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T细胞受体Vβ基因在自身免疫性甲状腺病病变组织中的表达及意义

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中华病理学杂志 2001年第4期30卷 268-272页

作者：张进安王一理雒文田施秉银朱本章司履生西安交通大学生命科学院免疫病理学研究室西安交通大学生命科学院第一医院内分泌科 710061

目的　研究国人Graves病、桥本甲状腺炎甲状腺内浸润T淋巴细胞的T细胞受体(TCR)Vβ基因家族的利用 ,发现优势利用基因 ,为阐明自身免疫性甲状腺病 (AITD)的T细胞克隆的分布模式及防治提供依据。方法　穿刺或手术取得 12例Graves病、15... 详细信息

目的　研究国人Graves病、桥本甲状腺炎甲状腺内浸润T淋巴细胞的T细胞受体(TCR)Vβ基因家族的利用 ,发现优势利用基因 ,为阐明自身免疫性甲状腺病 (AITD)的T细胞克隆的分布模式及防治提供依据。方法　穿刺或手术取得 12例Graves病、15例桥本甲状腺炎病人的甲状腺组织 ,提取RNA。抽取 5例Graves病、5例桥本甲状腺炎和 7例正常人之外周静脉血 ,分离外周血淋巴细胞 (PBL) ,提取RNA。以 2 4个Vβ基因家族特异的寡核苷酸为上游引物 ,以一个Cβ特异的寡核苷酸为下游引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 ,比较各个Vβ基因家族的表达。结果　Graves病及桥本甲状腺炎患者甲状腺内TCRVβ基因家族的平均表达阳性数分别为 ( 5 3± 1 2 )个 ,( 13 4± 3 0 )个 ;而且Vβ3、Vβ5和Vβ8的表达在Graves病更常见。以上两组病人及正常对照PBL之TCRVβ基因家族的平均表达分别为 ( 2 3 0± 1 0 )个 ,( 2 2 2± 1 3 )个和 ( 2 2 4± 1 7)个。结论　Graves病甲状腺内淋巴细胞的TCRVβ基因显示明显的限制性利用 ,某些Vβ家族的使用率更高 ,提示寡克隆扩增的甲状腺抗原特异性T细胞可能与Graves病的发病有关 ,这可能有重要的治疗意义。相反 ,桥本甲状腺炎病变内TCRVβ利用的限制性较差或无限制性 ,可能与随疾病进展 ,非特异性免?

关键词： Graves病甲状腺炎自身免疫性基因 T细胞受体β

Recombinant human B7.2 IgV-like domain expressed in bacteria maintains its co-stimulatory activity in vitro

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Chinese Medical Journal 2002年第7期115卷 1053-1057,152页

作者：闫晓彩马军郑瑾来宝长耿宜萍王一理司履生西安交通大学医学院免疫病理学研究室西安710061

OBJECTIVE: To investigate which of the two immunoglobulin (Ig)-like domains, the immunoglobulin variable region homologous domain IgV (hB7.2 IgV) and the immunoglobulin constant region homologous domain IgC (hB7.2 IgC) on the human B7.2 molecule contains receptor binding sites, and to evaluate whether the B7.2 protein expressed in bacteria has biological activity in vitro. METHODS: Three fragments of hB7.2 IgV,hB7.2 IgC and the complete extracellular region of human B7.2 containing both the IgV and IgC domains,hB7.2 Ig (V+C), were amplified by PCR and subcloned into pGEM-Teasy. Three recombinants,pGEX-4T-3-hB7.2 IgV,pGEX-4T-3-hB7.2 IgC and pGEX-4T-3-hB7.2 Ig (V+C), were generated by cloning the fragments into a prokaryote expression plasmid (pGEX-4T-3) and transformed into the host strain E. coli DH5alpha. The relevant target fusion proteins consisting of GST and hB7.2 IgV,hB7.2 IgC and hB7.2 Ig (V+C), were identified by SDS-PAGE and Western blotting. With the presence of the first signal imitated by anti-CD3 antibody, T cell activation was observed by exposing purified T lymphocytes to each soluble form of the three bacterially-produced human B7.2 fusion proteins by [(3)H]-TdR incorporation. RESULTS: Three recombinant fusion proteins of human B7.2, GST-hB7.2 IgV, GST-hB7.2 IgC and GST-hB7.2 Ig (V+C) were produced and detected in inclusion body form from engineered bacteria. With the first signal present,T lymphocytes proliferated when co-stimulated by bacterially-produced either GST-hB7.2 Ig (V+C) or GST-hB7.2 IgV fusion proteins, but not by GST-hB7.2 IgC. CONCLUSIONS: Functional human B7.2 fusion protein can be produced in bacteria. The IgV-like domain of human B7.2 is sufficient for B7.2 to interact with its counter-receptors and co-stimulate T lymphocytes.

