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高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

氢氧化镁-活性炭复合材料的制备及其对糖浆脱色工艺优化

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食品工业科技 2025年第1期46卷 201-207页

作者：陈金足韦晓雯农晶晶韩丽芳冯学唐婷范李利军程昊广西糖资源绿色加工重点实验室广西柳州螺蛳粉工程技术研究中心广西科技大学生物与化学工程学院广西柳州545006 蔗糖产业省部共建协同创新中心广西南宁530004

为寻找绿色环保且具有高吸附性的糖浆脱色材料,本文通过原位生成氢氧化镁沉积在活性炭表面,制备了氢氧化镁-活性炭复合材料,采用扫描电镜(SEM)、能谱仪(EDS)、比表面积和空隙度分析仪(BET)和X射线衍射仪(XRD)对制备的复合材料进行了表征... 详细信息

为寻找绿色环保且具有高吸附性的糖浆脱色材料,本文通过原位生成氢氧化镁沉积在活性炭表面,制备了氢氧化镁-活性炭复合材料,采用扫描电镜(SEM)、能谱仪(EDS)、比表面积和空隙度分析仪(BET)和X射线衍射仪(XRD)对制备的复合材料进行了表征,并以脱色率为指标,复合材料投入量、pH、脱色温度、脱色时间为影响因素,采用单因素及正交试验优化赤砂糖回溶糖浆脱色的最佳工艺。结果证明所制备的氢氧化镁-活性炭复合材料为多孔性,其比表面积和空隙率大、晶型结构良好、吸附能力强。糖浆脱色的最佳工艺为:复合材料用量为0.70 g,pH为10.00,脱色温度为50℃,脱色时间为50 min。在该工艺条件下的脱色率可达到80.7%,脱色效果明显优于商用活性炭。综上表明,氢氧化镁-活性炭复合材料对糖浆具有较理想的脱色效果,作为一种绿色材料在工业制糖方面具有一定的应用前景。

关键词：氢氧化镁活性炭赤砂糖回溶糖浆复合材料脱色

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超临界CO_2技术萃取蛋黄磷脂

生物化学与生物物理进展 1995年第4期22卷 366-370页

作者：赖炳森毛中兴沈晓京孙树秦解放军北京医学高等专科学校生物化学教研室

采用新型物理分离技术──超临界ＣＯ＿２萃取法，提取天然蛋黄粉中的磷脂．在４０ＭＰａ，先去除蛋黄粉中甘油三酯和胆固醇，再萃取磷脂．结果显示，磷脂纯度为９５％，Ｎ／Ｐ比值为１．００３，λ＿（ｍａｘ）＝２１４ｎｍ，薄层层析... 详细信息

采用新型物理分离技术──超临界ＣＯ＿２萃取法，提取天然蛋黄粉中的磷脂．在４０ＭＰａ，先去除蛋黄粉中甘油三酯和胆固醇，再萃取磷脂．结果显示，磷脂纯度为９５％，Ｎ／Ｐ比值为１．００３，λ＿（ｍａｘ）＝２１４ｎｍ，薄层层析显示磷脂着色点清晰，并去除了绝大部分甘油三酯和胆固醇。此法操作简单、产品质量高、安全和不污染环境，还可得到天然纯蛋黄油和蛋白。

关键词：磷脂蛋黄超临界CO2萃取

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细胞周期检测点激酶与肺癌耐药研究进展

中国肺癌杂志 2021年第4期24卷 265-270页

作者：柯芷茵梁爱玲刘勇军广东省医学分子诊断重点实验室东莞523808 广东医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室东莞523808 广东医科大学医学技术学院临床生物化学教研室东莞523808

肺癌是最常见的诊断癌症和癌症死亡的主要原因。虽然化疗、放疗、靶向治疗等治疗手段取得了重大进展,但获得性耐药的出现阻碍了临床治疗的疗效。研究表明肿瘤是一类细胞周期调控机制破坏的疾病,其中细胞周期检测点激酶(checkpoint kinas... 详细信息

