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高糖与胰岛素对人诱导多潜能干细胞来源的心肌细胞电生理特性的影响

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中南大学学报（医学版） 2022年第5期47卷 610-618页

作者：魏峰张玉顺王星烨霍建华西安交通大学第一附属医院结构性心脏病科西安710061 环境与疾病相关基因教育部重点实验室西安710061 陕西省分子心脏病学重点实验室西安710061 西安交通大学第一附属医院心血管内科西安710061

目的:糖尿病患者发生心律失常的风险增加,但高血糖及胰岛素治疗对人心肌细胞电生理特性的影响尚未完全明确。本研究探讨高糖与胰岛素对人诱导多潜能干细胞来源的心肌细胞(human induced pluripotent stem cells derived cardiomyocytes,... 详细信息

目的:糖尿病患者发生心律失常的风险增加,但高血糖及胰岛素治疗对人心肌细胞电生理特性的影响尚未完全明确。本研究探讨高糖与胰岛素对人诱导多潜能干细胞来源的心肌细胞(human induced pluripotent stem cells derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs)电生理特性及诱发心律失常现象的影响。方法:采用流式细胞术分析健康个体来源的hiPSC-CMs纯度。将hiPSC-CMs分为3组:对照组(NM组,培养基含5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组,培养基含15 mmol/L葡萄糖)和高糖+胰岛素组(HG+INS组,培养基含15 mmol/L葡萄糖+100 mg/L胰岛素),各组干预时间均为4 d。采用微电极阵列技术检测3组hiPSC-CMs在干预前后的电生理改变,包括跳动频率(beating rate,BR)、阈电位时程[(field potential duration,FPD),类似于心电图QT间期]、FPDc(经BR校正的FPD)、锋电位与传导速率(conduction velocity,CV);此外,采用索他洛尔干预各组hiPSC-CMs,观察其诱发FPDc延长及心律失常现象发生的情况。结果:hiPSC-CMs中心肌标志物肌钙蛋白T呈高表达,其纯度为99.06%。与NM组相比,HG组hiPSC-CMs的BR增快(9.14±0.8)%(P0.05)。药物诱发实验发现10μmol/L索他洛尔可使HG组各培养孔hiPSC-CMs诱发出心律失常现象。高糖+胰岛素处理后,HG+INS组BR相对HG组增快(8.3±0.5)%(P0.05);药物诱导实验发现10μmol/L索他洛尔可使HG+INS组的FPDc延长(78.9±11.6)%,但各孔均未诱发出心律失常现象。结论:高糖可诱导hiPSC-CMs的FPD/FPDc延长,并增加其药物诱发心律失常现象的风险;胰岛素可缩短高糖诱导的FPD/FPDc延长,并能降低高糖作用下药物诱发的心律失常现象。这为糖尿病患者心肌的电生理改变及胰岛素治疗对其电生理的影响提供了实验依据;进一步的机制研究将可能为获得性甚至遗传性长QT综合征的治疗提供新的思路与方法。

关键词：高糖胰岛素人诱导多潜能干细胞心肌细胞电生理学

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中MaxiK通道α-亚单位的表达(英文)

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四川大学学报（医学版） 2006年第2期37卷 171-175页

作者：雷新军马爱群席雨涛张葳姚艳杜媛王亭忠耿涛西安交通大学医学院第一附属医院心内科离子通道病研究室环境与疾病相关基因教育部重点实验室西安7100611

目的研究人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中MaxiK通道α-亚单位的表达。方法采用密度梯度离心法从男性健康志愿者外周血中分离单核细胞,经培养后分化为巨噬细胞,并通过加氧化型低密度脂蛋白(OxLDL),建立人巨噬细胞源性泡沫细... 详细信息

目的研究人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中MaxiK通道α-亚单位的表达。方法采用密度梯度离心法从男性健康志愿者外周血中分离单核细胞,经培养后分化为巨噬细胞,并通过加氧化型低密度脂蛋白(OxLDL),建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型,采用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究MaxiK通道α-亚单位的表达。结果巨噬细胞同30mg/LOxLDL孵育60h后,细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)显著增加,并且CE/TC从(14.437±6.781)%提高到(57.946±3.507)%。同时,MaxiK通道α-亚单位表达被下调,但同巨噬细胞相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论人单核细胞源性巨噬细胞同30mg/LOxLDL孵育60h后可分化为泡沫细胞,但MaxiK通道α-亚单位的表达无明显改变。

