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热打击诱导肝细胞释放的外泌体生物学功能及其致肝损伤作用分析

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解放军医学杂志 2020年第3期45卷 277-284页

作者：李悦祝鑫桃张明梁泳欣施学智童华生解放军南部战区总医院重症医学科/解放军热区损伤与组织修复重点实验室广州510010 广州医科大学第六附属医院/清远市人民医院重症医学科广东清远511500

目的探讨中暑诱导肝细胞释放外泌体的生物学功能及其对重症中暑肝损伤的作用。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组与热打击组,提取上清经超高速离心法分离外泌体。透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析法(NTA)检测... 详细信息

目的探讨中暑诱导肝细胞释放外泌体的生物学功能及其对重症中暑肝损伤的作用。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组与热打击组,提取上清经超高速离心法分离外泌体。透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析法(NTA)检测外泌体直径分布,Western blotting检测外泌体特征性标记物表达。通过等重同位素多标签相对定量蛋白质组学(iTRAQ)方法分析对照组与热打击组肝细胞外泌体中蛋白质的组成差异,采用KEGG通路对差异蛋白质集合进行生物信息学分析。外泌体刺激受体肝细胞实验将受体肝细胞分为对照组、正常刺激组、热打击刺激组(10μg/5 ml,24 h)、热打击组及热打击预处理组,检测各组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。外泌体体内回输刺激实验将小鼠分为对照组、正常输注组、热打击输注组(40μg/只)、热打击组及热打击预处理组,9 h后处死,检测其血清ALT、AST、LDH水平,以评价肝组织损伤情况。结果肝细胞分泌的微粒在TEM下呈双层膜状包裹的圆形或椭圆形结构,NTA检测显示其直径为90~150 nm,Western blotting检测显示其高表达CD9、CD63和CD81,具有外泌体的特征。热打击组肝细胞释放的外泌体数量明显高于对照组[(8.46±1.38)×10~9/mlvs.(0.66±0.16)×10~9/ml,t=5.605,P=0.005]。iTRAQ分析显示,热打击明显改变了肝细胞外泌体的蛋白质表达谱,KEGG通路分析显示,参与坏死性凋亡途径、PI3K-Akt信号传导途径、抗原加工和呈递途径、凋亡途径及NOD样受体等信号通路的蛋白质富集。外泌体刺激受体肝细胞实验中,热打击刺激组受体肝细胞上清ALT、AST、LDH水平明显升高,热打击预处理组肝细胞上清ALT、AST、LDH水平明显低于热打击组(P实验中,热打击输注组小鼠血清ALT、AST、LDH水平明显升高,热打击预处理组肝细胞血清ALT、AST、LDH水平明显低于热打击组(P损伤具有诱导作用。

关键词：重症中暑热打击肝细胞外泌体肝损伤

体重指数对脓毒症患者预后的影响:基于大型临床数据库MIMIC-Ⅲ的回顾性分析

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解放军医学杂志 2021年第2期46卷 129-135页

作者：王丹妮华黎电潘志国文强苏磊广东药科大学附属第一医院重症医学科广州510080 解放军南部战区总医院重症医学科/全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广州510010

目的探讨体重指数(BMI)与脓毒症患者短期和长期临床结局的关系。方法回顾性分析2001-2012年在医学信息市场重症监护(MIMIC-Ⅲ)数据库中注册的贝斯以色列迪康医疗中心(美国马萨诸塞州波士顿)的5571例脓毒症患者的临床资料。采用Cox比例... 详细信息

目的探讨体重指数(BMI)与脓毒症患者短期和长期临床结局的关系。方法回顾性分析2001-2012年在医学信息市场重症监护(MIMIC-Ⅲ)数据库中注册的贝斯以色列迪康医疗中心(美国马萨诸塞州波士顿)的5571例脓毒症患者的临床资料。采用Cox比例风险回归模型评估脓毒症患者BMI与30 d病死率、1年病死率的关系。结果根据BMI将患者进行分类[体重不足:336例(6.0%);正常体重:1752例(31.4%);超重:1563例(28.1%);肥胖:1920例(34.5%)],各类患者30 d病死率分别为42.3%、36.6%、32.2%、29.6%(P<0.001),1年病死率分别为64.6%、56.8%、52.5%、46.7%(P<0.001),院内病死率分别为35.4%、34.3%、31.6%、29.9%(P=0.018)。Cox比例风险回归模型分析显示,与正常体重患者相比,在30 d和1年内的死亡风险体重不足患者分别增高了13%和24%,超重患者分别降低了17%和14%,肥胖患者分别降低了22%和21%。结论超重或肥胖脓毒症患者入院后30 d和1年生存率高于体重不足及体重正常的脓毒症患者。

