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393例乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭死亡患者死因及临床特征分析

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中华肝脏病杂志 2015年第9期23卷 704-706页

作者：刘晓燕陈婧童晶晶肖珑关崇丹张惠英逢菲辛绍杰胡瑾华解放军三○二医院肝衰竭诊疗与研究中心

我们回顾性分析了2008年1月至2011年1月期间在我院住院诊断乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭（HBV—rdated acute-on-chronic liver failure, HBV-ACLF）并于半年内死于肝衰竭的患者相关资料，旨在了解该类患者的直接死亡原因以及疾病特... 详细信息

我们回顾性分析了2008年1月至2011年1月期间在我院住院诊断乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭（HBV—rdated acute-on-chronic liver failure, HBV-ACLF）并于半年内死于肝衰竭的患者相关资料，旨在了解该类患者的直接死亡原因以及疾病特点，以期寻找预后相关因素及降低病死率的预防措施。一。

关键词：肝炎病毒,乙型肝功能衰竭死亡原因

慢性乙型肝炎患者HBV核心区与聚合酶区特异性CTL表位变异分析

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实用肝脏病杂志 2011年第3期14卷 179-182页

作者：许智慧任晓强刘妍李晓东王耀戴久增徐东平北京市解放军第302医院肝衰竭诊疗研究中心病毒性肝炎研究室 100039

目的比较急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎与慢性重型乙型肝炎患者HBV C蛋白和Pol蛋白特异性CTL表位变异的差异,以探讨乙型肝炎重症化和慢性化的可能机理。方法对516例乙型肝炎患者的血清进行HLA-A2和A11分型;用巢式PCR扩增血清HBV C基因与Po... 详细信息

目的比较急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎与慢性重型乙型肝炎患者HBV C蛋白和Pol蛋白特异性CTL表位变异的差异,以探讨乙型肝炎重症化和慢性化的可能机理。方法对516例乙型肝炎患者的血清进行HLA-A2和A11分型;用巢式PCR扩增血清HBV C基因与Pol基因并对PCR产物进行序列测定;根据HBV S基因序列,用VirusBlast软件鉴定患者感染的HBV基因型;用Vector NTI软件对目前已知的HLA-A2限制性的4个C蛋白和5个Pol蛋白特异性CTL表位与HLA-A11限制性的1个C蛋白表位进行序列分析。结果 247例(47.86%)患者HLA-A2阳性,其中AHB 67例,CHB 109例,CSHB 71例;220例(42.64%)患者HLA-A11阳性,其中AHB 67例,CHB 107例,CSHB 46例;CTL表位变异分析结果如下:①在3组HLA-A2阳性患者,表位变异发生率无显著性差异(P>0.05);②在三组HLA-A2阳性HBV B基因型患者,P455-463和P816-824表位变异有极显著性差异(P0.05)。结论某些HBV C蛋白和Pol蛋白特异性CTL表位在AHB、CHB和CSHB患者间变异有明显差异,并且受感染病毒基因型的影响。CTL表位变异可能与乙型肝炎的重症化和慢性化机制相关。

关键词：乙型肝炎乙型肝炎病毒特异性CTL表位核心蛋白多聚酶蛋白

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一种新的HBV表型耐药研究方法的建立

实用医学杂志 2013年第7期29卷 1037-1040页

作者：朱华苏何玲刘永明刘青波马义丽许智慧钟彦伟徐东平桂林医学院生物技术学院 541004 解放军第三0二医院肝衰竭诊疗研究中心病毒性肝炎研究室北京市100039

目的:探索建立一种快速、简便、经济的HBV表型耐药分析方法。方法:将野生型pTriEx-HBV1.1表达载体转染HepG2细胞,5h后给予不同浓度的LAM、ADV及ETV处理,隔天换药1次,换药2d后收集培养上清及细胞,用Dnase处理后,real-timePCR检测HBVDNA... 详细信息

目的:探索建立一种快速、简便、经济的HBV表型耐药分析方法。方法:将野生型pTriEx-HBV1.1表达载体转染HepG2细胞,5h后给予不同浓度的LAM、ADV及ETV处理,隔天换药1次,换药2d后收集培养上清及细胞,用Dnase处理后,real-timePCR检测HBVDNA的水平。结果:上清及细胞内核心颗粒HBVDNA的水平下降2～3个数量级,最大抑制率达98%,EC50值接近。结论:以上清病毒定量代替核心颗粒,建立了基于real-timePCR的HBV表型耐药分析方法,有利于HBV临床治疗的耐药监测。