肺癌是最常见的诊断癌症和癌症死亡的主要原因。虽然化疗、放疗、靶向治疗等治疗手段取得了重大进展,但获得性耐药的出现阻碍了临床治疗的疗效。研究表明肿瘤是一类细胞周期调控机制破坏的疾病,其中细胞周期检测点激酶(checkpoint kinase,Chk)发挥着核心的作用,而Chk1和Chk2是检测点中非常重要的蛋白激酶。近年来发现,调控Chk1和Chk2对肺癌的临床治疗和耐药机制有十分重要的意义。本文就细胞周期检测点激酶与肺癌耐药机制进行综述,阐述有效的肺癌治疗靶点和方法。

关键词：细胞周期检测点激酶肺肿瘤耐药

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复合型小细胞肺癌研究进展

解放军医学杂志 2018年第9期43卷 799-805页

作者：李涛张娟胡毅北京解放军总医院肿瘤内科、全军肿瘤学重点实验室、肿瘤靶向治疗和抗体药物教育部重点实验室 100853 解放军总医院/解放军医学院研究生管理大队北京100853

随着对小细胞肺癌认识和研究的不断深入,人们逐渐发现和揭示了一种病理类型为小细胞肺癌混合非小细胞肺癌成分的疾病,即复合型小细胞肺癌(C-SCLC)。与单纯型小细胞肺癌相比,C-SCLC无论在发生机制与起源、临床生物学特性,还是在治疗和疾... 详细信息

随着对小细胞肺癌认识和研究的不断深入,人们逐渐发现和揭示了一种病理类型为小细胞肺癌混合非小细胞肺癌成分的疾病,即复合型小细胞肺癌(C-SCLC)。与单纯型小细胞肺癌相比,C-SCLC无论在发生机制与起源、临床生物学特性,还是在治疗和疾病预后等诸多方面都与之既有联系又有区别。基础研究的不断深入促进了C-SCLC来源、机制、起病等多方面的研究进展。随着医疗技术和诊疗手段的发展,临床上对于C-SCLC的发现和诊断率不断提高,治疗上也取得了一定效果。本文对目前C-SCLC的研究进展、诊断与分期、治疗现状和预后等进行归纳,以为今后进一步的基础科研探索和临床治疗提供经验。

关键词：小细胞肺癌,复合型治疗,预后

结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位预测

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生物医学工程学杂志 2016年第2期33卷 325-331页

作者：王东方白雪娟刘银萍梁艳吴雪琼林明贵河北北方学院张家口075000 解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

本文应用生物信息学技术预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位,为结核病的诊断和疫苗研发筛选合适的抗原靶位。通过Blast分析发现Rv2004c蛋白与人类蛋白的同源性较低;采用DNAStar软件包中的Protean软件分析其二级结构、... 详细信息

本文应用生物信息学技术预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位,为结核病的诊断和疫苗研发筛选合适的抗原靶位。通过Blast分析发现Rv2004c蛋白与人类蛋白的同源性较低;采用DNAStar软件包中的Protean软件分析其二级结构、亲水性、抗原性、柔韧性及表面可能性,预测该蛋白有10个候选B细胞抗原表位;应用RANKPEP及SYFPEITHI法预测该蛋白有37个候选Th细胞抗原表位,主要位于第200位氨基酸之后,其中HLA-DRB1*0401及HLA-DRB1*0701表型相对的表位数目较多且某些候选表位的主要组织相容性复合体(MHC)限制类型存在交叉重叠;应用SYFPEITHI法、BIMAS法及NetCTL法预测该蛋白有10个候选细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,其中以HLA-A2限制性表位数目较多、分值较高。由此得出结论:Rv2004c蛋白含有较多潜在的T细胞和B细胞抗原表位,可作为新的结核病诊断试剂和疫苗研发的候选靶蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 Rv2004c 表位预测生物信息学

电喷雾法制备海藻酸盐-明胶-脂肪干细胞微球及其修复关节软骨损伤的可行性

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中国组织工程研究 2021年第28期25卷 4473-4479页

