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高钾保存液对角膜内皮细胞存活的影响

眼科 1996年第2期5卷 112-115页

作者：王丽娅李辰李志杰曾耀英钟新华广州暨南大学医学院眼科 510632 广州暨南大学组织移植与免疫实验中心

应用流式细胞仪及细胞活性染料Dio,PI对高钾角膜保存液保存后角膜内皮细胞的存活与K液进行了对照实验。结果表明:(1)高钾保存液组保存5、7、9、11天的角膜内皮细胞存活率均高于K液组(P<0.05);(2)含钾离子浓度为12.15mM的高钾保存液角膜... 详细信息

应用流式细胞仪及细胞活性染料Dio,PI对高钾角膜保存液保存后角膜内皮细胞的存活与K液进行了对照实验。结果表明:(1)高钾保存液组保存5、7、9、11天的角膜内皮细胞存活率均高于K液组(P角膜内皮细胞存活高于共它高钾组(P角膜保存液对延长角膜内皮细胞的存活有一定的作用。

关键词：角膜移植角膜内皮细胞高钾角膜保存液

人皮肤干细胞体外诱导分化构建人工结膜的实验

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中山大学学报（医学科学版） 2006年第3期27卷 246-249页

作者：孟繁剑陈家祺中山大学中山眼科中心角膜科广东广州510060

目的观察皮肤干细胞在结膜去细胞基质上的生长和分化情况,探讨利用皮肤干细胞及结膜去细胞基质构建人工结膜的可能性。方法将体外分离培养的1～2代人皮肤干细胞接种于人结膜去细胞基质上,在体外观察细胞的分化情况。标本分别行HE染色、... 详细信息

目的观察皮肤干细胞在结膜去细胞基质上的生长和分化情况,探讨利用皮肤干细胞及结膜去细胞基质构建人工结膜的可能性。方法将体外分离培养的1～2代人皮肤干细胞接种于人结膜去细胞基质上,在体外观察细胞的分化情况。标本分别行HE染色、人上皮细胞角蛋白CK19单克隆抗体、结膜上皮细胞特异性标记蛋白CK8抗体、CK13抗体、MUC5A/C抗体免疫组化鉴定。结果皮肤干细胞在结膜去细胞基质等模拟的体外微环境下可形成类似结膜上皮细胞的复层增生,并有类结膜上皮细胞特异性标记蛋白表达,呈CK8抗体、CK13抗体、MUC5A/C抗体表达阳性。结论利用皮肤干细胞可在体外模拟的微环境下分化构建人工结膜,用于结膜移植眼表重建。

关键词：皮肤干细胞结膜去细胞基质人工结膜

准分子激光原位角膜磨镶术后角膜细胞凋亡的研究

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中国实用眼科杂志 2007年第9期25卷 1041-1044页

作者：陆勤康盛艳杨亚波王惠云童奇湖忻双华龚维坤宁波市鄞州人民医院眼科中心 315040 浙江大学医学院附属第二医院眼科中心 310009

目的了解准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK）后早期角膜基质细胞凋亡的特点并探索LASIK术后角膜愈合反应程度与角膜刀的机械损伤、激光能量的相关性。方法 20只新西兰白兔,其中10只兔左眼为LASIK-4.0D组... 详细信息

目的了解准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK）后早期角膜基质细胞凋亡的特点并探索LASIK术后角膜愈合反应程度与角膜刀的机械损伤、激光能量的相关性。方法 20只新西兰白兔,其中10只兔左眼为LASIK-4.0D组、右眼为LASIK-8.0D组、另10只兔左眼为单纯角膜瓣组、右眼作为空白对照组,在术后4小时处死兔取角膜制作病理切片,行透射电镜检查,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标法（terminal-deoxynucleotidyl transferase medi-ated dUTP nick end labeling,TUNEL）原位显示凋亡细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态,定量统计比较凋亡水平差别。结果三个手术组中角膜基质中均出现凋亡细胞,主要分布于角膜瓣和基质床交接面两侧50μm范围内的基质层中;瓣缘的凋亡水平高于中央部。而空白对照组中,凋亡细胞仅出现在表层上皮,角膜基质细胞未见凋亡。三个手术组的TUNEL阳性细胞计数进行方差分析,三组之间差异无显著意义（F=1.008,P〉0.05）;每组不同个体的TUNEL阳性细胞计数存在明显的差异。结论正常角膜基质细胞不发生凋亡。角膜基质细胞凋亡与角膜损伤有关。LASIK术后早期即可出现角膜基质细胞的凋亡表达,该表达与角膜瓣的制作有关,与激光切削的深度、能量无明显的相关性。

