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MeRIP-qPCR技术检测RNA m^(6)A甲基化修饰对t(8;21)AML细胞中KDM4B基因表达的调控作用

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中国实验血液学杂志 2024年第2期32卷 382-388页

作者：李雨晴邵杨柳李梦月王莉莉高晓宁中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部北京100071 解放军医学院北京100853

目的:通过MeRIP联合逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术,证明WTAP介导的RNA m^(6)A修饰对伴t(8;21)急性髓系白血病(AML)细胞中KDM4B基因的直接调控作用。方法:采用靶向WTAP或KDM4B基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体沉默t(8;21)AML细胞系Kasumi-1和SKNO-1中WTAP或KDM4B基因表达,以转染随机打乱序列(scramble)的shRNA的细胞为对照。用超纯RNA提取试剂盒(DNaseⅠ)提取细胞RNA,Magna MeRIP^(TM)m^(6)A Kit试剂盒富集甲基化修饰片段,并通过RT-qPCR检测m^(6)A甲基化修饰的RNA区域;采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)和逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测细胞中WTAP、KDM4B蛋白和mRNA的表达水平。采用克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力。结果:沉默Kasumi-1细胞中WTAP的表达后,m^(6)A甲基化修饰在KDM4B mRNA 3’UTR的富集程度显著下降(P<0.01),沉默Kasumi-1和SKNO-1细胞中WTAP的表达可显著抑制KDM4B蛋白(P<0.001)和mRNA表达水平(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)、细胞体外克隆形成能力下降(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)。结论:t(8;21)AML细胞系中,WTAP通过调控KDM4B基因mRNA 3’UTR的m^(6)A修饰调控KDM4B的表达,沉默KDM4B表达可以抑制t(8;21)AML细胞增殖。

关键词： MeRIP-qPCR 急性髓系白血病 t(8 21)染色体易位 KDM4B RNA m^(6)A甲基化修饰

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电离辐射诱导人肠上皮细胞焦亡机制

军事医学 2024年第4期48卷 241-250页

作者：王琼洪剑郭瑾段君昭丁可昕台福敏郑晓飞葛常辉安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院放射生物学北京市重点实验室北京100850 解放军总医院第八医学中心北京100091 解放军总医院京南医疗区北京100071

目的探讨消皮素E(GSDME)介导的细胞焦亡参与辐射诱导的肠损伤分子机制及消皮素(GSDM)蛋白家族是否通过通用的信号通路调控细胞焦亡。方法利用人正常结肠上皮NCM460细胞和人结肠癌HT-29细胞辐射不同剂量及辐射后不同时间,通过观察焦亡小... 详细信息

目的探讨消皮素E(GSDME)介导的细胞焦亡参与辐射诱导的肠损伤分子机制及消皮素(GSDM)蛋白家族是否通过通用的信号通路调控细胞焦亡。方法利用人正常结肠上皮NCM460细胞和人结肠癌HT-29细胞辐射不同剂量及辐射后不同时间,通过观察焦亡小泡、细胞存活、焦亡执行蛋白的切割进行焦亡指标的检测,对HT-29细胞过表达GSDME并辐射后通过RNA测序技术,对焦亡相关差异基因进行富集分析,筛选相关通路差异基因进行验证。结果辐射诱导NCM460细胞发生显著的细胞焦亡,HT-29细胞过表达GSDME后辐射诱导GSDME激活发生显著的细胞焦亡。成功模拟人肠细胞焦亡状态,过表达GSDME-N和GSDMD-N具有超过50%的焦亡状态下的差异基因;测序分析显示,焦亡状态下的基因主要富集在免疫反应、炎症反应和Rap1信号通路等。结论GSDME激活介导了辐射诱导肠细胞焦亡的发生,GSDM蛋白家族通过通用的调控模式参与细胞焦亡,辐射通过免疫反应、炎症反应和Rap1信号通路诱导GSDME/D激活调控细胞焦亡。

关键词：细胞焦亡电离辐射 RNA测序消皮素肠细胞

健康体检人群幽门螺杆菌感染与维生素水平的相关性

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中华医院感染学杂志 2024年 1817-1820页

作者：郝晶晶马晓娜王盛书李红解放军总医院第二医学中心健康医学科国家老年疾病临床研究中心解放军总医院第二医学中心消化内科国家老年疾病临床研究中心解放军总医院第二医学中心老年医学研究所衰老及相关疾病研究北京市重点实验室国家老年疾病临床研究中心