作者：廖思达孟昊业李俊康徐亦驰李获田萧羽冯勇汪爱媛彭江中国人民解放军医学院北京市100853 中国解放军总医院第一医学中心骨科研究所骨科再生医学北京市重点实验室全军骨科战创伤重点实验室北京市100853

背景:微球可作为细胞递送系统,通过注射或者与其他支架相结合的方式使细胞定位于软骨损伤处使其再生。目的:采用电喷雾法将脂肪源性干细胞负载至海藻酸盐-明胶微球中,评估微球中的细胞活性、增殖和成软骨分化能力。方法:使用电喷雾技术... 详细信息

背景:微球可作为细胞递送系统,通过注射或者与其他支架相结合的方式使细胞定位于软骨损伤处使其再生。目的:采用电喷雾法将脂肪源性干细胞负载至海藻酸盐-明胶微球中,评估微球中的细胞活性、增殖和成软骨分化能力。方法:使用电喷雾技术制备含不同质量浓度明胶(0,5,15,25 g/L)的海藻酸盐微球,光学显微镜下观察微球的外观,选择形成完整微球的明胶质量浓度用于以下实验。使用电喷雾技术制备含脂肪源性干细胞的海藻酸盐微球与海藻酸盐微球-明胶微球,光学显微镜下观察成球效果。将含细胞的两种微球培养于旋转细胞培养系统内,在设定的时间点检测微球内细胞的增殖能力、活性与成软骨能力。结果与结论:①加入0,5 g/L的明胶可制备出完整的微球,微球直径分别为(365.85±16.88),(358.85±23.97)μm,两种微球直径比较差异无显著性意义(P﹥0.05),后续实验选择明胶质量浓度为5 g/L;②加入脂肪源性干细胞不影响藻酸盐微球与海藻酸盐微球-明胶微球的成球性与微球直径;③含细胞海藻酸盐微球-明胶微球培养7,14 d的细胞增殖数量、活细胞比例均高于含细胞海藻酸盐微球(P生物材料。

关键词：骨材料海藻酸盐明胶软骨组织工程生物材料电喷雾微载体

缺氧条件下SNAⅡ激活基质金属蛋白酶对脉络膜新生血管生成的促进作用

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中华实验眼科杂志 2018年第1期36卷 16-22页

作者：孙嘉星窦国睿常天芳李曼红杨子岩晏贤春刘瑗韩骅王雨生解放军空军军医大学西京医院眼科全军眼科研究所西安710032 解放军空军军医大学基础医学院遗传与发育生物学教研室肿瘤生物学国家重点实验室西安710032

目的探讨缺氧环境下活化的血管内皮细胞是否可诱导SNAI1表达上调，进而通过SNAI1-基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9途径参与CNV生成。方法选取SPF级6～8周龄雄性C57小鼠16只并分为对照组和模型组，采用视网膜激光光凝法诱导小鼠CNV模型。... 详细信息

