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山羊皮肤组织miRNA测序与miR-129-5p调控黑色素生成的功能研究

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1019-1029页

作者：肖敏赵威孙武娜日苏赵乐刘陶禄张继攀赵永聚西南大学动物科学技术学院草食动物科学重庆市重点实验室重庆市牧草与草食家畜重点实验室重庆400715 青海大学畜牧兽医科学院西宁810016 内蒙古农业大学动物科学学院呼和浩特010018

旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA,并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制。本研究采集了健康酉州乌羊(Youzhou dark goat, YZDG)、川东白山羊(Chuandong white goat, CDWG)100日龄胎羊皮肤样本(n=3),和健康2~3周岁大足黑山羊(Dazu ... 详细信息

旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA,并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制。本研究采集了健康酉州乌羊(Youzhou dark goat, YZDG)、川东白山羊(Chuandong white goat, CDWG)100日龄胎羊皮肤样本(n=3),和健康2~3周岁大足黑山羊(Dazu black goat, DBG)、内蒙古绒山羊(Inner Mongolia cashmere goat, IMCG)个体皮肤样本(n=3),利用组织切片染色技术观察皮肤中黑色素沉积情况;通过小RNA测序技术筛选差异miRNAs;培养B16-F10皮肤黑色素瘤细胞,利用细胞转染、qPCR、Western Blot、黑色素含量检测等技术验证miR-129-5p对黑色素生成的影响。结果显示,黑色素颗粒明显在YZDG胎羊皮肤和DBG毛囊的毛球、毛干、外根鞘等部位沉积,而在CDWG胎羊皮肤和IMCG表皮、毛囊中没有被观察到。经测序分析,在肤色差异的YZDG和CDWG中筛选到62个差异表达miRNAs,其中31个在乌皮山羊中上调,31个下调。在毛色差异的DBG和IMCG中,筛选到38个差异表达miRNAs,其中10个在黑色被毛山羊中表达上调,28个表达下调。两组测序结果均显示miR-129-5p在乌皮和黑色被毛山羊皮肤中高表达(P0.05)。在抑制miR-129-5p后,inhibitor组TYR基因mRNA表达下调38.9%、蛋白表达水平下调21.1%(P研究发现,miR-129-5p在不同肤色及毛色的山羊皮肤中差异表达,且可通过调控TYR、TYRP1等关键基因的表达影响黑色素的生成,是山羊肤色和毛色形成过程的重要调节因子。

关键词：山羊肤色 miR-129-5p 黑色素生成 TYR

山羊早期胎儿组织TET1与Wnt通路基因的表达变化及其相关性

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中国农业科学 2017年第14期50卷 2816-2825页

作者：谭强罗南剑张艳丽安炳星陈秋羊赵永聚西南大学动物科技学院/重庆市牧草与草食家畜重点实验室/重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心

【目的】通过检测TET1和Wnt信号通路相关基因以及DKK家族基因在山羊胎儿发育早期的表达变化,分析TET1与Wnt通路基因的相关性,为TET1调控山羊胎儿发育研究提供理论依据。【方法】选取12只健康大足黑山羊母羊,自然发情后与同一只种公羊自... 详细信息

【目的】通过检测TET1和Wnt信号通路相关基因以及DKK家族基因在山羊胎儿发育早期的表达变化,分析TET1与Wnt通路基因的相关性,为TET1调控山羊胎儿发育研究提供理论依据。【方法】选取12只健康大足黑山羊母羊,自然发情后与同一只种公羊自然交配。采用剖腹产手术的方法,分别获得妊娠20、25、30、60和90d的胎儿,对胎儿的生长指标(体重、体长)进行统计,并采集了60和90d胎儿的组织器官样品(心、肝、肺、肾、脑、皮肤),通过Real-time PCR(RT-PCR)检测各样品中TET1基因,DKK家族基因(DKK1、DKK2、DKK3)和Wnt家族基因(Wnt2、Wnt2b、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt7b、Wnt16)的相对表达量。利用SPSS软件分析山羊胎儿发育早期不同阶段TET1与WNT信号通路相关基因相关性以及基因表达显著性(P研究空白;TET1与Wnt基因对山羊胎儿早期的发育和组织的形成是一个动态的调控变化过程;TET1基因表达与部分Wnt基因呈现显著正相关,部分呈现显著负相关;Wnt通路基因之间表达量呈现一定的相关性。这些数据为TET1与Wnt分子调控山羊早期胎儿发育的机制深入研究提供了参考。

