的表达保护视网膜神经节细胞

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辽宁中医杂志 2024年

作者：牛艺婷季青璇马盼彭美中徐艺宸杨美美刘卓容韩静北京中医药大学中医学院证候与方剂基础研究北京市重点实验室证候与方剂基础研究教育部重点实验室(北京中医药大学) 北京中医药大学中医药研究院

目的研究丹参酮ⅡA对高糖（HG）或LPS刺激的视?膜神经节细胞（RGC-5）的保护作用，并探讨其潜在的分子机制。方法将RGC-5细胞分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA不同剂量组，CCK-8法检测各组细胞活力，DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞活性... 详细信息

目的研究丹参酮ⅡA对高糖（HG）或LPS刺激的视?膜神经节细胞（RGC-5）的保护作用，并探讨其潜在的分子机制。方法将RGC-5细胞分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA不同剂量组，CCK-8法检测各组细胞活力，DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞活性氧，免疫荧光检测各组细胞Tuj-1和Brn3α的表达，PCR检测各组炎症因子及NFκBmRNA的表达，酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组细胞培养上清液中TNF-α的含量。结果 CCK-8结果显示，HG刺激后RGC-5细胞活力增强，在HG条件下丹参酮ⅡA3.20 μmol/L可以抑制细胞活?（P<0.001）。ROS检测结果显示，丹参酮ⅡA各剂量组可以抑制HG条件下细胞ROS的积累（P<0.01或P<0.001）。免疫荧光结果显示，与正常组比较，HG和LPS组Tuj-1和Brn3α的表达显著降低（P<0.05或P<0.001），与HG或LPS组比较，丹参酮Ⅱ可以增强Tuj-1和Brn3α的表达（P<0.01或P<0.001）。PCR结果显示，与正常组比较，HG组细胞内IL-6、IL-18、IL-1β、NFκBmRNA表达显著增高（P<0.001），与HG组相比，丹参酮ⅡA可以抑制细胞内IL-6、IL-18、IL-1β、NFκBmRNA的表达（P<0.05、P<0.01或P<0.001）。与正常组相比，LPS组细胞内促炎因子NFκBmRNA（P<0.05）表达显著增高，抑炎因子IL-10表达显著降低（P<0.01）；与LPS组相比，丹参酮ⅡA可以抑制细胞内NFκBmRNA的表达（P<0.05），并使抑炎因子IL-10表达增加（P<0.001）。ELISA检测显示，与正常组比较，HG组和LPS组细胞上清中TNF-α显著上升（P<0.001）；与HG或LPS组相比，丹参酮ⅡA各剂量组细胞上清中TNF-α含量均下降（P<0.001）。结论丹参酮ⅡA可以保护视网膜神经节细胞，其机制可能与通过核因子-κB(NF-κB)通路抑制炎症因子的表达密切相关。

关键词：丹参酮ⅡA 视网膜神经节细胞炎症

基于葡萄糖诱导的秀丽隐杆线虫模型探讨黄芪抗氧化的作用及机制

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药学学报 2024年

作者：杨美美刘汉滢彭美中马盼牛艺婷胡腾月籍宇星郝改梅韩静北京中医药大学中医学院证候与方剂基础研究北京市重点实验室证候与方剂基础研究教育部重点实验室中国中医科学院中医基础理论研究所北京中医药大学中医药研究院

本研究考察黄芪对高糖诱导的秀丽隐杆线虫的作用并探讨其作用机制。采用UPLC-MS法鉴定黄芪的成分。以秀丽隐杆线虫为模式生物，建立高糖模型，测定黄芪对线虫的体长、头尾摆动、咽泵运动能力、活性氧 (reactive oxygen species， ROS)... 详细信息

本研究考察黄芪对高糖诱导的秀丽隐杆线虫的作用并探讨其作用机制。采用UPLC-MS法鉴定黄芪的成分。以秀丽隐杆线虫为模式生物，建立高糖模型，测定黄芪对线虫的体长、头尾摆动、咽泵运动能力、活性氧 (reactive oxygen species， ROS) 的影响; 运用实时荧光定量聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction， PCR) 检测黄芪对BZIP结构域蛋白1 (protein skinhead-1， SKN-1) 信号通路相关基因mRNA表达的影响。结果显示，与正常组相比，高糖状态下线虫体长、头尾摆动、咽泵频率表达均显著降低，体内ROS含量显著增加; 黄芪给药后体长、头尾摆动、咽泵频率表达均显著增加， ROS含量显著降低 (P 研究表明，在秀丽隐杆线虫内，黄芪通过调控SKN-1信号通路改善高糖引起的氧化应激反应。

