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干扰和过表达端粒酶卡哈尔体蛋白1小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性对比

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中国组织工程研究 2025年第31期29卷 6616-6624页

作者：林书倩赵玺龙高景潘兴华李自安阮光萍解放军联勤保障部队第九二〇医院基础医学实验室云南省昆明市650032 干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程研究中心云南省昆明市650032 云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:随着年龄的增长,骨髓间充质干细胞的功能逐渐降低,延缓骨髓间充质干细胞自身衰老成为一项重要课题。目的:通过改变端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)基因的表达,探讨延缓骨髓间充质干细胞衰老的途径。方... 详细信息

背景:随着年龄的增长,骨髓间充质干细胞的功能逐渐降低,延缓骨髓间充质干细胞自身衰老成为一项重要课题。目的:通过改变端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)基因的表达,探讨延缓骨髓间充质干细胞衰老的途径。方法:细胞贴壁法培养小鼠骨髓间充质干细胞,应用重组慢病毒技术过表达或干扰骨髓间充质干细胞中的TCAB1基因,采用qPCR检测衰老相关基因P16、P21、P53、P27的表达,qPCR检测Telomere的表达判断端粒的相对长度;Western blot检测衰老蛋白P16、P21、P53、P27的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。结果与结论:过表达TCAB1基因骨髓间充质干细胞中衰老相关基因及蛋白的表达量下降,端粒相对长度增加,细胞增殖能力较强,细胞凋亡数量较少,细胞呈现年轻状态;干扰TCAB1基因骨髓间充质干细胞中衰老相关基因及蛋白的表达量上升,端粒相对长度缩短,细胞增殖能力较弱,细胞凋亡数量较多,细胞呈现衰老状态。以上结果表明,在适当范围内增加TCAB1的表达量,可以延缓细胞衰老的速度。

关键词：骨髓间充质干细胞端粒酶卡哈尔体蛋白1 衰老过表达干扰细胞增殖细胞凋亡工程化干细胞

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年轻和老年小鼠脂肪来源干细胞生物学特性对比

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4063-4068页

作者：林美玉姚翔高景赵玺龙潘兴华阮光萍解放军联勤保障部队第九二〇医院基础医学实验室云南省昆明市650032 干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程研究中心云南省昆明市650032 云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:脂肪来源干细胞具有抗衰老的作用,但来自不同年龄供者的脂肪来源干细胞是否有区别,还需深入研究。目的:对比老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的生物学特性。方法:分别从8周龄、14周龄C57BL小鼠脂肪组织中提取脂肪来源干细胞,对比分析... 详细信息

背景:脂肪来源干细胞具有抗衰老的作用,但来自不同年龄供者的脂肪来源干细胞是否有区别,还需深入研究。目的:对比老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的生物学特性。方法:分别从8周龄、14周龄C57BL小鼠脂肪组织中提取脂肪来源干细胞,对比分析老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的细胞周期、凋亡、增殖能力的差异,定量PCR和Western blot检测老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞衰老相关P21、P27基因和蛋白的表达。结果与结论:与老年小鼠脂肪来源干细胞相比,年轻小鼠脂肪来源干细胞更有活力,形态更规则,凋亡更少,增殖更快,衰老相关P21、P27基因和蛋白表达量更低,说明年轻小鼠脂肪来源干细胞具有更好的抗衰老作用。

关键词：脂肪来源干细胞脂肪组织年轻老年小鼠抗衰老

IFN-γ与IL-12诱导CIK细胞生物学活性的比较研究

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现代免疫学 2010年第5期30卷 428-431页

作者：丛丽媛杨海燕周士吉谢锐姬杨富强解放军第四五八医院肝病研究所免疫缺陷病研究与特殊实验中心广州510600

探讨IFN-γ与IL-12分别对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)的体外扩增速度、细胞免疫表型和杀伤活性的影响。分别以传统的IFN-γ、CD3 mAb、IL-2和IL-1α以及IL-12、CD3 mAb、IL-2和IL-1α为诱导剂制备CIK细胞,直... 详细信息

探讨IFN-γ与IL-12分别对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)的体外扩增速度、细胞免疫表型和杀伤活性的影响。分别以传统的IFN-γ、CD3 mAb、IL-2和IL-1α以及IL-12、CD3 mAb、IL-2和IL-1α为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较两者的扩增速度,流式细胞仪检测比较两组细胞的免疫表型,LDH法比较两者对K562细胞株的杀伤活性。结果:两种CIK细胞的增殖速度无显著性差异,但IL-12启动的CIK细胞体外扩增时存活时间比常规CIK细胞长,并且其CD3+CD8+及CD3+CD56+细胞显著高于常规CIK细胞(P<0.05),CD3+CD4+和CD4/CD8显著低于常规CIK(P<0.05),并且其体外对K562的非特异杀伤活性在效靶比为40∶1时显著高于常规CIK。IL-12诱导扩增的CIK中效应细胞比例显著增加,同时抑制性T细胞比例降低,且体外该CIK细胞的杀伤能力较常规CIK好。故IL-12取代IFN-γ对CIK进行预刺激可增强CIK细胞的生物学活性。

