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丙型肝炎病毒感染患者PBMC细胞因子的分泌水平

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第3期20卷 331-333页

作者：董漪张鸿飞陈昊杨晓晋李靖舒翠莉程云解放军第302医院传染病研究所免疫研究室北京100039

目的 :检测丙型肝炎病毒 (HCV)感染患者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养后 ,培养上清中细胞因子分泌的水平 ,以反映HCV患者体内的免疫状况。方法 :患者PBMC培养上清中的细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 10、IL 12、TNF γ、TNF α)采用ELISA... 详细信息

目的 :检测丙型肝炎病毒 (HCV)感染患者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养后 ,培养上清中细胞因子分泌的水平 ,以反映HCV患者体内的免疫状况。方法 :患者PBMC培养上清中的细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 10、IL 12、TNF γ、TNF α)采用ELISA进行检测。结果 :(1)HCV感染患者的PBMC培养 72h后 ,细胞因子检测结果表明 :与正常对照组相比较 ,HCV患者PBMC培养上清中TNF γ、IL 10和TNF α的水平明显升高 ,而没有检测到IL 2、IL 4、和IL 12的分泌产物。 (2 )轻、中度慢性肝炎 ,以及代偿期、失代偿期肝硬化患者间细胞因子的水平未见明显差异。结论 :(1)HCV感染患者体内细胞因子的分泌倾向于Th2型细胞因子占优势。 (2 )HCV感染患者PBMC分泌IL

关键词：丙型肝炎病毒细胞因子 PBMC

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肝脏干细胞的研究进展及应用前景

生理科学进展 2003年第3期34卷 235-237页

作者：张政王福生解放军第302医院传染病研究所北京100039

随着干细胞生物学研究热潮的掀起 ,肝脏干细胞的研究也取得了巨大进展。本文综述了近几年关于肝脏干细胞的起源、基本特性和治疗潜能等热点问题。

关键词：肝脏干细胞细胞移植细胞工程

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HBeAg与CD81分子结合的研究

细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 686-688页

作者：李伯安刘岩李靖舒翠莉何卫平侯俊程云解放军第302医院传染病研究所北京100039

目的 :研究HBeAg与CD81分子在细胞内、外的相互作用。方法 :应用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增CD81全基因 ,并构建重组真核表达载体。将其与pGBKT7 eAg共转染营养缺陷型酵母细胞 ,观察生长情况。应用网织红细胞裂解体外翻译及免疫共沉... 详细信息

目的 :研究HBeAg与CD81分子在细胞内、外的相互作用。方法 :应用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增CD81全基因 ,并构建重组真核表达载体。将其与pGBKT7 eAg共转染营养缺陷型酵母细胞 ,观察生长情况。应用网织红细胞裂解体外翻译及免疫共沉淀试验 ,进一步验证CD81分子与HBeAg的结合。结果 :经EcoRI和BamHI酶切和DNA序列测定鉴定表明 ,构建的CD81基因的重组表达载体正确。共转染后的酵母细胞在营养缺陷的培养基中生长良好。体外免疫共沉淀试验证实 ,CD81与HBeAg出现沉淀带。结论 :HBeAg与CD81分子在细胞内、外均可结合。

关键词：乙型肝炎病毒e抗原 CD81 酵母细胞免疫共沉淀

人IL-10基因的克隆表达及表达产物活性的初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第3期23卷 220-222页

作者：孙杰李伯安戚扬周继文朱雷迟淑萍程云解放军第302医院传染病研究所免疫室北京100039

目的:构建含人IL-10全基因序列的原核表达载体,并进行表达及产物活性的鉴定。方法:利用RT-PCR方法,从人肝癌细胞系HepG2的总RNA中扩增IL-10的全长编码序列。编码序列经测序验证后,将其克隆入表达载体PET-28 a(+),构建IL-10基因的重组原... 详细信息