关键词：山羊胎儿 TET1 Wnt通路基因表达变化相关性

TETs与细胞程序性死亡相关基因在山羊妊娠早期输卵管及子宫角的表达

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中国农业科学 2021年第4期54卷 845-854页

作者：赵乐杨海丽李佳璐杨永恒张蓉程文强成磊赵永聚西南大学动物科学技术学院/重庆市牧草与草食家畜重点实验室/重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心

【目的】TET(ten-eleven translocation)家族蛋白在调控胚胎和胎盘发育等过程中具有重要作用,输卵管与子宫内膜细胞的死亡平衡会影响受精卵及早期胚胎的发育。因此探讨TETs、细胞程序性死亡相关基因和附植相关基因在妊娠早期山羊输卵管... 详细信息

【目的】TET(ten-eleven translocation)家族蛋白在调控胚胎和胎盘发育等过程中具有重要作用,输卵管与子宫内膜细胞的死亡平衡会影响受精卵及早期胚胎的发育。因此探讨TETs、细胞程序性死亡相关基因和附植相关基因在妊娠早期山羊输卵管及子宫角中的表达规律及其潜在调控作用,以期为研究胚胎发育及附植的分子机制奠定基础。【方法】以合川白山羊为研究对象,采集妊娠19d(P19)山羊子宫角及输卵管组织,以空配19d(C19)为对照,利用H.E染色观察C19组和P19组山羊子宫角组织形态,利用qRT-PCR技术检测了胚胎附植相关基因(WNT5a、OPN、VEGFA)、TETs(TET1、TET2、TET3)、细胞程序性死亡相关基因(凋亡相关基因(BAX、BCL2、Caspase9)、焦亡相关基因(GSDMD、NLRP3、Caspase1)和炎症相关基因(NF-kB、TNF-α))的相对表达,并分析了TETs及细胞程序性死亡相关基因在输卵管和子宫角组织的表达相关性。【结果】H.E染色结果显示,在P19组中山羊子宫角的腺体增多,形态多变。qRT-PCR结果显示,OPN在P19组山羊子宫角中的表达量极显著高于C19组(P研究TETs通过细胞程序性死亡相关基因在妊娠早期输卵管及子宫角中的表达规律提供了理论参考。

关键词：山羊子宫角输卵管细胞程序性死亡基因表达

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胎盘血管形成机制及其对动物繁殖性能的影响

江苏农业学报 2019年第4期35卷 986-995页

作者：王攀赵永聚西南大学动物科技学院/重庆市牧草与草食家畜重点实验室/重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心

胎盘是哺乳动物妊娠期间形成的母胎之间用于物质交换的临时性器官。胎盘血液循环是物质交换的载体,影响着母体正常妊娠和宫内胎儿发育。胎盘血管形成对胎儿的正常生长发育十分重要,其调控机制非常复杂,且胎盘血管形成与动物繁殖性能的... 详细信息

胎盘是哺乳动物妊娠期间形成的母胎之间用于物质交换的临时性器官。胎盘血液循环是物质交换的载体,影响着母体正常妊娠和宫内胎儿发育。胎盘血管形成对胎儿的正常生长发育十分重要,其调控机制非常复杂,且胎盘血管形成与动物繁殖性能的发挥有关联。本文综述了胎盘血管形成过程、调控机制及其对动物繁殖性能的影响,为进一步解析动物繁殖性能差异的遗传机制、胎盘血管形成的分子机制提供研究方向。

关键词：胎盘血管形成信号通路繁殖性能

山羊皮肤组织miRNA测序与miR-129-5p调控黑色素生成的功能研究

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畜牧兽医学报 2023年

作者：肖敏赵威孙武娜日苏赵乐刘陶禄张继攀赵永聚青海大学畜牧兽医科学院西南大学动物科学技术学院草食动物科学重庆市重点实验室重庆市牧草与草食家畜重点实验室内蒙古农业大学动物科学学院

旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA，并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制。本研究采集了健康酉州乌羊（Youzhou dark goat，YZDG）、川东白山羊（Chuandong white goat，CDWG）100日龄胎羊皮肤样本（n=3），和健康2～3周岁大足黑... 详细信息

旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA，并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制。本研究采集了健康酉州乌羊（Youzhou dark goat，YZDG）、川东白山羊（Chuandong white goat，CDWG）100日龄胎羊皮肤样本（n=3），和健康2～3周岁大足黑山羊（Dazu black goat，DBG）、内蒙古绒山羊（Inner Mongolia cashmere goat，IMCG）个体皮肤样本（n=3），利用组织切片染色技术观察皮肤中黑色素沉积情况；通过小RNA测序技术筛选差异miRNAs；培养B16-F10皮肤黑色素瘤细胞，利用细胞转染、qPCR、Western Blot、黑色素含量检测等技术验证miR-129-5p对黑色素生成的影响。结果显示，黑色素颗粒明显在YZDG胎羊皮肤和DBG毛囊的毛球、毛干、外根鞘等部位沉积，而在CDWG胎羊皮肤和IMCG表皮、毛囊中没有被观察到。经测序分析，在肤色差异的YZDG和CDWG中筛选到62个差异表达miRNAs，其中31个在乌皮山羊中上调，31个下调。在毛色差异的DBG和IMCG中，筛选到38个差异表达miRNAs，其中10个在黑色被毛山羊中表达上调，28个表达下调。两组测序结果均显示miR-129-5p在乌皮和黑色被毛山羊皮肤中高表达（P0.05）。在抑制miR-129-5p后，inhibitor组TYR基因mRNA表达下调38.9%、蛋白表达水平下调21.1%（P研究发现miR-129-5p在不同肤色及毛色的山羊皮肤中差异表达，且可通过调控TYR、TYRP1等关键基因的表达影响黑色素的生成，是山羊肤色和毛色形成过程的重要调节因子。

关键词：山羊肤色 miR-129-5p 黑色素生成 TYR

山羊妊娠早期胎盘滋养层细胞TET1、MMPs与TIMPs的表达规律

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中国兽医学报 2019年第11期39卷 2247-2252页

作者：高静罗南剑杨晓伟杨永恒赵永聚西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室/重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心

TET1的去甲基化作用对胎盘功能具有重要调控作用,胎盘滋养层分泌的基质金属酶(matrix metalloproteinase,MMPs)使其具有迁移和侵袭功能,保证了滋养层细胞正常侵入子宫内膜建立妊娠,但滋养层细胞TET1、MMPs及TIMPs在山羊妊娠早期胎盘滋... 详细信息

TET1的去甲基化作用对胎盘功能具有重要调控作用,胎盘滋养层分泌的基质金属酶(matrix metalloproteinase,MMPs)使其具有迁移和侵袭功能,保证了滋养层细胞正常侵入子宫内膜建立妊娠,但滋养层细胞TET1、MMPs及TIMPs在山羊妊娠早期胎盘滋养层细胞中的表达规律未知。因此,本试验取妊娠20,25,30,45和60d大足黑山羊胎盘滋养层,利用荧光定量PCR技术检测并分析了MMP2和MMP9、TIMP1和TIMP2基因相对表达规律,观察TET1和MMP9在各时期胎盘滋养层中的分布规律。结果显示,除20,25d外,MMP9的表达量均高于MMP2,在30和60d差异显著(P<0.05),45d时差异达到极显著(P<0.01);除20d外,TIMP1的表达量均高于TIMP2,且在30,45d时具有显著性差异(P<0.05)。免疫组化染色结果发现TET1在细胞核和细胞质中均有表达,MMP9则主要分布于细胞质和细胞膜,且两者表达变化存在一定相似性。结果表明,山羊妊娠25~60d,可能由MMP9和TIMP1主要调控胎盘滋养层细胞迁移和侵袭,且在该过程中,TET1可能通过影响MMP9的表达,进而影响山羊胎盘滋养层细胞迁移和侵袭。

关键词：山羊 TET1 MMPs TIMPs 表达规律

利用Samtools挖掘山羊生产繁殖相关Indels标记

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中国兽医学报 2019年第2期39卷 349-356页

作者：薛蕾赵永聚管代禄张继攀徐恢仲西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心重庆400715

随着研究的深入,从最初认为单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)是导致遗传和表型多样性的主要原因,逐渐意识到插入/缺失(insertion/deletion,Indel)的普遍存在,并且与山羊生产繁殖性状密切相关。随着山羊参考基因组序... 详细信息

随着研究的深入,从最初认为单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)是导致遗传和表型多样性的主要原因,逐渐意识到插入/缺失(insertion/deletion,Indel)的普遍存在,并且与山羊生产繁殖性状密切相关。随着山羊参考基因组序列的公布及测序成本的降低,为大规模开发山羊Indels标记提供了可能。本研究就12个山羊个体(大足黑山羊,DBG,n=6;内蒙古绒山羊,IMCG,n=6)全基因组重测序结果,利用Samtools筛选群体间的差异In-dels。结果表明,12个山羊个体获得192.747GB基因组数据,平均每个个体检测到高质量的Indels位点为334 151个;比较基因组获得2个群体特有的Indels分别为110和100个,注释基因38和30个。其中大足黑山群体特有su-fu、sycp2位点和内蒙古绒山羊群体特有kdm4c位点可能是山羊生长繁殖相关候选Indel标记,为进一步精细解析山羊生产繁殖性状遗传机理奠定基础。