关键词： Antigens, CD Antigens, CD86 Escherichia coli Humans Immunoglobulin Constant Regions Immunoglobulin Variable Region Lymphocyte Activation Membrane Glycoproteins Plasmids Recombinant Fusion Proteins Research Support, Non-U.S. Gov't T-Lymphocytes

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磷酸化、乙酰化修饰对p53功能的影响

中华病理学杂志 2002年第6期31卷 551-553页

作者：李瑶琛孔令洪王一理司履生西安交通大学生命学院免疫病理研究室 710061

在人类基因组解码之后，将是对基因所编码蛋白质的研究。收白质在成熟的过程中乃至成熟之后需要经过一毓的修饰如甲基化、磷酸化、乙酰化、糖基化等使蛋白质的构象发生一定的变化，方可执行特定的功能。如组蛋白的乙酰化、一些转录因子... 详细信息

在人类基因组解码之后，将是对基因所编码蛋白质的研究。收白质在成熟的过程中乃至成熟之后需要经过一毓的修饰如甲基化、磷酸化、乙酰化、糖基化等使蛋白质的构象发生一定的变化，方可执行特定的功能。如组蛋白的乙酰化、一些转录因子的磷酸化或乙酰化等~[1]。因此，仅仅从基因的角度来研究并预测蛋白质的功能是远远不够的p53是参与细胞周期调节、控制细胞增生、凋亡的一个中枢性调节分子，一直深受细胞生物学家和肿瘤生物学家的关注。以往的大量研究表明人类肿瘤半数以上存在p53基因突变，认为p53基因突变失活是导致这些细胞癌变的根本所在。但是实验发现，尚有众多人类肿瘤中没有p53基因突变，却有p53功能性灭活。研究还发现：转录因子p53同其他蛋白质一样，翻译后有极为丰富的加工与修饰，p53的这种修饰是调节p53活性与稳定性的重要机制~[2]。可见，翻译后修饰对p53功能至关重要，更可能与某些肿瘤的发生密切相关。因此，对p53翻译后修饰与功能的关系作一综述。

关键词：磷酸化乙酰化修饰 p53 功能结核活化

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现代免疫细胞化学和荧光图像技术

中华病理学杂志 2004年第5期33卷 473-475页

作者：司履生西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室 710061

近20年来,生命科学、计算机科学、物理学、化学、生物信息学取得了巨大进步.人们已经可以表达、合成和突变体内的各种蛋白及其片段;已经可以随心所欲的制备出数以万计的抗各种天然蛋白、突变蛋白、翻译后经各种修饰(磷酸化、甲基化、乙... 详细信息

近20年来,生命科学、计算机科学、物理学、化学、生物信息学取得了巨大进步.人们已经可以表达、合成和突变体内的各种蛋白及其片段;已经可以随心所欲的制备出数以万计的抗各种天然蛋白、突变蛋白、翻译后经各种修饰(磷酸化、甲基化、乙酰化等)的蛋白、各种蛋白亚区、不同基序的抗体以及标记不同的细胞器的特异性抗体;已经可以合成许多稳定性好,不易淬灭,不受pH环境影响,水溶性好,发射光谱特异,适于多重标记的有机荧光色素,如分子探针Alexa Fluor系列[1]、Amersh的Cy系列[2]以及其他活体荧光标记分子;如FIAsH,ReAsH等二砷荧光色素[3]和O6-苯基鸟嘌呤荧光素(BGFL)[4],纳米量子颗粒(quantum dot)[5, 6]和荧光蛋白(GFP)[7]等;共聚焦扫描显微镜、全内反射荧光显微镜[8,9]及其他三维、四维荧光显微镜[10,11]和荧光图像数字图像系统的出现,又大大提高了对荧光信号的感知水平,即可感知细胞内低丰度(甚至单个分子)的标记荧光,其时间分辨率已可达微秒水平,其空间分辨率亦可与电镜匹敌[12]。

关键词：蛋白免疫细胞化学白及巨大体内特异性抗体表达细胞器生物信息学生命科学

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RNA研究进展

中华病理学杂志 2003年第3期32卷 276-278页

作者：杨笑菡胡劲松杨章民王一理司履生西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室 710061

近10年来,人们对RNA领域有了更多更新的研究发现,RNA早已不再局限于编译蛋白质,它还影响着生物体的基因表达、细胞周期及个体发育过程.小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)和非编码RNA(non-coding RNA, ncRNA)对生物体的生命活动... 详细信息

