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西藏那曲市牦牛源B型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及基因组分析

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3105-3118页

作者：刘博华符汉宇王玉恒索朗斯珠牛家强包玉花李家奎徐业芬西藏农牧学院动物科学学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室林芝860000 西藏自治区兽医生物药品制造厂拉萨850000 华中农业大学动物医学院武汉430000

旨在对引起西藏牦牛呼吸道感染的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,明确病原菌的血清型、耐药性和致病性等生物学特性及基因组特征和遗传进化关系。本研究从西藏林芝、拉萨、那曲地区采集牦牛鼻咽拭子和组织病料498份,进行流行病学调查、细... 详细信息

旨在对引起西藏牦牛呼吸道感染的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,明确病原菌的血清型、耐药性和致病性等生物学特性及基因组特征和遗传进化关系。本研究从西藏林芝、拉萨、那曲地区采集牦牛鼻咽拭子和组织病料498份,进行流行病学调查、细菌学分离纯化、生化试验、PCR鉴定、K-B药敏试验、动物致病性试验和分离株全基因组测序,并通过Mauve软件和MEGA 7软件进行基因共线性和系统进化分析。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定,发现在西藏林芝、拉萨、那曲地区巴氏杆菌阳性率为2.61%,且从病死牦牛肺组织中分离出B型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm XZ01”株;药敏试验发现Pm XZ01株对头孢菌素类、喹诺酮类、羧苄西林、丁胺卡那、复方新诺明和氯霉素类抗生素敏感;动物试验发现感染Pm XZ01株的家兔(1.2×10^(8) CFU·mL^(-1))和小鼠(1×10^(7) CFU·mL^(-1))死亡率高达100%,说明在该浓度下Pm XZ01株具有较强的致病性和致死性。全基因组测序获得Pm XZ01株全基因组大小为2331787 bp,GC含量为40.47%,重复序列总长度为3266 bp;含有121个非编码RNA基因,包括59个tRNA基因,19个rRNA基因,43个ncRNA基因;2个假基因,5个基因岛,3个前噬菌体,68个碳水化合物活性酶基因;CARD注释分析发现1个PBP3抗性基因和2个EF-Tu抗性基因;VFDB和PHI-base注释分析发现101个毒力因子相关基因及663个表型突变基因等;共线性分析发现Pm XZ01株与猪源HB03株(CP003328.1)、HN07株(CP007040.1)和禽源P1702株(CP097616.1)共线性最好,而与牦牛源Tibet-Pm1株(CP072655.1)共线性较差;系统进化树分析发现Pm XZ01株与中国广东牛源GDZQ201401株(KP083466.1)属于同一分支,进化关系最近。本研究完成了西藏牦牛巴氏杆菌病的流行病学调查,以及牦牛源B性多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、生物学特性和全基因组测序分析,为探索西藏牦牛源B型多杀性巴氏杆菌病的流行规律和致病机制以及防控提供了参考。

关键词：牦牛 B型多杀性巴氏杆菌分离鉴定药物敏感性致病性基因组

牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国畜牧兽医 2024年第1期51卷 229-241页

作者：王冬经吴金措姆曾江勇西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所拉萨850009 省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室拉萨850009

【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过... 详细信息

【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果。【结果】从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8。分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性。生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期。动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性。分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%。【结论】本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性。研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌分离鉴定生长曲线动物致病性耐药性

牦牛源表皮葡萄球菌的分离鉴定和生物学特性研究

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中国兽医杂志 2024年第8期60卷 69-73页

作者：邹明昊马弘财王冰艺樊世杰吴庆侠曾江勇西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009 省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室西藏拉萨850009

为了解西藏拉萨地区牦牛源表皮葡萄球菌的携带情况,本试验随机采集了26份拉萨地区牦牛鼻拭子样品,采用细菌分离纯化和形态学鉴定、生化鉴定以及16S rDNA测序和同源性比对分析对分离菌株进行鉴定;选取19种常用抗生素,利用K-B药敏纸片扩... 详细信息

