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大鼠耳蜗大上皮嵴细胞体外培养的实验观察

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第10期42卷 760-764页

作者：张媛孙建和胡吟燕郑贵亮翟所强解放军总医院耳鼻咽喉科研究所

目的建立大鼠耳蜗大上皮嵴(greater epithelial ridge,GER)细胞体外培养体系,探讨其在离体培养条件下的生物学特性、生长模式及超微结构。方法取生后1d 大鼠耳蜗,利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出纯 GER 细胞,分别于无血清和含10... 详细信息

目的建立大鼠耳蜗大上皮嵴(greater epithelial ridge,GER)细胞体外培养体系,探讨其在离体培养条件下的生物学特性、生长模式及超微结构。方法取生后1d 大鼠耳蜗,利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出纯 GER 细胞,分别于无血清和含10%胎牛血清的 DMEM 培基中进行培养,观察细胞生长特性,并对培养物进行溴脱氧尿苷(BrdU)、鬼笔环肽(phalloidin)、ZO1、钙视网膜蛋白(calretinin)及肌球蛋白 VIIa(myosin VIIa)免疫组化鉴定及扫描电镜观察。结果 GER 体外培养细胞呈现典型的上皮样多角形外观,细胞间连接紧密,具有明显的增殖能力,在含血清培养基中易形成贴壁细胞岛,而在无血清培养条件下则易形成悬浮细胞球。GER 细胞呈现 BrdU、phalloidin 以及ZO1染色的阳性反应,而 calretinin 及 myosinVIIa 则表现为阴性。扫描电镜显示 GER 细胞表面可见微绒毛和中心体,但未见毛细胞特异性结构纤毛束。结论 GER 体外培养细胞具有增殖能力,在不同培养条件下可分别呈现贴壁细胞岛及悬浮细胞球生长特性,GER 细胞表达上皮细胞来源标记物,但不表达毛细胞特异性标记物。

关键词：耳蜗细胞培养的细胞培养技术

中国人群迟发性耳聋家系及散发病例凝血因子C同源物基因突变分析

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中华医学杂志 2007年第44期87卷 3107-3110页

作者：孙勍杨淑芝康东洋张昕曹菊阳刘新戴朴袁慧军韩东一解放军总医院耳鼻咽喉科研究所

目的分析中国常染色体显性遗传非综合征性耳聋(DFNA)群体凝血因子 C 同源物(COCH)基因突变发生率及突变谱。方法在我国汉族人群中收集26个 DFNA 家系、19个遗传方式不明的迟发性耳聋小家系、22例迟发性耳聋散发病例和100例正常对照者的... 详细信息

目的分析中国常染色体显性遗传非综合征性耳聋(DFNA)群体凝血因子 C 同源物(COCH)基因突变发生率及突变谱。方法在我国汉族人群中收集26个 DFNA 家系、19个遗传方式不明的迟发性耳聋小家系、22例迟发性耳聋散发病例和100例正常对照者的临床资料及外周静脉血并提取 DNA,采取 PCR 扩增后直接测序的方法进行 COCH 全序列突变分析。结果在1个巨大DFNA 家系中发现 COCH 1625G>A 杂合突变,使原来542位的半胱氨酸突变成酪氨酸(C542Y);在1个遗传方式不明的迟发性耳聋小家系中发现 COCH 1535 T>C 杂合突变,使512位蛋氨酸突变为苏氨酸(M512T)。进化保守性分析提示 C542、M512在小鼠、牛、鸡和斑马鱼中高度保守。2个家系成员的表现型与基因型共分离。100例正常对照未见 COCH 突变。结论 COCH M512T 和 C542Y 突变是这2个迟发性耳聋家系患者致聋的分子病因。

