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肾脏不同区域体素内不相干运动扩散加权成像定量参数诊断IgA肾病的价值

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中华放射学杂志 2024年第6期58卷 640-646页

作者：翟雪陈仆周少鹏白旭赵建王涌张利蔡广研王松王海屹解放军总医院第一医学中心放射诊断科北京100853 解放军总医院第一医学中心肾内科北京100853

目的探讨肾脏不同区域体素内不相干运动扩散加权成像(IVIM-DWI)参数在区别IgA肾病患者与健康志愿者中的价值。方法本研究为横断面研究,前瞻性收集2022年2月至2023年9月在解放军总医院第一医学中心接受肾脏穿刺活检术(左肾下极)并经病理... 详细信息

目的探讨肾脏不同区域体素内不相干运动扩散加权成像(IVIM-DWI)参数在区别IgA肾病患者与健康志愿者中的价值。方法本研究为横断面研究,前瞻性收集2022年2月至2023年9月在解放军总医院第一医学中心接受肾脏穿刺活检术(左肾下极)并经病理证实的84例IgA肾病患者(IgA肾病组)及34例健康志愿者(对照组)的肾脏IVIM-DWI图像资料,分别在右肾皮质、髓质和实质勾画感兴趣区,测量相应区域的表观扩散系数(ADC)、真扩散系数(D)、假性扩散系数(D^(*))和灌注分数(f)。采用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验比较IgA肾病组与对照组间各区域IVIM-DWI参数的差异,对差异有统计学意义的参数进行受试者操作特征曲线分析,计算曲线下面积(AUC)。结果IgA肾病组与对照组间肾皮质ADC、肾实质ADC、肾皮质D、肾实质D和肾髓质f差异有统计学意义(Z=-3.03、-2.21、-2.62、-2.03、-2.03,P=0.002、0.027、0.009、0.043、0.042),其诊断IgA肾病的AUC(95%CI)分别为0.679(0.586~0.762)、0.630(0.537~0.717)、0.654(0.535~0.774)、0.619(0.497~0.742)和0.620(0.495~0.745)。2组间肾髓质ADC、D,肾皮质、髓质和实质D*,肾皮质和肾实质f差异无统计学意义(P>0.05)。结论肾脏IVIM-DWI定量参数受不同测量区域影响,其中肾皮质和肾实质ADC、D和肾髓质f可用于初步诊断IgA肾病。

关键词：肾小球肾炎,IgA 磁共振成像体素内不相干运动扩散加权成像

应激诱导蛋白Sestrin2对脂多糖诱发树突状细胞坏死性凋亡的影响

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中华危重病急救医学 2024年第3期36卷 237-243页

作者：吴梦瑶姚人骐段昱王陆郑丽玉贺鹏翼董宁吴瑶姚咏明解放军总医院医学创新研究部北京100853 解放军总医院第一医学中心普通外科北京100853 解放军总医院第一医学中心重症医学科北京100853

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(SESN2)对脂多糖(LPS)联合泛天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂zVAD诱导小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响。方法将培养至第3~10代小鼠骨髓来源树突状细胞系DC2.4给予LPS刺激0、6、12、24 h,... 详细信息

