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卡那霉素联合速尿致聋豚鼠的Math1基因治疗

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2013年第7期48卷 584-588页

作者：张贤芬杨仕明韩东一郭维维孙建和高举孙东绣孙爱玲李臻魏晓娜山东省烟台市烟台山医院耳鼻咽喉科 264001 解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科耳鼻咽喉科研究所

目的观察卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠耳蜗鼓阶导入Math1基因后的形态学及功能改变,探讨Mathl基因治疗药物中毒性耳聋的可行性.方法健康成年豚鼠经硫酸卡那霉素（500 mg/kg）和速尿（50 mg/kg）联合致聋,将听性脑干反应（ABR）反应阈＞... 详细信息

目的观察卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠耳蜗鼓阶导入Math1基因后的形态学及功能改变,探讨Mathl基因治疗药物中毒性耳聋的可行性.方法健康成年豚鼠经硫酸卡那霉素（500 mg/kg）和速尿（50 mg/kg）联合致聋,将听性脑干反应（ABR）反应阈＞95 dB SPL的豚鼠按随机数字表法分为空白对照组（不做任何处置,3只）,手术对照组（右耳单纯鼓阶钻孔,3只）,人工外淋巴液组（右耳鼓阶钻孔导入人工外淋巴液,3只）,单纯病毒载体组[右耳鼓阶钻孔导入携带增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的重组腺病毒（***）,4只]、Math1基因治疗组[右耳鼓阶钻孔导入携带Math1及EGFP基因的重组腺病毒（***1-EGFP）,6只].各组动物分别于鼓阶注射前及注射后8周时行ABR测试,结束测试后处死动物,取出耳蜗组织行扫描电镜观察.结果各组豚鼠不同频率（4、8、16、20 kHz）短纯音ABR阈值在不同检测时间段差异均无统计学意义,组间比较差异亦无统计学意义（P值均＞0.05）.除Math1基因治疗组外,其余各组右耳耳蜗各回毛细胞形态和数目与左耳（自身对照）比较无明显差别.4只Math1基因治疗组豚鼠中,有2只右耳耳蜗第三回内、外毛细胞数量明显比左耳多,其中内毛细胞排列形态较外毛细胞整齐.结论鼓阶显微注射导入Math1基因能使部分卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠的耳蜗毛细胞修复或再生,但其听觉功能没有改善.

关键词：基因疗法碱性螺旋-环-螺旋转录因子类耳蜗听觉丧失感音神经性豚鼠

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醋酸曲安奈德鼻喷剂长期应用对鼻粘膜的影响

临床耳鼻咽喉科杂志 2002年第5期16卷 232-233页

作者：翟所强曹菊阳孙建和杨伟炎解放军总医院耳鼻咽喉科研究所北京100853

目的 :观察醋酸曲安奈德鼻喷剂长期应用对鼻粘膜和鼻纤毛有无损害作用。方法 :杂色犬 12只 ,高剂量组、低剂量组及对照组各 4只。高剂量组采用 0 .6 4 %醋酸曲安奈德鼻喷剂 ,每日 1次 ,每次 2个鼻孔各喷药 1次 (880 μg) ;低剂量组采用0... 详细信息

目的 :观察醋酸曲安奈德鼻喷剂长期应用对鼻粘膜和鼻纤毛有无损害作用。方法 :杂色犬 12只 ,高剂量组、低剂量组及对照组各 4只。高剂量组采用 0 .6 4 %醋酸曲安奈德鼻喷剂 ,每日 1次 ,每次 2个鼻孔各喷药 1次 (880 μg) ;低剂量组采用0 .14 %醋酸曲安奈德鼻喷剂 ,每日 1次 ,每次 2个鼻孔各喷药 1次 (2 2 0 μg) ;对照组采用 0 .9%NaCl,每日 1次 ,每次 2个鼻孔各喷 10 0 μl。用药前后观察鼻腔粘膜、血常规 ;用药后 ,光镜和电镜观察鼻粘膜。结果 :用药后 ,鼻粘膜、血常规均正常 ,三组间无差异 ,光镜和电镜下未见鼻粘膜病损。结论