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)及维生素水平的相关性。方法回顾性分析2019年1月-2021年11月在解放军总医院第二医学中心健康医学科进行健康体检人群的体检指标,将Hp感染者设为感染组,... 详细信息

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)及维生素水平的相关性。方法回顾性分析2019年1月-2021年11月在解放军总医院第二医学中心健康医学科进行健康体检人群的体检指标,将Hp感染者设为感染组,未感染者设为对照组;采用多因素Logistic回归模型分析Hp感染与性别、年龄、体质量指数(BMI)及Hcy、hs-CRP和维生素水平的相关性。结果 Hp感染者hs-CRP、Hcy水平高于对照组(P<0.05);感染组叶酸、维生素A、维生素B12、维生素B6、维生素C、维生素D3水平低于对照组(P<0.05);调整性别、年龄、hs-CRP、Hcy、叶酸及维生素等因素后,多因素Logistic回归模型结果发现:以女性为参照,男性Hp感染的患病风险升高(OR=1.290),年龄(OR=1.049)、hs-CRP(OR=3.678)、Hcy(OR=1.140)、维生素B12(OR=1.211)与Hp感染率呈正相关;叶酸(OR=0.807)、维生素A(OR=0.171)、维生素B6(OR=0.870)、维生素C(OR=0.858)、维生素E(OR=0.990)、维生素D3(OR=0.947)与Hp感染率呈负相关。结论 Hcy及hsCRP水平升高,叶酸、维生素A、维生素B12、维生素B6、维生素C、维生素E、维生素D3降低与Hp感染感染率升高相关。

关键词：幽门螺杆菌感染血清同型半胱氨酸超敏C-反应蛋白维生素水平相关性

实体器官移植后糖尿病患者降糖药物应用专家共识(2024版)

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中华糖尿病杂志 2024年第4期16卷 404-420页

作者：中国研究型医院学会糖尿病学专业委员会中华医学会糖尿病学分会北京医学会糖尿病学分会徐春肖新华窦京涛郭立新申晶肖建中李宁牛玉坚不详解放军总医院第三医学中心内分泌科北京100039 中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院内分泌科、国家卫生健康委员会内分泌重点实验室北京100730 解放军总医院第一医学中心内分泌科、全军内分泌代谢病重点实验室北京100853 北京医院内分泌科、国家老年医学中心、中国医学科学院老年医学研究院北京100730 解放军总医院第八医学中心内分泌科清华大学附属北京清华长庚医院内分泌与代谢科山西省第二人民医院肾移植中心解放军总医院第三医学中心器官移植科

近年来有关器官移植后糖尿病(PTDM)诊治的临床证据日益增多,尤其是新型降糖药和血糖监测新技术的不断问世,进一步推动了PTDM的诊治进展。为详细阐述降糖药物在PTDM中的应用,中国研究型医院学会糖尿病学专业委员会、中华医学会糖尿病学... 详细信息

近年来有关器官移植后糖尿病(PTDM)诊治的临床证据日益增多,尤其是新型降糖药和血糖监测新技术的不断问世,进一步推动了PTDM的诊治进展。为详细阐述降糖药物在PTDM中的应用,中国研究型医院学会糖尿病学专业委员会、中华医学会糖尿病学分会与北京医学会糖尿病学分会共同组织专家编写了《实体器官移植后糖尿病患者降糖药物应用专家共识(2024版)》,共识主要围绕降糖药物的降糖作用机制、推荐强度、临床应用注意事项及其与免疫抑制剂的相互作用等方面展开,以期进一步提高临床对PTDM患者的管理水平,改善其结局。该共识的发布将有助于规范PTDM的临床诊疗。

关键词：糖尿病器官移植后降糖药物共识治疗

北京城乡老年人群健康生活方式评分与全因死亡的关联研究

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中国慢性病预防与控制 2024年第6期32卷 412-418页

作者：杨钧涵王盛书李皓炜刘少华陈仕敏李雪航李志强李蓉蓉杨姗姗李怀昊石岳庭鲍颖慧王建华何耀刘淼解放军医学院北京100853 中国人民解放军总医院研究生院三防医学教研室北京100853 中国人民解放军总医院第二医学中心老年医学研究所衰老及相关疾病研究北京市重点实验室国家老年疾病临床医学研究中心北京100853 中国人民解放军总医院第一医学中心疾病预防控制科肾脏疾病国家重点实验室北京100853

