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胎鼠纹状体神经干细胞分离培养方法的改进

中国临床康复 2005年第26期9卷 92-93,i0004页

作者：段发亮马廉亭于耀宇解放军广州军区武汉总医院神经外科湖北省武汉市430070

目的:利用有血清和多聚赖氨酸培养液中加入SD14d胚胎大鼠纹状体区神经干细胞,探讨其分离、纯化神经干细胞操作技术的改进。方法:实验于2003-03/2004-11在广州第一军医大学珠江医院神经外科实验室完成。①选用SD大鼠20只,取孕13～14d的S... 详细信息

目的:利用有血清和多聚赖氨酸培养液中加入SD14d胚胎大鼠纹状体区神经干细胞,探讨其分离、纯化神经干细胞操作技术的改进。方法:实验于2003-03/2004-11在广州第一军医大学珠江医院神经外科实验室完成。①选用SD大鼠20只,取孕13～14d的SD大鼠胚胎纹状体,吸管吹打(不超过10次)后,用组织剪剪成1mm3块状,以1.25mL/L的胰酶,在37℃下消化20min,以S-Dulbecco改良的Eagle培养基-F12中止消化,采用1000r/min离心10min,显微镜下细胞记数,以1×104/cm2接种到改良的有血清和多聚赖氨酸铺被的12孔培养板上,培养液为Dulbecco改良的Eagle培养基-F12加上B27,加入血清和20μg/L表皮生长因子。7d后用吸管吸取漂浮的细胞球,机械吹打成单细胞悬液,按每培养孔1×104/cm2细胞行传代再培养,此后5～7d再传代,方法同前。②利用神经干细胞与星形胶质细胞、神经细胞以及成纤维细胞贴壁之间的差异,使细胞分为贴壁和漂浮的两层细胞,分离去掉贴壁的神经细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞以及部分的神经干细胞,得到漂浮的细胞球。③机械吹打后制成单细胞悬液,再传代培养,细胞重新增殖成细胞球,应用免疫细胞化学技术特异性抗原巢蛋白检测最初的细胞球、吹打后的单细胞和重新增殖的细胞球巢蛋白抗原的表达和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。巢蛋白为神经干细胞特异性标记物,其阳性表达表明神经干细胞的存在。结果:①原代培养的纹状体细胞第2天可见贴壁生长的神经细胞、星形胶质细胞和增殖的细胞球(约10～16个细胞大小),漂浮的细胞开始出芽并增殖;第3天贴壁的细胞球继续增殖(约50个细胞大小),漂浮的细胞则增殖成4～8个大小的细胞球;第4～7天贴壁的细胞球开始分化,漂浮的细胞则继续增殖成约30个细胞大小的细胞球,巢蛋白染色阳性。②漂浮的细胞,吹打后行传代培养,加入表皮生长因子、血清和多聚赖氨酸,细胞仍漂浮生长,1周后增殖成约70～80个细胞大小的细胞球,吸管吹打继续再培养,细胞仍漂浮增殖成细胞球,巢蛋白抗原表现阳性。③免疫细胞化学染色显示原代培养中贴壁的细胞球、吹打后的单细胞、漂浮的细胞球巢蛋白染色阳性,吹打后的细胞若不加入表皮生长因子,则细胞染色显示胶质纤维酸性蛋白和神经丝蛋白阳性。分离纯化后的细胞具有自我更新能力和多分化潜能,有很强的增殖能力。结论:利用有血清和多聚赖氨酸加入的方法分离培养的原代细胞球巢蛋白表达阳性,具有纯化度高,存活时间长的特点。

关键词：神经系统/细胞学细胞分化培养基细胞,培养的分离培养方法神经干细胞纹状体区免疫细胞化学染色第一军医大学珠江医院表皮生长因子

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脂肪干细胞分离纯化方法研究进展

中国比较医学杂志 2015年第7期25卷 69-73页

作者：刘琴王丽平陈芳张宜解放军广州军区武汉总医院医学实验科武汉430070

脂肪干细胞作为种子细胞广泛应用于组织工程中,而获得足够量的、活性高的、高纯度的脂肪干细胞是其在组织工程中应用的前提。本文综述近几年来脂肪干细胞分离纯化方法的研究进展,比较各方法的优缺点,为分离纯化出理想的脂肪干细胞提供... 详细信息