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(SESN2)对脂多糖(LPS)联合泛天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂zVAD诱导小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响。方法将培养至第3~10代小鼠骨髓来源树突状细胞系DC2.4给予LPS刺激0、6、12、24 h,并按照刺激时间点进行分组,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组细胞SESN2蛋白表达水平。将过表达空载慢病毒(NC)、SESN2基因过表达RNA序列慢病毒(SESN2 LV-RNA)、小干扰空载慢病毒(NS)以及SESN2基因小干扰RNA序列慢病毒(SESN2 siRNA)分别转染至DC2.4细胞中,转染后72 h,于倒置荧光显微镜下观察细胞荧光表达改变。各转染组细胞给予LPS刺激24 h,同时设立空白对照组给予磷酸盐缓冲液(PBS)并培养24 h,采用Western blotting检测SESN2蛋白表达水平;给予LPS+zVAD刺激24 h,同时设立空白对照组给予PBS并培养24 h,采用Western blotting检测混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化MLKL(p-MLKL)蛋白表达水平,使用激光共聚焦显微镜观察p-MLKL变化及阳性细胞数量,采用流式细胞术和Hoechst染色检测坏死性凋亡细胞比例。结果与LPS刺激0 h组相比,LPS刺激24 h组细胞SESN2蛋白表达明显升高,故将24 h作为后续实验LPS刺激时间点。成功转染慢病毒后培养24 h,SESN2 siRNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显高于NS+LPS+zVAD组;SESN2 LV-RNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显低于NC+LPS+zVAD组;且NS+LPS+zVAD组和NC+LPS+zVAD组MLKL磷酸化水平分别高于NS+PBS组、NC+PBS组。激光共聚焦显微镜下显示,各组细胞p-MLKL蛋白荧光表达数量及荧光强度变化趋势与上述结果一致。流式细胞术和Hoechst染色检测结果均显示,SESN2 siRNA+LPS+zVAD组坏死性凋亡细胞比例明显高于NS+LPS+zVAD组〔流式细胞术:(30.800±1.153)%比(20.800±1.114)%,Hoechst染色:(75.267±0.451)%比(46.267±3.371)%,均P<0.05〕,提示敲减SESN2表达可以进一步加剧细胞坏死性凋亡发生;SESN2 LV-RNA+LPS+zVAD组坏死性凋亡细胞比例明显低于NC+LPS+zVAD组〔流式细胞术:(7.160±0.669)%比(19.240±2.322)%,Hoechst染色:(32.433±3.113)%比(48.567±4.128)%,均P<0.05〕,提示过表达SESN2可以逆转上述改变。结论SESN2对于脓毒症状态下DC坏死性凋亡具有明显抑制效应,干预SESN2有助于调节脓毒症时DC介导免疫反应进程。

关键词：应激诱导蛋白Sestrin2 坏死性凋亡脓毒症树突状细胞免疫反应

结核病患者IL-8、STAT3表达差异及其辅助诊断价值

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中国热带医学 2024年

作者：安红娟李昆张灵霞朱琰李改平史阅韩孙卫国解放军总医院第八医学中心结核病诊疗新技术北京市重点实验室

目的探索耐多药结核病患者（multi-drugresistanttuberculosis，MDR-TB）、药物敏感结核病患者（drugsusceptibletuberculosis，DSP-TB）及健康人3组人群外周血白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）、信号传导和转录激活因子3（signaltransducerandactivatoroftranscription3，STAT3）表达差异，对组间差异进行分析，为开展新型结核病实验室辅助诊断提供参考依据。方法对3组人群外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)mRNA芯片表达谱差异性进行分析；选取MDR-TB患者与DSP-TB患者为研究对象，以健康人为对照组，ELISA法测定各组血清IL-8浓度，比较组间差异；同时分离3组人群外周血单个核细胞（PBMC)，收集细胞并提取总RNA，分别通过实时荧光定量PCR技术分析各组IL-8、STAT3mRNA表达情况；以WesternBlot实验比较各组STAT3蛋白表达差异。结果MDR-TB和DSP-TB两组人群血清IL-8浓度明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；MDR-TB组和DSP-TB组人群外周血PBMCs中IL-8基因mRNA的相对表达量也明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；Q-PCR与WesternBlot实验结果均显示，健康组、DSP-TB组和MDR-TB组STAT3基因表达依次上调，组间有统计学差异(P＜0.05)，实验所得结果与mRNA芯片结果一致。结论IL-8在活动性结核病患者（ATB）体内表达显著升高，可以作为标志物区分ATB与健康人群；STAT3浓度的变化不仅作为ATB的诊断参考，还可以鉴别DSP-TB与MDR-TB人群。IL-8、STAT3联合检测有望成为不同结核病患者的临床辅助诊断依据。

关键词：结核分枝杆菌活动性结核病 IL-8 STAT3

结核病患者外周血淋巴细胞亚群以及12项血浆细胞因子流式检测分析

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中华检验医学杂志 2024年第7期47卷 755-762页