目的:构建含人IL-10全基因序列的原核表达载体,并进行表达及产物活性的鉴定。方法:利用RT-PCR方法,从人肝癌细胞系HepG2的总RNA中扩增IL-10的全长编码序列。编码序列经测序验证后,将其克隆入表达载体PET-28 a(+),构建IL-10基因的重组原核表达载体。在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白,表达产物采用Western blot和ELISA进行鉴定。结果:表达产物主要位于包涵体内。经Western blot分析和ELISA检测显示,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期的结果相符,有结合抗体活性。结论:成功地扩增人IL-10全基因序列,并构建了含该基因序列的原核表达载体,在大肠杆菌中高效表达的表达产物具有抗原活性,为下一步制备抗IL-10的单克隆抗体(mAb)提供了必要的前提。

关键词： IL-10 克隆原核表达

应用噬菌体展示技术筛选干扰素β基因启动子DNA结合蛋白的基因

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 82-85页

作者：钟彦伟吴顺华成军徐东平戴久增高学松曲建慧王巧侠李晓东郭风劲郭江纪冬解放军军医进修学院解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京地坛医院传染病研究所

目的筛选干扰素β(IFN-β)启动子DNA结合蛋白的基因,探讨IFN-β基因调节的分子生物学机制。方法应用噬菌体展示技术,以IFN-β启动子DNA的聚合酶链反应(PCR)产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的... 详细信息

目的筛选干扰素β(IFN-β)启动子DNA结合蛋白的基因,探讨IFN-β基因调节的分子生物学机制。方法应用噬菌体展示技术,以IFN-β启动子DNA的聚合酶链反应(PCR)产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的生物筛选过程,噬斑PCR扩增后,对所筛选克隆进行DNA序列测定和生物信息学分析。结果噬菌体经富集后,随机挑选52个克隆,序列测定后经过同源性搜索,确定与IFN-β启动子具有结合作用的肝细胞蛋白有6种,包括谷胱甘肽S-转移酶(GST),淀粉酶突变体蛋白,锌指蛋白等与细胞发育和代谢有关的蛋白。结论IFN-β启动子DNA与肝细胞中多种蛋白类型结合,为研究IFN-β基因在肝细胞中的表达调控奠定了基础。

关键词：噬菌体表面展示技术干扰素β 启动子筛选

增强子Ⅰ对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫应答的影响

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解放军医学杂志 2006年第2期31卷 132-134页

作者：赫兢辛绍杰侯俊胡燕杨健洋貌盼勇解放军第302医院感染六科北京100039 解放军第302医院传染病研究所病毒研究室

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)自身增强子Ⅰ(enhancerⅠ,ENHⅠ)对HBVDNA疫苗免疫应答的影响。方法采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原(HBsAg)和HBsAg-ENHⅠ基因片段,重组到载体VR1012中,构建两种HBVDNA疫苗,转染CO... 详细信息

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)自身增强子Ⅰ(enhancerⅠ,ENHⅠ)对HBVDNA疫苗免疫应答的影响。方法采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原(HBsAg)和HBsAg-ENHⅠ基因片段,重组到载体VR1012中,构建两种HBVDNA疫苗,转染COS-7细胞及HepG2细胞并免疫BALB/c小鼠。采用蛋白印迹、ELISA、ELISPOT等方法检测其在COS-7和HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答效果。结果转染的HepG2和COS-7细胞均表达HBsAg;连接ENHⅠ的HBVDNA疫苗转染HepG2细胞后HBsAg表达量明显升高,两种疫苗转染COS-7细胞表达HBsAg无明显差异;免疫小鼠后第2周产生HBsAb及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),两种疫苗免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL无明显差异。结论ENHⅠ可使HBVDNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg明显增加,对转染COS-7细胞表达HBsAg及接种BALB/c小鼠引起的免疫应答无明显影响。

关键词：肝炎病毒,乙型疫苗,DNA 增强子

乙型肝炎患者特异性细胞免疫功能检测的初步研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 33-35页

作者：赫兢辛绍杰沈宏辉杨建洋朱雷胡燕侯俊貌盼勇解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室北京100039

目的通过酶联免疫斑点法检测乙型肝炎(乙肝)患者特异性细胞免疫功能,初步研究各型乙肝患者特异性细胞免疫功能的差异。方法选择急、慢性乙肝、肝炎肝硬化(乙型)、乙肝病毒(HBV)既往感染,接种乙肝疫苗后血清乙肝病毒学标志中仅表面抗体... 详细信息