关键词：肝炎病毒乙型表型耐药分析 real-time PCR

乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭前期患者诊断标准的探讨

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中华肝脏病杂志 2018年第2期26卷 130-135页

作者：李晨朱冰吕飒游绍莉解放军第302医院肝衰竭诊疗与研究中心北京100039

目的对乙型肝炎病毒（HBV）相关慢加急性肝衰竭（ACLF）前期患者的概念及诊断标准进行探讨及评价。方法选取2014年9月至2016年9月间收治的754例HBV相关慢性肝病严重急性恶化（SAE）的患者进行回顾性研究，明确患者的临床特征。运用多因... 详细信息

目的对乙型肝炎病毒（HBV）相关慢加急性肝衰竭（ACLF）前期患者的概念及诊断标准进行探讨及评价。方法选取2014年9月至2016年9月间收治的754例HBV相关慢性肝病严重急性恶化（SAE）的患者进行回顾性研究，明确患者的临床特征。运用多因素logistic回归分析，得出患者发生ACLF的危险因素。通过对SAE—HBV相关慢性肝病患者纳入率和对ACLF患者检出率的研究，评价现有四种肝衰竭前期诊断标准的应用价值。据资料不同分别采用f检验、方差分析、Mann-WhitneyU检验、X2检验进行统计学分析。结果SAE—HBV相关漫洼肝病患者的ACLF发生率为9．9％，进展至ACLF的时间为（12．0±6．7）d。多因素logistic回归分析显示，HBV再激活（OR=5．118）、直接胆红素比例（D／T）（OR=1．041）、年龄（OR=1．033）、总胆红素（TBil）（OR=1．005）、凝血酶原活动度（PTA）（OR：0．880）、血清钠（Na）（OR=0．918）是影响患者发生ACLF的独立危险因素。51．3μmol／L〈TBil〈171．1μmol／L且40％≤PrrA〈60％组（B组，4．2％）患者ACLF发生率低于51．3μmol／L〈TBil〈171．1μmol／L且PTA〈400／o组（A组，13．7％）（P〈0．001）、TBil〉171．1μmol／L且40％〈PrA〈600／0组（C组，20．3％）（P〈0．001）。C组[（10．5±6．1）d]进展至ACLF时间低于A组[（15．6±7．4）d]（P=0．008）。45例患者符合重庆诊断标准，ACLF发生率为2．20／0。154例患者符合浙江诊断标准，ACLF发生率为7．1％。188例患者符合2012年我国指南诊断标准，ACLF发生率为6．40／0。117例患者符合SAE—CHB诊断标准，ACLF发生率为9．4％。结论目前四种肝衰竭前期诊断标准不完全适用于我国临床实际。HBV相关前期ACLF诊断标准应该纳入更多影响其进展至ACLF的重要评价指标。

关键词：肝炎病毒,乙型肝功能衰竭前期诊断标准

HBV基因组C1913A/G变异在不同疾病进程患者间的表现及对病毒复制力的影响

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中华临床医师杂志(电子版) 2013年第8期 3357-3361页

作者：江玲许智慧刘妍李晓东辛绍杰徐东平北京大学解放军302医院教学医院肝衰竭诊疗与研究中心病毒性肝炎研究室

目的评价HBV基因组核苷酸C1913A/G变异对乙型肝炎患者疾病进程及体外病毒复制力的影响。方法 385例研究对象包括116例慢性乙型肝炎轻中度(CHB-M)患者,123例慢性乙型肝炎重度(CHB-S)患者和146例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者。从患者血清中提... 详细信息

