检索结果-南通市图书馆

LncFAM200B对牦牛肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科学 2022年第13期55卷 2654-2666页

作者：冉宏标赵丽玲王会柴志欣王吉坤王嘉博武志娟钟金城西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室

【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分... 详细信息

【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncFAM200B超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析lncFAM200B超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2,lncFAM200B潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平；采用油红O染色、甘油三酯（TAG）测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况。【结果】从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞；lncFAM200B超表达后，脂肪分化标志基因C/EBPα、AP2表达量显著升高（P实验表明，lncFAM200B超表达72 h后，细胞增殖效率显著降低（P<0.05），而干扰lncFAM200B后72 h后细胞增殖效率显著增强（P<0.05）。【结论】lncFAM200B可能通过影响脂肪分化标志基因C/EBPα和AP2，脂肪合成相关基因SIRT1和PTEN的表达从而影响牦牛肌内脂肪沉积，但其具体机制还需要进一步研究。

关键词：牦牛 lncFAM200B 肌内前体脂肪细胞超表达干扰

LKB1基因对卵巢颗粒细胞类固醇激素生成相关基因的调控作用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科学 2022年第10期55卷 2057-2066页

作者：张静张姬越岳永起赵丹范依琳马妍熊燕熊显荣字向东李键杨丽雪青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室动物科学国家民委重点实验室西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室

【背景】颗粒细胞类固醇激素的合成能力对卵泡发育及成熟具有重要作用，但其关键的调控因子尚不完全清楚。笔者前期的研究表明肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)基因参与细胞的脂类代谢，类固醇激素的合成与脂类代谢密切相关，并且有研究... 详细信息

【背景】颗粒细胞类固醇激素的合成能力对卵泡发育及成熟具有重要作用，但其关键的调控因子尚不完全清楚。笔者前期的研究表明肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)基因参与细胞的脂类代谢，类固醇激素的合成与脂类代谢密切相关，并且有研究结果亦显示LKB1敲除可引起小鼠卵巢早衰，表明LKB1对维持卵巢的功能很关键，其在颗粒细胞的确切功能需要进一步研究。【目的】探究LKB1在牛卵泡中的表达模式及其对颗粒细胞类固醇激素生成相关基因的调控作用,为母牛繁殖生理调控研究提供理论依据。【方法】采用免疫组织化学染色对LKB1蛋白在卵泡中进行定位研究；同时分离培养牛原代颗粒细胞，并以促卵泡素受体（follicle stimulating hormone receptor, FSHR）蛋白作为标记基因，细胞免疫荧光染色鉴定颗粒细胞及纯度；然后以原代颗粒细胞为模型，采用siRNA沉默LKB1的技术，利用qRT-PCR方法检测LKB1功能缺失对类固醇激素合成相关基因表达的影响，另一方面采用腺病毒过表达LKB1,qRT-PCR和ELISA技术验证LKB1对类固醇激素合成相关基因表达的调控作用及雌二醇分泌。【结果】1) LKB1蛋白在卵泡中的细胞均表达，但颗粒细胞的染色信号强于膜细胞，进一步的定量分析显示颗粒细胞的表达量显著高于卵泡膜细胞。2)分离培养的牛原代卵泡颗粒细胞贴壁生长、细胞形态多呈圆形，能被颗粒细胞标志基因FSHR抗体标记。3) RNAi技术能显著抑制LKB1的表达。与对照相比，siRNA1和siRNA2干扰LKB1的效率分别为48%(P<0.05)和52%(P<0.05)；沉默LKB1显著降低颗粒细胞类固醇激素合成基因STAR (P<0.01)、CYP11A1 (P<0.01)和CYP19A1 (P<0.05)的表达，分别下调了约为对照组的60%、80%和50%。4) LKB1过表达腺病毒及对照组对颗粒细胞均具有高的感染效率，LKB1过表达效率高达10倍（P<0.01）；过表达LKB1显著上调STAR (P<0.01)、CYP11A1(P<0.01)和CYP19A1 (P<0.05)的表达，进一步研究显示LKB1基因功能获得促进颗粒细胞雌二醇的分泌（P<0.05）。【结论】LKB1在卵泡颗粒细胞中高表达，促进类固醇激素生成基因STAR、CYP11A1和CYP19A1的表达和雌二醇的分泌。本研究将为LKB1调控牛颗粒细胞类固醇激素合成的功能提供直接的理论依据。