关键词：医学信息市场重症监护大数据分析脓毒症肥胖

HMGB1与重症中暑大鼠凝血紊乱的相关性分析

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解放军医学杂志 2020年第3期45卷 292-297页

作者：余保军王黎彭娜施学智陆勇梁泳欣童华生苏磊南方医科大学附属深圳宝安医院重症医学科广东深圳518101 解放军南部战区总医院重症医学科/全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广州510010

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与重症中暑大鼠凝血紊乱的相关性。方法将48只SD雄性大鼠按照随机数字表法分为假加热对照组(Sham组)和重症中暑复温0 h组(HS-0 h组)、3 h组(HS-3 h组)、6 h组(HS-6 h组)、9 h组(HS-9 h组)、12 h组(HS-1... 详细信息

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与重症中暑大鼠凝血紊乱的相关性。方法将48只SD雄性大鼠按照随机数字表法分为假加热对照组(Sham组)和重症中暑复温0 h组(HS-0 h组)、3 h组(HS-3 h组)、6 h组(HS-6 h组)、9 h组(HS-9 h组)、12 h组(HS-12 h组)、18 h组(HS-18 h组)、24 h组(HS-24 h组),每组6只。Sham组大鼠置于温度(25.0±0.5)℃、湿度50%±5%的环境中,其余各组大鼠置于高温气候人工培养箱[温度(39.5±0.2)℃,湿度60%±5%]内,制备重症中暑大鼠模型,以直肠温度达43℃作为重症中暑标准。大鼠中暑后置于室温环境自然降温,分别于复温0、3、6、9、12、18、24 h采集血液标本。采用凝固法检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fib)水平;ELISA法测定血浆HMGB1及凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)水平;采用广义相加模型分析HMGB1与各凝血指标的相关性。结果HMGB1与PT、TAT均呈线性关系且明显相关(P0.05)。结论HMGB1与重症中暑大鼠凝血紊乱明显相关,其在中暑凝血紊乱中的作用机制值得深入研究。

关键词：高迁移率族蛋白B1 重症中暑凝血紊乱

血管内降温在重症中暑临床救治中的作用研究进展

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解放军医学杂志 2021年第5期46卷 525-530页

作者：夏诗语林国东苏磊广东药科大学临床医学院广州510080 解放军南部战区总医院重症医学科/全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广州510010

重症中暑(HS)指在高温、高湿且空气流通缓慢的环境下或剧烈运动后导致患者核心体温高于40.5℃,同时合并脏器功能损伤的一种疾病,其发病率及致死率均较高。早期诊断、早期降温可明显改善患者预后,提高生存率,减少并发症。重症中暑的降温... 详细信息

重症中暑(HS)指在高温、高湿且空气流通缓慢的环境下或剧烈运动后导致患者核心体温高于40.5℃,同时合并脏器功能损伤的一种疾病,其发病率及致死率均较高。早期诊断、早期降温可明显改善患者预后,提高生存率,减少并发症。重症中暑的降温措施可分为血管外降温及血管内降温,血管外降温主要为体表物理降温,血管内降温主要用于不适宜物理降温或因资源短缺导致诊治不及时的患者,尤其对重症中暑降温效果较好,能明显改善患者预后。目前临床上常用的血管内降温措施主要包括血管内输注降温、血管内温度管理装置降温及持续血液净化等。该文主要从血管内降温的类别、机制、临床应用及优缺点等方面进行综述。

关键词：重症中暑物理降温致伤机制血管内降温

单核-巨噬细胞TREM-1对重症中暑大鼠急性肺损伤的作用及机制

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解放军医学杂志 2020年第1期45卷 62-67页

作者：陈怿邱嘉玲丁程佳陈加弟刘志峰童华生江东新东莞市滨海湾中心医院重症医学科广东东莞523900 暨南大学医学部广州510632 南部战区总医院重症医学科/解放军热区创伤救治与组织修复重点实验室广州510010

目的探讨单核-巨噬细胞髓样细胞触发受体-1(TREM-1)对重症中暑大鼠急性肺损伤的作用及其可能机制。方法将40只大鼠随机分为对照组(Con组)、中暑组(HS组)、低剂量抑制剂组(LD组)和高剂量抑制剂组(HD组),每组10只。采用高温高湿[温度(40... 详细信息