作者：马锡慧李彬钰韩永孔祥瑞孙玉洁郭宗伟郭欣鑫崔文哲肖漓解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学部研究所、北京市器官移植与免疫调节重点实验室北京100091

目的:分析结核病患者淋巴细胞亚群和12项血浆细胞因子的流式检测结果,探讨其在结核病中的诊断效能。方法:回顾性病例对照研究。选取2022年1月至2023年12月在解放军总医院第八医学中心初诊的有病原学证据或临床确诊的结核病患者128例为... 详细信息

目的:分析结核病患者淋巴细胞亚群和12项血浆细胞因子的流式检测结果,探讨其在结核病中的诊断效能。方法:回顾性病例对照研究。选取2022年1月至2023年12月在解放军总医院第八医学中心初诊的有病原学证据或临床确诊的结核病患者128例为研究对象,根据结核分枝杆菌感染部位分为肺结核组(83例)与肺外结核组(45例)。另选择性别、年龄与结核病患者相匹配的健康体检者100例为对照组。采用流式细胞术检测各组外周血淋巴细胞亚群和12项血浆细胞因子[包括10项促炎因子:白细胞介素(IL)-5、干扰素(IFN)-α、IL-2、IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-8、IL-17、IL-12p70、肿瘤坏死因子(TNF)-α和2项抑炎因子:IL-4、IL-10]水平。比较各组淋巴细胞亚群和血浆细胞因子水平的差异,采用Spearman相关法分析淋巴细胞亚群与细胞因子的相关性,二元Logistic回归筛选结核病相关因素,受试者工作曲线(ROC)评价结核病相关因素的诊断效能。结果:与对照组比较,肺结核组和肺外结核组CD3+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞、NK细胞和B细胞绝对数较低(P均<0.05),肺结核组除IL-1β外的其他11项细胞因子水平均较高(P均<0.01),肺外结核组IL-6、IFN-γ、IL-17、TNF-α、IL-4和IL-10水平较高(P均<0.05)。与肺外结核组比较,肺结核组IL-8水平较高(P=0.026)。Spearman相关性分析显示,IL-6、IFN-γ、IL-8分别与CD3+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞、NK细胞和B细胞绝对数均呈负相关(IL-6:R^(2)=-0.30、-0.28、-0.32、-0.26、-0.28;IFN-γ:R^(2)=-0.36、-0.31、-0.37、-0.25、-0.36;IL-8:R^(2)=-0.14、-0.13、-0.16、-0.14、-0.22;P均<0.001),IL-10与CD3+CD4+T淋巴细胞、NK细胞和B细胞绝对数呈负相关(R^(2)=-0.14、-0.19、-0.21,P均<0.05);二元Logistic回归分析显示,IL-6、IFN-γ、IL-8、IL-10是结核病的相关因素(OR=1.809、1.136、0.910、2.218,P均<0.05);ROC曲线分析显示IL-6、IFN-γ、IL-8、IL-10联合诊断结核病的ROC曲线下面积为0.845,敏感度为0.766,特异度为0.820。结论:肺结核和肺外结核患者的淋巴细胞亚群绝对数和细胞因子水平显示其免疫功能处于低下状态,促炎因子(IL-6、IFN-γ、IL-8)和抑炎因子(IL-10)水平明显升高,4项细胞因子联合检测对结核病具有较高的诊断效能。

关键词：流式细胞术肺结核肺外结核淋巴细胞亚群细胞因子类

新型重组溶瘤痘苗病毒感染联合免疫效应细胞及免疫检查点阻断三联治疗胃癌的研究

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肿瘤防治研究 2024年第6期51卷 426-431页

作者：张林侯艳红吴凯张静中国人民解放军总医院第八医学中心北京100091

目的探讨溶瘤病毒感染、免疫效应细胞补充及免疫检查点阻断三者联合策略在胃癌治疗中的意义。方法以既往实验获得的痘苗病毒为基础构建的携带T淋巴细胞趋化因子CXCL9基因和白细胞介素7(IL-7)基因的重组溶瘤痘苗病毒(VV-IL7-CXCL9)干预... 详细信息

