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羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及部分生物学特性分析

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 680-687页

作者：宋艳袁永丰钱虹宇李鑫灿罗洪艳王芝英周作勇西南大学动物医学院重庆402460

为明确重庆和贵州部分羊场发生体表淋巴结脓肿病料中伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)感染情况及其生物学特征,对山羊体表脓肿样本进行Cp分离鉴定、致病性试验、药敏试验、毒力/耐药基因检测及系统进化分析。结果... 详细信息

为明确重庆和贵州部分羊场发生体表淋巴结脓肿病料中伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)感染情况及其生物学特征,对山羊体表脓肿样本进行Cp分离鉴定、致病性试验、药敏试验、毒力/耐药基因检测及系统进化分析。结果:从40份样本中分离到23株Cp,分离率达57.5%。毒力基因检测显示,所有Cp分离菌均携带pld、FagA、FagB、OppB、OppD、OppF、SodC、SpaC、pknG、NanH、sigE和cp40基因。药敏试验显示,所分离Cp对头孢拉定、丁胺卡那和多西环素敏感率最高,达95.65%(22/23),其次为青霉素、氨苄西林、四环素、万古霉素和环丙沙星,敏感率为91.30%(21/23),但对呋喃唑酮100%耐药,对新霉素和卡那霉素耐药率为82.61%(19/23)。Cp分离菌中氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-IIa和广谱A类β内酰胺酶耐药基因bla TEM-116的检出率分别为0和4.35%。对所有Cp的fusA进行测序并获得GenBank登录号ON969140-ON969162,系统进化分析显示所分离的Cp均聚类到羊生物型(biotype ovis)。本研究证实Cp是引起重庆和贵州部分羊场发生体表淋巴结脓肿的主要病原,并明确其部分生物学特性,为防控该病原提供了参考资料。

关键词：伪结核棒状杆菌山羊毒力基因药物敏感性系统进化分析

基于CRISPR/Cas9构建伪结核棒状杆菌cp40敲除株及其生物学特性与致病性研究

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微生物学报 2024年第7期64卷 2453-2464页

作者：吕红李鑫灿牛禄婷王芝英周作勇西南大学动物医学院重庆402460

【目的】建立更高效的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)靶基因敲除方法,敲除丝氨酸蛋白酶编码基因(cp40),并评价其在Cp感染致病中的作用。【方法】以p ECXK99E为载体,Cp宣汉株(XH02)cp40为靶基因,设计含CRISPR/C... 详细信息

【目的】建立更高效的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)靶基因敲除方法,敲除丝氨酸蛋白酶编码基因(cp40),并评价其在Cp感染致病中的作用。【方法】以p ECXK99E为载体,Cp宣汉株(XH02)cp40为靶基因,设计含CRISPR/Cas9的间隔序列(spacer)、导向RNA(guide RNA,g RNA)和cp40上下游同源臂的表达质粒(p EC-cp40g RNA-HDarm),转入含p Cas9g RNA-ccd B的Cp感受态细胞,构建CRISPR/Cas9基因编辑系统以敲除cp40基因。通过比较cp40敲除株和野生株的菌落形态及生长曲线、体外对J774A.1巨噬细胞活力及白细胞介素(interleukin,IL)-1β分泌,以及体内感染小鼠致死率及脏器载菌水平,研究cp40与该病原感染致病之间的关系。【结果】应用所建立的双质粒CRISPR/Cas9编辑系统成功获得XH02的cp40敲除株(XH02Δcp40)。与XH02相比,XH02Δcp40在菌落形态及生长曲线上无明显差异,但XH02Δcp40感染J774A.1巨噬细胞的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放(P=0.06)、碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色比例均降低(P<0.01),体内感染小鼠致死率下降50%,并且被感染小鼠肝脏和肾脏中Cp含量显著降低(P<0.001)。【结论】本研究所建立的CRISPR/Cas9编辑系统可较高效敲除Cp基因,证实cp40是该病原感染致病相关基因,为后续基于该基因研究Cp感染致病机制奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 伪结核棒状杆菌丝氨酸蛋白酶基因敲除致病性