目的探讨北京市城乡老年人群健康生活方式评分与全因死亡的关联,为不同居住地老年人健康行为干预提供科学依据。方法数据来源于北京城乡老年人群健康综合研究(BECHCS)。于2009年和2014年采用多阶段整群随机抽样方法分别选取北京市海淀... 详细信息

目的探讨北京市城乡老年人群健康生活方式评分与全因死亡的关联,为不同居住地老年人健康行为干预提供科学依据。方法数据来源于北京城乡老年人群健康综合研究(BECHCS)。于2009年和2014年采用多阶段整群随机抽样方法分别选取北京市海淀区万寿路街道和密云区巨各庄镇及冯家峪镇60岁及以上4499名老年居民作为研究对象,对其进行问卷调查、体格检查和实验室检测,每2~3年随访1次,随访截至2021年3月31日。根据吸烟情况、饮酒情况、锻炼情况和体型构建健康生活方式评分(0~4分),依据评分分为低风险健康生活方式(4分)、中风险健康生活方式(2~3分)和高风险健康生活方式(0~1分)3组。使用SPSS 26.0和R 4.2.1软件进行t检验、χ2检验及非参数检验,采用Kaplan-Meier法绘制不同健康生活方式评分下城乡老年人群的累积风险曲线,采用log-rank检验法比较不同健康生活方式评分下生存率及生存时间的差异。利用多因素Cox比例风险回归模型分析城乡老年人健康生活方式评分与全因死亡之间的关联,并对单一健康生活方式及交互作用进行效应分析。结果4499名老年居民中农村居民2397人(53.3%),城市居民2102人(46.7%),中位随访时间为6.76年(P25~P75:6.63~11.27年)。健康生活方式评分0~4分的老年居民分别为201人(4.5%)、823人(18.3%)、1442人(32.0%)、1468人(32.6%)和565人(12.6%)。随访期间共667人死亡,死亡密度为182.26/10000人年,其中农村死亡密度为191.06/10000人年,城市死亡密度为177.46/10000人年。多因素Cox回归分析结果显示,每增加1种健康生活方式,总人群全因死亡风险降低13.7%(HR=0.863,95%CI:0.747~0.997),城市老年人全因死亡风险降低24.1%(HR=0.759,95%CI:0.631~0.915),均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。单一健康生活方式Cox回归分析结果显示,总人群中从不吸烟导致全因死亡风险降低26.2%(HR=0.738,95%CI:0.610~0.893,P<0.01)。城市老年人从不吸烟与锻炼导致全因死亡风险分别降低31.0%(HR=0.690,95%CI:0.544~0.875)和24.7%(HR=0.753,95%CI:0.600~0.946),均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。城市老年人中存在吸烟状况与健康体型的相乘交互作用(HR=0.639,95%CI:0.415~0.986,P交互<0.05);农村老年人中存在吸烟状况与锻炼的相乘交互作用(HR=0.557,95%CI:0.343~0.904,P交互<0.05)。结论北京城市老年人群中,低风险健康生活方式评分与全因死亡降低呈正相关,但在农村人群中其关联尚不明确,需进一步进行探究。

关键词：健康生活方式老年人城乡差异全因死亡

健康体检人群幽门螺杆菌感染与维生素水平的相关性

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中华医院感染学杂志 2024年第12期34卷 1817-1820页

作者：郝晶晶马晓娜王盛书李红解放军总医院第二医学中心健康医学科国家老年疾病临床研究中心北京100853 解放军总医院第二医学中心消化内科国家老年疾病临床研究中心北京100853 解放军总医院第二医学中心老年医学研究所衰老及相关疾病研究北京市重点实验室国家老年疾病临床研究中心北京100853

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)及维生素水平的相关性.方法回顾性分析2019年1月-2021年11月在解放军总医院第二医学中心健康医学科进行健康体检人群的体检指标,将Hp感染者设为感染组,未感... 详细信息