目的探讨缺氧环境下活化的血管内皮细胞是否可诱导SNAI1表达上调，进而通过SNAI1-基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9途径参与CNV生成。方法选取SPF级6～8周龄雄性C57小鼠16只并分为对照组和模型组，采用视网膜激光光凝法诱导小鼠CNV模型。于造模后7 d摘取小鼠眼球以制备视网膜色素上皮（RPE）－脉络膜－巩膜复合体铺片和冰冻切片，采用Isolectin B4免疫荧光染色技术检测脉络膜铺片中CNV形成情况，并观察CNV组织附近血管内皮细胞中SNAI1、MMP2和MMP9的表达及定位；采用实时荧光定量PCR法检测CNV组织中SNAI1、MMP2和MMP9 mRNA的表达变化。将培养的恒河猴脉络膜/视网膜内皮（RF/6A）细胞分为常氧组和缺氧组，分别在含体积分数5%CO2培养箱或含体积分数94%N2、5%CO2和体积分数1%O2培养箱中孵育24 h，分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot技术测定各组细胞中SNAI1、MMP2和MMP9在转录水平和蛋白水平的表达变化。用小干扰SNAI1（siSNAI1）转染RF/6A细胞，采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测细胞中MMP2和MMP9在转录和蛋白水平的表达变化，并采用Transwell小室法检测血管内皮细胞的迁移数目。结果造模后7 d小鼠脉络膜铺片中可见CD31阳性和SNAI1阳性荧光染色细胞及双阳性细胞；模型组小鼠RPE－脉络膜－巩膜复合体中SNAI1 mRNA和MMP2 mRNA相对表达量分别为1.291±0.060和1.610±0.424，均明显高于对照组的0.759±0.074和0.772±0.080，差异均有统计学意义（P＝0.001、0.044），模型组小鼠RPE－脉络膜－巩膜复合体中MMP9 mRNA升高，但与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05），且MMP2 mRNA表达量高于MMP9 mRNA，差异有统计学意义（P〈0.01）。缺氧组RF/6A细胞中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、SNAI1和MMP2 mRNA及其蛋白的相对表达量均明显高于常氧组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），各组间MMP9 mRNA相对表达量的差异无统计学意义（P〉0.05）。缺氧＋siSNAI1组RF/6A细胞中MMP2 mRNA相对表达量为0.217±0.036，明显低于单纯缺氧组的0.818±0.105；缺氧＋siSNAI1组RF/6A细胞中MMP2蛋白相对表达量为0.236±0.009，明显低于单纯缺氧组的1.043±0.120，差异均有统计学意义（P＝0.002、0.003）。siSNAI1组血管内皮细胞迁移数目为（254.60±71.31）/视野，明显少于正常对照组的（534.10±96.21）/视野，差异有统计学意义（P＝0.029）。结论CNV局部的缺氧环境可能通过上调血管内皮细胞中SNAI1的表达而激活MMP2，促进血管内皮细胞迁移，从而参与CNV生成；缺氧条件下SNAI1的下调可抑制上述过程。

关键词：脉络膜新生血管基质金属蛋白酶小干扰RNA 转录因子SNAⅡ 血管内皮细胞动物模型缺氧

亲水相互作用色谱结合串联质谱多重碎裂模式在完整糖肽研究中的应用

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分析化学 2014年第2期42卷 159-165页

作者：江静应万涛钱小红中国人民解放军总医院军医进修学院蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心解放军医学院

蛋白质的糖基化修饰在生理及病理过程中发挥着重要作用。由于技术条件的限制,传统的糖蛋白分析方法中,通常分别鉴定蛋白质和糖链两者的结构,而忽略了蛋白质与糖链的连接关系。本研究旨在以完整糖肽作为检测对象,对糖肽中肽段序列和糖链... 详细信息

蛋白质的糖基化修饰在生理及病理过程中发挥着重要作用。由于技术条件的限制,传统的糖蛋白分析方法中,通常分别鉴定蛋白质和糖链两者的结构,而忽略了蛋白质与糖链的连接关系。本研究旨在以完整糖肽作为检测对象,对糖肽中肽段序列和糖链结构的同步解析。采用亲水相互作用色谱对完整糖肽进行分离纯化,联合生物质谱中碰撞诱导解离(CID)、高能诱导解离(HCD)、电子转移解离(ETD)等裂解模式,对完整糖肽的糖基化位点、糖链结构、肽段序列等进行全方面的解析。结果表明,亲水相互作用色谱中样品与填料比1∶50可有效富集糖肽,采用30%CID能量,主要产生糖苷键断裂的碎片,为糖链的结构组成分析提供了线索;采用25%HCD能量,在低分子量区域提供了糖链的特征离子信息,并产生明确的糖肽Y1特征离子;ETD保留了完整的修饰基团而产生肽段骨架的断裂,可以提供有效的肽段序列信息。本研究结合亲水相互作用色谱与质谱仪中的多种碎裂方式,为完整糖肽的结构解析提供了一种快速、有效的研究方案。

关键词：亲水作用色谱串联质谱完整糖肽碰撞诱导解离高能诱导解离电子转移解离