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移植肾排异反应的病理及免疫学改变:附56例报告

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南方医科大学学报 2014年第3期34卷 341-344页

作者：隋燕霞孙涛赵东利侯军李晓峰杨喆西安交通大学医学院第一附属医院病理科陕西西安710061 西安交通大学医学院药理系陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤科陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科陕西西安710061

目的研究移植肾在术后发生排异反应时,肾脏的病理学及免疫学改变。方法回顾性分析了西安交通大学医学院第一附属医院肾移植术后56例经皮肾脏穿刺活检标本的临床病理资料,根据Banff2009分类系统对排异反应进行病理学分类并分析免疫组织... 详细信息

目的研究移植肾在术后发生排异反应时,肾脏的病理学及免疫学改变。方法回顾性分析了西安交通大学医学院第一附属医院肾移植术后56例经皮肾脏穿刺活检标本的临床病理资料,根据Banff2009分类系统对排异反应进行病理学分类并分析免疫组织化学标记及免疫荧光在排异反应中的表达情况及其意义。结果 56例移植肾穿刺活检标本中超急排异反应1例(1.79%),界线性病变即可疑急性T细胞排异反应8例(14.29%),急性T细胞介导的排异反应12例(21.43%),急性抗体介导的排异反应6例(10.71%),急性T细胞介导合并抗体介导的排异反应2例(3.57%),慢性活动性T细胞介导的排异反应12例(21.43%),慢性活动性抗体介导的排斥反应2例(3.57%),慢性活动性T细胞介导合并活动性抗体介导的排异反应2例(3.57%),无特异性的间质纤维化和小管萎缩8例(14.29%),正常3例(5.36%)。在不同类型的T细胞介导的排异反应中免疫标记物CD3、CD4、CD8、CD20、GrB、perforin的表达情况也不同,且排异反应越重,这些标记物的表达阳性率及强度也越高;在抗体介导的排异反应中免疫标记物C4d均阳性表达。结论移植肾穿刺活检标本的病理形态学特点结合免疫组织化学及免疫荧光的表达情况可以更加及时准确地判断移植肾排异反应的类型,为临床治疗及判断预后提供可靠的病理学及病因学依据。

关键词：肾移植活检免疫组织化学移植排斥病理

藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库的构建及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第5期27卷 504-506,510页

作者：张洁孙秀珍颜虹张妮冯向莉西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科西安交通大学医学院公共卫生系西安交通大学医学院第二附属医院康复医学科陕西西安710004

目的:构建藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库,并进行初步鉴定。方法:用TRIzol试剂抽提藜草花粉总RNA并分离mRNA。以纯化的mRNA为模板,以含有XhoI内切酶位点和18 bp的Poly(dT)序列的引物,用ZAP Express cDNA合成试剂盒反转录合成cDNA。... 详细信息

目的:构建藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库,并进行初步鉴定。方法:用TRIzol试剂抽提藜草花粉总RNA并分离mRNA。以纯化的mRNA为模板,以含有XhoI内切酶位点和18 bp的Poly(dT)序列的引物,用ZAP Express cDNA合成试剂盒反转录合成cDNA。将cDNA修饰、分级纯化后,获得大于400 bp的cDNA片段。将带有黏性末端的双链ds cDNA与Uni-ZAP XR载体连接,采用ZAP Express cDNA文库合成试剂盒利用λ噬菌体构建藜草花粉λ噬菌体cDNA表达文库,用包装蛋白对合成的ds cDNA进行体外包装,以包装产物感染宿主菌XL1-Blue MRF即获得cDNA表达文库。用PCR方法检测cDNA表达文库的滴度和插入片段的大小。结果:构建的藜草花粉变应原λ噬菌体表达文库的滴度为9.7×108pfu/L,重组率为100%,库容量为4.85 pfu。插入片段的长度平均约为1.0 kb。结论:构建的cDNA表达文库的容量及插入片段的大小合适,适用于藜草花粉变应原cDNA克隆的筛选,为制备基因重组藜草花粉变应原疫苗奠定了基础。

关键词：藜草花粉 cDNA 表达文库

α-甘露聚糖肽作为甲型流感疫苗佐剂的免疫效果

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西安交通大学学报（医学版） 2013年第5期34卷 604-608页