关键词：黄芪秀丽隐杆线虫氧化应激反应 BZIP结构域蛋白1 高糖

生脉散调控气阴两虚型心律失常的心脏重构机制探析

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中国实验方剂学杂志 2024年第4期30卷 248-259页

作者：魏靖恒石晓路杨威黄聪史梦茹马润灏孙明杰中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700 中国中医科学院中医基础理论研究所北京100700

心律失常是心血管疾病中重要的一种疾病,临床上常发生由于离子通道异常、电活动紊乱、心肌纤维化、炎症、线粒体生物发生失调、线粒体钙超载、能量代谢失衡、氧化应激、交感神经亢进等病理性心脏重构活动而诱发的恶性心律失常,这是造成... 详细信息

心律失常是心血管疾病中重要的一种疾病,临床上常发生由于离子通道异常、电活动紊乱、心肌纤维化、炎症、线粒体生物发生失调、线粒体钙超载、能量代谢失衡、氧化应激、交感神经亢进等病理性心脏重构活动而诱发的恶性心律失常,这是造成心源性猝死的主要原因。中医认为心律失常病属心悸,常见于气阴两虚证,往往是脾胃先虚致使气机失常而后心功能下降尤甚的表现。生脉散是益气养阴的代表方剂,由人参、麦冬、五味子组成,近年来临床研究表明生脉散及其加减方常用于治疗心律失常。该篇文章即综述了生脉散各味单药的有效成分在心脏电生理、生化、结构、自主神经、亚细胞成分的调控机制,阐述生脉散治疗气阴两虚型心律失常的多靶点、多系统、整体性的特点。能量代谢障碍与气阴两虚证密切相关,与心肌能量代谢相关的线粒体功能损伤在心脏重构中发挥的重要作用,开展生脉散保护线粒体功能干预能量代谢减少心脏病理性重构的机制探讨具有重要意义,也将为此类心律失常的临床治疗提供更多理论依据。

关键词：生脉散心律失常心脏重构气阴两虚益气养阴

汉黄芩素减轻LPS诱导BV-2细胞炎症并保护SH-SY5Y细胞的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：孙梦菲欧阳竞锋吴春阳程娇娇北京中医药大学东直门医院中国中医科学院医学实验中心中医药防治重大疾病基础研究北京市重点实验室

目的：探讨汉黄芩素对脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导的BV-2小胶质细胞条件培养基培养SH-SY5Y细胞后的保护机制。方法：将BV-2细胞分为空白组、LPS组、汉黄芩素低浓度组(4 μmol·L-1)、汉黄芩素中浓度组(8 μmol·L-1)、汉黄芩... 详细信息

目的：探讨汉黄芩素对脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导的BV-2小胶质细胞条件培养基培养SH-SY5Y细胞后的保护机制。方法：将BV-2细胞分为空白组、LPS组、汉黄芩素低浓度组(4 μmol·L-1)、汉黄芩素中浓度组(8 μmol·L-1)、汉黄芩素高浓度组(16 μmol·L-1)，其中LPS组给予1 mg·L-1的LPS，后三组分别用相应浓度的汉黄芩素预处理4h后给予1 mg·L-1的LPS并使用以上各组的条件培养基培养SH-SY5Y细胞。通过细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)检测以上各组BV-2细胞的细胞活力；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组BV-2细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；免疫组织化学染色法(IHC)检测SH-SY5Y细胞的酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-syn)的表达情况；免疫荧光化学染色法(IF)检测SH-SY5Y细胞核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白核转移和荧光表达强度；免疫印迹法(Western blot， WB)检测SH-SY5Y细胞TLR4/髓样分化因子88(MyD88)/NF-κB通路相关蛋白表达情况。结果：CCK-8结果显示：与空白组比较，BV-2细胞活力差异无统计学意义；与LPS组比较，汉黄芩素低中高浓度组细胞活力的差异均无统计学意义。ELISA结果显示：与空白组比较，LPS组BV-2细胞上清的IL-6、TNF-α含量均显著升高，且差异具有显著的统计学意义(P＜0.01)；与LPS组比较，汉黄芩素低浓度组BV-2细胞上清的IL-6的含量降低且差异具有统计学意义(P＜0.05)、TNF-α的含量未见明显差异，汉黄芩素中高浓度组IL-6和TNF-α含量均降低(P＜0.05)、差异具有统计学意义，其中汉黄芩素高浓度组IL-6和TNF-α含量降低最明显(P＜0.01)、干预效果最佳。IHC结果显示：与空白组比较，LPS组条件培养基培养的SH-SY5Y细胞α-syn蛋白表达显著升高、TH蛋白表达显著降低，差异均具有统计学意义(P＜0.01)；与LPS组比较，汉黄芩素低浓度组α-syn蛋白表达差异无统计学意义、汉黄芩素中高浓度组α-syn蛋白表达呈降低趋势且差异均具有统计学意义(分别为P＜0.05、P＜0.01)，TH蛋白表达呈升高趋势且汉黄芩素低中高浓度组差异均具有统计学意义(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)。IF结果显示：与空白组比较，NF-κB p65蛋白逐渐向核内聚集、荧光表达强度显著增强(P＜0.01)；与LPS组比较，汉黄芩素各浓度组NF-κB p65蛋白逐渐向核外分散、荧光表达强度逐渐减弱，汉黄芩素低中浓度组未出现显著的统计学意义，汉黄芩素高浓度组荧光强度减弱且具有显著的统计学意义(P＜0.01)。WB结果显示：与空白组比较，LPS组的TLR4蛋白、磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白、MyD88蛋白表达量显著升高，差异均具有统计学意义(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.05)，NF-κB p65蛋白的表达未见统计学意义；与LPS组比较，汉黄芩素各浓度组的NF-κB p65蛋白的表达未见统计学意义，汉黄芩素低浓度组的TLR4蛋白、p-NF-κB p65蛋白和MyD88蛋白表达虽有所降低但差异没有统计学意义，汉黄芩素中浓度组TLR4蛋白、p-NF-κB p65蛋白和MyD88蛋白表达均降低且差异均具有统计学意义(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)；汉黄芩素高浓度组TLR4蛋白、p-NF-κB p65蛋白和MyD88蛋白表达均降低且差异具有统计学意义(分别为P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05)。结论：汉黄芩素可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制由LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎症因子的释放，保护SH-SY5Y细胞，从而达到减轻炎症和神经保护作用。