目的探讨溶瘤病毒感染、免疫效应细胞补充及免疫检查点阻断三者联合策略在胃癌治疗中的意义。方法以既往实验获得的痘苗病毒为基础构建的携带T淋巴细胞趋化因子CXCL9基因和白细胞介素7(IL-7)基因的重组溶瘤痘苗病毒(VV-IL7-CXCL9)干预治疗裸鼠皮下种植瘤方式建立的胃癌荷瘤动物模型。实验建立重组溶瘤痘苗病毒瘤内注射+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)+免疫检查点阻断剂(PD-1单抗)三联干预组、三种措施单独干预组、二联干预组及空白对照组。按照既定分组给药干预后采用肿瘤生长曲线法、肿瘤抑制率法及动物活体发光法检测肿瘤治疗效果并采取ELISA法检测各组动物血清及组织匀浆CXCL9和IL-7两分子浓度。结果动物模型治疗干预结果显示重组溶瘤痘病毒+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)+免疫检查点阻断剂(PD-1单抗)三联干预组肿瘤生长明显减缓,显著慢于其他干预组及空白对照组。结论在胃癌动物模型干预实验中采用重组溶瘤痘病毒瘤内注射+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)+免疫检查点阻断剂(PD-1单抗)三联干预的生物免疫治疗策略具有强烈的抑瘤作用。

关键词：胃癌溶瘤痘病毒免疫效应细胞免疫检查点阻断治疗

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黄芪-莪术基于C5a/NETs途径抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤转移的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 27-36页

作者：田培裕于泓洋李潇于路航闫梓乔窦永起解放军医学院北京100853 解放军总医院第一医学中心北京100853 解放军71901部队山东聊城252000 解放军总医院第六医学中心北京100089

目的:基于补体C5a/C5a受体(C5aR)对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成的调控机制,探讨黄芪-莪术(HQ-EZ)改善高凝状态、抑制肿瘤生长转移的机制。方法:40只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,其中设空白组,另外3组建立Lewis肺癌小鼠模型后分为模... 详细信息

目的:基于补体C5a/C5a受体(C5aR)对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成的调控机制,探讨黄芪-莪术(HQ-EZ)改善高凝状态、抑制肿瘤生长转移的机制。方法:40只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,其中设空白组,另外3组建立Lewis肺癌小鼠模型后分为模型组、黄芪-莪术组、PMX53组,每组各10只。建模后第3天开始给药,中药组按8.2 g·kg^(-1)剂量连续14 d给予中药浓煎液灌胃,PMX53组分别于第3、6、9、12、15天按1 mg·kg^(-1)剂量给予腹腔注射PMX53;每2 d测量小鼠体质量和肿瘤长短径,末次给药次日各组小鼠行活体肺部microCT检测转移瘤情况,麻醉后眼球取血,处死剖取肺脏、瘤块,观察肺脏大体情况,称取瘤重计算抑瘤率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和肿瘤组织中补体C5a、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、瓜氨酸化组蛋白-H3(Cit-H3)、髓过氧化物酶(MPO)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、NETs、血管性血友病因子(vWF)、组织因子(TF)、P-选择素含量,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肺内转移情况,免疫荧光(IF)观察肿瘤组织内NETs等的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织C5aR、MPO、Cit-H3蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组肺内可见肿块,肺内X射线透射度低区域增多,模型组肺脏大体可见结节灶及多处出血灶,整体肺脏颜色较深;小鼠血清补体C5a、NETs及相关蛋白、vWF、TF、P-选择素水平显著增高(P<0.01)。与模型组比较,HQ-EZ组与PMX53组肺内转移灶数量较少,X射线透射度低区域相对较少,肺脏大体未见明显结节,整体肺脏颜色相对较浅;与模型组比较,两用药干预组肿瘤生长曲线较缓,瘤重显著降低(P<0.01),肿瘤细胞凋亡率显著升高(P<0.01),血清和肿瘤组织中补体C5a、NETs及相关蛋白、vWF、TF、P-选择素水平明显降低(P<0.05),补体C5aR、MPO、Cit-H3的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:黄芪-莪术通过抑制补体C5a/C5aR通路抑制了NETs的表达,进一步改善机体的高凝状态,起到抑制肿瘤生长转移的作用。

