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基于临床经验和分子对接技术的抗新型冠状病毒中医组方快速筛选模式及应用

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中国中药杂志 2020年第6期45卷 1213-1218页

作者：牛明王睿林王仲霞张萍柏兆方景婧郭玉明赵旭湛小燕张子腾宋雪艾秦恩强王伽伯肖小河解放军总医院第五医学中心全军中医药研究所北京100039 解放军总医院第五医学中心中西医结合中心北京100039 解放军总医院第五医学中心感染性疾病诊疗与研究中心北京100039

2019年12月中上旬以来,新型冠状病毒肺炎疫情肆虐全国并波及海外20余个国家和地区,目前主要是对症支持治疗,还没有针对性的有效药物和疫苗。充分借鉴中医药防治SARS等重大疫病的理论和经验,利用现代生物医学知识和研究手段,快速形成有... 详细信息

2019年12月中上旬以来,新型冠状病毒肺炎疫情肆虐全国并波及海外20余个国家和地区,目前主要是对症支持治疗,还没有针对性的有效药物和疫苗。充分借鉴中医药防治SARS等重大疫病的理论和经验,利用现代生物医学知识和研究手段,快速形成有效的中医药防治方案,是中医药应对新突发传染病的重要使命和有力抓手。鉴于新型冠状病毒与SARS病毒的基因序列具有较高的同源性,且二者在致病机制和临床表现等方面也有较大的相似性,该团队探索建立了基于临床经验和分子对接技术的抗新型冠状病毒中医组方快速筛选模式(简称分子对接辅助中医组方),即组织临床小组和研究小组,分别采用不同策略和方法"背靠背式"筛选中医方药,然后对2组筛选结果进行比对和整合分析,优化形成中医药防治方案。结果表明,研究小组从国家及各省市公布的中医药抗SARS和新型冠状病毒方案中,筛选发现46个能作用于新型冠状病毒S-蛋白与人体ACE2结合区域且具有较高结合能的中药活性成分,主要归属于金银花、桑叶等7味中药,与临床小组根据中医理论和临床经验所拟中医组方的主要药味具有较好的吻合度,这从治疗靶标分析角度为中医组方的科学性和潜在疗效提供了佐证。同时提示,中医组方除可能改善临床症状或证候外,还具有潜在的直接抑制病毒感染作用。在此基础上,该团队优化形成了抗新型冠状病毒中医组方"克冠1号",在第一时间为该院防治新突发传染病提供了有一定临床经验和客观证据支持的中医方剂。该中医方剂与西医对症支持治疗联合用于临床救治,初步显示中西医结合治疗优于单纯的西医对症支持治疗。该研究创新了中医药科学防治新突发传染病的临床科研一体化攻关模式和方法,对进一步完善中医药应对重大疫情的快速响应机制、进一步提高中医药防治新突发传染病的能力和水平等具有重要意义。

关键词：新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒中医药组方筛选分子对接临床科研一体化

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长期孤立性巨天冬氨酸转氨酶升高1例报告

临床肝胆病杂志 2022年第4期38卷 886-887页

作者：李东泽屈蒙蒙游绍莉吕飒解放军总医院第五医学中心肝病医学部北京100039 解放军总医院第五医学中心感染医学部北京100039

1病例资料患者女性,32岁,主因“发现AST升高7年”于2020年5月27日到门诊就诊。患者于2013年单位体检时发现肝功能异常,AST 212 U/L,ALT 23 U/L,ALP 86 U/L、GGT 28 U/L、TBil 14.7μmol/L,HBsAg及抗-HCV(-),肝脏、心脏彩超无异常,无不... 详细信息

1病例资料患者女性,32岁,主因“发现AST升高7年”于2020年5月27日到门诊就诊。患者于2013年单位体检时发现肝功能异常,AST 212 U/L,ALT 23 U/L,ALP 86 U/L、GGT 28 U/L、TBil 14.7μmol/L,HBsAg及抗-HCV(-),肝脏、心脏彩超无异常,无不适症状,未予特殊治疗。以后每年均进行体检,并于2019年3月正常生育一女,孕期内其他检查亦无特殊变化.