脂肪干细胞作为种子细胞广泛应用于组织工程中,而获得足够量的、活性高的、高纯度的脂肪干细胞是其在组织工程中应用的前提。本文综述近几年来脂肪干细胞分离纯化方法的研究进展,比较各方法的优缺点,为分离纯化出理想的脂肪干细胞提供理论依据。

关键词：脂肪干细胞分离纯化组织块贴壁法酶消化法免疫磁珠分选法密度梯度离心法

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大动脉转位时心脏血流动力学与形态学的关系

临床心血管病杂志 1995年第4期11卷 233-234页

作者：程新耀朱水波中国人民解放军广州军区武汉总医院B超室中国人民解放军广州军区武汉总医院心外科

本文分析一组大动脉转位畸形的影像学和手术资料，就伴发畸形在血流动力学改变中的意义以及血流动力学对大血管和心室形态的影响进行讨论，从心脏结构形态与血流动力学一致性的角度提出有益于复杂先天性心脏病诊断的思维方法。

关键词：大动脉转位先天性心脏病血流动力学形态学

TLR4基因多态性与肺炎易感性及严重程度相关性研究

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中国感染与化疗杂志 2009年第6期9卷 427-429页

作者：袁伟锋黄文杰解放军广州军区总医院呼吸内科广州510010

目的以中国广东省汉族人群为研究对象,探讨Tolls样受体4(TLR4)等位基因Asp299Gly多态性与肺炎易感性、肺炎严重程度的关系。方法采用病例对照研究和PCR产物测序的方法,检查60例肺炎患者和40名健康体检者的TLR4等位基因Asp299Gly的分布... 详细信息

目的以中国广东省汉族人群为研究对象,探讨Tolls样受体4(TLR4)等位基因Asp299Gly多态性与肺炎易感性、肺炎严重程度的关系。方法采用病例对照研究和PCR产物测序的方法,检查60例肺炎患者和40名健康体检者的TLR4等位基因Asp299Gly的分布与肺炎严重程度的关系。结果在肺炎患者和健康体检者中,TLR4等位基因Asp299Gly基因型所有个体均为野生型纯合子,Asp299Gly野生型与突变型在肺炎患者与健康个体,或重症肺炎与非重症肺炎患者中的分布无差异。结论TLR4等位基因Asp299Gly多态性与肺炎易感性、肺炎严重程度相关性不明确。

关键词： Toll样受体4 肺炎基因多态性

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胎脑组织移植疗效评定方法初步探讨

中华器官移植杂志 1996年第4期17卷 177-179页

作者：王溶杨马廉亭吴佐泉郑宝轩谢德成徐志琼龙兰英宋显兴张宏民解放军第181医院桂林541002 解放军广州军区武汉总医院

我们根据1994年6月～1996年1月手术的68例患者的临床表现,按智能、运动功能和癫痫发作频度三个系统制订了疗效评分表。将患者术前和术后不同时期的症状体征分别列入表中计分,计算出各时期各项靶症状积分和量表总分,依量表总分判定疗效... 详细信息

我们根据1994年6月～1996年1月手术的68例患者的临床表现,按智能、运动功能和癫痫发作频度三个系统制订了疗效评分表。将患者术前和术后不同时期的症状体征分别列入表中计分,计算出各时期各项靶症状积分和量表总分,依量表总分判定疗效。量表总分提高1分以上判定为有效。量表总分提高数达到显效标准者判为显效。与脑电图(EEG)、脑电活动地形图(BEAM)和诱发电位(EP)检查结果对照分析表明,判定为显效者,术后脑整体功能有明显改善。二者结合综合评定疗效,能够较为准确地反映出患者的康复状态。