关键词：中性粒细胞胞外诱捕网中性粒细胞胞外诱捕网(NETosis) 益气活血气虚血瘀肺内转移

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计算机辅助近红外二区荧光血管造影在透析血液通路手术中的应用

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中国激光 2024年第9期51卷 200-206页

作者：李凌冰符礼丹史小静王远大王志军胡振华解放军总医院第二医学中心北京100853 中国科学院自动化研究所中国科学院分子影像重点实验室北京100190 中国科学院大学人工智能学院北京100049 解放军总医院第一医学中心北京100853 中国人民解放军总医院肾脏疾病全国重点实验室北京100853

浅静脉清晰成像对于透析患者动静脉内瘘术前手术路径规划和术中引导手术治疗等具有重要作用,对临床疾病的诊断和治疗具有重要作用。目前临床上常用的血管成像方法能够清晰地实现血管的成像,但对静脉血管网的成像效果难以满足临床需求。... 详细信息

浅静脉清晰成像对于透析患者动静脉内瘘术前手术路径规划和术中引导手术治疗等具有重要作用,对临床疾病的诊断和治疗具有重要作用。目前临床上常用的血管成像方法能够清晰地实现血管的成像,但对静脉血管网的成像效果难以满足临床需求。笔者利用临床获批的荧光染料吲哚菁绿(ICG)开展了前臂血管的近红外二区(NIR-II)荧光成像,结合人工智能算法获得分辨率更高的血管NIR-IIb荧光图像,更准确地描绘浅表细小血管的直径。在此基础上,笔者继续结合Fluent流体仿真模拟方法,辅助医生在术前判断主干引流静脉,并在术中结扎中选择主干引流静脉进行保留,对大侧枝引流静脉进行结扎,提高患者肾透析血液通路手术的成功率。利用荧光血管造影技术结合模拟方法引导肾透析血液通路手术将桡动脉接入头静脉,手术的早期通畅率为100%(8/8),而接受常规手术的对照组的早期通畅率为73.33%(11/15)。本研究验证了NIR-II荧光血管造影技术的安全性和有效性,并在此基础上进一步验证了荧光成像结合人工智能算法在肾透析血液通路手术中潜在的应用价值。

关键词：医用光学近红外二区荧光荧光血管造影吲哚菁绿人工智能计算机仿真模拟

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严重烧伤小鼠肠-胰岛轴功能的变化及其作用

中华烧伤与创面修复杂志 2024年第7期40卷 625-633页

作者：刘馨竹李大伟蒋敏李志生冯柏塨申传安解放军总医院第四医学中心烧伤整形医学部北京100048

目的探讨严重烧伤小鼠肠-胰岛轴功能的变化及其作用。方法该研究为实验研究。将90只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假伤组和烧伤组(每组45只小鼠),于烧伤组小鼠背部制备30%体表总面积Ⅲ度烫伤(以下称烧伤)创面,假伤组小鼠... 详细信息