关键词：巨天冬氨酸转氨酶聚乙二醇沉淀法治疗学

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原发性肝癌患者同种异体NK细胞治疗后疗效评价及外周淋巴细胞亚群变化特点

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北京大学学报（医学版） 2019年第3期51卷 591-595页

作者：谢云波张纪元杜美玲孟繁平福军亮刘利敏王松山曲芮廉方乔菲陈杨柳高莹莹徐若男施明王福生解放军总医院第五医学中心感染性疾病诊疗与研究中心

目的:评估同种异体自然杀伤(natural killer, NK)细胞治疗原发性肝癌的安全性和有效性,并探讨其抗肿瘤机制。方法:对21例经同种异体NK细胞治疗的原发性肝细胞癌患者进行1年随访,通过对其生存期、影像学指标、血液学指标、生物化学指标... 详细信息

目的:评估同种异体自然杀伤(natural killer, NK)细胞治疗原发性肝癌的安全性和有效性,并探讨其抗肿瘤机制。方法:对21例经同种异体NK细胞治疗的原发性肝细胞癌患者进行1年随访,通过对其生存期、影像学指标、血液学指标、生物化学指标及免疫学指标分析,评价该治疗的安全性和有效性,分析患者经过治疗后外周血淋巴细胞亚群的变化。结果:(1)21例原发性肝癌患者中,11例患者治疗1次,5例患者治疗2次,5例患者治疗3次,患者治疗后未见严重不良反应,10例患者有一过性发热,1例患者出现肝区疼痛,1例患者出现头痛,未经治疗均于8 h内自行缓解;(2)在一年随访中,总疾病控制率为76.2%,其中Barcelona分期(Barcelona clinic liver cancer, BCLC)A期患者中疾病控制率为100%,病情稳定(stable disease, SD)10例;BCLC B期患者中疾病控制率为60%,部分缓解(partial response, PR)1例,SD 2例;BCLC C期患者中疾病控制率为50%,完全缓解(complete response, CR)1例,PR 2例;(3)患者治疗后24 h外周血NK细胞和CD8+T细胞频率较治疗前显著降低,CD4+T细胞频率和CD4/CD8较治疗前显著上升。结论:同种异体NK细胞治疗原发性肝细胞癌有很好的安全性和有效性。

关键词： NK细胞肝细胞癌同种异体外周免疫

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肝衰竭前期的预警及治疗研究进展

中华肝脏病杂志 2020年第4期28卷 298-301页

作者：朱冰辛绍杰游绍莉解放军总医院第五医学中心原肝衰竭诊疗与研究中心北京100039

肝衰竭前期患者肝功能急剧恶化,存在发生肝衰竭的风险,病死率较高。现就肝衰竭前期概念,特别是肝衰竭前期发展为肝衰竭的预警研究及治疗进展进行综述,以期加强临床医师对肝衰竭前期的重视,促进肝衰竭防治关口前移,提高肝衰竭救治成功率。

关键词：治疗肝衰竭预警

扩散加权成像评价射波刀治疗肝细胞癌疗效的价值

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中华放射学杂志 2019年第5期53卷 381-384页

作者：史芳芳余海龙任洪伟董景辉安维民叶慧义解放军总医院北京100853 解放军总医院第五医学中心北京100039

目的探讨DWI评估射波刀治疗肝细胞癌疗效的价值。方法回顾性分析2011年2月至2013年12月解放军总医院第五医学中心临床诊断为肝细胞癌的90例肝细胞癌患者(95个病灶)90例患者于治疗前、46例患者于治疗后3个月、49例患者于治疗后6个月行肝... 详细信息

目的探讨DWI评估射波刀治疗肝细胞癌疗效的价值。方法回顾性分析2011年2月至2013年12月解放军总医院第五医学中心临床诊断为肝细胞癌的90例肝细胞癌患者(95个病灶)90例患者于治疗前、46例患者于治疗后3个月、49例患者于治疗后6个月行肝脏MRI平扫及动态增强扫描。按照实体肿瘤效果评价标准确定肿瘤完全坏死病灶及术后残留活性病变。测量肿瘤完全坏死的病灶、残留活性组织病灶和正常肝组织ADC值。釆用配对样本t检验比较治疗后3、6个月和治疗前肿瘤完全坏死病灶和正常肝组织ADC值的差异,采用ROC评价ADC值预测治疗后组织完全坏死的效能。结果95个病灶中,91个病灶肿瘤完全坏死,4个病灶中残留活性组织。肿瘤完全坏死病灶治疗后3个月和6个月病灶的ADC值和治疗前比较差异均有统计学意义(P0.05)。残留活性组织病灶的ADC值低于完全坏死病灶的ADC值。ADC值预测射波刀治疗后组织完全坏死的ROC下面积为0.767,以ADC值为1.23×10^-3mm^2/s为诊断截断值,诊断的灵敏度和特异度分别为76.5%和70.6%。结论ADC值可以区分肝细胞癌治疗后的坏死成分与肿瘤活性成分,可用于评价射波刀治疗肝细胞癌的治疗效果。

关键词：肝肿瘤磁共振成像射波刀

基于常规指标建立肝脏炎症及纤维化无创诊断模型

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解放军医学杂志 2019年第10期44卷 857-861页