关键词：帕金森病汉黄芩素 LPS TLR4信号通路

蛋白质修饰组学——中药作用机制研究的新途径

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：王砺寒侯静怡张晶晶杨洪军中国中医科学院医学实验中心中医药防治重大疾病基础研究北京市重点实验室中国中医科学院中药研究所

中医药作为我国宝贵的科学遗产与文化瑰宝，承载着中华民族数千年智慧的结晶，其深厚的医学理论和丰富的实践经验在我国卫生保健事业中占据着不可替代的核心地位。面对现代医学挑战与健康需求，深入探究中药作用机制显得尤为迫切和必要... 详细信息

中医药作为我国宝贵的科学遗产与文化瑰宝，承载着中华民族数千年智慧的结晶，其深厚的医学理论和丰富的实践经验在我国卫生保健事业中占据着不可替代的核心地位。面对现代医学挑战与健康需求，深入探究中药作用机制显得尤为迫切和必要。蛋白质翻译后修饰（Post-translational modification，PTM），作为调控蛋白质功能复杂性和多样性的核心机制，是连接内外环境刺激与机体内在生理反应的关键桥梁。同时，不同类型PTM之间可相互作用形成复杂的调控网络，符合中药多成分、多靶点的作用特点。尽管蛋白质修饰组学作为探究PTM的有效工具，近些年已经被应用于一些中药作用机制研究，但总体而言，这一领域的研究在中药学领域尚处于初步发展阶段。为此，本文首先概述了PTM的基础理论和蛋白质修饰组学的基本研究流程，继而系统回顾了蛋白质修饰组学在中药作用机制研究领域的应用现状，并针对现存研究局限性进行了深入剖析。本文旨在探寻一种基于PTM视角解析中药作用机制的创新研究范式，为未来深化理解中药作用机理提供理论依据与实践指导。

关键词：蛋白质翻译后修饰蛋白质修饰组学中药研究策略复杂作用机制解析

莲NnOMT和NnNMT基因家族的鉴定与分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第3期30卷 152-160页

作者：陈竹荫俞越童郝晨阳刘鸣茹陈莎中国中医科学院中药研究所中药鉴定与安全性评估北京市重点实验室北京100700

目的:莲苄基异喹啉生物碱(BIAs)的生物合成途径的解析具有重要的理论和经济价值,为了更好地促进莲BIAs生物合成途径的解析,本研究对莲氧甲基转移酶(NnOMT)、莲氮甲基转移酶(NnNMT)基因家族进行鉴定和生物信息学分析。方法:在莲全基因组... 详细信息