作者：冯素玲张卉任淑婷赵兴华廖怡然王冰西安交通大学医学院药理学系陕西西安710061 西安交通大学医学院药学系陕西西安710061 西安交通大学医学院病理系陕西西安710061

目的研究α-甘露聚糖肽作为甲型流感疫苗佐剂的免疫效果。探索α-甘露聚糖肽作为鼻黏膜免疫佐剂的可行性。方法分别通过肌注或滴鼻方式给Balb/c小鼠接种α-甘露聚糖肽甲型流感疫苗;采用ELISA法检测血清中特异性IgG和鼻、肺灌洗液中sIgA... 详细信息

目的研究α-甘露聚糖肽作为甲型流感疫苗佐剂的免疫效果。探索α-甘露聚糖肽作为鼻黏膜免疫佐剂的可行性。方法分别通过肌注或滴鼻方式给Balb/c小鼠接种α-甘露聚糖肽甲型流感疫苗;采用ELISA法检测血清中特异性IgG和鼻、肺灌洗液中sIgA抗体水平;采用MTT法进行淋巴细胞增殖试验。结果在肌注接种和滴鼻接种的量效实验中,佐剂疫苗组的血清IgG水平及鼻、肺灌洗液sIgA水平可达到单纯疫苗组2倍左右;佐剂疫苗组脾淋巴细胞体外刺激增殖率亦高于单纯疫苗组,且有显著性差异;在肌注接种的时效实验中,佐剂疫苗组血清IgG和鼻、肺灌洗液sIgA水平较单纯疫苗组在12周内一直保持在较高的水平。结论在肌注接种时,α-甘露聚糖肽能够同时促进体液免疫和细胞免疫应答,具有佐剂效应;在鼻黏膜接种时,加入α-甘露聚糖肽也可以增加甲型流感疫苗的免疫效果,因而α-甘露聚糖肽具有作为黏膜免疫佐剂的潜力。

关键词： α-甘露聚糖肽免疫佐剂甲型流感疫苗黏膜免疫 sIgA IgG

丙型肝炎患者血清蛋白质组差异表达的初步研究

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西安交通大学学报（医学版） 2013年第2期34卷 210-213页

作者：代晓霞王晓琴寻萌雷金娥王聪楚雍烈西安交通大学医学院公共卫生系陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院检验科陕西西安710061 西安交通大学医学院免疫学与病源生物学系陕西西安710061

目的观察丙型肝炎病毒(HCV)患者血清蛋白质组的变化情况,为研究丙型肝炎的发病机制及治疗提供新的线索。方法收集丙型肝炎患者和健康对照者血清,去除血清中高丰度蛋白;应用双向凝胶电泳技术构建2组研究对象血清二维电泳图谱,Image Maste... 详细信息

目的观察丙型肝炎病毒(HCV)患者血清蛋白质组的变化情况,为研究丙型肝炎的发病机制及治疗提供新的线索。方法收集丙型肝炎患者和健康对照者血清,去除血清中高丰度蛋白;应用双向凝胶电泳技术构建2组研究对象血清二维电泳图谱,Image Master软件分析所得图谱,寻找差异蛋白质点;基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对2组间比较所得目标蛋白质点进行质谱鉴定。结果获得了HCV患者血清蛋白质双向电泳图谱,对表达差异2倍以上进行质谱鉴定,共鉴定出15种蛋白质。结论成功鉴定了15个HCV相关蛋白质,为进一步研究其发病机制及治疗手段提供了实验基础。

关键词：丙型肝炎蛋白质组学双向电泳质谱

FOXP4的表达及其对β-catenin转录的调控在结直肠癌中的作用

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中国普通外科杂志 2020年第4期29卷 429-439页

作者：张淑莲马军齐宝华范志刚徐长福西安交通大学医学部附属三二〇一医院肿瘤科陕西汉中723000 西安交通大学医学院基础医学院陕西西安710061

背景与目的:FOXP转录因子家族已被证明在多种肿瘤中发挥重要作用,但其成员FOXP4在结直肠癌中的作用尚未见报道,故本研究探讨FOXP4在结直肠癌中的表达,及其与患者临床病理特征、预后的关系,并探讨其潜在的作用机制。方法:采用免疫组化和R... 详细信息