目的评价HBV基因组核苷酸C1913A/G变异对乙型肝炎患者疾病进程及体外病毒复制力的影响。方法 385例研究对象包括116例慢性乙型肝炎轻中度(CHB-M)患者,123例慢性乙型肝炎重度(CHB-S)患者和146例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者。从患者血清中提取HBVDNA,PCR扩增HBVDNA全长,统计分析G1896A,A1762T+G1764A和C1913A/G变异的发生率,C1913A/G变异引起核心蛋白第5位氨基酸残基由脯氨酸变为苏氨酸或丙氨酸。统计各组变异与不同疾病进程患者间的单因素与多因素分析。挑选代表性C1913A/G变异株通过定点突变回复为野生型对照。用BspQⅠ/ScaⅠ双酶切HBV基因组,转染HepG2细胞,检测病毒复制力和HBsAg表达水平。结果 CHB-M、CHB-S和ACLF三组患者G1896A,A1762T+G1764A和C1913A/G变异检出率分别为17.45%、27.43%和51.63%(P病毒复制力并进而降低HBsAg表达水平,可能与核心蛋白结构发生改变有关,结果提示该变异可能与慢性乙型肝炎重症化发生机制相关。

关键词：肝炎病毒,乙型突变病毒复制

梅毒螺旋体对HIV感染初治患者HIV RNA水平与T细胞计数的影响

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传染病信息 2024年第2期37卷 113-118页

作者：尹白露程娟姜天俊杨宝鹏王福生蚌埠医科大学研究生院 2330303 解放军总医院第五医学中心感染病医学部、国家感染性疾病临床研究中心北京100039

目的本研究拟探索梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)对人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染初治患者HIV RNA与T细胞计数的影响,HIV感染初治患者基线CD4^(+)T低于最低正常值范围的影响因素。为临床诊断中为TP合并HI... 详细信息

目的本研究拟探索梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)对人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染初治患者HIV RNA与T细胞计数的影响,HIV感染初治患者基线CD4^(+)T低于最低正常值范围的影响因素。为临床诊断中为TP合并HIV感染者确定合适的ART与梅毒治疗方案提供参考。方法本研究纳入我院爱心门诊收治的HIV感染初治患者106例,其中TP合并HIV感染者51例(合并感染组)、单纯HIV感染者56例(单纯感染组),准确记录血常规、生化、T细胞数值、HIV RNA等变量;根据2022年中国梅毒诊疗指南与2021中国艾滋病诊疗指南制定纳入排除标准,使用卡方检验、Mann-Whitney检验、二元Logistic回归分析TP对HIV感染初治患者基线HIV RNA水平、T淋巴细胞以及生化定量指标的影响、及HIV初治患者CD4^(+)T低于最低正常值范围的影响因素。结果合并感染组与单纯感染组HIV初治患者相比,T淋巴细胞计数(CD4^(+)、CD3^(+)、CD8^(+)标记)、CD4^(+)/CD8^(+)以及HIV RNA水平差异无统计学意义(P均>0.05)。白细胞计数、婚姻状况(离异或分居)作为独立保护因素促进HIV初治患者基线CD4^(+)T淋巴细胞数值高于最低正常值范围,无危险因素。结论合并梅毒不会影响HIV感染初治患者HIV RNA与T淋巴细胞数值,但白细胞计数与婚姻状况(离异)是影响CD4^(+)T淋巴细胞数值的独立影响因素。

关键词：梅毒人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒RNA CD4^(+)T淋巴细胞

丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7的重组表达及生物信息学分析

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解放军医学杂志 2007年第10期32卷 1028-1030页

作者：李晓光成军洪源张延峰郑铁龙王慧芬解放军总医院研究生队北京100853 北京地坛医院传染病研究所解放军第302医院肝衰竭治疗研究中心

目的构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7(NS5ATP7)的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中的表达,并初步探讨其结构与功能。方法应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得NS5ATP7基因片段,连接到pGEM-T载体,酶切鉴定及... 详细信息

目的构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7(NS5ATP7)的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中的表达,并初步探讨其结构与功能。方法应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得NS5ATP7基因片段,连接到pGEM-T载体,酶切鉴定及测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导以获得NS5ATP7融合蛋白的表达,SDS-PAGE、Western blot免疫印迹分析和证实该融合蛋白表达的特异性,并应用生物信息学方法对该融合蛋白的结构和功能进行预测。结果利用RT-PCR扩增获得大小为891bp的NS5ATP7基因片段,插入pET-32a(+)表达载体,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,成功获得了大小为48kD的目的蛋白,Western blot进一步证实了该蛋白具有特异性免疫反应识别。生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽。结论利用大肠埃希菌BL21成功表达了NS5ATP7融合蛋白,结合生物信息学分析结果,为研究NS5ATP7蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础。