为了解西藏拉萨地区牦牛源表皮葡萄球菌的携带情况,本试验随机采集了26份拉萨地区牦牛鼻拭子样品,采用细菌分离纯化和形态学鉴定、生化鉴定以及16S rDNA测序和同源性比对分析对分离菌株进行鉴定;选取19种常用抗生素,利用K-B药敏纸片扩散法对分离菌株进行药敏试验;检测四环素类耐药基因tet(M)和tet(K),林可胺类、氯霉素类、截短侧耳素类、恶唑烷酮类、链阳霉素A类多药耐药基因cfr,β-内酰胺类耐药基因mecA和酰胺醇类耐药基因fexA五种耐药基因,研究分离菌株的耐药性;进行攻毒试验,检测分离菌株的致病性。结果显示,分离得到1株表皮葡萄球菌,命名为LZ-1;LZ-1对氨苄西林、青霉素和红霉素耐药,对多黏菌素B、头孢他啶和克林霉素中介,对头孢曲松、四环素和新霉素等13种抗生素敏感;共检测出tet(M)、tet(K)和mecA三种耐药基因;该菌株对小鼠致病性不强。结果表明,本试验分离出1株牦牛源表皮葡萄球菌,有一定的耐药性,可为其防治提供一定的参考。

关键词：表皮葡萄球菌致病性耐药性

4种藏药提取物与抗生素对产气荚膜梭菌生物被膜的影响

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 766-773页

作者：罗润波蔡重振黄家旗吴丹郭晓庆白吉格桑卓玛边巴央拉苏中华索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 农业农村部西藏包虫病防治重点实验室西藏林芝860000 西藏自治区动物疫病预防控制中心畜牧总站西藏拉萨850000

采用微量肉汤稀释法测定3种方法提取的4种藏药提取物及12种抗生素对(Clostridium perfringens,***)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘法检测藏药提取物与抗生素的联合抑菌效果,结晶紫染色法测定20株牦牛源产... 详细信息

采用微量肉汤稀释法测定3种方法提取的4种藏药提取物及12种抗生素对(Clostridium perfringens,***)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘法检测藏药提取物与抗生素的联合抑菌效果,结晶紫染色法测定20株牦牛源产气荚膜梭菌生物被膜(biofilm,BF)成膜能力,并检测藏药提取物与抗生素单用及联合使用对BF的抑制效果。结果显示:水提诃子对45.0%的***的MIC≤0.80g/L;波棱瓜子75%乙醇提取物及马兜铃甲醇提取物对20株***的MIC均≤0.40g/L;强力霉素和氨苄西林对19株***的MIC≤0.25mg/L,万古霉素的MIC均≤0.50mg/L;诃子75%乙醇提取物与庆大霉素联用抑菌效果较好,对70.0%的***产生协同作用;20株产气荚膜梭菌均具有BF成膜能力,55.0%的菌株呈强成膜能力;被检抗生素中多黏菌素B对BF的抑制作用最强,在1/4MIC处有强抑制效果;被检藏药提取物中马兜铃甲醇提取物与诃子75%乙醇提取物在1/2MIC处对BF具有强抑制效果;庆大霉素与诃子75%乙醇提取物联用及多黏菌素B与马兜铃甲醇提取物联用在两者均为1/4MIC时对BF仍有强抑制效果。结果表明,4种藏药提取物对***具有抑菌效果,对其BF的形成具有抑制作用,与抗生素联用能增强抑制效果,需进一步对藏药抑菌机制进行研究。

关键词：产气荚膜梭菌藏药 MIC 药敏试验 BF

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牛至油在鸡生产上的应用研究进展

西藏农业科技 2024年第2期46卷 79-81页

作者：鲜莉莉冯静西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009

牛至油是从牛至的全草中提取出来的具有提高动物机体抗氧化、抗寄生虫、抗炎、抗菌、免疫力和减少应激反应能力的挥发性食用植物精油,是农业农村部批准使用的一种纯正的中药药物添加剂。在鸡的饲料中添加牛至油可以提高鸡的生产性能,改... 详细信息