关键词：醋酸曲安奈德鼻喷剂变应性鼻炎糖皮质激素类

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水通道蛋白1在小鼠内淋巴囊的超微结构定位

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第3期42卷 185-188页

作者：林琳张延平孙建和常昕黄德亮解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853 解放军总医院第二附属医院耳鼻咽喉科北京大学医学部电镜实验室解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853

目的研究水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)在小鼠内淋巴囊表达的精确定位,进一步探讨 AQP1在内淋巴囊的作用。方法选取正常昆明小鼠30只,断头分离内耳内淋巴囊,应用冰冻切片免疫荧光染色法研究 AQP1在内淋巴囊的组织分布情况,借助免疫电... 详细信息

目的研究水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)在小鼠内淋巴囊表达的精确定位,进一步探讨 AQP1在内淋巴囊的作用。方法选取正常昆明小鼠30只,断头分离内耳内淋巴囊,应用冰冻切片免疫荧光染色法研究 AQP1在内淋巴囊的组织分布情况,借助免疫电镜观察 AQP1在内淋巴囊的超微结构定位。结果 AQP1在内淋巴囊上皮下结缔组织层有表达。在纤维细胞胞膜特别是细胞突起的胞膜上可见大量胶体金颗粒标记,而上皮细胞的胞膜未见胶体金颗粒的标记。结论富含AQP1的内淋巴囊上皮下组织可能与内淋巴的吸收及平衡调节密切相关。

关键词：水通道蛋白1 内淋巴囊显微镜检查,免疫电子

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豚鼠爆震后听生理及耳蜗荧光组化实验观察

中华创伤杂志 1990年第4期6卷 209-211页

作者：翟所强顾瑞王沛英解放军耳鼻咽喉科研究所

以健康豚鼠为对照,用脉冲火花发生器给动物不同强度爆震。震前、后测定脑干诱发电位,处死动物行耳蜗毛细胞内Na^+-K^+-ATP酶和DNA、RNA吖啶橙荧光组织化学染色。结果是,不同强度爆震造成不同程度损伤。毛细胞内Na^+-K^+-ATP酶活性与阈... 详细信息

以健康豚鼠为对照,用脉冲火花发生器给动物不同强度爆震。震前、后测定脑干诱发电位,处死动物行耳蜗毛细胞内Na^+-K^+-ATP酶和DNA、RNA吖啶橙荧光组织化学染色。结果是,不同强度爆震造成不同程度损伤。毛细胞内Na^+-K^+-ATP酶活性与阈移两者间有一定的内在联系,酶活性降低很可能是听力阈移的重要原因之一。但是毛细胞内DNA、RNA荧光组化未见差异,表明爆震对耳蜗毛细胞内核酸影响可能不大,因此,耳科临床治疗爆震性耳聋,应十分注意内耳能量代谢。

关键词：爆破听生理荧光组化

抗生素89－07与奈替米星对豚鼠耳毒性的比较

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中国抗生素杂志 1995年第6期20卷 448-454页

作者：王沛英李兴启方耀云张素珍孙建和于黎明李玉赵承军胡吟燕中国人民解放军总医院耳鼻咽喉科研究所

９２只豚鼠分别肌注４种剂量的抗生素８９－０７、ＮＴＬ及生理盐水，２８ｄ后通过电生理、病理形态学检查，比较抗生素８９－０７与ＮＴＬ对豚鼠的耳毒性。结果显示：抗生素８９—０７与ＮＴＬ对听性脑干电反应阈值无显著影响。抗生素... 详细信息