关键词：胎脑组织移植移植疗效评定

股骨双隧道Y型双束LARS人工韧带关节镜下重建后交叉韧带11例

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第36期12卷 7110-7113页

作者：黄华扬郑小飞张余沈洪园解放军广州军区广州总医院骨科广东省广州市510010

回顾性分析2007-01/07解放军广州军区广州总医院骨科收治的男性后交叉韧带损伤患者11例。采用股骨双隧道Y型双束LARS人工韧带进行关节镜下后交叉韧带重建,分别于屈膝90°和30°位拉紧固定。11例患者均获得随访,所有患者均未出现滑膜炎... 详细信息

回顾性分析2007-01/07解放军广州军区广州总医院骨科收治的男性后交叉韧带损伤患者11例。采用股骨双隧道Y型双束LARS人工韧带进行关节镜下后交叉韧带重建,分别于屈膝90°和30°位拉紧固定。11例患者均获得随访,所有患者均未出现滑膜炎、韧带断裂、活动明显受限等并发症。术后X射线示挤压螺钉位置准确,术后抽屈试验全部阴性。术前IKDC评分为D级8例,C级3例;术后早期为A级10例,B级1例,差异有显著性意义(χ2=9.142,P<0.05)。术前及术后Lysholm膝关节功能评分为(65.2±5.6)分和(90.7±3.6)分,差异有显著性意义(t=10.572,P<0.05)。

关键词：关节镜人工韧带后交叉韧带

Cervifix内固定系统对陈旧性寰枢椎脱位的修复稳定应用

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中国临床康复 2005年第34期9卷 85-87,i0005页

作者：尹庆水夏虹吴增晖张余章莹潘刚明刘景发解放军广州军区广州总医院骨科广东省广州市510010

目的:评价应用Cervifix内固定系统治疗,改善脊髓功能的作用。方法:选择1999-10/2003-04解放军广州军区广州总医院骨科采用Cervifix内固定系统治疗陈旧性寰枢椎前脱位伴高位颈髓压迫症患者25例。陈旧性齿突骨折脱位12例,先天性畸形10例,... 详细信息

目的:评价应用Cervifix内固定系统治疗,改善脊髓功能的作用。方法:选择1999-10/2003-04解放军广州军区广州总医院骨科采用Cervifix内固定系统治疗陈旧性寰枢椎前脱位伴高位颈髓压迫症患者25例。陈旧性齿突骨折脱位12例,先天性畸形10例,类风湿性关节炎3例,均为寰枢椎前脱位。根据患者的病情分别采取不同方法,经口咽前路和后路一期减压及后路内固定6例,后路减压内固定12例,后路减压内固定后二期行前路减压7例。减压后全部病例均行Cervifix枕颈内固定,取髂骨植骨,术后佩带颈围3个月。采用日本骨科协会评分法(JOA17分,0分为严重障碍,分值越高表示功能越好)评价脊髓功能改善率。改善率=[(术后评分-术前评分)/17]×100%。采用自拟的公式评价脊髓受压改善率,改善率=[(术后矢径-术前矢径)/(拟正常矢径-术前矢径)]×100%。结果:按意向处理分析,25例均进入结果分析。①随访结果:平均随访22个月。患者枕颈不适消失,四肢麻木基本消失,感觉和肌力均有不同程度的恢复;术后日本骨科协会评分平均为14.2分,平均较术前提高6.4分,术后脊髓功能改善率为68.4%;术后脊髓减压改善率为70.2%;术后三四个月均骨性融合,无骨不连发生。②不良事件及副反应:25例无一例发生内固定折断及松脱现象。但随访时间超过2年的病例中,有6例患者发现其颈椎固定节段与未固定节段的界面出现明显的成角和轴线异常的影像学变化。术后被固定融合的枕颈及颈椎节段的活动功能均丧失,仅靠下颈椎的代偿,颈椎活动度明显受限,仅为正常活动度的1/3左右。1例发生椎动脉损伤,为先天性畸形患者,术中给予及时处理。结论:Cervifix颈椎后路内固定系统装配合理,提供螺丝钉最佳装配位置;留有植骨空间利于植骨融合;其纯钛/TAN合金材质不影响术后MRI检查,能量化术后的脊髓减压改善情况,优于枕颈CD环等内固定。但其固定节段多,影响颈椎活动度;并可加速下位颈椎的退行性变。