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞白介素12 免疫表型杀伤活性流式细胞术

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

慢性HBV感染者组织学免疫耐受状态无创诊断指标及相关模型的建立与评价

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临床肝胆病杂志 2025年第12期40卷 2392-2398页

作者：杜欣雨李嘉蒋贝赵坤宇胡月王凤梅鲁凤民郑州大学医学科学院精准医学中心郑州 450052 天津市第二人民医院肝病科天津 300192 天津市第二人民医院天津市肝病医学研究所天津 300192 北京大学人民医院北京大学肝病研究所北京 100044 天津市第一中心医院肝内科天津 300192 北京大学基础医学院病原生物学系暨北京大学感染病研究中心北京 100191

目的慢性HBV感染自然史多有组织学意义上的免疫耐受状态，免疫耐受状态一旦打破，需立即启动抗病毒治疗。通过对免疫介导的肝损伤与HBV病毒学指标进行相关性分析，精准定义肝组织学免疫耐受状态的患者。方法以2010年1月—2022年12月中... 详细信息

目的慢性HBV感染自然史多有组织学意义上的免疫耐受状态，免疫耐受状态一旦打破，需立即启动抗病毒治疗。通过对免疫介导的肝损伤与HBV病毒学指标进行相关性分析，精准定义肝组织学免疫耐受状态的患者。方法以2010年1月—2022年12月中国人民解放军总医院第五医学中心、天津市第二人民医院、上海瑞金医院和浙江省台州医院收集的HBeAg阳性且HBV DNA>2×106 IU/mL未经抗病毒治疗的577例慢性乙型肝炎患者为研究对象。通过肝组织活检确定肝损伤情况，检测血清ALT、AST水平及病毒学指标。分析现有各大指南无创指标特别是HBV DNA载量界值不同的情况下，肝组织免疫耐受状态患者所占比例。进一步尝试以与肝组织免疫病理损伤程度相关性消失时的血清HBV DNA为新的阈值，联合多因素指标建立组织学免疫耐受状态的诊断模型。计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料两组间比较采用χ2检验。采用Spearman法进行相关性分析。采用二元Logistic回归分析建立多因素诊断模型，并应用受试者工作特征曲线下面积（AUC）明确各模型的诊断效能，AUC的比较采用Z检验。结果中国2022版、EASL 2017版、AASLD 2018版、APASL 2015版慢性乙型肝炎防治指南病毒学无创指标所鉴定出的免疫耐受状态患者中符合本研究定义（HBV DNA>2×106 IU/mL）的组织学免疫耐受状态的比例分别为47.0%、38.5%、36.0%、44.6%，均未超过50%。当将血清HBV DNA阈值升至>2×108 IU/mL时，尽管免疫介导的肝损伤与HBV DNA相关性消失（r=-0.029，P=0.704），此时肝组织免疫耐受状态患者所占比例也仅为52.0%。在血清HBV DNA>1×108的HBeAg阳性患者队列（n=251）中，显著肝损伤组（n=140）和无显著肝损伤组（n=111）HBsAg、HBeAg、HBV DNA、ALT及AST水平比较，差异均有统计学意义（P值均免疫耐受状态的独立影响因素（P值均医院接受肝穿刺活检的238例成人慢性HBV感染者作为验证队列，验证结果显示，本研究建立的模型预测效能优于AST/ALT、FIB-4、APRI（AUC分别为0.698、0.555、0.518、0.373，P值均2×108 IU/mL的HBeAg阳性慢性HBV感染者中，AST>30.5 U/L时，提示组织学免疫耐受状态可能被“打破”。

关键词：乙型肝炎, 慢性免疫耐受诊断

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治疗型HBV DNA疫苗的研究与应用

解放军医学杂志 2003年第6期28卷 489-492页

作者：陈光明杨富强解放军第458医院全军肝病研究中心

综述治疗型乙型肝炎病毒 (HBV)疫苗研究概况 ,重点阐述治疗型HBVDNA疫苗研究进展、治疗乙型肝炎的依据、作用机制和与传统疫苗的比较等。

关键词：免疫疗法疫苗 DNA 肝炎病毒乙型治疗型 HBV-DNA疫苗电脉冲技术

治疗型HBV DNA疫苗肌注电转染法免疫恒河猴的效果及安全性观察

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解放军医学杂志 2003年第6期28卷 508-510页