牛至油是从牛至的全草中提取出来的具有提高动物机体抗氧化、抗寄生虫、抗炎、抗菌、免疫力和减少应激反应能力的挥发性食用植物精油,是农业农村部批准使用的一种纯正的中药药物添加剂。在鸡的饲料中添加牛至油可以提高鸡的生产性能,改善鸡肉的品质,提高鸡的免疫力和抗应激能力。该文章综述了牛至油在鸡生产中的应用进展情况,为牛至油在鸡生产实际中的应用提供参考。

关键词：牛至油鸡饲料药物添加剂应用进展

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不同海拔藏绵羊肉质脂肪酸特征分析

中国农业科技导报 2024年第4期26卷 67-76页

作者：徐英任越沙玉柱蒲小宁郭新羽姚亮伟邵鹏阳王继卿李少斌刘秀甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃省草食动物生物技术重点实验室兰州730070 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所拉萨850000

为明确自然放牧条件下不同海拔藏绵羊肉质脂肪酸含量及组成特征,选择高(4 500 m)、中(3 500 m)、低(2 500 m)海拔藏绵羊各6只(3岁母羊),测定其背最长肌、前腿肌和后腿肌中的脂肪酸组成及含量。结果表明,不同海拔藏绵羊脂肪酸组成及含量... 详细信息

为明确自然放牧条件下不同海拔藏绵羊肉质脂肪酸含量及组成特征,选择高(4 500 m)、中(3 500 m)、低(2 500 m)海拔藏绵羊各6只(3岁母羊),测定其背最长肌、前腿肌和后腿肌中的脂肪酸组成及含量。结果表明,不同海拔藏绵羊脂肪酸组成及含量存在显著差异,其中,肉豆蔻酸(C14∶0)在低海拔藏绵羊不同肌肉组织中含量最低;油酸(C18∶1n9c)在低海拔藏绵羊不同肌肉组织中含量最高,并显著高于中、高海拔。不同肌肉组织中的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA)与饱和脂肪酸(saturated fatty acid, SFA)的比值(P/S)在0.168~0.504之间,其中高海拔藏绵羊背最长肌的P/S值显著高于中、低海拔。由此表明,藏绵羊不同肌肉组织中脂肪酸的组成除高海拔区背最长肌外,低海拔更具优势,即生长在低海拔的藏绵羊具有更好的食用价值及生产高档羊肉的潜力。

关键词：海拔藏绵羊肉品质脂肪酸

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4种藏药提取物对产气荚膜梭菌生物被膜及孢子形成的影响

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黑龙江畜牧兽医 2024年第12期 101-107,129页

作者：罗润波蔡重振黄家旗吴丹郭晓庆白吉格桑卓玛边巴央拉索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 农业农村部西藏包虫病防治重点实验室西藏林芝860000 西藏自治区动物疫病预防控制中心拉萨850000

为了探究4种藏药提取物对产气荚膜梭菌生物被膜及孢子形成的影响,试验利用银染法鉴定产气荚膜梭菌Nyingchi-C20株的生物被膜,采用结晶紫法检测生物被膜形成能力,采用微量肉汤稀释法检测4种藏药提取物的最小抑菌浓度(MIC)。选取抑菌效果... 详细信息