关键词：凋亡角膜细胞角膜基质准分子激光原位角膜磨镶术 TUNEL

克隆人血小板源性生长因子B基因构建腺相关病毒载体及其病毒滴度测定

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第24期11卷 4730-4733页

作者：刘相萍罗文娟隋爱华杨堃吕振华王传富青岛大学医学院附属医院分子生物研究室山东省青岛市266003 青岛大学医学院附属医院眼科山东省青岛市266003

目的:克隆人血小板源性生长因子B基因于腺相关病毒载体中,以获得高感染滴度的重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒。方法:实验于2005-10/2006-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①健康足月产妇胎盘组织由青岛大学医学院... 详细信息

目的:克隆人血小板源性生长因子B基因于腺相关病毒载体中,以获得高感染滴度的重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒。方法:实验于2005-10/2006-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①健康足月产妇胎盘组织由青岛大学医学院附属医院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意。DH5α宿主菌由青岛大学医学院附属医院中心实验室制备保存。②Trizol试剂提取健康足月产妇胎盘组织总RNA,反转录-聚合酶链反应一步法克隆人血小板源性生长因子B基因全长开放读框。聚合酶链反应产物定向克隆于腺相关病毒载体,重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体进行双酶切和测序鉴定。③采用磷酸钙转染法将重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体、腺相关病毒包装载体,腺相关病毒辅助载体共转染腺相关病毒293细胞,包装得到重组腺相关病毒并回收病毒原液,显微镜下观察细胞及培养基的变化。④以携带β-半乳糖苷酶基因的腺相关病毒作为报告基因同重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体一样共转染相关病毒293细胞,对报告基因行X-Gal染色,通过蓝染的细胞计算病毒滴度。结果:①重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体酶切鉴定及序列分析:聚合酶链反应产物经电泳证明大小正确,重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体酶经双酶切和测序鉴定证实将血小板源性生长因子B基因正确插入。②腺相关病毒293细胞转染过程中病毒颗粒的产生:腺相关病毒293细胞转染6h后培养基底部出现无数小黑色颗粒,为加入的转染复合物颗粒。24h后腺相关病毒293细胞部分变圆,随着病毒增殖,细胞成串浮起,出现细胞病理效应。48h后细胞变形,逐渐从壁上脱落。72h后培养基的颜色从红色变化为橙色或黄色。③病毒滴度检测:通过携带β-半乳糖苷酶基因的腺相关病毒感染细胞后X-gal染色计数,测定重组腺相关病毒滴度为1×1010 L-1。结论:成功构建表达人血小板源性生长因子B基因的重组腺相关病毒载体,为进一步研究血小板源性生长因子B基因治疗角膜病和相关细胞系与组织的增殖提供实验基础。

关键词：基因克隆重组腺相关病毒病毒滴度血小板源性生长因子

人血小板源性生长因子B基因转染对猫角膜内皮细胞增殖的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第33期12卷 6457-6461页

作者：刘相萍罗文娟隋爱华杨堃胡丽婷王传富青岛大学医学院附属医院分子生物研究室山东省青岛市266003 青岛大学医学院附属医院眼科山东省青岛市266003

背景：许多研究显示外源性的人血小板源性生长B基因的转染可促进创伤的愈合。目的：用重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体及重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒转染和感染猫角膜内皮细胞，观察其对猫角膜内皮细胞增殖的... 详细信息