作者：马丽君纪冬王春艳付懿铭陈松海王晶晶邵清陈国凤定西市人民医院感染性疾病科甘肃定西743000 解放军总医院第五医学中心肝硬化诊疗二中心北京100039

目的建立准确的肝脏炎症及纤维化无创诊断模型肝纤维炎症指数(APAE),用于指导肝功能正常或轻度异常的慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者的抗病毒治疗。方法回顾性分析解放军总医院第五医学中心2009年1月-2016年12月住院且行肝组织活检的谷丙转氨... 详细信息

目的建立准确的肝脏炎症及纤维化无创诊断模型肝纤维炎症指数(APAE),用于指导肝功能正常或轻度异常的慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者的抗病毒治疗。方法回顾性分析解放军总医院第五医学中心2009年1月-2016年12月住院且行肝组织活检的谷丙转氨酶(ALT)水平正常或处于1~2倍正常值上限之间的HBV感染者的临床资料,包括基线人口学、生化学、病毒学及肝组织病理学检测结果,依据肝脏组织病理学结果所得肝脏炎症及纤维化严重程度进行分组:G≤1且S≤1者纳入无需抗病毒治疗组,S≥2或G≥2者纳入需抗病毒治疗组。采用二元logistic回归分析建立APAE指数。采用ROC曲线下面积(AUROC)评估APAE、天门冬氨酸氨基转移酶/血小板比值(APRI)及基于4因子的纤维化指数(FIB-4)在显著肝脏炎症(G≥2)及显著纤维化(S≥2)中的诊断效能。结果共纳入652例,其中男404例,女248例,平均31.2岁,肝脏炎症及纤维化≥G2S2者312例(47.9%)。两组间性别、家族史、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、年龄及胆碱酯酶等差异均无统计学意义(P>0.05),谷草转氨酶(AST)、血小板计数(PLT)、白蛋白(ALB)及e抗原定量等均存在明显差异(P<0.05)。建立新指数APAE=0.034×AST-0.006×PLT-0.025×ALB-0.001×e抗原定量,其AUROC为0.764,与APRI(AUROC=0.715)和FIB-4(AUROC=0.633)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于常规指标建立的无创诊断模型APAE指数在预测肝脏炎症及纤维化程度方面优于APRI和FIB-4,具有临床推广价值。

关键词：慢性HBV感染谷丙转氨酶肝脏炎症肝脏纤维化

新型血清学标志物在不同类型乙型肝炎病毒感染中的检出特征分析

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解放军医学杂志 2023年第2期48卷 163-167页

作者：李乐廖昊思兰兰陈容娟王钧张珊徐东平纪冬刘妍解放军总医院第五医学中心感染病医学部研究所北京100039 解放军总医院第五医学中心肝病医学部肝病科北京100039

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)新型血清学标志物HBVRNA、HBV核心抗原相关抗原(HBcrAg)、HBV核心抗体(anti-HBc)及肝组织HBV总DNA(tDNA)、共价闭合环状DNA(cccDNA)在不同类型HBV感染中的检出特点。方法纳入2017年1月-2019年12月在解放军... 详细信息

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)新型血清学标志物HBVRNA、HBV核心抗原相关抗原(HBcrAg)、HBV核心抗体(anti-HBc)及肝组织HBV总DNA(tDNA)、共价闭合环状DNA(cccDNA)在不同类型HBV感染中的检出特点。方法纳入2017年1月-2019年12月在解放军总医院第五医学中心住院并接受肝组织活检的227例不同疾病类型的HBV感染患者,回顾性分析其临床资料,检测其血清HBVRNA、HBcrAg、anti-HBc定量及肝组织HBVtDNA、cccDNA水平,比较分析各指标的特征以及抗病毒治疗对其的影响。结果在16例急性乙型肝炎(AHB)患者中,HBV RNA检出率为25.0%(4/16),HBcrAg检出率为93.8%(15/16),肝组织HBV tDNA及cccDNA检出率分别为87.5%(14/16)及81.3%(13/16)。在184例慢性乙型肝炎(CHB)患者中,34例接受核苷(酸)类似物(NAs)治疗,其HBVRNA和HBcrAg定量均明显低于未治疗组,anti-HBc定量明显高于未治疗组(P肝硬化(LC)患者中,9例接受NAs治疗,除HBVDNA外,其他新型病毒学指标在NAs经治者与未治者间差异无统计学意义(P>0.05)。在9例肝癌(HCC)患者中,HBVRNA检出率为55.6%(5/9),HBcrAg检出率为77.8%(7/9),肝组织HBVtDNA及cccDNA检出率分别88.9%(8/9)及66.7%(6/9)。结论 HBcrAg可作为AHB彻底治愈的鉴别指标;对于NAs经治患者,即使HBVDNA降至不可测,但只要能检测出HBV RNA,则仍可导致疾病缓慢进展,因此应继续抗病毒治疗;HBV RNA及HBcrAg在不同疾病类型中可作为肝组织HBV cccDNA的血清学替代指标。