关键词：颈椎脱位内固定术

带蒂皮瓣肌膜瓣修复喉次全切除组织缺损与喉功能重建

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临床耳鼻咽喉科杂志 2003年第6期17卷 330-331页

作者：陈勇挺张孟良汪建尤景敏郭晓谦解放军广州军区广州总医院耳鼻咽喉科广州510010

目的 :探讨喉次全切除术后创面修复及喉功能的重建。方法 :对 33例喉癌患者行喉次全切除术。手术范围 :切除舌骨 ,大部分甲状软骨板 ,会厌前间隙和声带、室带 ,保留一侧杓状软骨及一侧 1/ 3甲状软骨板、1/ 3的声带。采用一侧的带蒂皮瓣... 详细信息

目的 :探讨喉次全切除术后创面修复及喉功能的重建。方法 :对 33例喉癌患者行喉次全切除术。手术范围 :切除舌骨 ,大部分甲状软骨板 ,会厌前间隙和声带、室带 ,保留一侧杓状软骨及一侧 1/ 3甲状软骨板、1/ 3的声带。采用一侧的带蒂皮瓣、对侧带蒂的肌膜瓣修复创面和喉功能重建。结果 :全部患者均恢复正常的呼吸、吞咽功能 ,93.9%拔除气管套管获得发声功能。随访 2～ 5年 ,3例死于肿瘤以外的疾病 ,2例死于肿瘤多脏器转移。结论 :喉次全切除术后 ,应用带蒂皮瓣和肌膜瓣修复创面 ,重建发声功能 ,具有取材方便、血运好、不易造成喉狭窄、缩短带管时间以及提高患者生存质量等优点。

关键词：喉切除术喉功能重建术外科皮瓣

关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱3种重建前交叉韧带方法的疗效比较

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第20期13卷 3903-3906页

作者：郑小飞黄华扬张余李凭跃尹庆水解放军广州军区广州总医院骨科广东省广州市510010

背景:关节镜下重建前交叉韧带的移植物的选择存在很多争论。目前两个以上移植物之间的比较研究还比较少见。目的:比较分析膝关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱3种重建前交叉韧带的疗效。设计、时间及地点:回顾分析,对比观察,于199... 详细信息

背景:关节镜下重建前交叉韧带的移植物的选择存在很多争论。目前两个以上移植物之间的比较研究还比较少见。目的:比较分析膝关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱3种重建前交叉韧带的疗效。设计、时间及地点:回顾分析,对比观察,于1998-06/2005-06在解放军广州军区广州总医院骨科完成。对象:选择同期收治的前交叉韧带损伤患者142例,其中异体髌腱移植87例,自体髌腱移植34例,自体双股半腱肌21例。方法:回顾分析34例膝关节镜下自体骨-髌腱-骨移植、21例自体半腱肌腱移植和87例异体骨-髌腱-骨移植重建前交叉韧带的情况,随访31～84个月。采用Lysholm膝关节评分、国际膝关节文献编制委员会分级评估标准(IKDC)和KT2000评价疗效,并检测术后住院期间体温。主要观察指标:①各组患者Lysholm评分、IKDC分级。②不良事件及副反应。结果:3组间患者满意度、关节稳定性及功能差异均无显著性意义。自体骨-髌腱-骨重建组膝前痛发生率较异体骨-髌腱-骨、半腱肌腱组高。异体骨-髌腱-骨术后发热时间平均10.1d,自体骨-髌腱-骨和自体半腱肌组分别为4.9d和5.1d,与异体组相比差异有显著性意义。11例异体骨-髌腱-骨出现排斥反应,表现为胫骨隧道外口持续果酱样液体流出。经换药、激素或消炎痛治疗后痊愈。结论:关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱移植重建前交叉韧带的疗效相同,但各组间供区并发症、排斥反应等并发症之间的差异将影响人们对移植物的选择。

关键词：前交叉韧带骨-髌腱-骨关节镜移植