犬弓首蛔虫超氧化物歧化酶的分子特性及原核表达

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西南大学学报（自然科学版） 2024年第2期46卷 62-70页

作者：吴天乐王磊王冰楠孙雪杨晓伟周荣琼西南大学动物医学院重庆荣昌402460

为探究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)的分子特性,根据GenBank中登录的Tc-sod基因序列(GenBank:AAB00227.1),以T.canisc DNA为模板对Tc-sod全长基因进行扩增,并进行序列分析和多重序列比对;同时构建Tc-sod/pET-32a原核表达载体,经ITPG诱导表达,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体.结果显示Tc-sod全长基因为573 bp,共编码190个氨基酸;多重序列分析表明Tc-SOD的氨基酸序列与曼氏血吸虫、异尖线虫、美洲板口线虫、马来丝虫、犬钩口线虫均具有SOD-Cu保守结构域.种系发育分析发现Tc-SOD与马来丝虫进化关系较近. SDS-PAGE结果显示重组蛋白Tc-SOD的大小约为37 ku,以可溶性形式表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,以70 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度的目的蛋白;将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测显示抗体滴度>1∶320 000,表明重组蛋白的免疫原性较好;Western Blot结果显示抗体能与Tc-SOD蛋白特异性结合,表明抗体特异性高.

关键词：犬弓首蛔虫超氧化物歧化酶分子特性原核表达多克隆抗体

五味子多糖纳米硒的体外抗氧化和肠道菌群调节作用研究

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畜牧兽医学报 2024年第7期 3234-3245页

作者：杜红旭苏利娟何政科谭晓燕张旭马琪曹立亭陈红伟甘玲西南大学动物医学院西南大学中兽医研究所

旨在探究五味子多糖纳米硒（SCP-Selenium nanoparticles, SCP-SeNPs）的体外抗氧化活性和肠道菌群调节作用。本研究通过ABTS+、DPPH自由基、OH-和O2-体外清除以及还原力检测试验系统评价了SCP-SeNPs的体外抗氧化活性；进一步通过16S r... 详细信息

旨在探究五味子多糖纳米硒（SCP-Selenium nanoparticles, SCP-SeNPs）的体外抗氧化活性和肠道菌群调节作用。本研究通过ABTS+、DPPH自由基、OH-和O2-体外清除以及还原力检测试验系统评价了SCP-SeNPs的体外抗氧化活性；进一步通过16S rRNA高通量测序技术探究其对小鼠肠道菌群的影响。结果显示，SCP-SeNPs具有良好的体外抗氧化活性，且对OH-和O2-的清除活性优于五味子多糖（Schisandra Chinensis polysaccharide, SCP）。16S rRNA检测结果显示，SCP-SeNPs组小鼠盲肠菌群的α多样性指数高于空白对照组（BC组）(P>0.05);β多样性指数表明SCP-SeNPs组与BC组菌群结构存在明显差异。肠道菌群结构分析显示，拟杆菌门、厚壁菌门是小鼠肠道菌群的主要构成。菌群结构差异分析显示，属水平上，SCP-SeNPs组普雷沃氏菌属、Muribaculum、杜波西氏菌属、栖粪杆菌属和梭菌属＿UCG＿014等有益菌的相对丰度显著增加（P<0.05）。PICRUSt 2功能预测分析显示，蛋白酶体、过氧化物酶体以及苯丙氨酸代谢和托烷、哌啶、吡啶生物碱的生物合成这4个通路在SCP-SeNPs组显著富集（P<0.05）。综上，SCP-SeNPs具有一定的抗氧化能力，可能通过提高肠道有益菌的丰度和调节肠道微生物的物质代谢发挥肠道保护作用，提示SCP-SeNPs可以作为一种新型功能性微量元素添加剂。

关键词：五味子多糖纳米硒抗氧化肠道菌群

三七提取物通过IL-6、CASP3和STAT3调节免疫应激肉鸡炎症反应

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中国兽医学报 2024年

作者：杜林杨萍瑞周翰林邱莉娟胡卫东曹立亭毕师诚 1.西南大学动物医学院 2.西南大学中兽医研究所西南大学动物医学院西南大学中兽医研究所

本研究旨在观察三七提取物对免疫应激肉鸡炎症反应的影响，并通过网络药理学和分子对接结合体内动物试验对其机理进行探讨。根据TCMSP数据库及GeneCard等疾病数据库寻找三七及肉鸡炎症相关靶点，应用Cytoscape 3.7.1和String数据库分别... 详细信息