背景与目的:FOXP转录因子家族已被证明在多种肿瘤中发挥重要作用,但其成员FOXP4在结直肠癌中的作用尚未见报道,故本研究探讨FOXP4在结直肠癌中的表达,及其与患者临床病理特征、预后的关系,并探讨其潜在的作用机制。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测50例结直肠癌患者癌组织以及癌旁正常组织标本中FOXP4的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系;利用GEIPA数据库分析结直肠癌组织构FOXP4的表达情况,及其与患者生存率的关系。构建稳定过表达或敲减FOXP4的结直肠癌细胞系,分别用CCK8与Transwell法检测各结直肠癌细胞系增殖能力与迁移能力的变化。根据AnimalTFDB 3.0数据库预测FOXP4可能的靶启动子,分别用CHIP实验、荧光素酶报告基因、RT-PCR和Western blot验证FOXP4与靶启动子结合能力及对相应靶基因转录的调控作用。最后,对靶基因的功能进行验证。结果:临床标本与GEIPA数据库分析均显示,结直肠癌组织中FOXP4的表达量明显升高,其表达量与患者肿瘤大小、分化程度及TNM分期明显有关,高表达FOXP4的患者总体生存率明显降低(均P<0.05)。CCK8与Transwell实验结果显示,FOXP4过表达的结直肠癌细胞的增殖、迁移能力明显增强,而FOXP4低表达的结直肠癌细胞的增殖、迁移明显减弱(均P<0.05)。AnimalTFDB 3.0数据库分析显示,β-catenin的启动子可能是FOXP4的靶启动子;ChIP实验证明FOXP4可以识别β-catenin启动子区域;荧光素酶实验显示FOXP4仅可识别野生型的β-catenin序列;RT-PCR和Western blot分析发现FOXP4过表达可增加β-catenin基因及蛋白的表达水平。β-catenin抑制剂处理后,FOXP4过表达对结直肠癌细胞增殖与迁移能力的增强作用被取消(均P<0.05)。结论:FOXP4的表达在结直肠癌中增高,且与患者的恶性临床病理特征及不良预后密切相关。FOXP4过表达可能是通过调控β-catenin转录促进结直肠癌细胞的增殖及迁移。综上提示,FOXP4结直肠癌的发生发展中起了重要作用,可作为结直肠癌的潜在治疗靶点。

关键词：结直肿瘤叉头转录因子类 β连环素细胞增殖细胞运动

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β-榄香烯对裸鼠直肠癌的放射增敏作用

西安交通大学学报（医学版） 2014年第3期35卷 394-398页

作者：陈进才佘军军王光辉韩水平西安交通大学医学院第一附属医院普外科陕西西安710061 西安交通大学医学院病理系陕西西安710061

目的探讨G榄香烯对裸鼠直肠癌的放射增敏作用及其相关机制。方法采用细胞悬液接种法建立人直肠癌Col0320细胞株的裸鼠移植瘤模型，荷瘤后将裸鼠随机分为空白对照组，单纯药物组（40mg／kgβ-榄香烯），单纯放疗组（4Gy），放疗＋药物联... 详细信息

目的探讨G榄香烯对裸鼠直肠癌的放射增敏作用及其相关机制。方法采用细胞悬液接种法建立人直肠癌Col0320细胞株的裸鼠移植瘤模型，荷瘤后将裸鼠随机分为空白对照组，单纯药物组（40mg／kgβ-榄香烯），单纯放疗组（4Gy），放疗＋药物联合治疗组（40mg／kgB榄香烯＋4Gy放射）4组，每组4～5只。观察肿瘤生长情况以及肿瘤组织病理形态，并利用Tunel法检测各组肿瘤细胞凋亡情况，利用免疫组化方法检测各组肿瘤细胞Fas基因的表达情况。结果与空白对照组相比，B榄香烯联合放射组肿瘤重量显著下降，显示出明显的抑制肿瘤生长的作用（P〈0．05）。从病理形态上看，β-榄香烯联合放射组肿瘤组织出现大片坏死，坏死细胞的比例进一步增加。此外，在相同照射剂量下，与空白对照组和单纯放射组相比，β-榄香烯联合放射组裸鼠肿瘤体积明显变小，肿瘤细胞凋亡率和Fas基因阳性表达率明显增加（P〈0．05）。结论β-榄香烯对人直肠癌Col0320细胞株的裸鼠移植瘤有放射增敏作用，此作用可能与Fas基因介导的肿瘤细胞凋亡有关。