关键词： LKB1 牛颗粒细胞类固醇激素卵巢

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-138生物学功能研究进展

中国生物工程杂志 2022年第4期42卷 68-77页

作者：冉宏标王会钟金城西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省/教育部重点实验室成都610041

microRNAs(miRNAs)是真核生物体内高度保守的非编码小分子RNA,具有多种生物学功能,参与疾病发生和发展、细胞增殖和分化等多种病理及生理过程的调控。miR-138作为一种肿瘤抑制因子已在肿瘤发生与治疗中被广泛研究和应用,同时在心血管及... 详细信息

microRNAs(miRNAs)是真核生物体内高度保守的非编码小分子RNA,具有多种生物学功能,参与疾病发生和发展、细胞增殖和分化等多种病理及生理过程的调控。miR-138作为一种肿瘤抑制因子已在肿瘤发生与治疗中被广泛研究和应用,同时在心血管及神经系统疾病、成骨分化、脂肪生成及卵巢功能维持等生命过程中具有调控作用。在总结分析miR-138相关功能最新研究进展的基础上,对miR-138的潜在研究方向进行了分析、讨论和展望,旨在为进一步深入探明miR-138的生物学功能提供参考和理论依据。

关键词： miR-138 疾病成骨分化脂肪卵巢

不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因克隆、生物信息学及表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2308-2318页

作者：敬科民张鹏李雨谦田园董文静柴志欣王吉坤钟金城蔡欣西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省/教育部重点实验室成都610041

【目的】克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因序列,同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异,为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。【方法】根据GenBank中... 详细信息

【目的】克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因序列,同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异,为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。【方法】根据GenBank中牦牛SERPINE1基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增克隆获得高、低嫩度牦牛背最长肌中的SERPINE1基因序列全长,并对其结构及编码蛋白进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR检测不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因表达量。【结果】高、低嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因全长分别为8 315和8 318 bp,均编码402个氨基酸且氨基酸序列完全相同。高、低嫩度背最长肌组织中SERPINE1基因非编码序列中存在3个碱基缺失及22个碱基突变(4个碱基颠换、18个碱基转换)。牦牛SERPINE1基因核苷酸序列与普通牛、瘤牛、美洲野牛、绵羊、山羊、家猪、人、小鼠的相似性分别为99.26%、99.26%、99.59%、96.94%、97.02%、90.49%、86.52%和80.10%。SERPINE1蛋白是一个含有23个氨基酸信号肽的亲水性稳定膜外蛋白,位于细胞外,具有34个潜在磷酸化位点,包含1个反应中心环(reactive center loop, RCL)。SERPINE1蛋白二级结构主要由α-螺旋(44.78%)和无规则卷曲(35.32%)构成。实时荧光定量PCR结果显示,SERPINE1基因在高嫩度牦牛背最长肌中表达量极显著高于低嫩度牦牛背最长肌(P<0.01)。【结论】本研究成功从高、低嫩度牦牛背最长肌组织中克隆SERPINE1基因全长并进行了生物信息学特征分析,为后续研究SERPINE1基因参与调控牦牛肉嫩度机制提供理论参考。

关键词：牦牛 SERPINE1基因嫩度生物信息学表达

山羊CIDE家族基因克隆分析及互作蛋白预测鉴定

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华北农学报 2022年第1期37卷 211-221页

作者：李琪杨昌恒王永林亚秋向华朱江江青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室西南民族大学四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室西南民族大学四川成都610041

旨在获得CIDEB、CIDEC基因的CDS,检测该家族基因在山羊不同组织中的表达量,预测其互作蛋白,为进一步揭示CIDE家族基因在脂代谢中的调控网络提供参考。主要利用RT-PCR克隆获得山羊CIDEB、CIDEC基因序列并利用在线工具分析CIDE家族蛋白的... 详细信息

旨在获得CIDEB、CIDEC基因的CDS,检测该家族基因在山羊不同组织中的表达量,预测其互作蛋白,为进一步揭示CIDE家族基因在脂代谢中的调控网络提供参考。主要利用RT-PCR克隆获得山羊CIDEB、CIDEC基因序列并利用在线工具分析CIDE家族蛋白的生物学特性,并预测其互作蛋白。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了CIDE家族基因在山羊不同组织中的表达水平,并检测各互作蛋白在其表达水平最高的组织中的表达量,利用SPSS分析其表达量之间的相关性。克隆获得了CIDEB基因CDS区660 bp,共编码219个氨基酸,CIDEC基因CDS区714 bp,编码237个氨基酸。进化树分析显示,山羊CIDEA、CIDEB、CIDEC均与绵羊亲缘关系最近。RT-qPCR检测发现CIDEA、CIDEB、CIDEC基因分别在山羊瘤胃、肝脏、小肠中表达量最高。CIDEA与DFFB和ELOVL3在瘤胃中的表达量具有极显著相关性(P<0.01),与DIO2、TMEM26、PRDM16、PLIN1具有显著相关性(P<0.05)。CIDEB与DFFA和SDR39U1在肝脏中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。CIDEC与PLIN2、GPLD1、ADIPOQ在小肠中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。通过分析发现了与CIDE家族表达量具有相关性的基因,可为进一步揭示CIDE基因在脂质代谢中的作用及其调控网络提供理论基础,且CIDE家族蛋白均为脂滴相关蛋白,也可为进一步研究精确的脂滴形成机制提供参考。