本研究旨在观察三七提取物对免疫应激肉鸡炎症反应的影响，并通过网络药理学和分子对接结合体内动物试验对其机理进行探讨。根据TCMSP数据库及GeneCard等疾病数据库寻找三七及肉鸡炎症相关靶点，应用Cytoscape 3.7.1和String数据库分别进行关键化合物和靶点的筛选，并构建中药-关键成分-靶点网络关系图；通过DAVID平台进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，依托于chiplot在线网站进行可视化，最后通过Pymol软件对核心聚类蛋白进行分析得到核心作用靶点，使用分子对接技术预测活性成分与核心靶点匹配程度以及动物实验进一步探索三七提取物的药效机制。动物实验将60只1日龄红羽肉鸡，随机分为3组（LPS组，CON组，PN组），试验周期为35 d。LPS组和PN组在第12、14、33和35天以250 μg/kg腹腔注射LPS，CON组腹腔注射等量的无菌生理盐水。采用ELISA法检测三七提取物对血清中炎性细胞因子的影响，同时检测各组血清中的激素含量，荧光定量PCR检测各组对STAT3、IL-6和CASP3的mRNA表达水平的影响。结果表明，在第2和5周，LPS攻毒后，血清中IFN-γ、IL-6、iNOS、TNF-α和TNF-β含量显著增加（P ＜ 0.05），而IL-10含量显著下降（P＜0.05）。而与LPS组相比，基础日粮中添加三七提取物后血清中IFN-γ、IL-6、iNOS、TNF-α和TNF-β的含量显著下降（P＜0.05），IL-10含量显著增加（P＜0.05）。并且三七提取物显著降低了血清中促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质酮（CORT）的水平（P＜0.05），提高了生长激素（GH）的水平（P＜0.05）。网络药理学共预测了8种有效成分和123个肉鸡炎症的潜在靶点。三七对肉鸡炎症的保护机制可能与C型凝集素受体（CLR）信号通路、Toll样受体（TLR）信号通路、MAPK信号通路、NOD样受体（NLR）信号通路和FoxO信号通路有关。根据预测，三七缓解肉鸡炎症反应可能与作用于12个关键靶点有关。荧光定量PCR显示，三七提取物下调了IL-6和CASP3的mRNA表达（P＜0.05），上调了STAT3的mRNA表达（P＜0.05），分子对接结果也显示三七提取物中的有效成分可通过IL-6和CASP3发挥抗炎作用。结果提示，三七提取物可能通过多成分、多靶点、多途径缓解免疫应激肉鸡炎症反应，本研究有利于提出新的治疗策略并为开发以赶黄草提取物为主的饲料添加剂提供理论依据。

关键词：三七鸡炎症网络药理学分子对接

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雏鹅“痛风综合征”存在多种病毒感染

中国兽医学报 2024年第3期44卷 572-579页

作者：李金蓉陈卓高继业李继祥秦豆豆西南大学动物医学院重庆荣昌402460

近年在我国肉鹅养殖主要地区发生了一种以内脏器官表面尿酸盐沉积为主要病理特征,并伴有肌肉、关节和皮下尿酸盐沉积的鹅痛风,为探讨其可能存在的非星状病毒病原感染,采用RT-PCR/PCR方法对来自江苏、四川、广东、福建、山东、河北6省的1... 详细信息