关键词：聋突变凝血因子C同源物 vWFA2结构域

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颞骨立体形态学的研究

中华医学杂志 1997年第8期77卷 579-582,T011页

作者：姜泗长戴朴刘阳方耀云顾瑞王今王沛英郗昕解放军总医院耳鼻咽喉科解放军耳鼻咽喉研究所

目的利用计算机图象技术进行颞骨立体形态学研究，为颞骨的病理学、诊断和手术治疗径路提供形态学依据。方法采用计算机三维重建技术对颞骨连续切片进行处理，获取颞骨内各结构的三维图象，测量其三维参数，并制作颞骨结构的立体图象。... 详细信息

目的利用计算机图象技术进行颞骨立体形态学研究，为颞骨的病理学、诊断和手术治疗径路提供形态学依据。方法采用计算机三维重建技术对颞骨连续切片进行处理，获取颞骨内各结构的三维图象，测量其三维参数，并制作颞骨结构的立体图象。结果对颞骨内大部分结构共进行了３７例次重建，获得成套的颞骨结构立体图对及大量的三维参数，可揭示听骨链的力学模式及骨膜迷路的空间关系，完成了面神经、内淋巴囊及后鼓室详尽的三维解剖研究，每一组重建结构均有相应的立体图，使各结构间关系更为明了，根据后壶腹神经的三维解剖研究，进行其手术径路的计算机设计及模拟。结论计算机三维重建技术为颞骨解剖的研究和教学、手术径路的设计和模拟提供了全新的工具，补充和丰富了颞骨病理学的内容。

关键词：颞骨立体视觉形态学耳计算机

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人和几种动物壶腹嵴扫描电镜观察

解剖学报 1997年第4期28卷 426-428,I018页

作者：孙建和方耀云姜泗长朱光明张曙光候宁解放军总医院耳鼻咽喉科解放军耳鼻咽喉科研究所

借助扫描电镜观察了人和几种常见动物壶腹嵴的形态特征。各种动物之间上、后半规管壶腹嵴的形状与外半规管壶腹嵴不同。鸡、狗、猫、大鼠的上、后半规管壶腹嵴具有十字隆凸，而人、豚鼠、兔则没有。十字隆凸通常位于上、后半规管壶腹嵴... 详细信息

借助扫描电镜观察了人和几种常见动物壶腹嵴的形态特征。各种动物之间上、后半规管壶腹嵴的形状与外半规管壶腹嵴不同。鸡、狗、猫、大鼠的上、后半规管壶腹嵴具有十字隆凸，而人、豚鼠、兔则没有。十字隆凸通常位于上、后半规管壶腹嵴的中部，与壶腹嵴的长轴垂直。鸡上、后半规管壶腹嵴的十字隆凸呈乳头样。狗、猫、大鼠的十字隆凸呈发育不全状态，形状似小丘。

关键词：壶腹嵴十字隆凸扫描电镜内耳

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听神经瘤手术的听力保存技术

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2008年第8期43卷 564-569页

作者：杨仕明于丽玫于黎明韩东一解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853

目的探索听神经瘤切除术中保留术前残余听力的可能性，以及评价术中动态听力监测和耳内镜技术对听力保护的效果。方法2003年至2007年7月共收治听神经瘤手术患者138例，对术前有残余听力18例（18耳）施行术中连续听力监测。男6例，女12... 详细信息