关键词：肝炎病毒 NS5A 反式激活原核表达计算生物学

HBV核心启动子A1762T/G1764A双突变与慢加急性肝衰竭关系的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2010年第3期24卷 190-192页

作者：闫涛李克苏海滨刘晓燕臧红王慧芬解放军第三○二医院肝衰竭诊疗研究中心北京100039

目的分析HBV BCP A1762T/G1764A双突变与慢加急性肝衰竭（Acute on chronic liver failure,ACLF）之间的相关性.方法对166名HBV慢性感染后处于疾病不同阶段的患者进行HBV前BCP A1762T/G1764A双突变检测,比较不同患者之间突变率的差异... 详细信息

目的分析HBV BCP A1762T/G1764A双突变与慢加急性肝衰竭（Acute on chronic liver failure,ACLF）之间的相关性.方法对166名HBV慢性感染后处于疾病不同阶段的患者进行HBV前BCP A1762T/G1764A双突变检测,比较不同患者之间突变率的差异.结果慢性肝炎（CHB）45人,肝硬化（LC）45人,ACLF 49人,肝细胞癌（HCC）27人,各组A1762T/G1764A双突变率分别为40.0%（18/45）、84.4%（38/45）、73.5%（36/49）、92.6%（25/27）.但是,以CHB为基础的ACLF患者和以LC为基础的ACLF患者A1762T/G1764A双突变率差异无统计学意义[（81.3%）vs.（69.7%）,P=0.502].HBeAg阳性者和HBeAg阴性者BCP双突变率差异无统计学意义（P=0.735）.A1762T/G1764A双突变者HBV DNA水平（10g）为5.68±1.36,阴性者HBV DNA水平（log）为6.14±1.81,差异无统计学意义（P=0.075）.结论 A1762T/G1764A双突变与HBV感染后疾病进展相关,不具备ACLF特异性;A1762T/G1764A联合突变者HBV DNA水平及HBeAg状态也与非联合突变者差异无统计学意义.

关键词：肝炎病毒,乙型病毒核心蛋白质类突变肝功能衰竭

各种恩替卡韦耐药HBV株鉴定及替诺福韦酯对其抑制力分析

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传染病信息 2013年第2期26卷 96-99,107页

作者：李艳乐刘妍许智慧王晓陈丽戴久增姚增涛江玲张连峰徐东平炎研究室郑州大学第一附属医院消化科 450000 解放军第三○二医院全军传染病研究所/肝衰竭诊疗与研究中心病毒性肝炎研究室北京100039

目的分析临床分离的不同形式恩替卡韦(ETV)耐药HBV株的病毒复制力并探讨替诺福韦酯(TDF)对其的抑制力。方法从4例ETV治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中提取并扩增HBV反转录酶(reverse transcriptase,RT)基因,克隆测序分析其基因型耐药... 详细信息

目的分析临床分离的不同形式恩替卡韦(ETV)耐药HBV株的病毒复制力并探讨替诺福韦酯(TDF)对其的抑制力。方法从4例ETV治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中提取并扩增HBV反转录酶(reverse transcriptase,RT)基因,克隆测序分析其基因型耐药变异特点。选取代表性野生型和ETV耐药型HBV克隆株,构建pTriEx-HBV(C)1.1倍重组表达载体。提纯质粒转染HepG2细胞系,5d后检测上清中HBVDNA产生量,分析不同变异形式ETV耐药变异株体外复制力水平及TDF对其抑制力。结果 4份血清中共得到16种含不同HBVRT区变异形式的克隆株,10种与ETV耐药有关,另有6种与拉米夫定耐药有关。表型分析显示:与野生株相比,ETV耐药变异株复制力水平均有所下降,其中rtT184I+M204I变异株复制力最低,是野生株的19.3%,rtM204I+M250L基础上出现补偿突变(rtL80I、rtV173L和rtL180M)的变异株复制力较高,存在相同补偿突变的前提下,rtM204I基础上的耐药变异较rtM204V基础上的复制力低。TDF对各种类型ETV耐药变异病毒的复制力均有较强抑制作用(96.11%～99.90%)。结论与野生株相比,不同变异形式的ETV耐药变异株体外复制力均下降,TDF可有效抑制ETV耐药变异株复制,将是治疗ETV耐药患者的一种很好的选择。

关键词：乙型肝炎病毒突变抗病毒药抗药性