背景：许多研究显示外源性的人血小板源性生长B基因的转染可促进创伤的愈合。目的：用重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体及重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒转染和感染猫角膜内皮细胞，观察其对猫角膜内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点：分组对照观察细胞基因工程研究，于2007—01／11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料：健康足月幼猫，体质量250-300g，雌雄不限。重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体及重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒由青岛大学医学院附属医院中心实验室自行构建。方法：常规显微镜下撕取内皮培养法，培养出原代猫角膜内皮细胞，传2代的细胞用于实验。脂质体法将重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体转染到猫角膜内皮细胞中，重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒采用直接感染法。实验分正常对照组、质粒对照组、重组质粒组、腺相关病毒对照组和重组腺相关病毒组。转基因24h和48h后收集细胞，Trizol试剂提取其总RNA。主要观察指标：通过荧光定量聚合酶链反应检测目的基因在细胞中的表达。四甲基偶氮唑盐法检测转基因48h后细胞的增殖活性。结果：①撕取内皮法可方便获取到原代猫角膜内皮细胞。②自行设计的针对目的基因及内参基因的探针引物经扩增后电泳验证及序列测定证明特异性高。③转基因24h和48h后荧光定量聚合酶链反应检测人血小板源性生长因子B基因mRNA发现：正常对照组、真核表达质粒对照组和腺相关病毒对照组间差异无显著性意义（P〉0．05）；重组人血小板源性生长因子B基因真核表达质粒转染组和重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒实验组与正常对照组相比差异显著（P〈0．05）。④四甲基偶氮唑盐法检测显示重组质粒转染和重组病毒感染均可促进细胞增殖，真核表达质粒对照组和腺相关病毒对照组与正常对照组相比差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体及重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒可在角膜内皮细胞中高效表达并具有促进细胞增殖的活性。

关键词：血小板源性生长因子转染内皮细胞角膜聚合酶链反应组织构建

基质重塑相关7(MXRA7)基因:一个非亲缘家族的一员

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第7期36卷 725-733页

作者：王宜强厦门大学附属翔安医院厦门大学医学中心福建厦门361101

本世纪初,有学者对1375份人类cDNA文库内的所有基因进行共表达分析,发现有8个转录本总是与基质重塑相关的基因(如胶原、基质金属蛋白酶、骨成型蛋白等)共表达,将它们命名为matrixremodeling associated 1~8(MXRA1~8,暂译“基质重塑相... 详细信息

本世纪初,有学者对1375份人类cDNA文库内的所有基因进行共表达分析,发现有8个转录本总是与基质重塑相关的基因(如胶原、基质金属蛋白酶、骨成型蛋白等)共表达,将它们命名为matrixremodeling associated 1~8(MXRA1~8,暂译“基质重塑相关1~8”基因),但它们彼此之间并无序列同源性。随后的研究确定了该家族中除MXRA7外其他7个成员的生物学功能,其中部分成员在研究中以其他别名出现,比如MXRA4即CD93或C1qRP。国内学者首先在关于角膜新生血管和角膜感染的研究中报道MXRA7表达的变化,继而在化学诱导的肝损伤模型、免疫介导的银屑病模型以及骨髓间充质干细胞向成骨细胞、成脂细胞分化模型中证实MXRA7的重要作用。基因组文库数据显示MXRA7在脊椎动物中保守存在,且在人和小鼠等模型生物中均可以产生多种蛋白异构体。大量公共数据库(比如GEO)中都包含MXRA7在不同实验体系中的表达水平和变化信息,众多基于高通量分析的文献也常在数据流水账中对MXRA7一笔带过。对这些资源进行汇总分析,提示MXRA7基因产物可分布于胞外基质、胞浆中甚至细胞核内,可参与胚胎发育、细胞分化、细胞代谢等多种生理过程,或参与神经系统、心血管系统、骨骼系统的病理过程,或参与肿瘤、白血病、免疫性疾病、感染等疾病的发病机制。本文对现有文献和公共数据进行综述,以期激发学界对MXRA7的关注。

关键词：基质重塑相关7 MXRA7 MXRA家族

去势雌干眼症模型鼠睑板腺上皮细胞凋亡及其组织损伤

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第29期11卷 5773-5776页

作者：林静王传富王利华刘薇青岛大学医学院附属医院眼科山东省青岛市266003

目的:建立去势雌干眼症动物模型并探讨干眼症模型鼠睑板腺上皮细胞凋亡、相关基因表达与组织损伤的关系。方法:实验于2003-07/2004-07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心及眼科病理室完成。①实验动物:清洁级健康成年Wistar雌性大白... 详细信息