目的:莲苄基异喹啉生物碱(BIAs)的生物合成途径的解析具有重要的理论和经济价值,为了更好地促进莲BIAs生物合成途径的解析,本研究对莲氧甲基转移酶(NnOMT)、莲氮甲基转移酶(NnNMT)基因家族进行鉴定和生物信息学分析。方法:在莲全基因组的基础上,利用UniPort、美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库对莲NnOMT、NnNMT基因家族进行鉴定,分析其理化性质及亚细胞定位。利用TBtools、MEME、MEGA 11.0、FigTree 1.4.4等工具对前期鉴定出的NnOMT、NnNMT基因的系统发育、序列特征、基因结构、功能注释、顺式作用元件等进行分析。结果:共鉴定出61个莲NnOMT、NnNMT基因,编码的氨基酸数目介于168~580 aa,等电点范围为4.76~9.16,相对分子质量为18699.52~64934.53 Da,大部分表现为酸性且多为亲水蛋白,含有10个保守基序;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析共富集到12个通路,包括新陈代谢、异喹啉生物碱生物合成、苯丙烷的生物合成等;基因本体(GO)富集结果可视化显示,61个莲NnOMT、NnNMT基因共注释到32个类别,其中包括16项分子功能,如谷氨酸合成酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)活性、外肽酶活性,以及16项生物过程,如四氯化碳代谢过程、厌氧四氯化碳代谢过程、对外源生物刺激的反应。在莲NnOMT、NnNMT基因的启动子区存在多种顺式作用元件,主要为启动子和增强子区响应元件、光响应和茉莉酸甲酯响应元件。结论:该研究基于莲的基因组数据对61个莲NnOMT、NnNMT基因进行了全面的生物信息学分析,为莲NnOMT、NnNMT基因家族的基因结构和功能研究奠定了基础,并为莲BIAs的生物合成途径解析提供了参考。

关键词：莲氧甲基转移酶(OMT) 氮甲基转移酶(NMT) 生物信息学功能分析基因家族异喹啉生物碱

急性脑梗死瘀毒互结证大鼠模型并发脑心综合征的比较探讨

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中国实验方剂学杂志 2024年第1期30卷 112-119页

作者：姚明江李珺媛刘悦曹策袁果李磊刘建勋张允岭中国中医科学院西苑医院基础医学研究所中药药理北京市重点实验室北京100091 中国中医科学院西苑医院北京100091

目的:观察并比较两种急性脑梗死瘀毒互结证并发脑心综合征病证结合大鼠模型心电图指标、心肌形态及缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达的变化情况,为急性脑梗死引发心脏病变的可能发生机制及临床脑心综合征的诊治提供实验依据。方法:SPF级雄... 详细信息

目的:观察并比较两种急性脑梗死瘀毒互结证并发脑心综合征病证结合大鼠模型心电图指标、心肌形态及缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达的变化情况,为急性脑梗死引发心脏病变的可能发生机制及临床脑心综合征的诊治提供实验依据。方法:SPF级雄性SD大鼠60只随机分为6组,每组10只,包括正常组、角叉菜胶联合干酵母菌瘀毒互结证组(CA/Y),多发性脑梗死组(ME),大脑中动脉阻塞组(MCAO),多发性脑梗死瘀毒互结证组(CA/Y+ME)及大脑中动脉阻塞瘀毒互结证组(CA/Y+MCAO)。CA/Y组、CA/Y+ME组及CA/Y+MCAO组于造模首日经腹腔注射角叉菜胶10 mg·kg^(-1)、第2天背部皮下注射干酵母悬液2 mg·kg^(-1),ME组及CA/Y+ME组于第2天采用微球栓塞法建立多发性脑梗死模型,MCAO组及CA/Y+MCAO组于第2天采用线栓法建立大脑中动脉阻塞模型。脑梗死模型术后24 h,观察并分析各组大鼠心电图异常率及相关心电图指标,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察并分析各组大鼠脑缺血面积百分率,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理变化,免疫组化及蛋白免疫印迹法观察大鼠心肌Cx43蛋白表达。结果:与正常组及证候模型组比较,各模型组内均有一定数量大鼠存在心电图异常的表现,CA/Y+MCAO组心电图异常比率最高(P证候模型组、疾病模型组及CA/Y+ME组比较,病证结合模型组(CA/Y+ME与CA/Y+MCAO)P波与T波振幅降低,P-R间期缩短、Q-T间期延长,以CA/Y+MCAO组最为明显(P研究急性脑血管病引发心脏病变的可能发生机制及化瘀解毒中药的干预作用,此外,CA/Y+MCAO法具有更高的心电图异常率,心肌病理损伤程度及Cx43蛋白表达水平上调也更为显著,可根据具体实验目的进行选择应用。

关键词：急性脑梗死瘀毒互结证脑心综合征缝隙连接蛋白43 模型评价