关键词：离子通道胆固醇代谢细胞分化动脉粥样硬化

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中Kir2.1通道的表达(英文)

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第一军医大学学报 2005年第12期25卷 1461-1467页

作者：雷新军马爱群席雨涛张葳姚艳杜媛西安交通大学医学院第一附属医院心内科离子通道病研究室环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院离子通道病研究室环境与疾病相关基因教育部重点实验室儿科室陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院离子通道病研究室环境与疾病相关基因教育部重点实验室呼吸科陕西西安710061

目的Kir2.1通道是控制骨髓源性巨噬细胞增殖、活化和凋亡的重要离子通道之一, 并且还参与细胞分化。本研究观察 Kir2.1通道mRNA及蛋白在人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达。方法采用密度梯度离心加贴壁黏附法,从男性... 详细信息

目的Kir2.1通道是控制骨髓源性巨噬细胞增殖、活化和凋亡的重要离子通道之一, 并且还参与细胞分化。本研究观察 Kir2.1通道mRNA及蛋白在人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达。方法采用密度梯度离心加贴壁黏附法,从男性健康志愿者的外周血中分离单核细胞, 经5d培养后分化为巨噬细胞。在建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型的基础上, 采用RT-PCR, 蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究 Kir2.1 通道的表达。结果将巨噬细胞同 30mg/L氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)于 37 ℃孵育 60h后, 细胞体积增大, 并有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内, 细胞内的总胆固醇(TC) 、游离胆固醇(FC) 及胆固醇酯(CE)的含量分别从(54.79±28.304) mg/g、(47.968±26.787) mg/g 和(6.822±3.437) mg/g 增加至(229.775±57.453) mg/g、(96.241±24.003) mg/g 和(133.535±36.292)mg/g,CE/TC从(14.437±6.781)%提高到[(57.946±3.507)%(n=7, P通道 mRNA 的扩增量在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间无显著差异[(59.074±10.566)%vs(46.98±12.527)%,n=5,P>0.05]; 同样, Kir2.1 通道蛋白在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间亦无显著差异 [(60.527±18.621)%vs(50.243±11.583)%,n=6,P>0.05]。结论人单核细胞源性巨噬细胞同30mg/LOxLDL孵育 60h 后可分化为泡沫细胞, 但 Kir2.1 通道的表达无明显改变。

关键词：离子通道胆固醇代谢细胞分化动脉粥样硬化

兔LQT2模型心室肌复极化的性别差异(英文)

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生理学报 2005年第6期57卷 749-754页

作者：刘丽平杨琳赵朝陈前西安交通大学医学院第一附属医院心血管内科环境与疾病相关基因教育部重点实验室心血管离子通道病研究室西安710061

小研究旨在探讨长QT综合征(long QT syndromes,LQTS)室性心律失常发生的性别差异及其电生理机制,初步观察了不同性别兔LQT2模型左心室原已存在的电生理异质性和心室复极动力学的特征。实验分为3组,正常组以标准台氏液灌流; LQT2模型组... 详细信息

小研究旨在探讨长QT综合征(long QT syndromes,LQTS)室性心律失常发生的性别差异及其电生理机制,初步观察了不同性别兔LQT2模型左心室原已存在的电生理异质性和心室复极动力学的特征。实验分为3组,正常组以标准台氏液灌流; LQT2模型组给了含100μmol／dl-sotalol的台式液灌流;LQT2模型+低钾组给予含3．0mmol／L KCl、100μmol／L dl-sotalol的台式液灌流。采用冠状动脉旋支灌注兔左室心肌楔形组织块标本,应用浮置玻璃微电极记录技术进行记录。给予基础刺激周长 (basic cycle length,BCL)为500、1000和2000 ms的S1刺激,同步记录心室肌内膜侧、外膜侧细胞动作电位,并记录跨壁心电图;在BCL为500和1000ms时加用S2程序刺激以记录动作电位时程(action potential duration,APD)恢复曲线。研究发现: 在不同刺激频率时,3组实验雌兔心肌细胞的跨壁复极化离散(transmural dispersion of repolarization,TDR)、APD恢复曲线斜率均大于雄兔,有显著性差异(P室性心动过速(torsade de pointes,TdP);LQT2模型+低钾组雌兔7例中5例诱发TdP,雄兔7例中2例诱发TdP,有显著性差异(P<0．05)。结果提示: LQT2模型心肌原已存在的电生理异质性和动态异质性均有明显的性别差异,并呈频率依赖性。在LQT2模型中,TDR以及 APD恢复曲线斜率的增大可能是雌性动物较雄性更易发生尖端扭转性心律失常的原因。