为了探究4种藏药提取物对产气荚膜梭菌生物被膜及孢子形成的影响,试验利用银染法鉴定产气荚膜梭菌Nyingchi-C20株的生物被膜,采用结晶紫法检测生物被膜形成能力,采用微量肉汤稀释法检测4种藏药提取物的最小抑菌浓度(MIC)。选取抑菌效果较好的藏药提取物稀释后分为6组,分别为液体硫乙醇酸盐培养基(TSB)组、1/8 MIC组、1/4 MIC组、1/2 MIC组、MIC组和抗生素万古霉素MIC(VAN)组,每组接种菌悬液300μL后加入各组药液至30 mL,培养后取各组生物被膜悬液,采用实时荧光定量PCR检测其对生物被膜形成及孢子形成相关基因表达的影响。结果表明:马兜铃甲醇提取物及诃子、波棱瓜子、白豆蔻75%乙醇提取物MIC分别为0.2 mg/mL、0.8 mg/mL、0.4 mg/mL、1.6 mg/mL。与TSB组相比,马兜铃甲醇提取物各MIC组agrB基因与htrA基因(除1/8 MIC组和1/4 MIC组外)的表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),1/2 MIC组和MIC组sigK基因的表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);诃子75%乙醇提取物1/8MIC组(除ribD、codY、spo0A基因外)、1/4MIC组(除ribD基因外)、1/2MIC组、MIC组agrB、htrA、abrB、ribD、codY、spo0A基因表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);波棱瓜子75%乙醇提取物1/4 MIC组、1/2 MIC组及MIC组agrB基因相对表达水平极显著降低(P<0.01),1/8MIC组、1/4 MIC组、1/2 MIC组及MIC组minD基因相对表达水平极显著升高(P<0.01);白豆蔻75%乙醇提取物1/2 MIC组argG、ribD基因及MIC组argG、ribD、ribE基因相对表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。说明4种藏药提取物对Nyingchi-C20株具一定的抑制作用,对其生物被膜及孢子形成相关基因表达有不同程度的影响。

关键词：产气荚膜梭菌藏药生物被膜孢子基因

西藏牦牛源牛支原体T10株全基因组测序及其序列分析

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2154-2167页

作者：罗婷韩徐业芬蔡林索朗斯珠徐晋花牛家强西藏农牧学院动物科学学院、西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室林芝860000

旨在进一步完善牛支原体全基因组数据库,阐明其生物学功能和遗传进化关系,对西藏牦牛源牛支原体T10株进行了全基因组测序及其序列分析。使用Nanopore和Illumina PE150测序平台对T10株进行全基因组序列测定,利用生物信息学对其进行基因... 详细信息

旨在进一步完善牛支原体全基因组数据库,阐明其生物学功能和遗传进化关系,对西藏牦牛源牛支原体T10株进行了全基因组测序及其序列分析。使用Nanopore和Illumina PE150测序平台对T10株进行全基因组序列测定,利用生物信息学对其进行基因组特征分析和利用基因系统进化树与国内外分离株进行遗传进化关系比对。基因测序结果显示,T10株全基因组大小为987 812 bp, GC含量为29.27%,预测到822个编码基因,编码基因总长度为709 129 bp;通过功能数据库注释结果显示,注释到与膜转运蛋白相关基因22个,碳水化合物酶相关基因7个、糖基转移酶类相关基因4个,分泌蛋白基因相关43个、T3SS效应蛋白相关基因51个,病原与宿主互作相关基因28个,细菌毒力相关基因14个,抗性相关基因10个;通过比较基因组学分析结果显示,T10与08M、CQ-W70、Hubei-1、Ningxia-1和PG45均存在氨基酸突变和基因片段的插入或缺失,以及基因家族数量的差异,其中基因家族数量差异在8~32个。通过遗传进化关系分析结果显示:T10与HB0801、16M、Hubei-1、CQ-W70、NM2012、Ningxia-1、08M、JF4278、KG4397和PG45均在同一分支,但与PG1、PG2处于不同分支,其中与HB0801亲缘关系最近,与PG45亲缘关系较远。本研究不仅完善了牛支原体全基因组数据库,详细阐述了与致病性相关基因,还充分阐明了T10株以及与国内外其他牛支原体之间的遗传进化关系,明确了T10株基本基因组信息以及与国内外菌株亲缘关系,为后续进行致病机制以及疫苗研究提供理论依据。

关键词：牦牛牛支原体全基因组测序基因功能注释比较基因组

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西藏自治区动物疫病防控工作的思考和建议

西藏农业科技 2024年第3期46卷 104-107页

作者：苏中华王冬经林少卿西藏自治区动物疫病预防控制中心西藏拉萨850000 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009

为切实加强西藏自治区动物疫病防控工作,结合当前西藏自治区动物疫病防控工作中存在的一些问题进行思考,提出强化西藏自治区动物疫病防控工作的建议,以期为推动西藏自治区动物疫病防控事业高质量发展提供参考。

关键词：动物疫病防控建议