目的探讨严重烧伤小鼠肠-胰岛轴功能的变化及其作用。方法该研究为实验研究。将90只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假伤组和烧伤组(每组45只小鼠),于烧伤组小鼠背部制备30%体表总面积Ⅲ度烫伤(以下称烧伤)创面,假伤组小鼠模拟致假伤。伤后24 h,检测空腹血糖(样本数为12)后,行腹腔糖耐量实验和口服糖耐量实验,并绘制血糖浓度-时间变化曲线,计算曲线下面积(样本数为6);分别于腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前及腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min从心脏取血,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血浆胰岛素和胰高血糖素样肽1(GLP-1)水平(样本数为3);取每组3只小鼠回肠组织,行免疫荧光染色及原位末端标记染色检测肠道L细胞GLP-1表达及凋亡水平;提取每组6只小鼠胰岛行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验,分别经低糖(2.8 mmol/L葡萄糖)和高糖(16.7 mmol/L葡萄糖)孵育后取上清液,采用ELISA法检测胰岛素水平。取36只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠,按随机数字表法分为假伤组、烧伤组和烧伤+艾塞那肽4(Ex-4)组(每组12只小鼠),对假伤组和烧伤组小鼠行同前对应处理,将烧伤+Ex-4组小鼠同烧伤组小鼠致伤后给予其GLP-1受体激动剂Ex-4。伤后24 h,提取小鼠胰岛,采用蛋白质印迹法检测重链结合蛋白(BIP)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达并计算p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α比值(样本数为3),采用流式细胞术检测胰岛细胞凋亡率(样本数为3),同前行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验以检测上清液中胰岛素水平(样本数为6)。结果伤后24 h,烧伤组小鼠空腹血糖为(7.3±1.0)mmol/L,显著高于假伤组的(5.1±0.6)mmol/L(t=6.36,P实验和口服糖耐量实验中,烧伤组小鼠血糖浓度-时间变化曲线下面积均显著大于假伤组(t值分别为4.32、6.03,P<0.05);与假伤组相比,烧伤组小鼠经腹腔注射给予葡萄糖溶液前血浆胰岛素水平及经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前血浆GLP-1水平均显著降低(P<0.05),经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min血浆胰岛素水平及经灌胃给予葡萄糖溶液后30、60 min血浆GLP-1水平均显著降低(P<0.05)。伤后24 h,与假伤组相比,烧伤组小鼠肠道L细胞GLP-1表达水平显著降低(t=7.74,P<0.05),凋亡水平显著升高(t=14.28,P<0.05)。伤后24 h,烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平为(8.5±0.4)ng/mg,显著低于假伤组的(15.7±0.3)ng/mg(t=18.68,P<0.05)。伤后24 h,与假伤组相比,烧伤组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与烧伤组相比,烧伤+Ex-4组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。伤后24 h,烧伤组小鼠胰岛细胞凋亡率为(32.0±3.0)%,显著高于假伤组的(10.3±2.5)%(P<0.05);烧伤+Ex-4组小鼠胰岛细胞凋亡率为(20.0±3.6)%,显著低于烧伤组(P<0.05)。伤后24 h,烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著低于假伤组(P<0.05),烧伤+Ex-4组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著高于烧伤组(P<0.05)。结论严重烧伤后小鼠肠-胰岛轴功能障碍,肠道L细胞凋亡增多、GLP-1合成及分泌减少,胰岛细胞发生内质网应激、凋亡增多,葡萄糖刺激的胰岛素分泌减少;GLP-1受体激动剂Ex-4能保护严重烧伤小鼠胰岛细胞功能,可能通过减轻内质网应激降低胰岛细胞凋亡水平,促进胰岛素分泌。

关键词：烧伤胰岛素胰高血糖素样肽1 内质网应激高糖血症肠-胰岛轴

负载人脐带间充质干细胞来源的小细胞外囊泡的甲基丙烯酸酐化明胶水凝胶治疗小鼠全层皮肤缺损创面的效果

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中华烧伤与创面修复杂志 2024年第4期40卷 323-332页

作者：陈祎琦周莹芊魏茜谢晓烨刘馨竹李大伟申传安解放军总医院第四医学中心烧伤整形医学部北京100048

目的探究负载人脐带间充质干细胞来源的小细胞外囊泡(hUCMSC-sEV)的甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶治疗小鼠全层皮肤缺损创面的效果。方法该研究为实验研究。采用超速离心法提取hUCMSC-sEV,通过透射电子显微镜观察其形貌,采用蛋白质... 详细信息