目的:建立去势雌干眼症动物模型并探讨干眼症模型鼠睑板腺上皮细胞凋亡、相关基因表达与组织损伤的关系。方法:实验于2003-07/2004-07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心及眼科病理室完成。①实验动物:清洁级健康成年Wistar雌性大白鼠20只,体质量180～200g,无眼疾患。②实验分组:采用随机数字表法分为去势雌组及对照组,每组10只。③实验干预:去势雌组摘两侧卵巢。对照组按相同方法找到卵巢后不摘除。去势雌组分别于手术前和手术后2,3,4,5,6个月行Schirmer试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色检测。④去势雌组分别于术前、术后第1天、第9天心脏穿刺取血,采用化学发光法测量血清雌二醇水平(取血后有数只大鼠死亡,分别按上述步骤补齐);6个月后麻醉下处死两组动物,取睑板腺进行病理组织学观察,并采用免疫组织化学方法检测睑板腺上皮细胞中的Bax、bcl-2等相关基因蛋白的表达。结果:20只大鼠进入结果分析。①血清雌激素水平测定结果:去势雌组术后血清雌二醇水平明显低于手术前[(16.34±3.15),(43.57±2.81)ng/L,P角膜荧光素染色阳性,且随观察时间延长加重。③两组大鼠睑板腺光镜观察:病理学观察去势雌鼠睑板腺腺细胞萎缩,腺管扩展。④两组大鼠睑板腺上皮凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达:睑板腺上皮细胞中Bax阳性表达的细胞数明显高于对照组(P细胞数明显低于对照组(P细胞中Bax增加及bcl-2减少均与促进细胞凋亡有关,可能是导致组织学改变进而功能丧失引起干眼症的原因之一。

关键词：干眼病雌激素类细胞凋亡睑板腺组织构建

碱性成纤维细胞生长因子促进猫角膜内皮细胞的增殖作用

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第20期13卷 3911-3914页

作者：罗文娟林静王传富青岛大学医学院附属医院眼科山东省青岛市266001

背景:有实验报道,碱性成纤维细胞生长因子能改变角膜内皮细胞形状、促进其分裂和趋化,刺激活体和体外角膜内皮细胞的损伤修复。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对猫角膜内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点:细胞形态学观察实验,2005-... 详细信息

背景:有实验报道,碱性成纤维细胞生长因子能改变角膜内皮细胞形状、促进其分裂和趋化,刺激活体和体外角膜内皮细胞的损伤修复。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对猫角膜内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点:细胞形态学观察实验,2005-01/2006-12在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:家猫购买自青岛大学医学院附属医院动物实验中心。方法:猫角膜内皮细胞原代培养,行NSE免疫组织化学染色鉴定细胞的类型、纯度及生理特性。传1代后,分别在培养液中加1,10,100μL的碱性成纤维细胞生长因子,继续卵化1～5d。主要观察指标:加药后第1,3,5天分别利用MTT法测定在490nm处的吸光度值来判断角膜内皮细胞增殖情况;同时应用倒置相差显微镜观察细胞形态及透射电镜检测细胞超微结构。结果:碱性成纤维细胞生长因子作用组加药后1,3,5d,MTT法测定猫角膜内皮细胞在490nm处的吸光度值明显高于对照组,其中10μg/L作用组差别最显著。结论:碱性成纤维细胞生长因子作用能促进猫角膜内皮细胞的增殖,相对有效浓度为10μg/L。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子 MTT法角膜内皮细胞

手术切除眼表面鳞状细胞性肿物29例临床分析

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眼外伤职业眼病杂志 2003年第8期25卷 536-537页

作者：叶宇峰郑志刚谢亚男姜节凯浙江大学医学院第二附属医院眼科中心研究生310009 衢州市人民医院杭州师范学院医学院

目的　提高对眼表面鳞状细胞肿物的诊断和治疗水平。方法　对我院 1988年 5月～ 2 0 0 1年 10月手术切除的2 9例眼表面鳞状细胞肿物进行临床分析。结果　本组病例中男性多见 (69% ) ,病变好发于角膜缘部 (62 .1% ) ,可分为 :良性病变 (1... 详细信息

目的　提高对眼表面鳞状细胞肿物的诊断和治疗水平。方法　对我院 1988年 5月～ 2 0 0 1年 10月手术切除的2 9例眼表面鳞状细胞肿物进行临床分析。结果　本组病例中男性多见 (69% ) ,病变好发于角膜缘部 (62 .1% ) ,可分为 :良性病变 (14例 ,48.3 % ) ,包括鳞状细胞良性增生、鳞状细胞乳头状瘤 ;交界性病变 (6例 ,2 0 .7% ) ,主要是非典型性增生 ;恶性病变(9例 ,3 1.0 % ,) ,包括原位癌、浸润性鳞状细胞癌 3大类。手术完整切除是治疗的主要手段。结论　对眼表鳞状细胞肿物早期的正确诊断。

关键词：眼表面鳞状细胞性肿物诊断治疗外科手术临床分析病理临床特点