关键词：直肠癌 β-榄香烯放射敏感性凋亡裸鼠

细胞角蛋白8真核表达载体的构建、表达及生物信息学分析

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第2期27卷 123-127页

作者：寻萌赵四海曹春霞薛欣邵明明李薇徐琨楚雍烈西安交通大学医学院免疫与病原生物学系陕西西安710061 西安交通大学医学院实验动物中心陕西西安710061 Department of Medicine University of Florida 西安医学院医学技术系陕西西安710021

目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pE... 详细信息

目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-CK8。脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、realtimePCR和Westernblot检测CK8的表达。生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等。结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达。结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础。

关键词：细胞角蛋白8 全长编码序列真核表达生物信息学分析

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动脉粥样硬化发病的炎症机制的研究进展

西安交通大学学报（医学版） 2015年第2期36卷 141-152页

作者：刘俊田西安交通大学医学部基础医学院药理系陕西西安710061

动脉粥样硬化是临床常见疾病,是缺血性心脑血管病的主要病理基础。迄今为止,其发病机制尚未完全清楚,因而临床尚无有效而特异性的药物治疗。大量基础和临床研究表明,动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,是血管壁对各种损伤的一种异常反应... 详细信息

动脉粥样硬化是临床常见疾病,是缺血性心脑血管病的主要病理基础。迄今为止,其发病机制尚未完全清楚,因而临床尚无有效而特异性的药物治疗。大量基础和临床研究表明,动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,是血管壁对各种损伤的一种异常反应,具有经典炎症变性、渗出及增生的特点。炎症反应贯穿动脉粥样硬化发病的各个阶段,可能是多种致动脉粥样硬化因素致病机制的共同环节或通路。炎症机制不但与动脉粥样硬化的发生发展有关,而且与动脉粥样硬化的多种并发症的发生密切相关。动脉粥样硬化的炎症类型包括生物性炎症、免疫性炎症和化学性炎症。动脉粥样硬化发病初期主要表现为急性渗出性炎症,而在进展期主要表现出慢性增生性炎症的特点。炎症反应中涉及多种炎症细胞、炎性细胞因子、炎性介质、黏附分子、趋化因子、生长因子等。现已证明,多种抗动脉粥样硬化药物具有抗炎作用,抗炎治疗已成为防治动脉粥样硬化的一种新途径。

关键词：动脉粥样硬化炎症发病机制生物性炎症免疫性炎症化学性炎症

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miR-135b促进肝癌细胞侵袭和转移

细胞与分子免疫学杂志 2015年第10期31卷 1316-1321页

作者：张彦兵王妍华郭亚焕廖子君徐瑞阮之平西安交通大学医学院附属陕西省肿瘤医院肿瘤内科陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院陕西西安710061

目的探讨miR-135b对肝癌细胞浸润转移的影响及其分子机制。方法分别在肝癌细胞系中过表达和下调miR-135b,通过Transwell^(TM)实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力,利用肝癌移植瘤模型检测肝癌细胞的体内增殖能力和成瘤能力;采用Western blo... 详细信息

目的探讨miR-135b对肝癌细胞浸润转移的影响及其分子机制。方法分别在肝癌细胞系中过表达和下调miR-135b,通过Transwell^(TM)实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力,利用肝癌移植瘤模型检测肝癌细胞的体内增殖能力和成瘤能力;采用Western blot法结合双荧光素酶基因报告系统预测miR-135b的下游靶基因。结果 miR-135b在高侵袭性的MHCC97肝癌细胞系中高表达;过表达miR-135b能够增强HepG2和Bel-7402肝癌细胞的体外侵袭和转移能力,促进肝癌细胞的体内转移能力;通过靶向miR-135b的干扰载体pcDNA-miR-135b-Sponge下调miR-135b的表达,MHCC97肝癌细胞的体外侵袭转移能力及移植瘤的转移能力明显受到抑制;双荧光素酶基因报告系统和Western blot实验结果显示miR-135b能够靶向Hippo信号通路中的关键分子,包括大型肿瘤抑制因子同源蛋白2(LATS2)、含β转导素重复序列蛋白(β-TrCP)、N-myc下游调节基因2(NDR2)和亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)等。结论 miR-135b可能通过靶向Hippo信号通路相关基因促进肝癌细胞的侵袭和转移。

关键词： miR-135b Hippo信号通路肝癌转移侵袭