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严重急性呼吸综合征疫苗研究进展

中华结核和呼吸杂志 2005年第1期28卷 44-46页

作者：栾翔凌吴雪琼解放军总医院三○九临床分部结核病研究室北京100091

现在科学家已经确定一种变异的冠状病毒(SARS-CoV)就是引起严重急性呼吸综合征(SARS)的病原体[1-4].为了防止SARS再次蔓延,有效的疫苗研发已经成为当务之急.现对与SARS疫苗密切相关的病毒概况、病毒免疫机制、疫苗研究现状、疫苗接种途... 详细信息

现在科学家已经确定一种变异的冠状病毒(SARS-CoV)就是引起严重急性呼吸综合征(SARS)的病原体[1-4].为了防止SARS再次蔓延,有效的疫苗研发已经成为当务之急.现对与SARS疫苗密切相关的病毒概况、病毒免疫机制、疫苗研究现状、疫苗接种途径等问题的研究新进展进行综合论述.

关键词：疫苗研究严重急性呼吸综合征(SARS) 研究新进展 SARS疫苗冠状病毒 SARS-CoV 病原体途径科学家机制

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结核分支杆菌利福平耐药基因突变的研究

中华结核和呼吸杂志 1998年第6期21卷 329-332页

作者：吴雪琼张俊仙庄玉辉张晓刚李国利何秀云张军芝贾树林解放军第三○九医院结核病研究室

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）... 详细信息

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）分析５０株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｏＢ基因。结果３株结核分支杆菌药物敏感株和２株非ＲＦＰ耐药株中，仅１株ｒｐｏＢＳＳＣＰ图谱异常的药物敏感株出现５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ突变。４５株ＲＦＰ耐药株中，１０株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析均未见ｒｐｏＢ突变，３５株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析异常，其中１４株为５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ或ＴＧＧ或ＴＡＣ突变，１４株为５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ或ＧＡＣ或ＣＣＣ或ＣＴＣ或ＧＴＣ突变，２株为５１６位ＧＡＣ→ＧＴＣ或ＴＡＣ突变，２株为５１６位和５２６位及５１５位和５１６位密码子双点突变，３株ｒｐｏＢ序列与结核分支杆菌不同。结论大多数结核分支杆菌耐ＲＦＰ是由于其ｒｐｏＢ基因突变所致。

关键词：结核杆菌利福平结核病抗药性药物疗法

聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

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中华结核和呼吸杂志 1996年第6期19卷 338-341页

作者：何秀云庄玉辉李国利吴雪琼张晓刚北京解放军第三○九医院结核病研究室

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－Ｓ... 详细信息

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系。

关键词：利福平结核分支杆菌聚合酶链反应基因突变

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耐多药结核病耐药分子机制的研究

中华结核和呼吸杂志 1997年第6期20卷 332-335页

作者：吴雪琼庄玉辉张俊仙张晓刚何秀云李国利解放军第三O九医院结核病研究室

目的研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结核分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果ＰＣＲ分析... 详细信息

目的研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结核分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１～１０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ基因引物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的特异性。２０株耐多药分离株中，９０％有２种以上耐药遗传标志改变，１０％只有ｒｐｏＢ基因突变。结论耐多药是各种药物靶基因逐步突变所致，少数由一个耐多药位点突变所致，通过ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ可简便、快速地检测大部分结核分支杆菌耐多药分离株的耐药基因型。

关键词：结核病耐多药结核病耐药分子机制 PCR

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结核分支杆菌链霉素耐药基因的检测

中华结核和呼吸杂志 1996年第6期19卷 342-345页

作者：吴雪琼庄玉辉何秀云李国利张晓刚北京解放军第三○九医院结核病研究室

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度... 详细信息

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）进一步分析其突变的部位和性质。结果以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，５株敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常、有ＭｂｏⅡ酶切位点；１３株耐Ｓｍ株中，１１株（８６％）有ｒｐｓＬ基因泳动异常、无ＭｂｏⅡ酶切位点；４株耐其它抗结核药物株中，也有１株ＳＳＣＰ泳动异常、并无ＭｂｏⅡ酶切位点。结论大多数结核分支杆菌Ｓｍ耐药分离株有ｒｐｓＬ突变，而突变位点大多位于第４３位密码子。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可能成为快速检测结核分支杆菌耐药突变株的新方法。

关键词：结核分支杆菌聚合酶链反应药物耐受性

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抗酸菌L型(变异)分离培养方法的研究

微生物学通报 1991年第6期18卷 348-349,373页

作者：庄玉辉李国利张晓刚解放军三○九医院结核病研究室

本文介绍用过滤法和酸碱中和离心法前处理痰标本,在胰胨大豆蛋白胨0.25%琼脂培养基(TSA-L)上,34例肺结核病人L型的阳性率分别为20.6%,14.7%,经统计处理,二者差异不显著(P>0.05);在TSA-L斜面上培养,分别是17.6%,14.7%,二法差异也不显著(P... 详细信息