目的探究负载人脐带间充质干细胞来源的小细胞外囊泡(hUCMSC-sEV)的甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶治疗小鼠全层皮肤缺损创面的效果。方法该研究为实验研究。采用超速离心法提取hUCMSC-sEV,通过透射电子显微镜观察其形貌,采用蛋白质印迹法检测CD9、CD63、肿瘤易感基因101(TSG101)及钙联蛋白的表达。将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及第3、4代人表皮角质形成细胞(HEK)、人真皮成纤维细胞(HDF)均分为常规培养的空白对照组和在细胞培养液中加入hUCMSC-sEV培养的hUCMSC-sEV组,行细胞划痕试验并计算划痕后6、12、24 h的细胞迁移率,行细胞Transwell试验并计算培养12 h细胞迁移数量,行5-乙炔基-2''-脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst染色检测培养24 h增殖细胞比例,样本数均为3。制备单纯GelMA水凝胶及负载hUCMSC-sEV的GelMA水凝胶(以下简称hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶),通过扫描电子显微镜观察2种水凝胶微观形貌,通过激光扫描共聚焦显微镜观察hUCMSC-sEV的分布情况,采用蛋白质比色定量法测定并计算hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶在磷酸盐缓冲液(PBS)中浸泡0(即刻)、2、4、6、8、10、12 d时hUCMSC-sEV累积释放率(样本数为3)。将24只6周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为PBS组、单纯hUCMSC-sEV组、单纯GelMA水凝胶组和hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶组(每组6只),于小鼠背部制备全层皮肤缺损创面后分别行PBS注射、hUCMSC-sEV悬液注射、单纯GelMA水凝胶覆盖、hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶覆盖。于伤后0(即刻)、4、8、12 d观察创面愈合情况并统计伤后4、8、12 d创面愈合率,于伤后12 d取创面组织行苏木精-伊红染色后观察创面新生组织结构,样本数均为6。结果提取的hUCMSC-sEV呈杯状结构,表达CD9、CD63和TSG101,几乎不表达钙联蛋白。划痕后6、12、24 h,hUCMSC-sEV组HEK(t值分别为25.94、20.98、20.04)、HDF(t值分别为3.18、5.68、4.28)、HUVEC(t值分别为4.32、19.33、4.00)的迁移率均明显高于空白对照组(P<0.05)。培养12 h,hUCMSC-sEV组HEK、HDF及HUVEC迁移数量分别为(550±23)、(235±9)、(856±35)个,均明显多于空白对照组的(188±14)、(97±6)、(370±32)个(t值分别为22.95、23.13、17.84,P<0.05)。培养24 h,hUCMSC-sEV组HEK、HDF及HUVEC增殖细胞比例均明显高于空白对照组(t值分别为22.00、13.82、32.32,P<0.05)。单纯GelMA水凝胶内部呈疏松多孔的海绵状结构且其中未见hUCMSC-sEV,hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶具有相同海绵状结构且其中可见hUCMSC-sEV呈团块状均匀分布。hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶浸泡2 d后hUCMSC-sEV累积释放率曲线趋于平缓,浸泡12 d时hUCMSC-sEV累积释放率为(59.2±1.8)%。伤后0~12 d,4组小鼠创面均不断缩小。伤后4、8、12 d,hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶组小鼠创面愈合率均明显高于其余3组(P<0.05),单纯GelMA水凝胶组、单纯hUCMSC-sEV组小鼠创面愈合率均明显高于PBS组(P<0.05);伤后8、12 d,单纯hUCMSC-sEV组小鼠创面愈合率均明显高于单纯GelMA水凝胶组(P<0.05)。伤后12 d,hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶组小鼠创面上皮化程度最佳,真皮胶原排列松散有序,炎症细胞数量最少;其余3组小鼠创面均可见真皮胶原排列致密且存在不同程度的炎症细胞浸润。结论hUCMSC-sEV能够促进皮肤创面愈合相关细胞HEK、HDF与HUVEC迁移与增殖,并可在GelMA水凝胶内缓慢释放。hUCMSC-sEV/GelMA水凝胶作为创面敷料能够显著提高小鼠全层皮肤缺损创面愈合速度。

关键词：组织工程间质干细胞水凝胶胞外囊泡生物相容性材料