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)及维生素水平的相关性.方法回顾性分析2019年1月-2021年11月在解放军总医院第二医学中心健康医学科进行健康体检人群的体检指标,将Hp感染者设为感染组,未感染者设为对照组;采用多因素Logistic回归模型分析Hp感染与性别、年龄、体质量指数(BMI)及Hcy、hs-CRP和维生素水平的相关性.结果Hp感染者hs-CRP、Hcy水平高于对照组(P<0.05);感染组叶酸、维生素A、维生素B12、维生素B6、维生素C、维生素D3水平低于对照组(P<0.05);调整性别、年龄、hs-CRP、Hcy、叶酸及维生素等因素后,多因素Logistic回归模型结果发现:以女性为参照,男性Hp感染的患病风险升高(OR=1.290),年龄(OR=1.049)、hs-CRP(OR=3.678)、Hcy(OR=1.140)、维生素B12(OR=1.211)与Hp感染率呈正相关;叶酸(OR=0.807)、维生素A(OR=0.171)、维生素B6(OR=0.870)、维生素C(OR=0.858)、维生素E(OR=0.990)、维生素D3(OR=0.947)与Hp感染率呈负相关.结论Hcy及hs-CRP水平升高,叶酸、维生素A、维生素B12、维生素B6、维生素C、维生素E、维生素D3降低与Hp感染感染率升高相关.

关键词：幽门螺杆菌感染血清同型半胱氨酸超敏C-反应蛋白维生素水平相关性

旋转细胞培养系统对老年人表皮干细胞增殖和干性维持的影响

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2698-2705页

作者：张敏董溪溪黄萌王朝祥张鲁岳曹均凯解放军医学院北京市100853 中国人民解放军总医院第一医学中心北京市100853 中国人民解放军总医院第五医学中心北京市100071

背景:由于人口老龄化和老年疾病的增加,对老年人表皮干细胞的研究和利用变得越来越重要。但由于老年人表皮干细胞的增殖和干性能力较弱,限制了其在生物医学和临床研究的应用。目的:探讨旋转细胞培养系统培养的老年人表皮干细胞的增殖和... 详细信息

背景:由于人口老龄化和老年疾病的增加,对老年人表皮干细胞的研究和利用变得越来越重要。但由于老年人表皮干细胞的增殖和干性能力较弱,限制了其在生物医学和临床研究的应用。目的:探讨旋转细胞培养系统培养的老年人表皮干细胞的增殖和干性维持能力。方法:采用传统平面培养方法获取儿童(7-12岁)和老年人(60岁以上)表皮干细胞,经细胞形态学和细胞免疫荧光鉴定后,通过流式细胞术、CCK-8、细胞克隆形成实验分析儿童和老年人表皮干细胞增殖能力的差异;采用旋转细胞培养系统和3D TableTrix®微载体培养儿童和老年人表皮干细胞,通过活/死染色、细胞倍增效率、细胞倍增时间以及实时定量聚合酶链反应检测细胞增殖情况以及干性标志物的表达。结果与结论:①在平面培养条件下,儿童组表皮干细胞较老年组具有更强的增殖能力;②与平面培养相比,经旋转细胞培养系统动态培养的老年人表皮干细胞的细胞倍增效率更高(P<0.01),细胞倍增时间更短(P<0.01);③旋转细胞培养系统动态培养促使老年人表皮干细胞自组装形成基于微载体支架的三维细胞球,具有和儿童组表皮干细胞相似的增殖情况;④动态培养后的老年人表皮干细胞在干性标记物基因(ITGA6和ITGB1)、基底细胞标记物基因(K5)和分化标记物基因(K10和K1)表达上可达到和儿童组相近的表达水平。结果表明:旋转细胞培养系统动态培养不仅可以提高老年人表皮干细胞的培养效率,促进细胞增殖和自组装成三维细胞球,而且可维持老年人表皮干细胞一定的干性,未发生完全终末分化。

关键词：人表皮干细胞老年人旋转细胞培养系统微载体三维动态培养干性增殖

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NK细胞在异基因造血干细胞微移植治疗急性髓系白血病中的作用研究

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中国实验血液学杂志 2024年第2期32卷 546-555页

作者：刘汝玉余长林乔建辉蔡博孙琪云王一刘铁强姜珊张天耀艾辉胜郭梅胡锴勋解放军总医院第五医学中心血液医学部北京100000 安徽医科大学安徽合肥230000

目的:探讨异基因造血干细胞微移植(MST)治疗急性髓系白血病(AML)患者中NK细胞的作用。方法:回顾性分析本中心2013-2018年接受MST治疗的93例AML患者的数据。诱导方案为蒽环类药物与阿糖胞苷联合粒细胞集落刺激因子动员后的外周血造血干细... 详细信息