９２只豚鼠分别肌注４种剂量的抗生素８９－０７、ＮＴＬ及生理盐水，２８ｄ后通过电生理、病理形态学检查，比较抗生素８９－０７与ＮＴＬ对豚鼠的耳毒性。结果显示：抗生素８９—０７与ＮＴＬ对听性脑干电反应阈值无显著影响。抗生素８９－０７较ＮＴＬ对前庭功能影响稍轻。耳蜗病变从扫描电镜、耳蜗铺片所见抗生素８９－０７较ＮＴＬ轻。内耳切片观察两药无显著区别．前庭病变各剂量总体相比抗生素８９－０７较ＮＴＬ轻。

关键词：抗生素 89-07 奈替米星耳毒性

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基因突变与耳蜗微环境

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2009年第2期44卷 167-171页

作者：李兴启杨仕明张倩林运娟解放军总医院耳鼻咽喉科研究所北京100853 南京大学鼓楼医院耳鼻咽喉科北京大学人民医院耳鼻咽喉科

随着分子生物学的发展，对遗传性聋的调查和研究逐渐深入。据报道，1／2000～1／1000的儿童出生时为极重度耳聋，其中50％～60％为遗传性聋。现已发现有200多个基因突变与耳聋有关，而比较公认的A1555G、GJB2、SLC26及Otoferlin与遗传... 详细信息

随着分子生物学的发展，对遗传性聋的调查和研究逐渐深入。据报道，1／2000～1／1000的儿童出生时为极重度耳聋，其中50％～60％为遗传性聋。现已发现有200多个基因突变与耳聋有关，而比较公认的A1555G、GJB2、SLC26及Otoferlin与遗传性聋密切相关。然而这些基因的突变引起耳聋的病理生理变化还不清楚，且与耳聋的严重程度及渐进性之间缺乏相关性。

关键词：基因突变微环境重度耳聋耳蜗遗传性聋 A1555G 病理生理变化分子生物学

Waardenburg综合征Ⅱ型患者MITF基因突变分析

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遗传 2008年第4期30卷 433-438页

作者：陈静杨淑芝刘军韩冰王国建张昕康东洋戴朴杨伟炎袁慧军解放军总医院耳鼻咽喉研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院耳鼻咽喉科北京100073

Waardenburg综合征(WS)是临床上常见的常染色体显性遗传性耳聋综合征,MITF基因突变与部分Waardenburg综合征Ⅱ型(WS2)病例的发病有关。MITF属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,能调节酪氨酸酶基因,参与黑色素细胞的分化。文章... 详细信息

Waardenburg综合征(WS)是临床上常见的常染色体显性遗传性耳聋综合征,MITF基因突变与部分Waardenburg综合征Ⅱ型(WS2)病例的发病有关。MITF属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,能调节酪氨酸酶基因,参与黑色素细胞的分化。文章报道了1个携带MITF基因点突变的3代Waardenburg综合征Ⅱ型中国家系。先证者表现为先天性重度感音神经性聋、虹膜异色、面部雀斑;其他家系成员除一名仅表现为先天性耳聋外,均表现为颜面、上肢雀斑和/或早白发。患者可检测到c.639delA杂合突变,该突变在MITF基因第7外显子上产生了终止密码子(p.I220X),突变产生的截短的MITF蛋白没有DNA结合活性。该突变是WS2病例中第3个位于MITF第7外显子的突变,尚未见报道。该突变与已报道的位于第7外显子其他两个突变仅相差1个碱基,氨基酸改变十分相似,但在表型上有显著差别,提示遗传背景对WS临床表型有重要影响。

关键词： Waardenburg综合征Ⅱ型遗传性耳聋 MITF基因基因突变

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震动眼震在单侧前庭外周疾病中的临床意义

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2006年第10期41卷 736-739页

作者：谢溯江杨伟炎张素珍吴子明陈勇胜贾宏博周娜冀飞解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853 空军航空医学研究所