目的探索听神经瘤切除术中保留术前残余听力的可能性，以及评价术中动态听力监测和耳内镜技术对听力保护的效果。方法2003年至2007年7月共收治听神经瘤手术患者138例，对术前有残余听力18例（18耳）施行术中连续听力监测。男6例，女12例；左12耳，右6耳；年龄14～64岁；15例为单发的听神经鞘瘤，3例为神经纤维瘤病Ⅱ型。MRI测得肿瘤最大直径在12～33mm，中位数19．5mm。均采用经乙状窦后入路，10耳辅以耳内镜下手术。18例均行听性脑干反应（ABR）及耳蜗电图术中连续听力监测；术中常规监测面神经功能。术后随访时间为6个月～2．5年，以最后一次听力结果为准。术前及术后听力评价标准采用1995年美国耳鼻咽喉头颈外科学会分级法。结果手术全切16例，大部分切除2例（均为神经纤维瘤病Ⅱ型）。无死亡病例，术后均恢复顺利，无脑脊液漏，无皮下血肿等术后并发症。18例术前均无面神经麻痹，术中面神经均得以保存，解剖结构连续完整。术后7d面神经功能Ⅰ～Ⅱ级占50．0％（9／18）；术后6个月面神经功能Ⅰ～Ⅱ级占88．9％（16／18）。18耳中11耳术后听力得以保存（61．1％），术后听力A级4耳，B级4耳，C级2耳，D级1耳。术前肿瘤〉20mm者共5耳仅2耳保存听力，〈20mm者共13耳术后听力保存9耳（69．2％）。耳内镜辅助下手术10耳，听力保存8耳（80．0％）。术中监测发现，手术过程中当磨钻内耳道后唇、内耳道口附近处牵拉或电凝止血，尤其是夹持内听动脉、处理内耳道处肿瘤及夹持或电凝肿瘤表面最内层蛛网膜血管时，对ABR和耳蜗电图波形影响很大。结论对术前有良好听力的听神经瘤患者应在术中辅以实时动态听力监测，并结合术中耳内镜技术进行听力保护，术后能够获得较好的听力保存效果。听神经瘤表面蛛网膜的保留及其血供状况对保留听力起重要作用，而内听动脉的损伤是术后听觉丧失的最主要原因。

关键词：听神经瘤听力监测手术中耳外科手术

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三种基因转录因子在大鼠耳蜗大上皮嵴的表达

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2005年第9期40卷 664-666页

作者：张媛胡吟燕宋巍郭维维翟所强解放军总医院耳鼻咽喉科研究所北京100853

目的检测Math1、Hes1及Hes5在大鼠耳蜗大上皮嵴(greaterepithelial ridge,GER)的表达,初步探讨各基因对毛细胞分化和再生的作用。方法分别取出生当天(P0),出生后第1天(P1)、第3天(P3)、第4天(P4)和第5天(P5)大鼠耳蜗,利用机械分离和酶... 详细信息

目的检测Math1、Hes1及Hes5在大鼠耳蜗大上皮嵴(greaterepithelial ridge,GER)的表达,初步探讨各基因对毛细胞分化和再生的作用。方法分别取出生当天(P0),出生后第1天(P1)、第3天(P3)、第4天(P4)和第5天(P5)大鼠耳蜗,利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出相对纯化的GER细胞。Trizol法提取GER细胞总RNA,逆转录聚合酶链反应检测Math1、Hes1及Hes5在GER的表达,琼脂糖凝胶电泳检测结果。结果Math1在P0～P5大鼠GER均有表达,Hes1只在P0～P3大鼠GER有表达,而Hes5在P0～P5大鼠GER中均无表达。结论Math1的表达水平可能只有累积至一定量,才能诱导GER增殖、分化成毛细胞,并且此过程可能同时受Hes1的控制。

关键词：逆转录聚合酶链反应转录因子毛细胞,内基因转录因子大鼠耳蜗上皮聚合酶链反应检测琼脂糖凝胶电泳细胞分化

Hath1基因诱导新生大鼠大上皮嵴细胞形成毛细胞样细胞

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2008年第5期43卷 360-363页

作者：张媛胡吟燕郭维翟所强解放军总医院耳鼻咽喉科研究所北京100853

目的探讨Hathl（human atonal homolog 1）基因对大鼠耳蜗大上皮嵴（greater epithelial ridge，GER）细胞的诱导分化作用。方法取出生后1d大鼠耳蜗，利用酶消化和机械分离相结合的方法分离出GER细胞，并行体外培养。以腺病毒为载体，对... 详细信息