目的:探讨异基因造血干细胞微移植(MST)治疗急性髓系白血病(AML)患者中NK细胞的作用。方法:回顾性分析本中心2013-2018年接受MST治疗的93例AML患者的数据。诱导方案为蒽环类药物与阿糖胞苷联合粒细胞集落刺激因子动员后的外周血造血干细胞(GPBSC)输注,获得完全缓解(CR)后给予2-4个疗程的中大剂量阿糖胞苷联合GPBSC强化治疗。分析移植前未达CR的42例患者经1个疗程、2个疗程MST诱导治疗后的效果。多因素COX回归模型分析供者NK细胞数量与KIR基因型包括KIR配体错配、2DS1、单倍型和HLA-Cw配体对患者生存的影响。结果:42例患者接受MST诱导治疗1个疗程后CR率为57.1%,2个疗程后CR率为73.7%。多因素分析结果显示,中、高剂量NK细胞与患者较长的无病生存(DFS)时间显著相关(HR=0.27,P=0.005;HR=0.21,P=0.001),高剂量NK细胞与患者的较长的总生存(OS)时间显著相关(HR=0.15,P=0.000)。供者2DS1阳性显著提高患者的OS(HR=0.25,P=0.011)。对于60岁以下高危患者,供受者KIR配体错配组患者的DFS长于非错配组(P=0.036);供者2DS1阳性显著延长患者的OS(P=0.009)。结论:NK细胞剂量、KIR配体错配与2DS1能够影响MST的治疗效果,改善AML患者的生存。

关键词：急性髓系白血病造血干细胞微移植 NK细胞 KIR

基于低温沉积3D打印技术构建新型组织工程半月板支架的研究

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中国修复重建外科杂志 2024年第6期38卷 748-754页

作者：陈明学吴江殷瀚眭翔刘舒云郭全义首都医科大学附属北京积水潭医院矫形骨科北京100035 中国人民解放军总医院第一医学中心骨科研究所骨科再生医学北京市重点实验室全军骨科战创伤重点实验室北京100853

目的基于低温沉积3D打印技术构建新型组织工程半月板支架,评价该支架理化性质及生物相容性。方法取新鲜猪膝关节半月板,采用改良物理化学联合方法脱细胞处理,获得脱细胞半月板基质匀浆;经大体观察、HE及DAPI染色观察脱细胞效果,甲苯胺... 详细信息

目的基于低温沉积3D打印技术构建新型组织工程半月板支架,评价该支架理化性质及生物相容性。方法取新鲜猪膝关节半月板,采用改良物理化学联合方法脱细胞处理,获得脱细胞半月板基质匀浆;经大体观察、HE及DAPI染色观察脱细胞效果,甲苯胺蓝、番红O及天狼猩红染色评估黏多糖和胶原保留情况。然后制备脱细胞半月板基质生物墨水,通过低温沉积3D打印技术制备新型组织工程半月板支架。扫描电镜观察微观结构;与脂肪来源干细胞共培养后,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测支架细胞相容性,死/活细胞染色和细胞骨架染色观察细胞活性和形态;植入大鼠皮下后组织学染色评估支架炎症细胞浸润与降解情况。结果脱细胞处理后半月板基质匀浆呈透明凝胶状,DAPI和组织学染色示免疫原性的核酸去除,同时黏多糖及胶原成分保留。采用低温沉积3D打印技术成功构建新型组织工程半月板支架,扫描电镜示支架呈分级大孔-微孔的微观结构;CCK-8检测示支架具有良好细胞相容性;死/活细胞染色示支架可有效维持细胞活性(>90%);细胞骨架染色示支架有利于细胞黏附和铺展;支架植入大鼠皮下1周后有轻度炎症反应,3周后未见明显炎症反应,并可见支架逐步降解。结论基于低温沉积3D打印技术构建的新型组织工程半月板支架具有分级大孔-微孔的微观结构和良好细胞相容性,有利于细胞黏附和生长,为下一步体内研究奠定基础。

关键词：组织工程支架低温沉积3D打印技术半月板脱细胞基质

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