目的通过酶联免疫斑点法检测乙型肝炎(乙肝)患者特异性细胞免疫功能,初步研究各型乙肝患者特异性细胞免疫功能的差异。方法选择急、慢性乙肝、肝炎肝硬化(乙型)、乙肝病毒(HBV)既往感染,接种乙肝疫苗后血清乙肝病毒学标志中仅表面抗体阳性及未接种过乙肝疫苗、未感染过HBV、血清HBV标志全部阴性者共6组研究对象,每组4例,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测其外周血单个核细胞中γ-干扰素分泌细胞的数量。结果急性乙肝患者、慢性乙肝患者及急性乙肝患者、肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞γ-干扰素分泌细胞数量明显不同(P=0·0209及P=0·0211)。结论通过ELISPOT检测乙肝患者外周血单个核细胞γ-干扰素分泌细胞的数量可以了解乙肝患者特异性细胞免疫功能。急性乙肝患者特异性细胞免疫功能明显强于慢性乙肝患者及肝炎肝硬化患者。

关键词：肝炎,乙型免疫,细胞酶联免疫斑点法

严重急性呼吸综合征相关抗体与激素应用的相关性及其临床意义

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第二军医大学学报 2003年第6期24卷 605-607页

作者：何卫平郑宇赵军陈昊李伯安李靖高蓉程云解放军第302医院传染病研究所免疫研究室北京100039

目的 :探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)患者体内 SARS相关抗体出现时间、抗体滴度与激素应用的相互关系及其可能的临床意义。方法 :采集 2 2例 SARS患者 (临床诊断 )不同发病期及 3例 SARS密切接触者血清 ,采用酶联免疫吸附试验(EL ISA... 详细信息

目的 :探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)患者体内 SARS相关抗体出现时间、抗体滴度与激素应用的相互关系及其可能的临床意义。方法 :采集 2 2例 SARS患者 (临床诊断 )不同发病期及 3例 SARS密切接触者血清 ,采用酶联免疫吸附试验(EL ISA)检测其中的 SARS相关抗体 ,并对使用激素治疗的 17例 SARS患者进行追踪检测。结果 :多数 SARS患者在发病后1～ 3d肺部未出现炎性病变征象前即可检测到 SARS相关抗体 ;3例密切接触者 SARS相关抗体也为阳性。 17例患者使用激素后 SARS相关抗体滴度均有所下降 ,其中 11例患者激素减至小剂量或停用后 ,有 10例患者 SARS相关抗体滴度较前上升 ,1例继续下降。结论 :SARS相关抗体滴度与激素应用具有相关性 ,该抗体与

关键词：严重急性呼吸综合征相关抗体激素应用相互关系临床意义传染性非典型肺炎诊断 ELISA

SARS相关抗肺自身抗体产生机制的初步研究

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 823-824页

作者：陈昊李伯安赵军何卫平郑宇李靖高蓉程云解放军第302医院传染病研究所免疫研究室北京100039

目的 :检测严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中抗 SARS病毒抗体与肺组织的反应性。方法 :采用酶联免疫吸附法检测 SARS患者恢复期血清中抗 SARS病毒抗体 ,并采用肺组织与抗体共同孵育的方法 ,吸附抗 SARS病毒抗体中同肺组织反应的 S... 详细信息

目的 :检测严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中抗 SARS病毒抗体与肺组织的反应性。方法 :采用酶联免疫吸附法检测 SARS患者恢复期血清中抗 SARS病毒抗体 ,并采用肺组织与抗体共同孵育的方法 ,吸附抗 SARS病毒抗体中同肺组织反应的 SARS相关抗体。结果 :与肺组织共同孵育后 ,抗 SARS病毒抗体被部分中和 ,中和率为 13.6 %～ 32 .2 %。结论 :部分抗 SARS病毒抗体可以与肺组织反应 ,SARS病毒抗原同肺组织抗原有部分同源性。机体对 SARS病毒抗原和肺组织的交叉免疫性可能是

关键词：严重急性呼吸综合征 SARS 自身抗体肺组织反应性酶联免疫吸附法