作者：莫国玉陈光明杨富强何晓嫱黄英杨若才解放军第458医院全军肝病研究中心

为观察肌注电转染法接种治疗型HBVDNA疫苗对恒河猴的免疫效果 ,对健康恒河猴采用肌注电转染法接种治疗型HBVDNA疫苗 ,剂量分别为 0 2mg/只、1mg/只和 2mg/只 ;前 3次给药时间间隔 1个月 ,主要观察免疫效果 ;此后 6次给药为每天 1次 ... 详细信息

为观察肌注电转染法接种治疗型HBVDNA疫苗对恒河猴的免疫效果 ,对健康恒河猴采用肌注电转染法接种治疗型HBVDNA疫苗 ,剂量分别为 0 2mg/只、1mg/只和 2mg/只 ;前 3次给药时间间隔 1个月 ,主要观察免疫效果 ;此后 6次给药为每天 1次 ,观察重复给药的安全性。结果显示肌注电转染法接种疫苗后 ,不同剂量组均可有效诱导恒河猴产生HBsAg特异性抗体 (抗 HBs) ;重复给药未见明显的各系统毒副反应及血液学和血生化异常 ,血清抗核抗体 (ANA)阴性。表明治疗型HBVDNA疫苗用肌注电转染法免疫可显著增强恒河猴的免疫效果 ;多次重复接种该疫苗未见恒河猴的毒性反应。

关键词：肝炎病毒乙型疫苗 DNA 免疫法转染

HBV DNA疫苗诱导健康及HBV转基因小鼠细胞免疫应答

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解放军医学杂志 2003年第6期28卷 501-503页

作者：杨富强陈光明何晓嫱吴乐园莫国玉黄英解放军第458医院全军肝病研究中心

采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HB... 详细信息

采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HBsAg表位多肽(pp2 0 )体外刺激DNA疫苗免疫组效应细胞 ,培养上清IL 1 2释放水平 (2 1 1 3± 39 8pg/ml)明显较对照组 (86 7±2 7 1 pg/ml)高(P 免疫HBVTg小鼠诱导CTL活性 (1 2 7%± 6 7% )较蛋白疫苗免疫对照组(1 7%±3 2 % )高(P 免疫对照组 (3 8±3 0 pg/ml,P 免疫应答。

关键词：肝炎乙型慢性治疗型HBV-DNA疫苗疫苗 DNA

电脉冲肌注法增强治疗型HBV DNA疫苗免疫效果的实验研究

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解放军医学杂志 2003年第6期28卷 498-500页

作者：杨富强赵勇刚陈光明何晓嫱吴乐园莫国玉解放军第458医院全军肝病研究中心

为提高细胞内质粒DNA的导入率并增强DNA疫苗诱导的免疫效果 ,采用在体电脉冲肌注法接种治疗型HBVDNA疫苗。结果接受电脉冲(2 0 0V/cm)肌注的 8只BALB/c小鼠局部肌肉组织荧光素酶活性为 1 6 1 70± 1 2 5 33RLU ,未加电脉冲对照组为 8 0 ... 详细信息

为提高细胞内质粒DNA的导入率并增强DNA疫苗诱导的免疫效果 ,采用在体电脉冲肌注法接种治疗型HBVDNA疫苗。结果接受电脉冲(2 0 0V/cm)肌注的 8只BALB/c小鼠局部肌肉组织荧光素酶活性为 1 6 1 70± 1 2 5 33RLU ,未加电脉冲对照组为 8 0 2±8 0 0RLU ,相差 4个数量级 ,差异具非常显著性 (P 第 2、4周 ,双质粒 (pS2 ·S +pFP)大剂量组 (5 0 +5 0 μg/只 )血清抗 HBs阳性动物数明显较同期未加电脉冲对照组 (大剂量 :1 0 0 0 +1 0 0 0 μg/只 )高 ,差异具显著性意义 (P 第 1 3周时 ,电脉冲免疫大 (5 0 +5 0 μg/只 )、中 (2 5 +2 5 μg/只 )、小 (5 +5 μg/只 )剂量组均有血清抗 HBs阳性鼠出现 ,分别为 5、4和 4 只 ,组间阳性动物数并无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,但均较同期的对照组高 ,并具有显著性意义 (P 免疫第 1 3周时 ,电脉冲免疫的大、中、小

关键词：肝炎乙型疫苗 DNA 接种在体电脉冲 EP