目的探讨单核-巨噬细胞髓样细胞触发受体-1(TREM-1)对重症中暑大鼠急性肺损伤的作用及其可能机制。方法将40只大鼠随机分为对照组(Con组)、中暑组(HS组)、低剂量抑制剂组(LD组)和高剂量抑制剂组(HD组),每组10只。采用高温高湿[温度(40±2)℃,湿度65%±5%]打击60 min制备中暑大鼠模型,LD组、HD组大鼠分别于造模前2 h尾静脉注射50 mg/kg、100 mg/kg LP-17试剂。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定体循环血及肺组织匀浆上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的表达水平;流式细胞术检测体循环血中单核细胞TREM-1的表达;HE染色观察肺组织病理学变化;免疫组化法检测肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;Westernblotting检测肺组织TREM-1和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白的表达。结果抑制单核-巨噬细胞TREM-1活性可抑制中暑大鼠体循环血和肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β的释放(P组织损伤(P组织iNOS、TREM-1和MCP-1蛋白的表达(P组织中TREM-1的表达而减轻炎性损伤,缓解氧化应激反应,抑制趋化因子释放,进而减轻重症中暑大鼠的急性肺损伤。

关键词：重症中暑单核巨噬细胞 TREM-1 急性肺损伤

热打击单核细胞来源外泌体中miR-155对肝细胞炎症的影响及其机制

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解放军医学杂志 2023年第9期48卷 1017-1022页

作者：张明李悦杨经文施学智肖吉彪童华生广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院重症医学科一区广东清远511500 解放军南部战区总医院重症医学科/全军热区损伤与组织修复重点实验室广东广州510010

目的研究热打击单核细胞来源外泌体对肝细胞炎症损伤的影响及其与外泌体miR-155的关系。方法将单核细胞THP-1分为对照组、热打击组、乌司他丁组,分别提取3组细胞的外泌体,将其孵育肝细胞系HepG2细胞后,检测肝细胞上清中谷丙转氨酶(ALT)... 详细信息

目的研究热打击单核细胞来源外泌体对肝细胞炎症损伤的影响及其与外泌体miR-155的关系。方法将单核细胞THP-1分为对照组、热打击组、乌司他丁组,分别提取3组细胞的外泌体,将其孵育肝细胞系HepG2细胞后,检测肝细胞上清中谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,肝细胞存活率,以及肝细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平,评估外泌体对肝细胞的作用;采用RT-qPCR检测单核细胞来源外泌体中miR-155含量的变化;通过数据库检索、双重荧光素酶报告基因检测及Western blotting实验分析miR-155的潜在靶点;观察热打击单核细胞外泌体对肝细胞miR-155的影响,以及使用乌司他丁或miR-155抑制剂处理对这些外泌体功能的影响。结果热打击单核细胞来源外泌体使肝细胞上清ALT及LDH水平、TNF-αmRNA及IL-6 mRNA水平明显增高(P损伤,这可能是通过释放外泌体miR-155至肝细胞并以SOCS1为潜在靶点实现的;乌司他丁可能缓解此条件下肝细胞内炎性因子mRNA的表达。

关键词：中暑外泌体单核细胞乌司他丁肝细胞 miR-155

热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1对内皮细胞炎症的作用

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解放军医学杂志 2023年第6期48卷 670-675页

作者：张明杨经文李悦施学智李华楚童华生广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院重症医学科一区广东清远511500 南部战区总医院重症医学科/解放军热区损伤与组织修复重点实验室广东广州510010

目的观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞炎症的作用。方法制备中暑大鼠模型,将大鼠分为对照组(n=6)与中暑组(n=6),分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定;对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述;采... 详细信息