近年在我国肉鹅养殖主要地区发生了一种以内脏器官表面尿酸盐沉积为主要病理特征,并伴有肌肉、关节和皮下尿酸盐沉积的鹅痛风,为探讨其可能存在的非星状病毒病原感染,采用RT-PCR/PCR方法对来自江苏、四川、广东、福建、山东、河北6省的12份临床典型病例进行了常见水禽病毒的检测,包括鹅星状病毒(GoAstV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、禽源星状病毒1型(AAstV-1)、禽源星状病毒2型(AAstV-2)、坦布苏病毒(TMUV)、鹅禽流感病毒(GAIV)、鹅圆环病毒(GoCV)、鹅细小病毒(GPV)、鹅腺病毒(GAV)、鹅出血性多瘤病毒(GHPV),并对分离到的毒株JS2001、JS2002、JS2003、SC2001进行透射电子显微镜观察和致死胚胎的组织病理学观察。RT-PCR/PCR结果显示,GoAstV阳性率为100.0%,AAstV1阳性率为41.7%,AAstV2阳性率为58.3%,ARV阳性率为50.0%,TMUV阳性率为16.7%,AIV、GPV阳性率均为8.3%;其中GoAstV+AAstV1+AAstV2三重阳性率为25.0%(3/12),GoAstV+AAstV1/AAstV2+ARV三重阳性率为25.0%(3/12),GoAstV+AAstV1+AAstV2+ARV四重阳性率为8.3%(1/12)。分离病毒的透射电镜图片显示,4个样品均存在直径大小为20~30 nm、无囊膜的球形病毒颗粒;此外,SC2001还存在1种直径大小约为150 nm、有明显可见的衣壳和双层膜结构的病毒颗粒,而JS2003还存在直径大小为100~200 nm的病毒颗粒,在其双层膜表面有大小为10~20 nm规则排列的小颗粒。临床样本致死鹅胚体出血或黄染,局部或全身性水肿,皮下伴有严重的胶冻样液体渗出;致死鹅胚的组织病理切片显示,心脏、肝脏、肾脏出现严重的炎性细胞浸润,肝脏细胞、心肌细胞、肾小管上皮细胞均出现严重的空泡变性坏死。结果提示,当前中国流行的鹅痛风存在多种属鹅星状病毒和其他未知病毒等多病毒感染,或可被称为雏鹅“痛风综合征”,其可能存在的多病毒感染致病机制还有待进一步研究。

关键词：鹅痛风星状病毒病原体共感染

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沙门菌介导的肿瘤治疗研究进展

微生物学通报 2024年

作者：陈信张雯瑾陈垚霖刘欣雨刘青孔庆科宜宾西南大学研究院西南大学动物医学院西南大学动物科学技术学院

传统的癌症疗法如放疗、化疗和手术在实体肿瘤治疗方面仍具有明显的局限性，然而细菌介导的抗肿瘤疗法已取得显著的临床效果，有望成为一种有效的肿瘤治疗策略。沙门菌(Salmonella)作为一种兼性厌氧菌，可优先定殖于肿瘤，并通过重塑肿... 详细信息

传统的癌症疗法如放疗、化疗和手术在实体肿瘤治疗方面仍具有明显的局限性，然而细菌介导的抗肿瘤疗法已取得显著的临床效果，有望成为一种有效的肿瘤治疗策略。沙门菌(Salmonella)作为一种兼性厌氧菌，可优先定殖于肿瘤，并通过重塑肿瘤微环境(tumor microenvironment， TME)激活宿主的抗肿瘤免疫反应。经基因工程改造的沙门菌具有良好的肿瘤靶向性和可控性，在不同治疗需求下具有很强的适应性，从而成为理想的药物递送载体。然而，应用沙门菌治疗肿瘤的主要障碍是其在宿主体内的潜在致病性及如何提高细菌的肿瘤靶向性。为使基于沙门菌的肿瘤治疗更加安全有效，需深入了解宿主免疫系统与细菌的相互作用。因此，本文将从沙门菌的抗肿瘤机制、细菌的新型肿瘤治疗策略及沙门菌介导肿瘤治疗的挑战和展望等方面进行综述。

关键词：沙门菌免疫系统肿瘤治疗靶向性安全性

金属有机框架荧光传感器在食品中抗生素类兽药残留检测的研究进展

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食品与发酵工业 2024年第8期50卷 334-342,355页

作者：谢三磊陶晓奇河南科技大学动物科技学院河南洛阳471000 西南大学动物医学院重庆400715 西南大学食品科学学院重庆400715

金属-有机框架材料(metal-organic frameworks,MOFs),是一类由金属离子或者是次级构筑单元与有机配体通过配位键自组装形成的材料,是近年快速发展的一种新型功能性检测材料。MOFs具有比表面积大、孔道尺寸可调和结构可控等优势,在构建... 详细信息