目的探讨Hathl（human atonal homolog 1）基因对大鼠耳蜗大上皮嵴（greater epithelial ridge，GER）细胞的诱导分化作用。方法取出生后1d大鼠耳蜗，利用酶消化和机械分离相结合的方法分离出GER细胞，并行体外培养。以腺病毒为载体，对GER细胞培养物进行Hath1基因和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）基因（ad—Hath1-EGFP）的转染，单纯转染EGFP（ad-EGFP）作为对照组，对感染后不同天数的标本行毛细胞特异性标记物myosin Ⅶa免疫组化染色鉴定。结果ad-Hath1—EGFP组中的GER细胞中出现了myosin Ⅶa和EGFP双标记细胞，并且从感染后第5天开始出现myosin Ⅶa阳性细胞，随后阳性细胞的数量有所增加，但增加不明显；而adEGFP组感染后3～12d的GER标本均未见myosinWa阳性细胞。结论GER细胞可能是耳蜗毛细胞的前体细胞，Hath1基因过表达可以诱导GER细胞向毛细胞样细胞（myosin Ⅶa阳性）分化。

关键词：耳蜗细胞,培养的转染 Hath1

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听神经病的国内研究现状

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2005年第6期40卷 458-461页

作者：翟所强顾瑞解放军总医院耳鼻咽喉科研究所北京100853

目的复习我国近10年来有关听神经病的报道,对其临床诊断做分析。方法检索中国生物医学文献数据库和中国期刊网医学专题全文数据库,以听神经病为关键词检索1995—2004年发表的有关听神经病的文章,按研究对象的选择、样本含量、听功能检... 详细信息

目的复习我国近10年来有关听神经病的报道,对其临床诊断做分析。方法检索中国生物医学文献数据库和中国期刊网医学专题全文数据库,以听神经病为关键词检索1995—2004年发表的有关听神经病的文章,按研究对象的选择、样本含量、听功能检查方法和诊断标准等作分析。结果共检出42篇文章,其中临床研究和听神经病病例报道23篇,23篇文章中共检查573例患者1146耳,其中能符合听神经病诊断标准的有480耳,占42%,不足一半。其余有脑干或耳蜗病变或伴有其他周围神经病变的表现。结论听神经病的临床表现及听力学检查和诊断标准等方面有显著不一致的现象,对诊断命名和病变部位的认识还不十分明确。

关键词：听神经病国内研究中国生物医学文献数据库诊断标准周围神经病变全文数据库中国期刊网 2004年听力学检查临床诊断研究对象样本含量病例报道临床研究耳蜗病变临床表现病变部位文章关键词听功能检索

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光学方法同步记录成群前庭神经节细胞膜电位

中国应用生理学杂志 2002年第3期18卷 306-309,F003页

作者：杨仕明姜泗长杨伟炎顾瑞山下敏夫解放军总医院耳鼻咽喉科耳鼻咽喉科研究所北京100853 日本关西医科大学耳鼻咽喉科

目的 :采用电压敏感染料和多位点光学成像系统研究前庭神经节细胞 (vestibularganglioncells ,VGCs)电生理特性。方法 :自新生小鼠内耳分离并培养的VGCs ,用吸光性电压敏感染料RH15 5染色后 ,多个或成群VGCs被同时成像于 16× 16记录单... 详细信息

目的 :采用电压敏感染料和多位点光学成像系统研究前庭神经节细胞 (vestibularganglioncells ,VGCs)电生理特性。方法 :自新生小鼠内耳分离并培养的VGCs ,用吸光性电压敏感染料RH15 5染色后 ,多个或成群VGCs被同时成像于 16× 16记录单元Photodiodearrays (PDA)光学成像系统。结果 :用高钾溶液灌流刺激时发现当VGCs膜电位变化时 ,膜表面的光吸收增强 ,光吸收度为 0 .2 3%± 0 .0 8%。并且所记录的光学反应具有波长特性。另外 ,在本实验条件下 ,光损伤和染料的药毒性副作用不明显或者可忽略不计。结论 :光学记录可以同步观测多个和成群VGCs膜电位变化。

关键词：光学方法同步记录成群前庭神经节细胞膜电位光学记录电压敏感染料