关键词：长QT综合征性别动作电位尖端扭转型室性心功过速

DAB2IP在膀胱移行细胞癌组织中的表达及与临床预后的相关性研究

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四川大学学报（医学版） 2014年第4期45卷 591-594页

作者：朱建宁吴开杰管振锋刘丽霞宁忠运周建成王新阳范晋海西安交通大学第一附属医院泌尿外科西安710061 西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室--肿瘤研究室西安710061

目的探讨DAB2IP在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder,TCCB)组织中的表达及与膀胱癌患者预后的相关性。方法收集79例膀胱移行细胞癌组织和11例正常膀胱组织,用免疫组化方法检测DAB2IP的表达,分析染色结果与肿瘤病... 详细信息

目的探讨DAB2IP在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder,TCCB)组织中的表达及与膀胱癌患者预后的相关性。方法收集79例膀胱移行细胞癌组织和11例正常膀胱组织,用免疫组化方法检测DAB2IP的表达,分析染色结果与肿瘤病理分级、临床分期、淋巴结转移和患者性别、年龄及术后3年生存率之间的关系。结果膀胱移行细胞癌中DAB2IP表达量低于正常膀胱上皮,而在高级别、浸润性或转移性癌组织中DAB2IP的阳性表达率及评分低于低级别、浅表性、非转移性癌组织,差异均有统计学意义(P一种重要的抑制分子,有望成为TCCB基因治疗的新靶点。

关键词：膀胱癌 DAB2IP 免疫组化 3年生存率

细胞接触诱导骨髓间充质干细胞获得窦房结细胞表型的初步研究

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中华心血管病杂志 2009年第1期37卷 73-76页

作者：管思彬马爱群蒋文慧上海徐汇区中心医院心血管内科 200031 西安交通大学第一附属医院离子通道病研究室环境与疾病相关基因教育部重点实验室

目的通过建立体外骨髓间充质干细胞（BMSCs）与纯化培养的乳鼠窦房结细胞共培养体系，探讨窦房结微环境对BMSCs分化的诱导作用。方法自新生乳鼠的心脏分离窦房结细胞，并差速贴壁纯化培养，免疫荧光检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通... 详细信息

目的通过建立体外骨髓间充质干细胞（BMSCs）与纯化培养的乳鼠窦房结细胞共培养体系，探讨窦房结微环境对BMSCs分化的诱导作用。方法自新生乳鼠的心脏分离窦房结细胞，并差速贴壁纯化培养，免疫荧光检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4（HCN4）和缝隙连接蛋白45（Cx45）的表达。自成年大鼠的骨髓分离BMSCs，传2代后，用脂质体介导pEGFP-N1转染标记BMSCs，再与纯化培养的窦房结细胞以1：5比例进行直接接触共培养，并用窦房结细胞条件培养液对转染后的BMSCs进行培养作为对照。1周后应用免疫荧光检测BMSCs的HCN4和Cx45表达。结果接触共培养组中，可见部分表达绿色荧光蛋白的BMSCs同时表达HCN4和Cx45，而条件液培养组中未见HCN4和Cx45的表达。结论直接接触共培养体系可诱导BMSCs初步分化为窦房结样细胞。

关键词：干细胞窦房结临床研究细胞培养

慢性盐负荷对血压正常盐敏感者血管内皮标志物的影响

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第三军医大学学报 2009年第17期31卷 1693-1695页

作者：朱丹军王永兴刘华胜薛小临刘治全西安交通大学医学院第一附属医院心内科环境与疾病相关基因教育部重点实验室离子通道病研究室西安710061

目的观察慢性盐负荷对血压正常盐敏感者的血管内皮标志物的影响。方法以29例血压正常健康自愿者为研究对象,采用慢性盐负荷试验确定血压盐敏感性,观察盐敏感者和盐不敏感者在平衡饮食期、高盐饮食期及低盐饮食期的24 h动态血压、血浆vW... 详细信息