目的观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞炎症的作用。方法制备中暑大鼠模型,将大鼠分为对照组(n=6)与中暑组(n=6),分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定;对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述;采用Western blotting及酶联免疫吸附法(ELISA)分别验证中暑大鼠及患者单核细胞来源外泌体HMGB1的表达变化;将脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组、中暑组以及中暑+丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)组,分别添加来自对照组、中暑组大鼠外周血单核细胞上清中提取的外泌体及EP,采用RT-qPCR及Western blotting检测内皮细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达水平;采用ELISA检测健康志愿者及中暑患者外泌体NLRP3及IL-1β的表达水平。结果与对照组比较,中暑组大鼠单核细胞来源外泌体数量(×104/单核细胞)明显增多(11.24±2.66 vs.1.52±0.21,P<0.001)。蛋白质组学分析表明中暑组外泌体HMGB1表达较对照组上调18.63倍(P<0.001),且在NOD样受体等信号通路富集。Westernblotting检测结果显示,中暑组大鼠外泌体内含HMGB1表达量较对照组明显升高(4.13±0.22 vs.1.00±0.15,P<0.001)。ELISA检测结果显示,中暑组患者外泌体内含HMGB1水平(ng/ml)较对照组明显升高(0.29±0.11 vs.0.12±0.04,P=0.006)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与对照组比较,中暑组内皮细胞中NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,与中暑组比较,中暑+EP组NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平则明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论热打击可提高单核细胞来源外泌体HMGB1水平,并可能通过HMGB1介导内皮细胞的炎症反应。

关键词：中暑外泌体单核细胞高迁移率族蛋白B1

热打击诱导血管内皮细胞释放的外泌体特征及其功能分析

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解放军医学杂志 2020年第3期45卷 270-276页

作者：陈怀生张明梁泳欣施学智童华生苏磊深圳市人民医院重症医学科广东深圳518020 广州医科大学第六附属医院/清远市人民医院重症医学科一区广东清远511500 解放军南部战区总医院重症医学科/解放军热区损伤与组织修复重点实验室广州518020

目的分析热打击诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放的外泌体特征及其功能。方法培养HUVECs并分为对照组与热打击组。热打击组细胞给予41℃热刺激培养2 h,建立热打击细胞模型;对照组细胞于37℃孵育培养2 h。采用纳米颗粒追踪法分析两组细... 详细信息

目的分析热打击诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放的外泌体特征及其功能。方法培养HUVECs并分为对照组与热打击组。热打击组细胞给予41℃热刺激培养2 h,建立热打击细胞模型;对照组细胞于37℃孵育培养2 h。采用纳米颗粒追踪法分析两组细胞释放的外泌体特征;Westernblotting检测外泌体标志蛋白CD63和TSG101的表达;荧光标识观察外泌体进入正常细胞的过程。检测、提取外泌体,对细胞进行干预实验,将培养的细胞分为空白对照组(37℃培养HUVECs细胞)、37℃外泌体处理组(加入对照组细胞释放的外泌体)和41℃外泌体处理组(加入热打击组细胞释放的外泌体),采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况;MTS法检测细胞增殖情况;ELISA法检测凝血功能指标水平;高通量测序法分析外泌体中的微小RNA(miRNA)。结果与对照组不同,41℃热打击组细胞可释放异常外泌体,并导致正常HUVECs出现行为、功能异常,组织因子、血管性血友病因子、纤溶酶原激活物抑制因子1表达明显增加(P组织型纤维蛋白溶酶原激活剂表达降低(P<0.05)。与37℃孵育HUVECs比较,41℃热打击HUVECs释放的外泌体共出现2590条miRNA调节变化,对细胞凋亡等途径具有较明显影响。结论41℃热打击可使HUVECs分泌异常外泌体,后者可导致正常细胞出现行为及凝血功能等的异常。

关键词：中暑人脐静脉内皮细胞外泌体

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重症中暑凝血功能障碍的诊断和治疗

中国实用内科杂志 2021年第6期41卷 480-485页

作者：彭娜耿焱童华生余宝军夏诗语苏磊中国人民解放军南部战区总医院重症医学科全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广东广州510010

凝血功能障碍是重症中暑常见并发症,一旦发展为弥散性血管内凝血,可导致广泛的微血栓栓塞和大出血,最终出现多器官功能障碍,是病死率增加的主要因素。早期评估和治疗凝血紊乱,是遏制重症中暑进展及死亡的有效途径之一,值得临床医生高度... 详细信息

凝血功能障碍是重症中暑常见并发症,一旦发展为弥散性血管内凝血,可导致广泛的微血栓栓塞和大出血,最终出现多器官功能障碍,是病死率增加的主要因素。早期评估和治疗凝血紊乱,是遏制重症中暑进展及死亡的有效途径之一,值得临床医生高度关注。目前国内外指南尚无重症中暑凝血功能障碍诊断和治疗的统一规范,文章将主要阐述重症中暑凝血功能障碍的病理生理机制、诊断和治疗进展。

关键词：重症中暑凝血障碍弥散性血管内凝血