本文介绍用过滤法和酸碱中和离心法前处理痰标本,在胰胨大豆蛋白胨0.25%琼脂培养基(TSA-L)上,34例肺结核病人L型的阳性率分别为20.6%,14.7%,经统计处理,二者差异不显著(P>0.05);在TSA-L斜面上培养,分别是17.6%,14.7%,二法差异也不显著(P>0.05)。77例杆菌型培养阴性的肺结核病人L型阳性率为18.2%。除酸碱中和离心法用TSA-L半流体培养基污染率高外,其它方法均可用于痰标本L型的分离培养。

关键词：抗酸菌 L型分离培养

聚合酶链反应和DNA探针联合检测临床标本中结核杆菌的研究

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中华结核和呼吸杂志 1996年第1期19卷 37-40页

作者：吴雪琼庄玉辉张晓刚李国利解放军第三○九医院结核病研究室北京100091

目的为提高聚合酶链反应(PCR)检测未培养临床标本中结核杆菌的敏感性和特异性。方法首先通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,然后用Southern法转移至膜上,与地高辛标记的人型结核杆菌DNA探针杂交。结果 PCR电泳检测的灵敏度为1pg,而DNA... 详细信息

目的为提高聚合酶链反应(PCR)检测未培养临床标本中结核杆菌的敏感性和特异性。方法首先通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,然后用Southern法转移至膜上,与地高辛标记的人型结核杆菌DNA探针杂交。结果 PCR电泳检测的灵敏度为1pg,而DNA探针检测将灵敏度提高到100fg。24种受试菌株中,只有结核分支杆菌复合体和蟾分支杆菌有245hp扩增带,其中牛型结核分支杆菌与188bp探针不杂交。对225例临床标本进行涂片、PCR电泳和探针检测,51例非结核性标本三者均阴性;1例非结核分支杆菌感染者的痰标本涂片和培养均阳性,PCR电泳和探针检测均阴性。菌种鉴定为快生长分支杆菌;173例结核性标本三者阳性率分别为16.2%、37.6%和50.3%。此外,将PCR电泳图谱分为四型,并探讨了其影响因素。结论结果表明PCR是结核病早期诊断和鉴别诊断的一种有价值的检测手段,而与探针联合检测可提高阳性检出率,避免漏判和误判。

关键词：结核杆菌痰液检验聚合酶链反应 DNA探针

差显技术分析结核杆菌H37Rv与H37Ra差异表达的基因

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微生物学通报 2005年第3期32卷 57-61页

作者：熊志红庄玉辉李国利解放军总医院第309分部结核病研究室北京100091

采用差异显示技术比较了结核分支杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra在体外培养条件下的基因表达差异。通过20种引物组合进行mRNA差异显示,克隆到了两菌株间的20余个差异表达基因,经序列分析及杂交鉴定发现其中2个基因仅在H37Rv中表达。其中R... 详细信息

采用差异显示技术比较了结核分支杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra在体外培养条件下的基因表达差异。通过20种引物组合进行mRNA差异显示,克隆到了两菌株间的20余个差异表达基因,经序列分析及杂交鉴定发现其中2个基因仅在H37Rv中表达。其中Rv1894 c基因编码的可能是H37Rv中的一个新蛋白。而在H37Ra的基因组中含有这2个基因的编码序列,但均未检测到基因的表达。

关键词：结核分支杆菌,差异显示,差异表达基因

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结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展

中华结核和呼吸杂志 2006年第5期29卷 340-342页

作者：吴雪琼解放军第三○九医院全军结核病中心结核病研究室北京100091

结核分枝杆菌(MTB)蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白.分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白,游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内,在菌体内仅有微量存在;而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中... 详细信息

结核分枝杆菌(MTB)蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白.分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白,游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内,在菌体内仅有微量存在;而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中,在细菌对数生长的晚期细菌死亡后才释放到培养基中.将培养不超过5 d的滤液蛋白称为短期培养滤液蛋白,这是记忆性免疫CD+4T淋巴细胞的靶分子;将培养7 d以上的滤液蛋白称为长期培养滤液蛋白,随着培养时间的延长,滤液中蛋白越来越多,由于部分MTB开始裂解死亡,释放胞质蛋白,培养42 d时滤液中已有100多种蛋白质.结核病保护性免疫主要是细胞免疫,诱导细胞免疫反应的抗原主要存在于细胞壁、细胞质和培养滤液中,其中分泌蛋白和细胞壁表面的蛋白是主要的免疫保护性抗原,将成为新疫苗研究的首选靶抗原.现将保护性抗原的编码基因、生物学特性、免疫学功能等介绍如下.

关键词：免疫保护性抗原结核分枝杆菌 CD4^+T淋巴细胞细胞免疫反应分泌蛋白胞质蛋白培养基保护性免疫生物学特性免疫学功能