关键词：山羊 CIDE家族 RT-qPCR 脂滴基因克隆

BMP4在牦牛和犏牛睾丸组织及支持细胞中的差异表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2023年第4期51卷 8-15,44页

作者：王明秀张鹏陈雪梅敬科民刘欣睿钟金城蔡欣西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室四川成都610041

【目的】从牦牛和犏牛睾丸组织中分离培养支持细胞,检测骨形态发生蛋白4基因(BMP4)及其受体基因在牦牛、犏牛睾丸组织及支持细胞中的表达情况,为深入研究BMP4对犏牛精子发生过程的作用提供理论基础。【方法】采集12月龄牦牛和犏牛睾丸组... 详细信息

【目的】从牦牛和犏牛睾丸组织中分离培养支持细胞,检测骨形态发生蛋白4基因(BMP4)及其受体基因在牦牛、犏牛睾丸组织及支持细胞中的表达情况,为深入研究BMP4对犏牛精子发生过程的作用提供理论基础。【方法】采集12月龄牦牛和犏牛睾丸组织,使用Trizol法提取各睾丸组织总RNA,利用RT-PCR技术检测BMP4及其受体基因(骨形态发生蛋白受体1B型(ALK6)、骨形态发生蛋白受体2型(BMPR2)、激活素A受体2A型(ACVR2A)、激活素A受体2B型(ACVR2B))的mRNA表达水平。通过两步酶法消化睾丸组织制备细胞悬液,经差速贴壁、饥饿处理和胰酶消化分离纯化牦牛和犏牛睾丸支持细胞。采用HE染色、油红O染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、免疫荧光染色鉴定支持细胞,用Trizol法提取细胞总RNA,RT-PCR检测支持细胞、生精细胞、间质细胞、类肌细胞标志基因和BMP4及其受体基因的mRNA表达水平。采用实时荧光定量PCR检测BMP4及其受体基因在牦牛和犏牛睾丸支持细胞中的差异表达情况。【结果】HE染色结果显示,第3代(F3)支持细胞呈长条形或梭形。油红O染色结果显示,体外培养的细胞胞质中有明显脂滴积累,且在细胞核内可观察到支持细胞特有的双极小体结构。ALP染色结果显示,细胞不着色。免疫荧光染色结果显示,支持细胞标志蛋白GATA结合蛋白4(GATA4)呈阳性表达。RT-PCR检测结果显示,支持细胞标志基因BMP4、SRY-box转录因子9基因(SOX9)、波形蛋白基因(Vimentin)、Wilm肿瘤抑制基因(WT1)、FAS细胞表面死亡受体基因(FAS)和胶质细胞源性神经营养因子基因(GDNF)存在明显表达,而生精细胞标志基因出局区解旋酶4(DDX4)和类肌细胞标志基因半胱氨酸的血管生成诱导剂61(CYR61)无明显表达,间质细胞标志基因细胞色素P450家族11亚家族A成员1(CYP11A1)则有少量表达。BMP4在牦牛和犏牛睾丸支持细胞中都有表达,且在牦牛支持细胞中的表达量显著高于犏牛支持细胞,而其受体基因ALK6、BMPR2、ACVR2A和ACVR2B在牦牛支持细胞中的表达量显著或极显著低于犏牛支持细胞。【结论】从牦牛和犏牛睾丸组织中分离获得支持细胞,BMP4在牦牛支持细胞中表达量较高,暗示BMP4对犏牛精子发生具有潜在调控作用。

关键词：牦牛犏牛骨形态发生蛋白4基因支持细胞动物遗传育种

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

溶血性曼氏杆菌重要抗原的免疫原性分析

江苏农业学报 2022年第2期38卷 446-452页

作者：陆奕彤李垚杨发龙西南民族大学/青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室四川成都610041

旨在通过分析溶血性曼氏杆菌重要抗原的免疫原性,为疫苗和诊断试剂研制提供依据。在生物信息学分析的基础上,构建溶血性曼氏杆菌lktA、ompA、plpE、plpF、ompP2和gs60基因的原核重组表达载体,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,... 详细信息