目的研究震动眼震(vibration-induced nystagmu,VIN)在前庭外周疾病诊断中的临床意义,并确定震动实验(vibration test,VT)的灵敏度和特异度。方法 30例健康成人和眩晕门诊112例单侧外周前庭疾病患者纳入本研究,排除具有自发性眼震患者,... 详细信息

目的研究震动眼震(vibration-induced nystagmu,VIN)在前庭外周疾病诊断中的临床意义,并确定震动实验(vibration test,VT)的灵敏度和特异度。方法 30例健康成人和眩晕门诊112例单侧外周前庭疾病患者纳入本研究,排除具有自发性眼震患者,采用置于乳突和前额的震动刺激(92Hz)进行震动实验,观察记录 VIN 的诱发情况,患者和正常受试者同时还进行摇头眼震(headshaking nystagmus,HSN)和前庭双温冷热试验检查,并进行比较。结果 112例患者中,有91例(81%)出现 VIN,主要是水平眼震,VIN 在乳突比在前额更常诱发出,其中76例 VIN 的方向朝向健侧,然而15例梅尼埃病患者 VIN 方向朝向患侧。30例健康受试者,均未出现 VIN。随着前庭双温冷热试验中半规管轻瘫(canal paresis,CP)值的增加,VIN 出现率增加。分别有70例(63%)单侧外周前庭疾病患者和9例健康受试者(30%)出现 HSN。前庭双温检查,112例患者中 CP 值<25%有10例,25%≤CP 值≤40%有32例,40%

关键词：眼震病理性冷热试验半规管轻瘫

噪声暴露对豚鼠耳蜗内毛细胞下传入神经末梢的损伤

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声学学报 2002年第5期27卷 465-470页

作者：谭祖林夏辉韩梅于宁刘军孙建和李兴启空军总医院耳鼻咽喉科北京100036 长春中医学院附属医院耳鼻咽喉科长春130021 解放军总医耳鼻咽喉科研究所北京100853

为了观察噪声暴露对耳蜗内毛细胞下传入神经末梢的损伤,探讨引起损伤的过量谷氨酸兴奋毒性机制,将实验动物随机分为正常对照组与噪声暴露后8小时、1天、3天和 7天组。正常对照组不给噪声;实验组暴露于 120 dB Lp及 1/3倍频程的 4 kHz窄... 详细信息

为了观察噪声暴露对耳蜗内毛细胞下传入神经末梢的损伤,探讨引起损伤的过量谷氨酸兴奋毒性机制,将实验动物随机分为正常对照组与噪声暴露后8小时、1天、3天和 7天组。正常对照组不给噪声;实验组暴露于 120 dB Lp及 1/3倍频程的 4 kHz窄带噪声中 4小时。测试噪声暴露前、后不同时间各组动物耳蜗微音器电位（Cochlear Microphonics,CM）幅度和听神经复合动作电位（Compound Action Potential,CAP）阈值;在透射电镜下观察噪声暴露后耳蜗形态学及内毛细胞中谷氨酸免疫金颗粒密度的变化。结果表明:（1）噪声暴露后,豚鼠CM非线性特性减弱,CAP阈值升高;外毛细胞胞浆和内毛细胞下传入神经末梢有空泡形成。随着噪声暴露后时间的延长,上述改变逐渐减轻,但当CM非线性特性与外毛细胞形态学变化基本恢复时,CAP仍有显著阈移,内毛细胞下传入神经末梢空泡仍存在。（2）内毛细胞中谷氨酸免疫金颗粒密度在噪声暴露后8小时降低,在噪声暴露后1天、3天和7天恢复。从而说明:（1）噪声暴露不仅损伤外毛细胞,而且损伤内毛细胞下传入神经末梢。（3）噪声暴露后内毛细胞传入神经递质谷氨酸过度释放引起内毛细胞下传入神经末梢的兴奋毒性损伤。

关键词：噪声暴露豚鼠耳蜗内毛细胞传入神经末梢损伤过量谷氨酸兴奋毒性机制