金属-有机框架材料(metal-organic frameworks,MOFs),是一类由金属离子或者是次级构筑单元与有机配体通过配位键自组装形成的材料,是近年快速发展的一种新型功能性检测材料。MOFs具有比表面积大、孔道尺寸可调和结构可控等优势,在构建高选择性和高灵敏度的发光传感器领域有着广阔的应用前景。该文对发光MOFs的不同荧光发光机理进行阐明和详细分类,总结了发光MOFs作为荧光传感器在抗生素类兽药残留检测中的应用实例,最后就目前存在的问题提出建议,并对未来的发展前景进行了展望。

关键词：金属-有机骨架材料荧光传感器荧光发光机理抗生素类兽药

基于微生物组和宿主转录组整合分析香砂六君子汤对ETEC诱导断奶腹泻仔猪回肠损伤的调控机制

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 797-808页

作者：肖乐刘峻源曾雯玉汪芹韩雯珏刘彦泠范誉徐雨婷杨贝妮肖雄王自力西南大学动物医学院重庆400715 浙江大学动物科学学院杭州310058 浙江大学动物医学中心杭州310058

本研究旨在探讨香砂六君子汤对产肠毒素大肠杆菌(entexotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的断奶仔猪腹泻的干预作用及其机制。将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(CON)、模型组(MOD)和香砂六君子汤组(XS),连续14 d给XS组灌服香砂... 详细信息

本研究旨在探讨香砂六君子汤对产肠毒素大肠杆菌(entexotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的断奶仔猪腹泻的干预作用及其机制。将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(CON)、模型组(MOD)和香砂六君子汤组(XS),连续14 d给XS组灌服香砂六君子汤(1 mL·kg^(-1),1 g·mL^(-1)),其余组灌服等量无菌水,第15天给MOD组、XS组仔猪按1 mL·kg^(-1)连续3 d灌服1011 CFU·mL^(-1) ETEC菌液,XS组继续灌服香砂六君子汤。分别记录各组仔猪腹泻评分,HE法检测回肠组织病理学变化,实时荧光定量PCR检测回肠组织IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA水平,转录组学分析回肠组织RNA差异表达情况,微生物宏基因组学分析回肠菌群变化情况,Western blot检测回肠组织p-p38/p38、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK蛋白水平。结果表明,灌服ETEC后,MOD组腹泻评分极显著高于CON组(P<0.01),回肠组织结构破坏,V/C值极显著下降(P<0.01),且IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA表达量极显著升高(P<0.01),肠道菌群门水平上变形菌门极显著上调(P<0.01),厚壁菌门极显著下调(P<0.01),属水平上乳酸菌属下调,志贺菌属上调,回肠组织p-p38/p38和p-JNK/JNK比值显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。与MOD组相比,XS组腹泻评分极显著下降(P<0.01),回肠组织结构完整,V/C值极显著升高(P<0.01),回肠组织IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),肠道菌群门水平上变形菌门极显著下调(P<0.01),厚壁菌门极显著上调(P<0.01),属水平上乳酸菌属上调,志贺菌属下调,回肠组织p-p38/p38和p-ERK/ERK比值极显著降低(P<0.01)。肠道组织基因转录组学筛选出与炎症免疫相关的差异显著的10个基因,分别为TNFAIP8L2、TRIM67、CXCL2、EGF、NOX1、CCL28、FABP2、FABP6、IL1RAP和CEBPB。微生物组学筛选出各组可能的标志物种分别为CON组的Lactobacillaceae,MOD组的Shigella,XS组的Deinococcus和Eubacterium。综上所述,香砂六君子汤可有效缓解ETEC诱导的断奶仔猪腹泻,提高肠道菌群中有益菌的丰度,逆转ETEC诱发的菌群结构的改变,并可通过抑制MAPK信号通路的激活,从而缓解ETEC诱导的肠道炎性损伤。

关键词：香砂六君子汤产肠毒素大肠杆菌断奶仔猪腹泻肠道菌群转录组学 MAPK信号通路