关键词：乙型肝炎病毒病毒感染新型血清学标志物共价闭合环状DNA

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胃肠道移植物抗宿主病营养支持的研究进展

中华临床营养杂志 2024年第1期32卷 50-56页

作者：于海燕张雪亭刘岩路筝孙笑天解放军总医院第五医学中心消化内科消化内镜中心北京100071 解放军总医院第五医学中心肝病学部消化内镜中心北京100039 解放军总医院京南医疗区综合内科北京100071

胃肠道移植物抗宿主病是造血干细胞移植术后最严重的并发症之一,可发生于各年龄段患者,临床表现有恶心、呕吐、腹痛、腹泻等,严重者可直接影响患者的临床预后和疗效。该文就胃肠道移植物抗宿主病营养支持及饮食管理策略的研究进展做一综... 详细信息

胃肠道移植物抗宿主病是造血干细胞移植术后最严重的并发症之一,可发生于各年龄段患者,临床表现有恶心、呕吐、腹痛、腹泻等,严重者可直接影响患者的临床预后和疗效。该文就胃肠道移植物抗宿主病营养支持及饮食管理策略的研究进展做一综述,主要从营养风险筛查及评估、营养支持方案制定、营养监测、营养教育、营养干预途径及时机等方面进行分析研究,形成阶梯化营养支持模式,减少胃肠道移植物抗宿主病患者营养不良的风险,对改善患者全身状况、缓解消化道症状和降低并发症发生风险等都具有十分重要的临床意义。

关键词：胃肠道移植物抗宿主反应营养支持

copGFP和Puro^(R)双标记基因慢病毒融合表达载体的构建及应用

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中国应用生理学杂志 2022年第2期38卷 108-112,153页

作者：张浩朱文琦赵思捷李永利侯俊卞成蓉鲍春梅卫桢孙杰李波李伯安解放军总医院第五医学中心检验科北京100039 解放军总医院第五医学中心感染病研究所北京100039

目的:构建具有绿色荧光蛋白(copGFP)和嘌呤霉素抗性基因(PuroR)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体,检测其嘌呤霉素抗性和绿色荧光蛋白表达的特性。方法:从pCDH-CMV-MCS-copGFP载体中扩增copGFP编码区DNA序列,从pLKO.1载体中扩增Puro... 详细信息

目的:构建具有绿色荧光蛋白(copGFP)和嘌呤霉素抗性基因(PuroR)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体,检测其嘌呤霉素抗性和绿色荧光蛋白表达的特性。方法:从pCDH-CMV-MCS-copGFP载体中扩增copGFP编码区DNA序列,从pLKO.1载体中扩增Puro^(R)编码区DNA序列,运用重组PCR方法,扩增copGFP与Puro^(R)基因融合编码序列并克隆至经BamHⅠ+SalⅠ双酶切的pCDH-CMV-MCS-copGFP载体片段中,构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体;载体的融合标签序列进行测序确证;将该载体用辅助包装质粒PLP1、PLP2、VSVG在293T细胞中包装成慢病毒后感染肝癌细胞MHCC97H,检测感染细胞对嘌呤霉素的抵抗作用以及绿色荧光蛋白的表达情况;为验证该载体表达外源目的基因的有效性,将Sp1编码区DNA序列插入该载体中包装成慢病毒,用对照及表达Sp1的慢病毒感染肝癌细胞MHCC97H,感染细胞经1 mg/ml嘌呤霉素筛选7 d后获得稳定感染细胞株,提取稳定感染细胞的总RNA及总蛋白,分别运用RT-qPCR和Western blot方法检测Sp1在对照及表达Sp1的慢病毒感染的肝癌MHCC97H细胞中的mRNA和蛋白表达水平的差异。结果:成功构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体;该载体与辅助质粒包装出的慢病毒感染肝癌细胞后,感染细胞同时具有嘌呤霉素抗性和表达绿色荧光蛋白特性;将Sp1编码序列插入该载体,包装慢病毒并肝癌细胞,Sp1的mRNA水平对照细胞相比分别升高3.3倍,蛋白水平升高2.2倍(P<0.01)。结论:成功构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体,该载体编码的融合双标记基因具有嘌呤霉素抗性和绿色荧光蛋白表达的特性,可高水平表达长片段的目的基因。

关键词：桡足类绿色荧光蛋白嘌呤霉素抗性基因融合表达慢病毒载体特异性蛋白1