目的观察慢性盐负荷对血压正常盐敏感者的血管内皮标志物的影响。方法以29例血压正常健康自愿者为研究对象,采用慢性盐负荷试验确定血压盐敏感性,观察盐敏感者和盐不敏感者在平衡饮食期、高盐饮食期及低盐饮食期的24 h动态血压、血浆vWF、血、尿一氧化氮(NO)及内皮素-1(ET-1)等血管内皮标志物的变化,综合评价慢性盐负荷对血压正常盐敏感者血管内皮标志物的影响。结果29例血压正常健康自愿者中,检出盐敏感者(SS)11例(37.9%),盐不敏感者(SR)18例;SS组的昼夜平均动脉压差值较SR组显著缩小,高盐负荷后血压显著升高;高盐饮食后,SS组血浆vWF水平显著升高,血、尿NO含量显著减少,而SR组在盐负荷前后变化不著;血浆ET-1在盐负荷前后SS组与SR组之间比较无显著差异。结论部分血压正常个体表现为血压盐敏感性且存在显著的血压昼夜节律性改变;血压正常盐敏感者在高盐负荷时血浆vWF显著升高而血、尿NO含量显著减少,提示血压正常盐敏感者存在高盐介导的血管内皮功能异常。

关键词：盐血压内皮血管性血友病因子一氧化氮

先天性长QT综合征HERG基因A561V突变的功能研究

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中华心血管病杂志 2007年第2期35卷 143-146页

作者：李宇崔长琮赵永辉薛小临张爱峰廉姜芳黄辰西安交通大学第一医院心内科 710061 西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室

目的在收集的一个先天性长 QT 综合征家系中发现 HERG 基因 A561V 突变,探讨HERG 基因 A561V 突变在真核细胞中的功能表达。方法采用克隆载体快速 PCR 法及限制性内切酶法将突变体克隆到真核表达载体 pcDNA3中,用 Superfect 转染试剂将... 详细信息

目的在收集的一个先天性长 QT 综合征家系中发现 HERG 基因 A561V 突变,探讨HERG 基因 A561V 突变在真核细胞中的功能表达。方法采用克隆载体快速 PCR 法及限制性内切酶法将突变体克隆到真核表达载体 pcDNA3中,用 Superfect 转染试剂将野生型及突变型 HERG 质粒与荧光载体 pRK5-GFP 共转染至 HEK293细胞,用免疫荧光化学法及蛋白免疫印迹法检测蛋白质表达,用全细胞膜片钳法检测 HERG 通道的电流表达。结果构建的突变体经 DNA 直接测序示HERG 基因 cDNAl682位点碱基 C 变为 T,突变体蛋白质位于细胞膜上及细胞质中,野生型通道蛋白显示135000和155000的2条蛋白条带,而杂合型和突变型通道蛋白仅有135000的1条蛋白条带,野生型通道记录到尾电流而杂合型通道及突变型通道均未检测到电流表达。结论成功构建并表达了 HERG 基因 A561V 突变的功能,中国患者具有与欧美患者相同的 HERG 基因突变热点。

关键词： QT延长综合征基因突变

ABCA3基因定点突变及其在A549细胞株中的表达

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中国当代儿科杂志 2015年第4期17卷 395-399页

作者：王娟娟李媛陈春燕胡培静耿立蒙周熙惠西安交通大学医学院第一附属医院新生儿科/环境与疾病相关基因教育部重点实验室离子通道研究病室陕西西安710061

目的探讨构建与新生儿呼吸窘迫综合征相关的ABCA3基因突变体c.875A>T(p.E292V)和c.2169G>A(p.M723I)及其绿色荧光表达载体的方法,并观察其在人肺腺癌(A549)细胞株中的表达。方法应用重叠延伸PCR法构建ABCA3基因的两个突变体E292V和M723I... 详细信息

目的探讨构建与新生儿呼吸窘迫综合征相关的ABCA3基因突变体c.875A>T(p.E292V)和c.2169G>A(p.M723I)及其绿色荧光表达载体的方法,并观察其在人肺腺癌(A549)细胞株中的表达。方法应用重叠延伸PCR法构建ABCA3基因的两个突变体E292V和M723I,运用限制性酶切连接等技术构建两个突变体的绿色荧光表达载体,使用脂质体Lipofectamine 2000将构建的载体瞬时转染到A549细胞株,使其在体外表达,在荧光显微镜下观察转染效率,利用激光共聚焦显微镜观察重组子的表达情况。结果构建的两个突变体E292V和M723I经测序分别证实ABCA3基因c DNA第875位碱基A变为T和第2169位碱基G变为A,重组子转染A549细胞后,野生型和突变型基因的蛋白质都在细胞内成功表达。结论成功构建了ABCA3基因野生型及突变型的绿色荧光表达载体,并使其在A549细胞表达,为后续实验提供了条件。

关键词： ABCA3 定点突变真核表达人肺腺癌细胞株