近10年来,人们对RNA领域有了更多更新的研究发现,RNA早已不再局限于编译蛋白质,它还影响着生物体的基因表达、细胞周期及个体发育过程.小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)和非编码RNA(non-coding RNA, ncRNA)对生物体的生命活动有着重要的调控作用.siRNA引起RNA干扰(RNA interference, RNAi),ncRNA在包括转录调节、染色体复制、RNA剪切及加工、维护mRNA稳定和翻译,甚至在蛋白降解和转运等很多方面发挥作用.鉴于它们在生物体中的重要意义,目前人们正致力于研究它们的功能和机制以及寻找更多的此类RNA.

关键词： RNA 研究进展 siRNA 作用机制

小鼠抗人T淋巴细胞表面抗原噬菌体抗体库的构建及筛选

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西安医科大学学报 2002年第3期23卷 239-241,282页

作者：王剑利王一理司履生西安交通大学生命科学院免疫病理研究室西安710061

目的　构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法　以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以... 详细信息

目的　构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法　以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以人T淋巴细胞为靶抗原 ,对该库进行了 3轮淘洗 ,ELISA方法鉴定噬菌体抗体。结果　成功构建了最大实际库容量为 1 .75× 1 0 6的小鼠抗人静息T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库和小鼠抗人活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库。结论　所构建的抗体库可进一步用于对T淋巴细胞表面蛋白抗原的差异显示分析及构建基因工程抗体。

关键词： T淋巴细胞表面抗原抗体库噬菌体展示单链Fv抗体 T淋巴细胞噬菌体抗体库技术

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我国实验病理学的回顾与展望

中华病理学杂志 2005年第8期34卷 482-485页

作者：司履生西安交通大学生命学院免疫病理学研究室本刊第五六七届编委710061

创刊以来的50年,不仅见证了我国实验病理学的艰苦奋斗历程,也成为我国实验病理学走向世界的重要窗口。

病理学杂志>创刊以来的50年,不仅见证了我国实验病理学的艰苦奋斗历程,也成为我国实验病理学走向世界的重要窗口。

关键词：实验病理学《中华病理学杂志》发生发展规律艰苦奋斗走向世界研究队伍研究工作实验手段疾病病因

共刺激分子B7-2与HPV16L1联合基因免疫小鼠的免疫应答

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第5期22卷 515-517页

作者：孙向乐宋建明司履生王一理郭建芬刘天菊交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室西安710061

目的　研究共刺激分子B7 2和HPV16L1重组质粒免疫小鼠的体液免疫反应。方法　用pcDNA Ll和PLXDmB7 2质粒共同肌注免疫C5 7BL 6小鼠 ,ELISA方法检测其血清抗体 ,红细胞凝集抑制实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验检测其抗体中和活性。结... 详细信息

目的　研究共刺激分子B7 2和HPV16L1重组质粒免疫小鼠的体液免疫反应。方法　用pcDNA Ll和PLXDmB7 2质粒共同肌注免疫C5 7BL 6小鼠 ,ELISA方法检测其血清抗体 ,红细胞凝集抑制实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验检测其抗体中和活性。结果　HPV16L1和B7 2基因联合免疫小鼠的血清抗体滴度增高。结论　共刺激分子B7 2联合免疫可以增加目的抗原的抗体产生。

关键词：免疫应答乳头状瘤病毒共刺激分子 DNA疫苗重组质粒体液免疫

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21世纪,病理学的机遇

中华病理学杂志 2001年第1期30卷 7-9页

作者：司履生西安交通大学医学院免疫病理学研究室 710061

器官病理学和细胞病理学的发展奠定了现代医学的基础，促进了现代医学的发展。病理学也因此而被公认为医学各基础学科中最重要的基础学科。然而，曾几何时，现代科技，主要是电子计算机技术和现代生命科学技术已经使得病理学之昔日风光... 详细信息

器官病理学和细胞病理学的发展奠定了现代医学的基础，促进了现代医学的发展。病理学也因此而被公认为医学各基础学科中最重要的基础学科。然而，曾几何时，现代科技，主要是电子计算机技术和现代生命科学技术已经使得病理学之昔日风光不在。不过，现代高科技的发展也为病理学带来了新的机遇。首先是人类基因组草图的完成必将对医学，包括病理学带来巨大冲击，其冲击之大，影响之深是人类医学史上任何一次变革所无法比拟的，远比细胞病理学的问世要深刻得多，病理学也迎来了新的发展的大好时机。

关键词：病理学 21世纪发展趋势疾病基因组计划蛋白质组计划