关键词：山羊重测序全基因组插入/缺失(Indel) Samtools

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卵巢microRNA的调控作用

中国兽医学报 2021年第3期41卷 618-626页

作者：成磊刘凌斌李佳璐任灵通赵永聚西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室/重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心重庆400715

卵巢是雌性动物卵泡发育、黄体形成、退化、排卵以及类固醇激素合成的生殖器官,其在microRNA(miRNA)调控下分泌产生的性腺类固醇激素、前列腺素等多种激素和生长因子,控制着动物机体的发育和生理活动。miRNA作为一类内源性非编码RNA和... 详细信息

卵巢是雌性动物卵泡发育、黄体形成、退化、排卵以及类固醇激素合成的生殖器官,其在microRNA(miRNA)调控下分泌产生的性腺类固醇激素、前列腺素等多种激素和生长因子,控制着动物机体的发育和生理活动。miRNA作为一类内源性非编码RNA和关键调节因子,通过与3′UTR结合调控基因的表达,并通过与靶基因的相互作用,在卵巢发育过程中发挥重要作用。现主要对miRNA在卵巢发育中的最新研究进展,包括miRNA在卵泡发育、黄体形成与退化、卵母细胞成熟、颗粒细胞增殖与凋亡和性腺类固醇激素合成过程中的作用机制进行综述,为深入研究miRNA调节卵巢发育机理提供理论基础。

关键词：卵巢 miRNA 卵泡发育卵母细胞成熟颗粒细胞类固醇激素

山羊妊娠早期胎儿胎盘血管形成及相关基因的表达

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畜牧兽医学报 2020年第5期51卷 1019-1029页

作者：程文强王攀罗南剑徐恢仲王炜张蓉成磊赵威赵永聚西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心重庆400715

旨在探究大足黑山羊妊娠早期胎儿胎盘血管发育、分布和血管生成相关因子表达状况,并对血管生成相关因子表达之间和血管发育进行相关性分析。本研究随机选取15只8月龄、体格相近、身体健康的国家级畜禽遗传资源—大足黑山羊青年母羊,经... 详细信息

旨在探究大足黑山羊妊娠早期胎儿胎盘血管发育、分布和血管生成相关因子表达状况,并对血管生成相关因子表达之间和血管发育进行相关性分析。本研究随机选取15只8月龄、体格相近、身体健康的国家级畜禽遗传资源—大足黑山羊青年母羊,经同一种公羊自然交配后(以末次配种当天记为0 d),经剖腹产手术采集妊娠第20、25和30天的胎儿和胎儿胎盘以及经屠宰采集妊娠第45和60天的胎儿和胎儿胎盘作为研究对象,通过免疫组化法评估胎盘血管发育和分布情况,采用qRT-PCR技术检测主要血管生成相关基因的mRNA表达水平,分析血管生成相关基因之间以及与胎盘血管发育分布的相关性。结果显示,胎儿体重和体长随着妊娠的进行逐渐增加,且血管内皮细胞阳性率处于较高水平(>26%)。山羊胎儿胎盘毛细血管总面积/组织区域面积(CAD)逐渐升高;毛细血管总数/单位组织区域面积(CND)在妊娠25~30 d增加,30~60 d降低,毛细血管总面积/毛细血管根数(APC)呈相反趋势;毛细血管总周长/单位组织区域面积(CSD)无显著变化。妊娠早期胎儿胎盘VEGFA的表达量随着妊娠的进行逐渐升高,且与血管分布存在一定的相关性,其受体FLT1和KDR表达量呈先增高后降低的趋势,分别在30和45 d达到峰值。血管生成相关基因ANGPT1/2及其受体TEK和FGF2及其受体FGFR2的表达均在妊娠30 d时较高。综上表明,在妊娠30 d前,胎儿胎盘主要通过毛细血管形成分支促进血管面积的增加;而在30~60 d,主要通过单位血管的增粗促进血管面积的增加,并且血管生成相关基因的表达在妊娠30 d时较高,这可能和子叶开始形成有关。山羊妊娠早期胎儿胎盘中VEGFA可能通过其受体结合与其他血管生成因子共同作用调控胎儿胎盘血管形成。

关键词：大足黑山羊妊娠早期胎儿胎盘血管生成基因表达