旨在通过分析溶血性曼氏杆菌重要抗原的免疫原性,为疫苗和诊断试剂研制提供依据。在生物信息学分析的基础上,构建溶血性曼氏杆菌lktA、ompA、plpE、plpF、ompP2和gs60基因的原核重组表达载体,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,获得重组蛋白质。随后用被抗溶血性曼氏杆菌感染的绵羊血清进行Western-blot和酶联免疫吸附测定(ELISA),评价各蛋白质的免疫原性并筛选优势免疫原;用各重组蛋白质免疫小鼠,评价免疫小鼠后诱导其产生的抗体水平,以评价各重组蛋白质作为重组疫苗的潜在价值。Western-blot和ELISA检测结果表明,各重组蛋白质均具有良好的免疫原性,其中rLktA、rOmpA、rGs60与感染的绵羊血清结合能力最强,为优势免疫原;各重组蛋白质免疫小鼠后均能诱导其产生体液免疫应答,其中rOmpA、rPlpE和rPlpF免疫小鼠后诱导其产生的抗体在免疫后35 d仍能与全菌蛋白质结合。研究结果为溶血性曼氏杆菌感染血清学诊断试剂的开发和新型疫苗的研制提供了重要的试验数据。

关键词：溶血性曼氏杆菌重要抗原免疫原性

乳酸菌与酵母菌的复配筛选及在传统泡菜中应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品工业科技 2023年第16期44卷 155-163页

作者：陈偲张明付竹贤王淑敏罗璠西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室四川成都610041 西南民族大学青藏高原研究院四川成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041

为了探究具有不同菌种关系的乳酸菌和酵母菌在泡菜发酵过程中的发酵性能,本实验选取不同食品来源的8株乳酸菌和5株酵母菌,通过代谢产物交叉培养及菌株共培养方法,筛选到一对具有互促关系的乳酸菌和酵母菌,即植物乳杆菌(Lactiplantibacil... 详细信息

为了探究具有不同菌种关系的乳酸菌和酵母菌在泡菜发酵过程中的发酵性能,本实验选取不同食品来源的8株乳酸菌和5株酵母菌,通过代谢产物交叉培养及菌株共培养方法,筛选到一对具有互促关系的乳酸菌和酵母菌,即植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)J05和酿酒酵母(Sacchromyces cerevisiae)Y21。分别从培养方式、接种顺序、接种比例等方面分析该组菌共培养关系,并测定了泡菜发酵过程中pH、总酸、还原糖含量、亚硝酸盐的含量。结果显示,添加酿酒酵母Y21静置培养无菌代谢产物对处于生长期的植物乳杆菌J05具有明显促生长作用,先接种酿酒酵母Y21后接种植物乳杆菌J05可促进两种菌的生长,筛选到两株菌共培养的最佳比例为30:1和40:1。在30:1的接种比例下,泡菜发酵进入稳定期后,与自然发酵组、单菌组、互抑组相比较,互促组p H维持在3.4~3.5之间,显著低于其他各组(P实验筛选所得互促菌组发酵性能较强,可缩短泡菜发酵周期,降低泡菜中亚硝酸盐含量。

关键词：植物乳杆菌酿酒酵母共培养自然发酵人工接种发酵发酵泡菜

山羊FATP2基因的克隆及对前体脂肪细胞脂质沉积的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2023年第9期54卷 3642-3652页

作者：唐崟梅李琪李海洋林亚秋王永向华黄炼朱江江西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省/教育部重点实验室成都610207 西南民族大学青藏高原研究院成都610207

旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析,检测FATP 2基因在山羊不同组织中的表达差异,并进一步揭示干扰FATP 2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康... 详细信息

旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析,检测FATP 2基因在山羊不同组织中的表达差异,并进一步揭示干扰FATP 2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳羊(n=12)为试验动物。采用RT-PCR法扩增并克隆山羊FATP 2基因,进行序列对比、系统发育树构建及生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测FATP 2基因在山羊不同组织中及在山羊肌内前体脂肪细胞不同分化时期的相对表达水平,合成SI-RNA干扰序列并转染至山羊肌内前体脂肪细胞;使用RT-qPCR检测FATP 2干扰效率及脂质代谢相关基因的表达情况;通过Bodipy染色法观察干扰FATP 2对脂滴形成的影响,利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示,获得山羊FATP 2基因序列全长2335 bp,CDS区1863 bp,5′UTR 188 bp,3′UTR 284 bp;共编码621个氨基酸,山羊FATP 2基因在肝脏表达量最高;RT-qPCR检测结果显示,FATP 2表达在细胞中被显著干扰;Bodipy染色结果显示,干扰FATP 2基因后脂滴显著减少;甘油三酯测定结果显示,干扰FATP2基因山羊肌内前体脂肪细胞甘油三酯含量显著降低。本研究成功获得山羊FATP 2基因CDS区序列,干扰FATP 2后山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积显著减少并显著影响脂代谢相关基因的表达,这些结果为进一步阐明FATP 2对调控山羊肌内脂肪形成的作用机制提供了重要数据。

关键词：山羊 FATP2基因 RNA干扰肌内前体脂肪细胞